28-04 最低检测限和定量限_分析灵敏度试验
1.检测限和定量限的确定方法
目前的一些常用方法的缺陷
空白
真实
SD
低值
假设
导致低
LOD/Q
无法 区分
虚假
分布
对称
忽略事 实(LOD)
LOB
LOB
空白样本结果接近零时的分布
仪器内部产生该类型的信号时，许多仪器自动转换阴性值信号为零或一个 低值阳性值。因此只提供非阴性浓度值输出 假设该值超过空白测量中实际空白样本显著变异分布的第95百分位数 如果样本产生一个超过该限值的观测值，它可以宣称分析物含量大于零
α=β=5%。一个α值为5%对应使用空白值分布第95百分位数，宣称测量值显著高于空白限值 一个空白值呈Gaussian分布：LoB=µB+1.645σB
LOB
计算方法
•浓度低于零的情况下不被报告或空白值不呈Gaussian分布时（空白值呈不 对称分布），第95百分位数通过其他方法估计 直截了当的程序使用基于命令值的非参数原理。通过大量的Nb值排序，第 95百分位数作为阳性第Nb(95/100+0.5)位观测值来估计
LOB
LOB验证举例
•用户进行25次空白测量（5个样本5天测量5次） 目测检查显示空白值呈不对称分布，因此，非参数估计LoB，在观测区的第 24位和第25位之间线性内插法得LoB=19.17 U/L（=18.01+0.25*（22.6518.01））
LOD
LOD
第II类错误
为了表述第II类错误，一方面不得不考虑最小样本浓度等于LoD,即提供规定概率下超过LoB 的结果 当第II类错误β水平设为5%时，那么95%的测量结果超过LoB
LOD
图示
LOD
样本分布
•如果样本中分析物的实际浓度等于LoB，50%的测量值超过LoB（a）。样本 实际浓度等于LoD，（100%-β）（95%）的样本测量值超过LoB(b) •样本不呈Gaussian分布（且不能转换为Gaussian分布），有可能使用非参 数估计LoD，另外，有必要生产浓度接近暂定LoD的样本。用于检查5%或更 低的测量观测值低于LoB的最低水平
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限（LOD）和定量限（LOQ）是分析方法灵敏度的两个重要指标，它们通常使用对照品来测定。
检测限是指分析方法能够从样品中可靠地检测出被分析物的最低浓度。
通常，检测限被定义为信号与噪声之间的差异，即当分析物的信号超过背景噪声的3倍时，被认为是可检测到的。
在确定检测限时，一般将对照品溶液的浓度设定为预期的检测限浓度的3～5倍，然后通过重复测量7次来计算检测限。
例如，如果预期的检测限浓度为10ng/ml，则配制一个约为30ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为3倍），然后将该溶液稀释到3/10倍，基本即为该物质的检测限。
定量限是指分析方法能够准确地定量测定样品中分析物的最低浓度。
这个浓度通常被定义为信噪比为10：1时的浓度。
与检测限类似，在确定定量限时，也需要使用对照品溶液。
具体方法是将对照品溶液的浓度设定为预期的定量限浓度的10倍，然后通过重复测量7次来计算定量限。
例如，如果预期的定量限浓度为10ng/ml，则配制一个约为100ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为10倍），然后将该溶液稀释到1/10倍，基本即为该物质的定量限。
需要注意的是，以上计算方法是一种常规做法，具体的
操作方法可能因不同的分析方法和仪器而有所不同。
检出限和定量限
检出限和定量限3倍信噪比是检出限，10倍信噪比是定量限，这个有必要知道。
除此之外，检出限表示方法能测出该物质时的最低浓度。
定量限则表示方法能准确定量出该物质的最低浓度。
具体来讲：检测限：分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量；定量限：分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。
※两者的区别在于：检测限：检测限指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。
它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。
非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
信噪比法：用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠检测出的最低浓度或量。
