任务2微生物生理生化特性鉴定

明胶液化试验
一些细菌可产生胞外酶，使 明胶蛋白分解为氨基酸,而失去明 胶的凝固能力。
阴性
阳性
阴性
阳性
观察结果记录
菌名
菌种 1 菌种 2 菌种 3
淀粉水解试验
脂肪水解试验
明胶液化试验
任务实施
1.按经批准的方案实施任务，设计并填写记录单。 具体任务： 任务3-2 微生物生理生化特征鉴定 2.记录过程，观测并报告结果。
淀粉酶试验
一些细菌可产生淀粉酶将淀粉 分解为双糖或单糖，加入碘不变色。
接种菌，可 产生淀粉酶
卵磷脂酶试验
一些细菌产生卵磷脂酶，可以 分解卵磷脂产生甘油脂和水溶性的 磷酸胆碱，在菌落周围形成一个乳 白色的沉淀或浑浊带。 乳白色 浑浊带 透明圈
（三）明胶水解试验
1.用接种针挑取待试菌培养物，以较大量穿刺接种于明 胶高层约2/3深度。 2.将接种后的试管置20℃中，培养2～5d。 3.观察明胶液化情况。 每天观察结果，若因培养温度高而使明胶液化时应不 加摇动，静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细 菌液化，如却被液化，即为试验阳性。
落分别进行试验。
二、常见的生理生化试验
（一）淀粉水解试验
1.将固体淀粉培养基熔化后，冷却至50℃左右，无菌操作制成平板。 2.用记号笔在平板背面的玻璃上做标记，将平板化成两半，一半接种 大肠杆菌作为试验菌，另一半接种枯草芽孢杆菌作为阳性对照菌， 均用无菌操作划线接种。 3.于36±1℃培养24～48h。 4.打开皿盖，滴加少量碘液于培养基表面，轻轻旋转平皿，使碘液铺 满整个平板。立即检视结果，阳性反应（淀粉被水解）为琼脂培 养基呈深蓝色、菌落周围出现无色透明环。阴性反应则无透明环。 透明环的大小还能说明该菌水解淀粉能力的强弱。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而实验结果与菌种产生淀粉 酶能力、培养时间、培养基含有淀粉琼脂平板不易保存于冰箱， 因而临用时制备为妥。
的生长情况。
4. 在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培
养后,观察培养基的pH值变化。
（五）生理生化试验的注意事项
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多 为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌
（二）油脂水解试验
1.将溶化的固体油脂培养基冷却至50℃左右时，充分摇荡， 使油脂均匀分布。无菌操作倒入平板，待凝。 2.用记号笔在平板底部划成两部分，一半接种枯草芽孢杆 菌作为试验菌，另一半接种金黄色葡萄球菌作为阳性对 照菌。 3.将上述两种菌分别用无菌操作划“十”字接种于平板的 相对应部分的中心。 4.将平板倒置，于37℃温箱中培养24h。 5.取出平板，观察菌苔颜色，如出现红色斑点说明脂肪水 解，为阳性反应。
制定方案
1.完成以上问题，各分组做出微生物生理生化特征鉴定的工
作流程和注意事项。
2.按照实训中心给定的条件，合理划分工作阶段、小组工作 任务和个人工作任务。 3.拟定工作详细流程和时间安排，设计过程记录和结果报告 方法。 4.各组由组长阐述小组的实施方案，全班共同讨论各个小组 的方案，整合意见，修订上述操作流程、所需器材、试
剂、结果记录和报告方法，确定实施方案。
相关知识
一、生理生化试验的概念
及其类型
二、常见的生理生化试验
一、生理生化试验的概念及其类型
（一）定义 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的
代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、
属种的试验。 （二）设计原则 在试验中加入某些 化学物 质，使细菌代谢 途径中分解代谢产物与加入的化 学物质发生反应， 产生某些变化或出现某种特征。
（三） 生理生化试验的类型
1 .糖（醇）类代谢试验
2 .氨基酸和蛋白质代谢试验
3 .有机酸盐和铵盐的利用试验
4 .呼吸酶类试验
5 .毒性酶类试验
（四）生理生化试验的方法
1. 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产 物所生成的颜色反应。
2. 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
3. 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌
任务3-2 微生物生理生化特性鉴定
任务3-2 生理生化特征鉴定
能力目标 1会测定微生物各种生理生化指标，并能进行更深入的识别和鉴定； 2会使用和维护菌种识别鉴定的相关仪器设备，能做好菌种识别和鉴 定的档案，品种记录。
知识目标
1微生物生理特征的相关知识；2微生物酸碱度、耐盐性、生长温度、 酶等生理生化指标测定的原理和方法；3酸度计、电导仪等相关仪器 设备使用和维护的知识。
学习情境三 菌种的识别和鉴定
任务3-1 形态特征鉴定 任务3-2 生理生化特征鉴定
情景任务引入百度文库
情景3
对任玲同学认真负责的工作状态，宋主任很欣赏，她又交给任玲一 项新的任务，让她把所有的菌种重新整理一下，并汇报一下存在的问 题。
情景3.2
不同微生物对淀粉、蛋白质和脂肪等大分子物质的分解利用能力、代 谢途径、代谢产物不完全相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。 因此，当从微生物的形态、菌落特征等方面无法区分微生物的种类时，微 生物的生化反应是微生物分类鉴定的重要依据之一。任玲同学经过个体形 态的初步识别，还剩下4株杆状细菌无法定性，根据菌种保藏目录，剩下 的4株杆菌的生理生化特性不一样。因此，任玲计划通过生理生化特性的 鉴定方法来进行鉴定。
素质目标
1实事求是、科学严谨的工作态度； 2具备农用微生物菌种鉴定相关法规知识
信息获取和处理
如果你是任玲同学，将如何完成这项工作，你需要先解决哪些问题呢？
任务3-2 微生物生理生化特性鉴定
（对淀粉、蛋白质和脂肪等大分子物质的分解利用情况） 1.是不是所有微生物对大分子物质的利用情况都一样？为什么？ 2.我们知道当淀粉遇到碘液会发生什么现象？如果淀粉被分解后又会发生什 么现象？我们可不可以用这种现象来进行微生物淀粉利用情况的检测呢？ 如果不利用碘液，你又如何证明淀粉水解的存在呢？ 3.明胶具有以下特性：是一种水溶性的蛋白质混合物，同时它还可以作为凝 固剂（凝固点大于），想想利用这些特性我们是否可以来检测微生物对 此类蛋白质的利用情况？ 4.脂肪分解后可以产生脂肪酸，脂肪酸是酸性物质，想一想利用这一特性， 我们如何检测微生物对脂肪的利用情况？