MicroRNA在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达谱的变化
大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中血流动力学及炎症因子的表达变化
ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ ｃａｐｓａｉｃｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｖａｇａｌ ａｎｄ
ｓｃｉａｔｉｃ ｓｅｎｓｏｒｙ ｆｉｂｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ａｎｄ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ［ Ｊ］ ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｍａ－
ｃｏｌ， ２０００，３９９（２－３） ：２５１－２５８．
１．５３ ±０．２６ １．９２ ±０．３２ 倡＃ ２．２２ ±０．３４ 倡＃ ３．８３ ±０．４２ 倡＃ ４．１１ ±０．４８ 倡＃
１４３ ±１７ １４４ ±１８ １５１ ±１５ １４５ ±２１ １４２ ±８
２７７ ±３８ ２８４ ±４０ ２７９ ±４４ ２８２ ±３９ ２７６ ±４２
１．４６ ±０．１３ １．４９ ±０．２１ １．５０ ±０．１８ １．５２ ±０．２４ １．５５ ±０．２８
Ｓｕｒｇｅｒｙ， １９９６，１２０（２） ：２２７－２３２．
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山东医药 ２０１４ 年第 ５４ 卷第 ４４ 期
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大鼠心肌缺血_再灌注损伤模型的改进与评价
V o l 16 N o 14 CK4301±251u l, CK 2M B 2288±328u l, LDH 2329±216u l, A ST 371±57u l (N = 5)。
断 3、4、5共 3条肋骨,以使心脏暴露良好)。
破心包, 左手用眼科镊夹一小棉球,用棉球将胸腺及左心耳 文献记载的方法[ 2～ 4 ] ,并根据本实验室条件,对该模 冠状静脉。
注意左手推胸腺时一定要轻,太重心脏反 1 材料与方法国医科大学实验动物部提供) ; N iHon Konden 型心 电图机 (上海 KOND EN 医用电子仪器厂) ;小动物2mm 的中央有圆孔的软垫,再将线穿过直径 银,管旁边附有直尺做刻度组成) ;红四氮唑 (T TC ) 一起压向冠状动脉。
夹紧丝线阻断冠脉血流,放松丝 插管接呼吸机,按 1～ 1. 5m l 100g 潮气量, 70～ 80次分的频率给予呼气末持续正压呼吸,呼∶吸比为中山医科大学附属第二医院急诊科15m in,左, ,1第 6卷 第 4期解剖科学进展2000年 PRO GR ESS O F ANA TOM ICAL SC IEN CES 2000大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评价王淑侠 兰小莉1 王吉文2 裴著果(中国医科大学第二临床学院核医学科 沈阳 110003)摘要 大鼠心肌缺血再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失 常药物疗效常用的动物模型。
本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的 方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。
结果:大鼠左冠状动脉主干缺血30′再灌 120′危险区左室重量比为 55%± 5% ,坏死区危险区为 58%± 6% (N = 10)。
心肌酶谱结果:关键词 心肌再灌注损伤;大鼠;模型, T TC 染色法阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间 2∶1,压力在 5～ 15cm H 2O 之间。
微小RNA在缺血再灌注损伤中的作用研究
ｍｉ Ｒ－ ４ ９ ４ 、 ｍｉ Ｒ－ ４ ９ ９、 ｍｉ Ｒ－ １ ２ ５ ｂ、 ｍｉ Ｒ 一 １ ４ ４和 ｍｉ Ｒ－ ４ ５ １在 缺 血 后
与多种疾病的发生发展密切相关 ， 在 缺 血 再 灌 注损 伤 中 发 挥
着特殊的作用 。 １ 缺血 再 灌 注 损伤 后 ｍｉ Ｒ Ｎ Ａ表 达谱 的变 化
心 肌 重 构 的 多个 阶段 发 挥 了 重 要 的 保 护 作 用 ， 如 抑 制 心 肌 细 胞 的凋 亡 、 迁 移 和 炎性 反 应 ， 促 进 血 管 再 生 等 。ｍｉ Ｒ —