一般以信噪比3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限也可采用标准差法：空白值＝0时；①定背景10次以上，求出标准差σ。
②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X，即为方法的检出值；空白值不等于0；定量限：1、指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。
2、常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。
方法检出限和定量限标准做法什么时候需要进行测定？检出限（LOD）或定量限（LOQ）的测定通常是在目标物的含量接近于“零”的时候才需要进行测定。
当方法应用于所测定的分析物浓度要比定量限大的多时，检出限与定量限评定就显的不是非常有必要了。
但是对于那些浓度接近于检出限与定量限的痕量和超痕量测试，常报出“未检出”时，这时检出限或定量限对于风险评估或法规决策则就显得非常的重要。
不同的基体需要独立评估其检出限和定量限检出限（LOD）？对于大多数现代的分析方法检出限（LOD）分为两个部分，方法检出限（MDL）和仪器检出限（IDL）。
1.检测限和定量限的确定方法
空白 BLANK//空白限LIMIT OF BLANK(LOB）
空白 Blank 不含有感兴趣分析物，或至少浓度远低于感兴趣最低水平的样本 空白限 Limit of blank(LoB） 可能观测到空白样本的最高测量结果（声称概率下）
注：a）LoB不是通过测量获得的实际浓度。事实上，阳性信号的实际浓度 确认被称为LoD。同样地，LoB是含有在声称概率下分析物水平等于LoD的 样本预期的最低值
功能灵敏度比定量限无任何优势。由于该术语延续灵敏度的不赞成 用法，因此不鼓励它在体外诊断标示中的使用
定性分析中限值的使用
“检测限”
•一个定性测试的检出限有可能根据经验观测不到其增 加，例如，试剂引起的变化。因为样本中分析物可检测 的水平可能低于cutoff值，这可能增加假阴性结果的比 例
同时，高浓度样本同样也可以给出正确的阳性信号。因此，检出限 的测定试验对许多定性测试的质量控制是重要的
空白样本测量。在该单一模式下，假设尽可能高的空白 值是测定分析物存在的阈值
此为检测下限 最常见的是，进行一个空白样本的重复测量，计算这些测量值的均 值和SD，用SD乘以某一因数，加上重复测试的均值，该值被称为 LoD以及可能为LoQ（例如，分析化学）
目前的一些常用方法的缺陷
空白
真实
SD
低值 导致
无法
定性分析中限值的使用
“检测限”
•阳性和阴性结果之间的交叉点（也称为cutoff值，50% 的阳性和50%的阴性）
过渡区称为“95%的区间”，非CI（LOB与临界点相同）
样本浓度与区间关系，重复结果95%阳性结果、95%阴性结果
95%区间上限如同LoD
±20%基础上进行阴阳性结果的重复测量确认
28-04-最低检测限和定量限-分析灵敏度试验
分析灵敏度试验结果评价表年：□□□□流水号：□□□□□□检出限（Limit of Detection，LD；）、最低检测限（Lowest Limit of Detection，LLD）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信检出的最低水平。
（当测量空白样品时，分析物未检出的概率应是99%；当测量样品时，检出概率至少应是95%）。
用来描述空白响应量（RLU）的平均水平和所有响应量（RLU）对于空白均值的离散程度指标。
定量限（Limit of Quantitation，LQ）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信定量的最低水平。
（定量限所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求）。
某样品单次检测可能具有的最小响应量（RLU）仅大于空白检测低限。
注：1. 空白样品（Blank sample ，BS ）的准备：常使用检测系统的系列校准品中的“零标准”作为空白。
对某些项目，可使用术后已无某疾病的病人样品为空白样品。
2. 样本检测：：空白样品重复20次（不低于10次）作批内测定，计算空白样品组的响应量（RLU ）均值0A 和空白样品组响应量（RLU ）的标准差0S 。
3. LLD 的计算：（对于小于或等于检测低限的分析物量报告“无分析物检出”）。
（1）002LLD A S =+计算（以95%为可信限）。
（2）003LLD A S =+计算（以99.7%为可信限）。
