低分子量蛋白质 Marker II
重组人_干扰素纯化工艺的建立
许崇利1，2，欧阳红生 2 ，许崇波 3 ，张艳平3( 1．吉林化工学院环境与生物工程学院，吉林吉林132022; 2．吉林大学畜牧兽医学院，长春130062;3．大连大学医学院，辽宁大连116622)［摘要］采用超声破碎的方法提取hIFN －γ包涵体，经盐酸胍溶解、稀释复性、浓缩后通过S P Sepharos e F． F 层析纯化，简化了纯化步骤，缩短周期，提高了蛋白回收率。
S D S－PAGE 检测表明，hIFN －γ纯度达97%，比活性为3．5 ×107 IU/m g，总回收率达40%。
说明整个工艺适合于大规模生产的要求，具有实际应用价值，为hIFN －γ批量生产奠定了良好的基础。
［关键词］重组人γ－干扰素; 包涵体; 复性; 纯化Study on t h e P u ri f i ca t i o n T e c hn o l og y of R e co mb i n a n t Human I n t e r f e r o n －γXU C hong －Li1，2，OUYANG Hong －Sheng2 ，X U C hong －Bo3，ZHANG Y an －P i ng3 ( 1．C o ll e g e o f E nv ir o nm e nt and B i oe ng i n ee ri ng，J i l i n I n s t i tut e o f Ch e m i c a l T ec hn o l o gy，J i l i n，J i l i n132022，C h i na; 2．C o ll e g e o f An i ma l S c i e n ce and V e t e ri na r y M e d i c i n e，J i l i n Un i v e r s i t y，c hang c hu n130062，C h i na; 3．C o ll e g e o f M e d i c i n e，Da l i an Un i v e r s i ty，Da l i an，L i a o n i ng116622，Ch i na)Ab s t r ac t: I n c l us i on body o f o b ta i ne d by the u l tras on i c at i on，renature d and c onc entrated by us i nghIFN －γ wasguan i d i ne hy d ro c h l or i d e d enaturat i on．Aft er t he p ur i f i c at i on of SP Sepharos e F．F，the tota l p rot e i n rec ov ery w asi n c rease d by s i m p li f y i ng t he proc edures and s horten i ng the c y c l e．T he product s howed h i gh p ur i ty ex c ee d i ng97% an dthe tota l p rote i n rec overy rate was nea l y40% by SD S －PAGE d ete c t i ng．T he h i gh s p e c i f i c a c t i v i ty was 3．5 × 107IU/m g．The p ro d u c t i on proc ess report ed here is so s i m p l e and c onv en i ent that i t can be a pp li e d in the l arge s c a l ep ro d u c t i on of INF －γ．T h i s p ur i f i c at i on te c hno l ogy esta b li s he d a good f oun d at i on f or the hIF N －γmass p ro d u c t i on．K e y w o r d s: re c om b i nant hum an Int erf eron －γ;i n c l us i on b o d y; renaturat i on; p ur i f i c at i onγ干扰素( i nt er f eronγ，IFN －γ) 是由活化的T 细胞及N K 细胞产生的一种多功能细胞因子，除了具有抗病毒活性外，还具有强大的免疫调节作用［1－5］。
低分子量蛋白质 Marker II
的胶。胶浓度为 8-10% 时蛋白 Marker 中低分子量的蛋白易于同染料前沿跑在一条线上不易区 分，在 12-15%的胶上及梯度电泳中，所有的条带都能锐利清晰分开。
推荐上样量：
上样量 5µl 10µl 20µl
胶厚度大小
0.75mm thick mini
1.5mm thick mini 0.75mm thick large 1.5mm thick large
操作步骤：
1. 室温溶解或37- 40°C加热几分钟溶解，轻摇以确保溶液混合均匀。 2. 为避免污染最好分装保存以备使用，取所需体积的Marker置于一干净离心管中并封好口。 3. 沸水中煮5分钟。使蛋白完全变性。冷却并混合均匀以备上样进行SDS-PAGE电泳。 4. 上样并进行 SDS-PAGE电泳。 5. 该Marker适用于考马斯亮蓝, 银染或其他蛋白染色方法。
低分子量蛋白质 Maቤተ መጻሕፍቲ ባይዱker II
地 址：北京市海淀区彰化南路 18 号院 6-3-2 电 话：010 – 51286531/68232041/68232051/68235911（Fax） 市场部：info@ 合成部：oligo@ 测序部：seq@
制品说明：本产品是由 7 种蛋白质分别纯化后混合而成的蛋白质溶液，分子量范围为 14KD－116KD，经 SDS
－聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用考马斯亮蓝 R－250（Coomassie Blue R-250）染色后可得清晰的 7 条蛋白带。建议使用分离浓度为 12%～15%。
适用胶浓度：最优适用于 12% (37.5:1 丙烯酰胺:双丙烯酰胺)的聚丙烯酰胺凝胶。该 Marker 也可用于 8-15%
包 装 量：
蛋白标准品（Marker）知识汇总