・７ ７ ６ ・
中华 老 年心 脑血 管 病杂 志 ２ ０ １ ５年 ７月 第 １ ７卷 第 ７期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ＪＧｅ ｒ ｉ ａ ｔ ｒＨｅ ａ ｒ ｔＢ ｒ ａ ｉ ｎＶ ｅ ｓ ｓ ｅ ｌ Ｄ ｉ ｓ ， Ｊ ｕ ｌ ｙ２ ０１ ５ ， Ｖ ｏ ｌ １ ７ ， Ｎ ｏ ． ７
ｌ ３ ３ 、 ｍｉ Ｒ－ ２ ４、 ｍｉ Ｒ 一 ４ ９ ４ 、 ｍｉ Ｒ一 ４ ９ ９和 ｍｉ Ｒ一 １ ２ ５ ｂ通 过 作 用 于 凋
ｍｉ Ｒ ＮＡ 在 体 内 的表 达 水 平 受 到 许 多 因 素 的 调 节 ： 如 初
级转录受到转录因子 的独立 调节 ； 而 影 响 ｍｉ ＲＮＡ 成 熟 的 ２
ｍＲ ＮＡ 的 翻 译 ， 从 而 调 节 细胞 内 蛋 白质 的 表 达 水 平 ， 是 在 转 录 后 水 平 调 节 基 因 表 达 的一 种 内源 性 调 控 机 制 ＿ １ ］ 。ｍｉ Ｒ ＮＡ 是 目前 最 多 的 。
缺血性心律失常相关微小RNA在大鼠心脏的表达变化
在 心肌缺血预适应过程 中， 心
肌微小 Ｒ Ｎ Ａ的表 达发 生明显变化 ， 这些微小 Ｒ Ｎ Ａ可能对缺血预适应介导 的抗心律失 常起重要 调节作用 ， 为缺血 性
［ 文章编 号］１ ０ ０ ０ —１ ９ ０ ５ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ ２—０ ０ ９ ５ —０ ３
ｏ ｎ ｄｌ ａ ｎ ｇ ｌ ￣ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ＲＮＡｓ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｉ ｓ ｅ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｒ ｒ ｈ ｙ ｔ ｈ ￣ ａ ｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｈｅ ａ ｒ ｔ
ｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｓ Ｄ ｒ ａ ｓ ｔ ｗ ｅ ｒ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍ ｌ ｙ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｓ ｈ ａ ｍ － ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｄ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ｐ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｉｎ ｎ ｇ （ Ｉ Ｐ ）
维普资讯
Ｖ ｏ １ ． ４１ ． Ｎ０ ． ２
第４ ｌ 卷 第２ 期 ２ ０ ０ ７年 ４月
哈尔滨 医科大学学报
Ｊ ＯＵＲＮＡ Ｌ Ｏ Ｆ ＨＡＲＢ Ｉ Ｎ ＭＥ ＤＩ Ｃ ＡＬ ＵＮＩ ＶＥ ＲＳ Ｉ ＴＹ
Ａ ｐ ｒ ． ， ２ Ｏ Ｏ ７
缺血 再 灌 肌有 ４个 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ上 调 ， ５ 个 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ下 调 ； 缺 血 预 适 应 组 非 缺 血 再 灌 区有 ２ ３ 个 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ上调 ， 包 括三个
肌肉特异表 达的 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ（ ｍ ｉ ｒ － １ 、 ｍ ｉ ｒ － １ ３ ３和 ｍ ｉ ｒ － ２ ０ ６ ） ， 另有 ９个 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ表 达下 调。结论 心律 失常机制研究提供 了新 思路 。 ［ 关键词 ］ 微小 Ｒ Ｎ Ａ ； 缺血预适应 ； 心律失 常 ； 大 鼠 ［ 中图分类号 ］Ｒ ９ ６ ６ ； Ｒ ９ ７ ２ ． ２ Ｅｘ ｐ ｒ ￣ ［ 文献标识码 ］ Ａ
微小RNA在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制