注：1. 样本配制方法： 将已确定空白（B ）和低值（L ）的样本按照一定比例混合稀释，配制成20套（一天一套）11个等差浓度水平（10S B 、9S B +1L 、8S B +2L 、7S B +3L 、6S B +4L 、5S B +5L 、4S B +6L 、3S B +7L 、2S B +8L 、1S B +9L 、10L ）的样本。
-20℃冰箱保存备用。
“S B ”：空白样本或生理盐水；“L ”：低值样本。
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限和定量限是在分析化学中常用的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
本文将从理论和实际应用两方面介绍检测限和定量限的概念和计算方法。
一、概念解释检测限（Limit of Detection，LOD）是指在特定仪器条件下，能够被检测出来但无法准确测量的最低浓度。
通常来说，检测限是指信号与噪声之间的比例，即信噪比（S/N）达到一定阈值时的浓度。
定量限（Limit of Quantitation，LOQ）是指在特定仪器条件下，能够被准确测量的最低浓度。
与检测限相比，定量限要求信噪比更高，以保证测量结果的准确性和可靠性。
二、计算方法1. 检测限的计算方法检测限的计算方法有多种，其中常用的方法有信号与噪声法、标准差法和3倍标准差法。
信号与噪声法是指在低浓度下测量多个空白样品的信号与噪声，并计算其平均值和标准差；标准差法是指根据多个相同浓度的样品测量结果计算标准差；3倍标准差法是指将标准差乘以3作为检测限。
2. 定量限的计算方法定量限的计算方法与检测限类似，但要求信噪比更高。
通常可以使用3倍标准差法或线性回归法来计算定量限。
其中，线性回归法是指通过绘制浓度与仪器信号之间的标准曲线，根据信号与浓度的线性关系来计算定量限。
三、实际应用检测限和定量限在实际分析中具有重要意义。
首先，它们可以评估分析方法的灵敏度，判断方法是否适用于特定样品的测量。
其次，检测限和定量限可以帮助选择合适的仪器和方法，以确保分析结果的准确性和可靠性。
此外，检测限和定量限还可以用于质量控制和比较不同方法或仪器的性能。
在实际应用中，为了准确计算检测限和定量限，需要注意以下几点。
首先，要选择合适的样品和浓度范围，以涵盖需要测量的目标浓度。
其次，要控制实验条件的稳定性和一致性，避免误差的产生。
最后，要根据具体情况选择合适的计算方法，并对结果进行验证和确认。
检测限和定量限是分析化学中重要的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
检测限和定量限
LOD/LOQ（制/定量限制）确定测试用于计算用户方法的最低分析物浓度。
该测试测定用户的方法能够检测出特定分析物的最低浓度值，以及用户的方法能够定量该分析物所需的最低浓度值。
要确定特定分析物的 LOD 和 LOQ，必须定义以下测试参数：要求：从“线性”测试生成 LOD/LOQ 结果时，该“线性”测试必须具有与“LOD/LOQ 确定”测试相同的“组份”类型。
创建测试配置参数对其适用的样品组时，必须选中所有相关行的“LOD/LOQ 确定测试”复选框。
也可在数据采集结束后，通过选择“附加到所选测试的数据”表中的样品组并单击“改变样品”来选中“LOD/LOQ 确定测试”复选框。
进行所需的更改并保存样品组后，必须处理改变后的样品组。
提示：对靠近或处于 LOQ 的样品进行单独的准确度、重复性和/或中间精度测试，可以确定检测限制 (LOD) 和/或定量限制 (LOQ) 结果值。
采集要求附加到此认证测试的所有样品组方法必须完全满足用户定义的采集要求，样品组才能反映状态。
采集要求表参数：参数说明LOD/LOQ 方法从以下选项中选出 LOD/LOQ 确定的方法：1.线性曲线截距标准差 -“方法认证管理器”根据参照线性测试的截距标准差确定 LOD/LOQ2.线性曲线残差标准差 -“方法认证管理器”根据参照线性测试的残差标准差确定 LOD/LOQ3.信噪比 -“方法认证管理器”使用相关峰的 Empower 信噪比数字平均值来确定 LOD/LOQ。
提示：如果使用线性测试来确定方法的 LOD/LOQ（以上选项 1 和 2），该测试应该在靠近 LOQ 的浓度级别下进行。
平均信噪比值可以来自一个或多个级别的峰。
用于确定 LOD/LOQ 的线性测试。
限制：确定 LOD/LOQ 的方法设置为“信噪”时，该字段为只读字段。
选择线性方法后，该方法必须与 LOD/LOQ 测试在相同的认证研究中，并且包含正确的组份类型。
判据值取决于所执行研究的类型：对于平衡研究，选择精确判据。