蛋白Mark er可分为：一、未预染的Ma rker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Mar ker即单色预染和多色预染。
在wester n blot 过程中，分子量Mar ker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。
这个 Wester n Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误了，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Ma rker也是west ern blot实验成功的必要条件之一。
总体来说，蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。
以下是关于蛋白分子量标准的小叙：一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准未染色的蛋白分子量标准是最简单，也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。
现在的Mar ker多数都选用预混和的Mar ker，方便不同大小的蛋白比较。
预混的Mar ker通常有几条带加倍浓度作为指示，因为混合的条带越多，越不好记，谁知道哪条是那条!数到眼都花了。
所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。
不过要记得，小带通常都不那么容易看清楚的。
在选择上来说，当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好，越近越好。
如果你的蛋白不幸在两条跨度较大M arker条带之间，选别的Mar ker吧。
预混的Mar ker 使用上不如预染Marke r(pre-staine d)好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后染色才―开蛊‖，无法对实验起预示参照作用。
TaKaRa 蛋白质分子量标准(低)
∙o Protocolso Standard Protocolo Manual/Datasheet∙Cat.# Product Size Note3450 Protein Molecular Weight Marker (Low) 200 lanes3451 Protein Molecular Weight Marker (High) 200 lanes3452 Protein Molecular Weight Marker (Broad) 200 lanesDescriptionProtein Molecular Weight Markers are designed for use in SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis. There are 3 kinds of Protein Molecular Weight Marker, Low (Molecular weight range : 14.3 - 97.2 kDa) , High (Molecular weight range : 44.3 - 200 kDa) and Broad (Molecular weight range : 6.5 - 200 kDa).Each protein is proportioned to yield uniform band intensities when perform staining Coomassie Brilliant Blue R-250 after run on SDS polyacrylamide gel.5µl of 20-fold diluted marker is loaded per lane of SDS-PAGE minigel for standard use. In this case, this marker is sufficient for 200 lanes.Electrophoresis ResultLow(Cat.# 3450) High(Cat.# 3451) Broad(Cat.# 3452)15% SDS-PAGE 7.5% SDS-PAGE 5-20% gradientSDS-PAGEStorageProtein Molecular Weight Marker, 1 MDTT: -20°C5×Loading Buffer : Store at room temperature after used.ComponentProtein Molecular Weight Marker 50 µl5×Loading Buffer1 ml1 M DTT 100 µlConcentration12 µg/µl (Cat.# 3450) 10 µg/µl (Cat.# 3451) 18 µg/µl (Cat.# 3452)Form50 mM Tris-HCl, pH6.81 mM EDTA200mMNaCl50% glycerolComponent Protein Low(Cat.# 3450)Protein Source M.W.(Da)Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Carbonic Bovine 29,000anhydraseTrypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300High(Cat.# 3451)Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidaseE. coli116,000Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200SerumAlbuminBovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Broad(Cat.