Ｒｅ ｓ，２ ０１ １，９ １：１ ０ ８ ・ １ １ ５． Ｍｉ ｕ ｒ ａ Ｔ，Ｔ ａ ｎ ｎ ｏ Ｍ ， Ｓ ａ ｔ ｏ Ｔ． Ｍｉ ｔ ｏ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｉ ｆ ａ ｌ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｓ ｉ ｎａ ｇ ｌｌ ｉ ｎ ｇ ｐ ａ ｔ ｈ ｗａ ｙ ｓ ｉ ｎ ｍｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｌ ｐ ａ ｏｔ ｒ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｒ ｏ ｍ ｉ ｓ ｅ ｈ ｅ ｍｉ ａ ／ ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ— ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ．Ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｏ ｖ ａ ｓ ｃ Ｒｅ ｓ ，２ ０１ ０，８ ８：７ － １ ５． Ｈｕ ｌ ｌ ｉ ｎ ｇ ｅ ｒ Ｔ Ｇ， Ｍｏ ｎ ｔ ｇ ｏ ｍｅ ｙ ｒ ＲＬ， Ｓ ｅ ｔ ｏ ＡＧ ， ｅ ｔ ａ １． Ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ
ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｅ ｍｐ ｏ ｒ ａ ｒ ｙ ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｃ ｏ ｒ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ａ ｒ ｔ ｅ ｒ ｙ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｄ ｏ ｇ ．Ａｒ ｃ ｈ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ，１ ９ ６ ０，７ ０：６８ － ７ ８ ．
超载 激活多种酶类 ， 破坏质膜 完整 性 ， Ｃ ａ “及 凋亡相 关 因子 等外 流 ， 使细胞发生不可逆性损 伤， 导致 细 胞 死 亡 。 。
安全性等 问题还在探索 。 目前 关于 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ与 Ｉ Ｒ Ｉ 关 系的 临
大鼠心力衰竭细胞 microRNA 表达谱及生物信息学分析重点
・基础研究・大鼠心力衰竭细胞ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达谱及生物信息学分析朱海娟 何淑芳 金世云 胡军 张野２３００６１ 合肥，安徽省妇幼保健院麻醉科（朱海娟）；２３０６０１合肥，安徽医科大学第二附属医院麻醉科（何淑芳、金世云、胡军、张野）通信作者：张野，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｅ＿ｈａｓｓａｎ＠ｓｉｎａ畅ｃｏｍＤＯＩ：１０畅３７６０／ｃｍａ畅ｊ畅ｉｓｓｎ畅１６７１－０２８２畅２０１６畅０４畅００９【摘要】目的 观察大鼠心力衰竭细胞中ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）表达变化，利用生物信息学分析技术探索差异ｍｉＲＮＡ靶基因的功能。
方法 １８只成年雄性ＳＤ大鼠，体质量２００～２２０ｇ，随机数字表法随机分为两组：正常对照组（ＣＯＮ组）和心力衰竭组（ＨＦ组）。
ＨＦ组制备阿霉素致心力衰竭模型，ＣＯＮ组注射等量生理盐水。
提取大鼠心脏，Ｌａｒｇｅｎｄｏｒｆｆ逆行灌注法分离心室肌细胞，提取总ＲＮＡ行ｍｉＲＮＡ表达谱检测，筛选两组差异表达的ｍｉＲＮＡ，荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ技术验证结果，Ｔａｒｇｅｔｓｃａｎ、ｍｉＲａｎｄａ软件预测差异表达ｍｉＲＮＡ的靶基因，并对靶基因行生物信息学分析。
结果 芯片检测结果显示，与ＣＯＮ组相比，ＨＦ组共有３７个ｍｉＲＮＡ表达发生显著改变，其中２２个ｍｉＲＮＡ上调，１５个ｍｉＲＮＡ下调（均Ｐ＜０畅０１，ＦＤＲ＜０畅０５）。
荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｉＲ－１３３ｂ－５ｐ（ｔ＝１４畅５６，Ｐ＜０畅１）、ｍｉＲ－６２１６（ｔ＝９畅３２，Ｐ＜０畅１）、ｌｅｔ－７ｅ－５ｐ（ｔ＝１３畅９２，Ｐ＜０畅１）表达水平，变化趋势与芯片结果一致。
生物信息学分析显示，差异表达ｍｉＲＮＡ调控的靶基因显著富集于３１个基因组（均Ｐ＜０畅０１，ＦＤＲ＜０畅０５）和１２条信号通路（均Ｐ＜０畅０５，ＦＤＲ＜０畅０５），其中泛素蛋白酶体系统、ＭＡＰＫ信号通路、Ｔｏｌｌ样受体信号通路富集程度较高。
