RNA marker 1000
RNA的提取
RNA的提取
一、试剂
1、depc处理水：在1000ml的去离子水中加入1ml depc ，充分摇匀，并用磁力搅拌
器搅拌2h，过夜，第二天高温灭菌（121℃、30min）。
2、0.1％depc水：在1000ml水中加入1ml depc ,用磁力搅拌器搅拌2h以上。
3、5xTBE缓冲液(1000ml)
Tris 54g
硼酸27.5g
EDTA-2Na 3.2g
加depc处理水至1000ml，搅拌至溶解
4、GenGree(荧光染料RNA专用)
5、Biowest Agarose
6、总RNA提取试剂盒
7、Marker
8、DEPC
二、耗材
1、枪头（10ul、200ul、1000ul）:应用未开封过的枪头，应用0.1％depc水处理过的枪
头盒装。
2、EP管（1.5ml、200ul）:用未开封的EP管，应用0.1％depc水处理过的容器装。
3、电泳槽：用0.1％depc水浸泡至过夜，后让其自然晾干。
4、制胶槽和梳子：用0.1％depc水浸泡至过夜，后让其自然晾干。
三、步骤
1、Rna的提取步骤为天根公司总RNA提取试剂盒
2、1％琼脂糖凝胶：
Biowest Agarose 0.2g
0.5xTBE 20ml
微波炉中加热至溶解，待其温度不烫手时，加入GenGree(荧光染料RNA专用)，轻
轻摇匀倒入已放好梳子的制胶槽中，待其冷却备用。
3、将配好的胶放入电泳槽加入depc水至将其淹没，取Rna样品5ul加1ul 6 x loading bulf
(RNA双染料)混匀加入到胶孔中，取6ul Marker加入孔中，200V 10min。
单细胞测序marker基因
单细胞测序marker基因单细胞测序(marker基因)——实现生命的大数据读取随着生命科学、医学和工业等领域的不断发展，越来越多的研究者对细胞的精细调控和功能进行研究。
传统的细胞测序对于细胞组的研究已经发展了较成熟的技术，但是对于单个的细胞的研究，还需要一些新型的技术来解决技术瓶颈。
“单细胞测序(marker基因)”是一种新型的技术，可以快速、高效地研究单个细胞及其藏在内部的信息，这对于我们探究细胞特异性和癌症等疾病的研究有着重要的意义。
一、单细胞测序技术的基本原理单细胞测序(marker基因)技术允许研究者从单个细胞中提取RNA或DNA，以此了解单个细胞的基因表达情况。
其关键技术是marker基因，通过特定的基因筛选可以筛选出我们所需要的细胞进行检测。
在此基础上，研究者们可以通过单细胞测序技术获取虚拟的单细胞间差异，从而探寻这些差异所带来的生物学意义。
二、单细胞测序技术的优势传统的细胞总RNA提取和RNA测序技术在浓度和纯度上有严格的要求，在样本数量和带酸性它池的素质限制下严重制约着后期高通量测序的质量。
单细胞测序(marker基因)技术完全不需要这种复杂的前期实验，它可以抱错从细胞形态学、免疫学、局部特异性等等解剖学信息，以便输出拟人工细胞、信仰病毒的技术开发，这些应用半推半就都迫切需要单细胞测序技术。
三、单细胞测序的应用场景举例单细胞测序(marker基因)技术在诸如肿瘤单细胞转化研究、小鼠特异性脑神经元染色、抑制小鼠隐形眼镜亚类转化测试、优化细胞接口分析构建等领域都有广泛的应用场景。
同时，在大数据的背景下，单细胞测序技术也成为了了解生命的有效途径。
现在，越来越多的研究者和企业将单细胞测序(marker基因)技术作为重点开展的技术研究领域。
四、单细胞测序技术的未来前景随着单细胞测序(marker基因)技术的不断发展，其未来研究前景也会变得更加广阔。
从识别单细胞基因表达、诊断某些癌症、研究发展细胞生命周期等角度入手，都有足够的理由相信，单细胞测序marker基因必将成为生命科学和医学领域研究的重要工具，为人类健康事业和生命科学领域作出更多的贡献。
分子量Marker
12分子量Marker210211212214215216216216217218218218219219219DNA 分子量Marker 图预混合的即用型DNA Marker DNA Step Ladders DNA Ladders 常用DNA Marker 放射自显影Marker 超螺旋DNA Ladder 染色体DNA Marker 荧光DNA Marker RNA Markers 蛋白Marker 体外翻译Marker 基因组DNA 上样染料其它常见水生植物(亚马逊河之剑)Echinodorus paniculatus 的花粉。