# 3452) < /TR>Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidase E. coli116,000 Phosphorylase B Rabbit muscle 97,200 Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287CarbonicanhydraseBovine 29,000 Trypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300Aprotinin Bovinepancreas6,5005×Loading Buffer200 mM Tris-HCl , pH6.810% SDS 0.05%BPB50% GlycerolNote∙All products are intended to be used for research purpose only. They are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they intended for human use. They shall not to be used products as food, cosmetics, or utensils, etc∙Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.∙If you require licenses for other use, please call at +81 77 543 7247 or contact from our website at ∙Please confirm the content about the license or patent used in this document that relates to the Takara Bio product by clicking the license mark.Moreover, please confirm the "Limited Use Label License" or "patent" concerning the product of another manufacturers or respective owners in their Web site/catalog etc.Page TOP。
蛋白marker标记颜色方法
蛋白marker标记颜色方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：蛋白marker标记颜色方法在生物科学研究中，标记蛋白是非常常见的实验技术之一。
蛋白marker的标记可以帮助研究人员在实验中追踪和定位蛋白，从而更好地理解蛋白的功能和相互作用。
而标记蛋白的颜色选择也是非常重要的，不同颜色的标记能够帮助实验者在实验过程中更清晰地识别和分析样品。
本文将介绍一些常用的蛋白marker标记颜色方法，希望能够帮助读者更好地进行蛋白标记实验。
一、荧光标记荧光标记是蛋白标记颜色中最常用的方法之一。
通过将蛋白与荧光物质结合，可以在光学显微镜下直接观察到蛋白标记的颜色。
常用的荧光标记包括FITC（荧光异硫氰酸酯），TRITC（罗丹明异硫氰酸酯）和Cy5（Cyanine5）。
这些荧光物质在实验中常用于免疫荧光染色、融合蛋白标记等实验中。
荧光标记的优势是信号强度高、灵敏度高且不受环境影响，适用于单细胞和组织的标记。
在实验中，荧光标记的颜色可以根据荧光物质的不同而有所区分。
比如，FITC标记的蛋白呈现绿色，TRITC标记呈现橙红色，Cy5标记呈现红色。
实验者可以根据实验需要选择不同的荧光标记物质，并通过显微镜观察到标记蛋白的颜色。
二、生物素标记生物素标记是一种基于生物素-亲和素相互作用的蛋白标记方法。
生物素是一种维生素H成分，具有与亲和素结合的特性。
在实验中，生物素可以与生物素素结合并形成稳定的结合物，从而实现蛋白的标记。
生物素标记的颜色在实验中常表现为紫色，实验者可以通过观察颜色变化来判断蛋白是否标记成功。
生物素标记的优势是其结合力强、稳定性高，适用于长时间的实验操作。
另外，生物素标记也可以用于有机溶剂、高温、酸碱环境等多种条件下的蛋白标记。
因此，在一些特殊实验条件下，生物素标记是一种非常理想的标记方法。
三、酶标记酶标记是另一种常用的蛋白标记方法。
通过将蛋白与酶结合，可以在实验中通过酶的催化作用来识别蛋白的存在。
常用的酶标记包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)使用说明
超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)使用说明货号：PR1300规格：15T(150µ1)保存：-20℃保存，有效期为一年。
产品简介::超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-20.1kD。
可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。
使用说明::1.开封后，溶于150µ11×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10µl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。
2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。
凝胶的配置方法:分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 甘油0.48ml0.48ml0.48ml//ddHO0.70ml 1.02ml 1.125ml0.926ml 1.344ml210%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl凝胶制备及染色注意事项:1.先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。
电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。
蛋白质分子量标准(宽)
●保存条件
制品原液可在-20℃下长期保存，制品的 20 倍稀释液 可在-20℃下保存 2～3 个月，制品的原液和制品的 20 倍稀释液都应避免多次反复冻融。
●制品中的各种蛋白质种类
蛋白种类
肌球蛋白 β 半乳糖苷酶 磷酸酶 b 牛血清蛋白 卵清蛋白 碳酸苷酶 胰蛋白酶抑制剂 溶菌酶 抑肽酶
来源
猪 大肠杆菌 兔子肌肉