结论 阿霉素诱导的心力衰竭模型大鼠心肌细胞中ｍｉＲＮＡ表达谱发生显著改变，这些差异表达ｍｉＲＮＡ可能通过调控靶基因功能参与心力衰竭的病理生理过程。
microRNA调控自噬在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展
安徽医科大学学报"'01 2018Sep ;5&(9)• 1485 +网络出版时间：2018 - 8 - 2 09 :40网络出版地址：http ://kns. cnki. net/kcms/detail/'4. 1065. R. 20180731. 1310. 0'7. htmlmicroRNA 调控自噬在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展杨红星1，李绍旦2综述杨明会2审校摘要心肌缺血再灌注损伤是缺血性心脏病中的治疗难点。
在其诸多机制中，近年来自噬引起了研究者的关注。
自噬是 细胞内一种通过溶酶体降解长寿命蛋白和受损细胞器的代谢途径，在细胞应激过程中起到了重要作用。
miciRNA 作 为近年来广为研究的转录后调控者，其在自噬调控过程中的 具体作用和分子机制仍然有待于更多深人研究，该文综述近 年来关于m iiR N A 通过调控自噬的具体环节从而干预心肌 缺血再灌注损伤的研究，为基础与临床研究提供参考。
关键词m iiR N A ;自噬;心肌缺血再灌注损伤中图分类号 R '4;R 541文献标志码A 文章编号1000 -1492(2018)09 -1485 -04 doi ：10. 19405/j. cnki. issn1000 - 1492. 2018. 09. 0372018 -02 -28 —收基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（编号：2012C B 518601)作者单位:1北京中医药大学第一临床医学院，北京1000292解放军总医院中医院，北京100853作者简介:杨红星，男，博士研究生；杨明会，男，教授，主任医师，博士生导师，责任作者，E -m a il :y m h 9651@s i n a. c o m[22] L i X Y ，W a n g S S ，H a n Z ，e ta l.T r ip t o l i d e r e s t o r e sa u to p h a g y /a lle v ia te d iab e tic r e n a l f ib r o s is th r o u g h t h e m i R -141-3p /P T E N / A k t /m T O R p a t h w a y [J ]. M o l T h e r N u c le ic A c id s ，2017,9:48 - 56.[23] W a n g H ，F e n g Z ，X ie J ，e t a l. P o d o c y te -s p e c if ic k n o c k in o f P T E Np r o te c ts k id n e y fro m h y p e r g ly c e m ia [ J ]. A m J P h y s io l R e n a l P h y s io l ，2018 ，314(6) ：F 1096.[24] S u n J ，L i Z P ，Z h a n g R Q ，e t a l. R e p r e s s i o n o f m iR -217 p r o te c tsa g a in s t h ig h g lu c o s e -in d u c e d p o d o c y te in ju r y a n d in s u li n r e s is ta n c eb y r e s to r in g P T E N -m e d ia t e d a u to p h a g y p a th w a y [ J ] • B i oc h e m B io - p h y s R e s C o m m u n ，2017，483 (1) ：318 -24.[25] W a n g X M ，Y a o M ，L iu S X ，e t a l. I n te r p la y b e tw e e n th e N o tc ha n d P I 3K /A k t p a t h w a y s i n h i g h g l u c o s e -i n d u c e d p o d o c y t e a p o p t o - s i s [ J ]. A m J P h y s io l R e n a l P h y s i o l ，2014，306(2) ：F 205 -13.