放大倍数：1325×。
单个花粉直径为25µm ，这些植物生长在水中，或露出水面，但是花蕾只在水上开放。
DNA 分子量Marker 图分子量Marker核酸分子量Marker说明: Promega 提供用于传统及脉冲电场凝胶电泳(PFGE )所需的范围广泛的DNA 及RNA 分子量Marker (molecular weight marker )。
传统双链DNA 电泳Marker 包括ladders ，限制性内切消化的lambda, φX174和pGEM ® DNA 。
蓝色/橙色上样染料与大多数DNA Marker 一同提供。
同时提供未消化的DNA (如, Lambda, φX174,pBR322等) 以用于自制分子量Marker 。
提供的RNA Marker 的大小范围为281到6,583个碱基。
PFGE 大小Marker 包含Promega-Markers ® Lambda Ladders 。
PFGE Marker 大小范围大约为50kb 到1.0Mb 。
提供的PFGE Marker 为储存于50mM EDTA 缓冲液的橙色琼脂糖系列条带。
Promega 同时还提供蛋白Marker 及体外翻译Marker 。
BenchTop DNA MarkersAgarose, LE, Analytical Grade24Ethidium Bromide Solution, Molecular Grade 29Wizard ®SV Gel and PCR Clean-Up System 92– 1,353bp– 1,078– 872– 603– 310– 281/271– 234– 194– 118– 722% agarose3176T A 12_0ABenchTop φX174 DNA/HaeIII Markers Cat.# G7511 Load 5µl/lane.– 2,645bp– 1,605– 1,198– 6762% agarose– 517– 460– 396– 350– 222– 179– 126– 75/65 [51,36]3177T A 12_0ABenchTop pGEM ®DNA Markers Cat.# G7521 Load 5µl/lane.bp – 1,000– 750– 500– 300– 150– 502% agarose0094T A 05_3ABenchTop PCR MarkersCat.# G7531 Load 6µl/lane.bp– 250, 253– 500– 750– 1,000– 1,500– 2,000– 2,500– 3,000– 4,000– 5,000– 6,000– 8,000– 10,0000.7% agarose1409T A03_6ABenchTop 1kb DNA LadderCat.# G7541 Load 6µl/lane.bp – 1,500– 1,000– 900– 800– 700– 600– 500– 400– 300– 200– 1002% agarose0973T C 03_5ABenchTop 100bp DNA LadderCat.# G8291 Load 6µl/lane.预混和的即用型DNA Marker分子量Marker说明: BenchTop DNA Markers 可以方便地储存于室温(22-25℃)，并可以在琼脂糖凝胶上直接上样。
总 RNA 的电泳检测
总RNA 的电泳检测，原来我使用Lambda DNA/EcoR I （或者Hind III）酶切Marker，现在基本上不再用Marker 了。
指示剂一定是溴酚蓝加二甲苯氰，胶浓度1-1.2%。
加样后，开始电泳(电压的选择的唯一依据是，我后面的时间安排。
)。
溴酚蓝出孔2 -3cm 后终止电泳，紫外观察。
首先能吸引我的一定是非常亮的位置(是否上样过量)，然后观察溴酚蓝到二甲苯氰之间的条带情况(降解情况)，再就是加样孔(杂质残留情况)，最后是23kb 处是否有条带(基因组DNA 残留情况)。