3. 均匀混合后，100℃加热处理 5 分钟，然后取 5 μl 进行 5～20％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for SDS-PAGE mini gel）。
4. 5~20%聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳、12%聚丙烯酰 胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝 R-250 染色后的结 果如下。
KDa 200
116 97.2 66.4
蛋白质分子量标准（宽）
Protein Molecular Weight Marker (Broad)
使用说明书
TaKaRa Code：D532A
●浓 度：18 μg/μl
●制品内容（约 200 次量）
Protein MW Marker（Broad） 50 μl
5×Loading Buffer
1000 μl
KDa 210106 97.2 66.4
44.3
44.3
29.0
29.0 20.1
20.1
14.3
14.3
6.5
6.5
5~20%
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
12%
V2010.04
●使用方法
1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT 5×Loading Buffer
* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2 μl 20 μl
低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明
低分子量蛋白质Marker（14.4kD-97.4kD)使用说明货号：PR1400规格：20T保存：-20℃可保存至少一年。
避免反复冻融，建议分装保存。
产品简介：低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉，分子量范围为14.4kD-97.4kD，每种蛋白的含量约为20-30μg。
经过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶）电泳后，用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。
可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。
使用说明：1.开封后，溶于400µL体积的1×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂），于沸水浴中加热5分钟，冷却后可根据需要进行小量分装，每管20µL，-20℃贮存，每次取一管使用。
2.如长期贮存后使用，使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。
注意事项：1.建议分离胶浓度12%，浓缩胶浓度5%，制胶时先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。
电泳时，80v电压大约跑1小时后，待指示剂沿到达分离胶上沿时，将电压调至120v，直到电泳结束。
整个电泳过程大约需3-4个小时。
2.电泳之后可将胶进行染色观察，如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液，该试剂具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。
相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P10164×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒P1300-500考马斯亮蓝快速染色液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
质量检测：
5µl 的该 Marker 用于 12% 的凝胶进行SDS-PAGE电泳 (mini gel)并用考马斯亮蓝R-250染色,能得到7 条亮度相同的锐利条带。
操作步骤：
1. 室温溶解或37- 40°C加热几分钟溶解，轻摇以确保溶液混合均匀。 2. 为避免污染最好分装保存以备使用，取所需体积的Marker置于一干净离心管中并封好口。 3. 沸水中煮5分钟。使蛋白完全变性。冷却并混合均匀以备上样进行SDS-PAGE电泳。 4. 上样并进行 SDS-PAGE电泳。 5. 该Marker适用于考马斯亮蓝, 银染或其他蛋白染色方法。
包 装 量：
使用说明书
目编号
包装单位
PP2001 PP2002
100µl（20次） 250µl（50次）
浓 度：每种蛋白约 0.1－0.2mg/ml 在 1×loading Buffer 储运温度：收到产品后分装冻存，避免反复冻融降解蛋白，-20℃ (长期保存请置于-70℃ )
(用于小胶 5µl/次可用 20 次 用于大胶 10µl /次 可用 10 次)
的胶。胶浓度为 8-10% 时蛋白 Marker 中低分子量的蛋白易于同染料前沿跑在一条线上不易区 分，在 12-15%的胶上及梯度电泳中，所有的条带都能锐利清晰分开。
推荐上样量：
上样量 5µl 10µl 20µl
胶厚度大小
0.75mm thick mini
1.5mm thick mini 0.75mm thick large 1.5mm thick large
NOT FOR HUMAN OR DRUG USE
制品说明：本产品是由 7 种蛋白质分别纯化后混合而成的蛋白质溶液，分子量范围为 14KD－116KD，经 SDS
－聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用考马斯亮蓝 R－250（Coomassie Blue R-250）染色后可得清晰的 7 条蛋白带。建议使用分离浓度为 12%～15%。
适用胶浓度：最优适用于 12% (37.5:1 丙烯酰胺:双丙烯酰胺)的聚丙烯酰胺凝胶。该 Marker 也可用于 8-15%
低分子量蛋白质 Marker II
地 址：北京市海淀区彰化南路 18 号院 6-3-2 电 话：010 – 51286531/68232041/68232051/68235911（Fax） 市场部：info@ 合成部：oligo@ 测序部：seq@