[26] L iu X ，Z h a n g Y ，S h i M ，e t a l. N o tc h 1 r e g u la te s P T E N e x p r e s s io nto e x a c e r b a te r e n a l tu b u lo in te r s tit ia l f ib r o s is in d ia b e tic n e p h r o p a th y b y in h ib it in g a u to p h a g yin te r a c t io n s w ith H e s 1 [ J ]. B io -c h e m B io p h y s R e s C o m m u n ，2018，497(4) ：1110 -6.[27] L u o M ，T a n X ，M u L ，e t a l. M iR N A -21 m e d ia te s th e a n tia n g io g e n ic a c tiv ity o f m e /o r m i n th r o u g h ta r g e tin g P T E N a n d S M A D 7 e x p r e s s io n a n d P I 3K /A K T p a tliw a y [ J ]. S c i R e p ，2017，7 ：43427.[28] D e y N ，D a s F ，M a r ia p p a n M M ，e t a l. M ic r o R N A -21 o r c h e s tr a te s心肌缺血再灌注损伤（m y o c a r d i a l is c h e m iar e p e r f u s io n i n j u r y ，M I R I )是指在原发或继发的缺血 性心脏疾病中恢复心肌缺血部位的血液供应后却加 剧了缺血心肌的应激反应和细胞死亡的病理生理过 程。
2021年MicroRNA-21在动脉粥样硬化疾病中的研究进展(全文)
2021年MicroRNA-21在动脉粥样硬化疾病中的研究进展（全文）动脉粥样硬化发病机制复杂，它是众多心脑血管疾病发病的病理基础，临床上常见的心血管疾病，如心绞痛，心肌梗死等多数是由动脉粥样硬化引起的，这些疾病严重危害了人们的健康。
年龄、性别、高血脂、遗传以及生理、吸烟、高血压、糖尿病、肥胖、精神压力大等，这些都是动脉粥样的危险因素。
长期以来，对于动脉粥样硬化的发病机制，人们进行了大量的研究，关于它的发病机制有很多学说，比如脂质浸润学说，血管增生学说，平滑肌细胞增殖学说，还有内皮损伤学说等。
现在的观点认为动脉粥样硬化的发病始于血管内皮的损伤，低密度脂蛋白在内皮细胞沉积，单核细胞入侵，氧化低密度脂蛋白和巨噬细胞的清道夫受体结合，形成巨噬源性泡沫细胞，平滑肌细胞迁移，吞噬脂质形成肌源性泡沫细胞，平滑肌细胞增殖，纤维帽形成。
各种因素可以使泡沫细胞坏死，形成粥样斑块。
粥样斑块的破裂引发临床心脑血管疾病。
进一步探讨动脉粥样硬化的发病机制，为临床治疗心脑血管疾病提供新的理论基础，具有很重要的意义。
近年来，miRNA普遍引起人们的关注，人们发现miRNA在动脉粥样硬化的发生和发展中起着十分重要的作用。
miRNA是一种非编码的小RNA，它可以和mRNA结合，在转录后水平对基因的表达进行调控。
miRNA在很多疾病中发挥着十分重要的作用，近年来，研究发现，miRNA与动脉粥样硬化的发生和发展关系密切[1,2]。
随着人们对miRNA研究的深入，发现miRNA对巨噬细胞、内皮血管和平滑肌细胞细胞均有调节作用[3]。
miRNAs可以和靶基因的3´UTR 相结合，从而调控靶基因的表达。
近期研究发现miRNAs在心肌重构和肥厚、心肌细胞凋亡、心力衰竭和心律失常中扮演着重要的角色，在心肌缺血和心肌梗死等动脉粥样硬化中的研究也取得了很大的突破[4]。
研究发现一些miRNAs的功能与血管内皮细胞的增殖、凋亡和分化密切相关。
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随着静脉溶栓、经皮冠状动脉腔内成形术等技术治疗急性心肌梗死的广泛开展，心肌缺血再灌注损伤（ischemic reperfusion ，I ／R ）日益成为人们关注的热点。
探索心肌缺血再灌注损伤的发病机制和防治途径，减轻或防止再灌注损伤的发生，是临床上亟待解决的重要课题。
缺血再灌注损伤的特征性改变是细胞凋亡，细胞凋亡的程度决定着缺血再灌注损伤的轻重，对缺血再灌注损伤的预后判断具有重要意义。