如果同时抽提的样品是多个，而且类似，在具体分析某一个问题样品前，要先综合一下该批次抽提的总的成败。
如果全部有某现象，可能与试剂有关，也可能与样品有关，还可能与操作有关；如果只有部分有该现象，更可能与操作有关，少部分与样品有关(先做的和后做的可能也有区别)。
只有在宏观上有了一个概念，微观分析才有价值，才准确。
微观分析重点要看如下几个位置：1 溴酚蓝偏下一点点。
这个位置提供的是小片段rRNA (5S 等)的信息及降解的辅助指标。
有可能有，也可能没有。
没有不是问题，因为柱子抽提方法及TRIzol 的高盐沉淀方法，都会去除大部分小的RNA 片段。
问题一：特别亮，宽度甚至超过了加样孔的宽度。
特别亮首先提示上样量过大，而过大的上样量是很容易掩盖一些信息的，导致判读错误。
不管能否看见大片段RNA，也不管带型如何，碰到小片段非常亮的情况，最好大大降低上样量重新跑一次，再判读。
2 指示剂溴酚蓝到二甲苯氰之间或者上面一点点。
这个位置提供的是大片段的rRNA (28S/18S 等)完整性的信息。
条带清晰弥散轻微，表示完整性好；否则表示完整性差。
问题一：比例达不到2:1。
条带亮度比例，没有必要太放在心上，因为比例不是非变性电泳的结论；同时，有些物种本身就不具备这样的比例(从DXY 上战友处首次学到)。
关键是条带是否清晰，弥散少。
问题二：有多条带。
rna marker制备流程
rna marker制备流程
RNA Marker制备过程其实也不难，先说说要准备啥吧。
得准备MOPS、DEPC处理水、NaOH、CH3COONa、EDTA、琼脂糖这些。
都是基础材料，但选的时候可得挑好的，不然后面制备出来的Marker效果可就差了。
MOPS这玩意儿得先溶解在DEPC处理水里，大概700ml左右。
搅拌的时候别太快，也别太慢，得让MOPS完全溶解，但又别弄出太多泡沫来。
调pH值这一步也挺关键的。
得用2N NaOH调到7.0，得反复测试，一点点调，不然影响后面的实验。
再加点1M CH3COONa和0.5M EDTA pH8.0进去，这俩能让溶液更稳定。
最后，再加点DEPC处理水，让溶液总量达到1L。
过滤一下，放那避光保存。
这样制备出来的RNA Marker就能用了。
说来说去，制备RNA Marker这事儿得细心，每一步都得注意，
不然出来的效果就不好。
所以，大家在做实验的时候，一定得按照步骤来，别马虎。
同科生物DNA Marker 1000产品说明书
同科生物DNA Marker1000产品说明书
产品编号：TK02013
通用名称：DNA分子量标准1000
产品规格：500μL（100次量）
储存条件：长期保存于-20±5℃，频繁使用保存于4℃，避免反复冻融。
有效期：半年（4℃）；两年（-20±5℃）。
产品介绍：
本产品仅供科研使用，由1000bp、700bp、500bp、400bp、300bp、200bp和100bp 共7条线性的双链DNA组成，其中400bp的DNA含量约为30ng/μL，其它6条DNA含量均约为10ng/μL，本产品已含有1×上样缓冲液，可以直接用于琼脂糖凝胶电泳。
存储液成分：
终浓度为10mM的Tris-HCl(pH8.0)、10mM的EDTA、0.02%的溴酚蓝和5%的甘油。
使用方法介绍：
（1）直接取5μL上样，电压选择4-10V/cm。
（2）琼脂糖凝胶浓度建议为2-3%之间。
DNA Marker1000
2%的琼脂糖凝胶电泳
上样量为5μL，电压为5V/cm
电泳缓冲液为1×TAE。
DNAMarker
DNAMarkerDNA Marker 类100bpDNAMarkerⅠ概述： 100bpDNAMarkerⅠ是由单独的 PCR 扩增⽬录号包装价格PBZ0301-1 PBZ0301-1 50 次 100 次 75.00 140.00 产物混合⽽成，已含有 1xLoading Buffer,可以直接电泳。
包括 11 条双链DNA ⽚断：100bp、 200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、 800bp、900bp、1000bp 和 1500bp。
特异性加强500bp。
每次上样 4～5µL。