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限摘要：药品分析方法的验证是质量控制的重要环节，为检验分析方法提供制定依据。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法是需进行分析方法验证。
在检验前期需通过验证试验得到合适的分析方法对药品进行检验，确保分析方法的可靠性，能准确检验产品质量。
分析方法验证遵循的GMP规定，根据检验项目要求预设验证内容进行验证，使样品检验达到预期要求。
本文就药品分析方法验证试验中检测限和定量限的运用进行的分析讨论。
关键词：药品分析方法；验证试验；检测限；定量限引言：药品分析方法的验证试验主要参考中国药典分析方法验证指导原则，主要涉及的验证参数有专属性、准确性、精密度、线性、检测限、定量限、耐用性、范围。
方法验证的建构应当满足所预期的检测目的及用途，对所涉及的有关参数予以验证。
检测限是指能从被测试样中检出的最低量，考察的是其是否具备灵敏检测能力。
定量限是指能从被测试样中定量测定的最低量，其测定结果符合准确度和精密度要求。
运用于杂质定量试验，能把极少杂质含量精准测定出来，从而达到更好的检测效果，保证药品的质量符合规定。
1药品分析验证方法成功的条件药品分析验证是按照药品生产GMP药物分析方法学进行验证，保障药物分析结果的准确性。
为了排除其它因素的影响，需具备所用仪器在校正有效期内，使用可靠稳定对照品和稳定试剂，确保受试溶液满足稳定性要求，在规定时间内不能出现降解现象，同时还要考虑其专属性、线性、准确度、定量限、检测限、系统适用性等影响。
除此之外，还要对分析方法的验证评价进行严格考量，应使分析方法具有专属性，能区分其共存物质、基团、目标化合物等，从而使分析方法验证达到整体性和系统性要求。
2药品分析方法验证试验中检测限和定量限的概念按照中国药典分析方法验证指导原则，检测限和定量限是重要的验证指标。
检测限是指被测试样能检出的最低量，依靠置信度能检测组分中的最小量和最小浓度，检测限仅作为限度测试指标和定性鉴别依据，无定量意义。
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中日联谊医院检验医学中心文件编号：CJUH/LMC-JL-TY-CX-28-04第1版第0次修订
分析灵敏度试验结果评价表
年：□□□□流水号：□□□□□□
检出限（Limit of Detection，LD；）、最低检测限（Lowest Limit of Detection，LLD）：
是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信检出的最低水平。
（当测量空白样品时，分析物未检出的概率应是99%；当测量样品时，检出概率至少应是95%）。
用来描述空白响应量（RLU）的平均水平和所有响应量（RLU）对于空白均值的离散程度指标。
定量限（Limit of Quantitation，LQ）：
是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信定量的最低水平。
（定量限所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求）。
某样品单次检测可能具有的最小响应量（RLU）仅大于空白检测低限。
注：
1. 空白样品（Blank sample ，BS ）的准备：常使用检测系统的系列校准品中的“零标准”作为空白。
对某些项目，可使用术后已无某疾病的病人样品为空白样品。
2. 样本检测：：空白样品重复20次（不低于10次）作批内测定，计算空白样品组的响应量（RLU ）均值0A 和空白样品组响应量（RLU ）的标准差0S 。
3. LLD 的计算：（对于小于或等于检测低限的分析物量报告“无分析物检出”）。
（1）002LLD A S =+计算（以95%为可信限）。
（2）003LLD A S =+计算（以99.7%为可信限）。
1. 样本配制方法： 将已确定空白（B ）和低值（L ）的样本按照一定比例混合稀释，配制成20套（一天一套）11个等差浓度水平（10S B 、9S B +1L 、8S B +2L 、7S B +3L 、6S B +4L 、5S B +5L 、4S B +6L 、3S B +7L 、2S B +8L 、1S B +9L 、10L ）的样本。
-20℃冰箱保存备用。
“S B ”：空白样本或生理盐水；“L ”：低值样本。
2. 样本检测：每天定时将11个等差浓度比例的样本按照浓度由低到高的顺序分别在检测系统上检测1次，一共检测10—20天。
计算各浓度组的响应量均值i A 和各浓度组的响应量的标准差i S
3. LQ 的计算：以0(3)3i i A S S ->的稀释浓度为LQ （以99.7%为可信限）。