近年来发现的微小RNA （microRNA ）在基因的转录后调控中发挥着重要作doi ：10．3969／j．issn．1006-5725.2012.2.013作者单位：100700北京军区总医院胸外科（谭健）；200433上海市，第二军医大学附属长海医院（肖健，王志农）MicroRNA 在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达谱的变化谭健肖健王志农摘要目的：分析微小RNA （microRNA ）在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达谱的变化，为缺血再灌注损伤治疗中的microRNA 干预策略提供可供选择的目标microRNA 。
方法：利用microRNA 基因芯片技术检测大鼠正常心肌及缺血再灌注损伤心肌microRNA 表达谱的差异。
实时定量PCR 检测上述2组大鼠心肌组织中基因芯片结果差异性表达的microRNA ，验证芯片结果的可信性。
结果：与正常大鼠心肌组织相比，缺血再灌注心肌组织中表达上调的microRNA 有10个，分别为rno-microRNA-21、rno-microRNA-26b 、rno-microRNA-499、rno-microRNA-126、rno-let-7e 、rno-microRNA-23a 、rno-microRNA-23b 、rno-let-7a 、rno-let-7d 、rno-microRNA-26a ；表达下调的microRNA 有6个rno-microRNA-214、rno-microRNA-125b-5p 、rno-microRNA-1、rno-microRNA-133a 、rno-microRNA-133b 、rno-microRNA-24。
结论：缺血再灌注损伤中伴有microRNA 表达谱的变化。
关键词再灌注损伤；microRNA 微阵列；微小RNA Changes of the expression profile of microRNAs in myocardium of rats with ischemia reperfusion injury TAN Jian *，XIAO Jian ，WANG Zhi-nong．*Department of Thoracic Surgery ，the Military General Hospital of Beijing PLA ，Beijing 100700，China【Abstract 】Objective To investigate the changes of the expression profile of microRNAs in myocardium of rats with ischemia reperfusion injury．Methods The expression profiles of microRNA in normal myocardium and ischemia reperfusion injured myocardium of rats were detected by microRNA genetic chip ，and were verified by real-time quantitative PCR．Results As compared with normal myocardium ，10microRNAs ：rno-microRNA-21，rno-microRNA-26b ，rno-microRNA-499，rno-microRNA-126，rno-let-7e ，rno-microRNA-23a ，rno-microRNA-23b ，rno-let-7a ，rno-let-7d ，and rno-microRNA-26a were up-regulated ，and 6microRNAs ：rno-microRNA-214，rno-microRNA-125b-5p ，rno-microRNA-1，rno-microRNA-133a ，rno-microRNA-133b ，and rno-microRNA-24were down-regulated in the ischemia reperfusion injured myocardium．Conclusions Ischemia reperfusion injury is associated with the change of the expression profile of microRNAs．【Key words 】Reperfusion injury ；MiRNA microarray ；MiRNAtesticular function ［J ］．Best Pract Res Clin Endocrinol Metab ，2011，25（2）：391－402．Kalfa N ，Philibert P ，Baskin L S ，et al．Hypospadias ：interactions between environment and genetics ［J ］．Mol Cell Endocrinol ，2011，335（2）：89－95．