100bpDNAMarkerⅡ概述： 100bpDNAMarkerⅡ是由单独的 PCR 扩增⽬录号包装价格PBZ0302-1 PBZ0302-2 50 次 100 次 75.00 140.00 产物混合⽽成，已含有 1xLoading Buffer,可以直接电泳。
包括 6 条双链DNA ⽚断： 100bp、 200bp、 300bp、400bp、500bp 和 600bp，适⽤于短⽚断 DNA ⼤⼩的分析。
特异性加强 500bp。
每次上样 4～5µL。
200bpDNAMarker 概述：200bpDNAMarker 是由单独的 PCR 扩增⽬录号包装价格PBZ0303-1 PBZ0303-2 50 次 100 次 75.00 140.00 产物混合⽽成，已含有 1xLoading Buffer,可以直接电泳。
包括 10 条双链DNA ⽚断：200bp、 400bp、 600bp、 800bp、 1000bp、 1200bp、 1400bp、 1600bp、 1800bp 和 2000bp，特异性加强1000bp。
每次上样 4～5µL。
1kbDNAMarker 概述： 1kbDNAMarker 是由 8 条 DNA 条带组成，由⼩到⼤分别为： 1.0kb, 2.0kb, 3.0kb, 4.0kb,⽬录号包装价格PBZ0303-1 PBZ0303-2 50 次 100 次 75.00 140.005.0kb,6.0kb, 8.0kb 和 10.5kb 。
小鼠单细胞分群出的各个细胞的marker基因
小鼠单细胞分群出的各个细胞的marker基因最近几年，单细胞RNA测序技术的快速发展使得对小鼠细胞的深入研究成为可能。
通过单细胞RNA测序，可以获得大量的细胞表达数据，并且能够进行细胞分群，从而揭示出不同细胞类型之间的差异。
在小鼠单细胞分群的研究中，marker基因是非常重要的指标，可以用来鉴定和描述不同细胞类型。
下面我们将介绍一些小鼠单细胞分群中常见的细胞类型及其marker基因。
1.神经元细胞：神经元细胞是大脑的基本功能单位，主要负责信息传导和处理。
在小鼠单细胞分群中，可以通过一些特定的marker基因来鉴定神经元细胞，比如Tubb3、Snap25、Syn1和Nefh等。
这些基因主要参与神经元的结构和功能，通过它们的表达水平可以鉴定出神经元细胞。
2.神经胶质细胞：神经胶质细胞是神经组织中的非神经细胞，主要承担起支持、维持和修复神经元的功能。
在小鼠单细胞分群中，神经胶质细胞可以通过一些特定的marker基因来鉴定，比如Aqp4、Gfap、Optc等。
这些基因主要参与神经胶质细胞的结构和功能，通过它们的表达水平可以鉴定出神经胶质细胞。
3.免疫细胞：小鼠的免疫系统中含有多种不同类型的免疫细胞，包括B细胞、T 细胞、巨噬细胞等。
在小鼠单细胞分群中，可以通过一些特定的marker基因来鉴定免疫细胞的不同亚群，比如Cd19、Cd3d、Cd68等。
这些基因主要涉及免疫细胞的特定表面标记物或功能酶，通过它们的表达水平可以鉴定出不同类型的免疫细胞。
4.干细胞和前体细胞：在小鼠单细胞分群中，还可以鉴定出一些干细胞和前体细胞，这些细胞具有多向分化能力，在组织发育和修复中具有重要的作用。
一些常见的marker基因如Sox2、Olig2、Nestin和Pax6等，它们主要参与细胞的发育和分化过程，通过它们的表达水平可以鉴定出干细胞和前体细胞。
总的来说，小鼠单细胞分群的研究中使用了许多marker基因来鉴定不同细胞类型。
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制品内容
RNA Marker RL1,000 6×Loading Buffer DEPC 处理水
20 μl 100 μl
1 ml
使用方法 A. 普通琼脂糖凝胶电泳时
1. 按下列组份配制 RNA Marker 样品。
RNA Marker RL1,000 6×Loading Buffer DEPC 处理水
RNA Marker RL1,000
使用说明书
Takara Code : D508A
包 装 量 : 约 20 次量
浓 度 : 约 200 ng/μl
保 存 : -80℃（短期保存可放置于-20℃）