McIntyre B S ，Barlow N J ，Foster P M．Androgen-mediated development in male rat offspring exposed to flutamide in utero ：permanence and carrelation of early postnatal changes in anogenital distance and nipple retemion with malformations in androgen-dependent tissuess ［J ］．Toxicol Sci ，2001，62（2）：236－249．Kalfa N ，Sultan C ，Baskin L S．Hypospadias ：etiology and current research ［J ］．Urol Clin North Am ，2010，37（2）：159－166．Kim T S ，Jung K K ，Kim S S ，et al．Effects of in utero exposure to DI （n-Butyl ）phthalate on development of malereproductive tracts in Sprague-Dawley rats ［J ］．J ToxicolEnviron Health A ，2010，73（21－22）：1544－1559．李民英，陈龙华，陆小军，等．NAD＋对受照射L02肝细胞株bcl-2、bax 、p53蛋白表达的影响［J ］．实用医学杂志，2010，26（18）：3323－3326．杨开明，王勇杜，赵康．胚胎早期心脏发育中Bax 、Bcl-2及NF-κB 的表达及对心肌细胞分化的调控［J ］．实用医学杂志，2011，27（9）：1542－1544．（收稿：2011－05－03编辑：陈兵）［2］［3］［4］［5］［6］［7］用，大量研究表明，心肌特异性表达的microRNA 参与调控了心脏细胞凋亡［1－2］。
那么缺血再灌注损伤中大鼠心肌microRNA的表达谱如何改变，缺血再灌注是否可能通过调控microRNA的表达来影响心肌细胞凋亡目前尚未见报告。
为此，我们进行了实验研究，现报告如下。
1材料与方法1．1材料1．1．1动物分组及模型制作SPF级成年雄性SD 大鼠16只（由第二军医大学动物中心供应，SCXK （沪）2007－0003），体质量220～380g，随机分为2组，其中1组是假手术组（只穿线不结扎），另外1组为缺血再灌注组，每组8只。
在胸骨左侧第3～4肋间开胸，暴露心脏，在左心耳及肺动脉圆锥间找到左前降支（LAD），在距其起始部3～5mm处用6－0带线缝合针穿过，于心肌上放一垫片，用单活结结扎LAD，观察60min后，松线再灌注，逐层关胸，再灌注180min后处死。
成功标准：结扎LAD 后心电图Ⅱ导联ST段出现弓背向上抬高，T波高耸等为缺血成功，放松结扎线后，抬高的ST段下降1／2以上为再灌注成功。
假手术组与实验组行相同手术步骤，但仅穿线不结扎。
1．1．2试剂四氮唑红（TTC）试剂盒（南京凯基公司），Trizol总RNA提取试剂盒以及RNA反转录试剂盒（美国Invitrogen公司），10mmol／L dNTPs以及5U／μL Taq DNA聚合酶（美国Promega公司），其余试剂均为分析纯。
1．2方法1．2．1总RNA的提取及质量检测按照TRIzol 试剂（Invitrogen life technologies）说明书的步骤，逐步提取出各组心肌组织中的总RNA。
应用紫外分光光度计测定总RNA的吸光度A260值和A280值，用A260值计算其浓度，并计算A260／A280检测其纯度；琼脂糖凝胶电泳法进一步检测总RNA 质量。
1．2．2基因芯片检测各组心肌microRNA的表达取2～5μg总RNA样品，通过YM-100（Millipore）微离心过滤柱得到片段＜300nt的小RNA。
杂交反应通过微循环泵杂交仪器在μParaflo微流体芯片上过夜，该芯片上含有最新版本探针序列（Version9．2microRNA数据库http：／／microrna．sanger．ac．uk／sequences／）。
杂交检测使用Cy3和Cy5特异性荧光标记、激光扫描仪（GenePix4000B，Molecular Device）采集杂交图像、Array-Pro（Media Cybernetics）软件对杂交图像进行数字化转换。
数据处理和分析首先是扣除背景，计算重复点平均值和标准偏差，然后通过LOWESS（Locally-Weighted Regression）过滤进行标准化。
对于双色标记实验，将计算两种检测信号的比值和t-test的P值。
以P＜0．01定义显著差异性表达。
1．2．3实时定量PCR检测目的microRNA表达量挑选心肌特异性表达且在两组心肌间表达有差异的基因作为验证基因。