制品说明 RNA Marker RL1,000是由体外转录得到的8条高纯度的单链RNA片 段组成的，其长度分别为1,000、800、600、500、400、300、200 和100 Bases，每微升本制品的RNA量约为200 ng。可用于RNA的 琼脂糖变性凝胶电泳（甲醛或乙二醛）或者普通的RNA琼脂糖凝胶 电泳等。每次取1 μl电泳时可使用约20次。
4. 甲醛变性琼脂糖凝胶配制方法如下： 加 6.0 g 高质量的琼脂糖到 93 ml DEPC 水中，煮沸直至完全溶 解，再加入适量的 DEPC 水定容至 93 ml。溶液冷却至 60℃左 右后，加入 30 ml 5×MOPS-EDTA Buffer 和 27 ml 37%甲醛（在 通风橱中操作），倒胶后于室温静置 1 小时。
1 μl 2 μl up to 10 μl
2. 均匀混合后 65℃加热 10 分钟，迅速冷却至室温（最好用 PCR 仪）。
3. 使用高质量的琼脂糖，用 1×TAE Buffer 制备 5%凝胶，制胶时 凝胶中请加入溴乙锭（终浓度：1 μg/ml）。
4. 将上述操作 2 配制的 Marker 样品加样后，在 1×TAE Buffer 中 电泳。
7. 电泳结束后，将凝胶在 DEPC 处理水中浸泡 15 分钟，除去凝胶 中的甲醛。
8. 使用 DEPC 处理水制备的 EtBr（5 μg/ml）染色 2~3 分钟。用 DEPC 处理水脱色 30 分钟，再换水脱色 30 分钟后成像观察。 如果背景偏高时可以进一步进行过夜凝胶脱色。 注意：甲醛凝胶用 EtBr 染色比较麻烦，即使 RNA 样品染上了 明显的条带也会带来较高的背景。因此，应控制凝胶在 染色剂中的浸泡时间小于 5 分钟，以降低背景。
使用例 取本制品 1 μl、2 μl 进行 5%的琼脂糖凝胶电泳（使用 1×TAE Buffer）时 的结果如下。
V2012.01
5. 加样前将胶在 1×MOPS-EDTA Buffer 中 10 V/cm 条件下预电泳 10 分钟。
6. 混匀电泳槽中的 1×MOPS-EDTA Buffer（电泳液），加入上述 操作 2 配制的 RNA Marker 样品后，10 V/cm（恒压）条件下 电泳至溴酚蓝迁移至胶的 2/3 左右位置，电泳过程中应每隔 30 分钟混匀电泳槽中的电泳液一次。
使用注意 1. RNA 极易分解，应严格防止核酸分解酶的混入。实验操作时应
戴手套，实验的仪器及溶液应经 Drker 中的条带不清晰或不完整。 2. RNA Marker 中的 RNA 为单链线性 RNA，因此，当进行体外转 录得到的 RNA、或经提取得到的 mRNA 等单链线性 RNA 电泳 时，可使用本制品作为分子量大小的参照标准，但对于 Total RNA，本 Marker 只能作为定性参照标准。 3. 若脱色后观察不到 Marker 的条带，可能是由于胶被染上了较高 的背景，此时可以进行反复脱色或过夜和脱色后再进行观察。
2. 按下列组份配制 RNA Marker 样品。
RNA Marker RL1,000 甲醛 甲酰胺 5×MOPS-EDTA Buffer 6×Loading Buffer DEPC 处理水
4.0 μl 3.5 μl 4.0 μl 4.0 μl 3.0 μl up to 20 μl
3. 均匀混合后，70℃加热 5 分钟，迅速冷却至室温（最好用 PCR 仪）。
B.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳时
1. 按下列方法配制 5×MOPS-EDTA Buffer（0.1 M MOPS pH7.0， 5 mM EDTA，10 mM NaOAc）。 ① 称量 20.9 g MOPS 置于 1 L 烧杯中。 ② 加量约 700 ml 的 DEPC 处理水，搅拌溶解。 ③ 使用 2 N NaOH 调节 pH 值至 7.0。 ④ 向上述溶液中加入 10 ml 的 1 M NaOAc（DEPC 处理水配制）。 ⑤ 溶液中加入 10 ml 的 0.5 M EDTA pH8.0（DEPC 处理水配制）。 ⑥ 加入 DEPC 处理水将上述溶液定容至 1 L。 ⑦ 使用 0.45 μm 滤膜过滤后室温避光保存。