食品分析的检出限和定量限
食品理化检验控制要点
• 环境条件的评审，必要时增添设施； • 原始记录表格和报告格式的评审，必要时进行修订。
检测方法的验证
方法验证用于判定方法能否完全达到预期目的，或证 明由分析方法误差而导致结果判断错误的概率是否在允许 范围之内而进行的科学证明。
按照GB/T 27404-2008中的要求，需要从回收率、校 准曲线、精密度、测定低限、准确度、提取效率、特异 性和耐用性等8个方面进行验证。
要时用SOP细化检测步骤和操作 • 评价标准：国家食品安全标准、产品卫生标准、产品标
准 • 无法界定的品种：不做评价
检测方法的证实
• 当实验室将标准方法引入检测工作时，应证实能够正确地 运用该方法。
• 当标准方法发生换版时，应重新进行证实。证实的内容应 考虑新旧标准的差异分析；
• 执行新标准所需人员的评价，必要时进行培训，考核确认 后授权上岗
空白测定：
• 最简单的空白为“试剂空白”，除了不加入实验样品， 其它分析步骤与样品的相同，实际上是测试试剂的纯度。
• 测试分析系统中任何来源的污染，如玻璃器皿、环境污 染，可称之为 “过程空白”。
• 如果能找到与实验材料相似的材料作空白，则可更确切
地称为“空白检测”。
回收实验
在没有质控样品时，样品中加入标准物质，测 定其回收率，可以检验方法的准确程度和样品所引起 的干扰误差并可以同时求出精确度。
质控样品
a.质控样品是插入批中与检验样品一同经历同样分析过程的 物质；
b.质控样品所含被测物浓度必须适当，并被赋予浓度值； c.有相同的基质，包括哪些可能与准确度有关的次要成分也
要相同； d.具有相似的物理状态，如粉碎程度、湿度相同，不限于这
检测限和定量限用对照品定 -回复
检测限和定量限用对照品定-回复在化学分析中，确定性限和定量限是两个非常重要的概念。
它们用于评估分析方法的灵敏度和可靠性。
检测限和定量限有时需要使用对照品进行确定。
本文将详细介绍检测限和定量限以及对照品在确定它们时的使用方法。
首先，我们来介绍一下检测限。
检测限是指分析方法能够检测到的最低浓度或含量的限制。
换句话说，检测限是指在所使用的分析方法下，能够准确发现目标成分存在的最低浓度或含量。
通常，检测限是通过对一系列浓度较低的目标物进行分析，并确定能够准确识别的最低浓度来确定的。
例如，在环境监测中，我们可能需要确定水中某种有毒物质的检测限，以确保水源的安全。
在此例中，我们可以通过将不同浓度的该物质添加到已知浓度的水中，然后使用分析方法进行测定，以确定能够可靠识别的最低浓度。
然后，我们来介绍一下定量限。
定量限是指分析方法能够准确测量目标成分浓度或含量的最低限度。
换句话说，定量限是指在所使用的分析方法下，能够准确测量目标成分含量的最低限度。
与检测限相比，定量限更具挑战性。
确定定量限同样需要使用对照品。
对照品是一种已知浓度或含量的标准样品。
通过对对照品进行一系列测量，并根据测量结果绘制标准曲线，我们可以准确测定目标成分的浓度或含量。
当目标样品的浓度或含量在定量限以下时，分析方法无法提供可靠的定量结果。
在确定检测限和定量限时，对照品的使用是非常重要的。
对照品是一个已知成分浓度或含量的样品，用于验证分析方法的准确性和可靠性。
在检测限和定量限的确定过程中，我们可以使用对照品来验证方法的选择性、灵敏度和准确性。
对照品应该与待测样品尽可能接近。
我们可以将对照品与不同浓度的待测物样品一起进行测量，并通过比较结果来验证方法的准确性。
只有在对照品能够被准确测量，并且结果与已知浓度或含量相符时，我们才能够确定适当的检测限和定量限。
在日常实验中，我们可以使用多种方法来确定检测限和定量限，例如比色法、光谱法和电化学法等。
这些方法在不同领域和实验室中具有广泛的应用。
食品理化检测中标准方法的查新、验证方法
1明确相关人员责任依据《通用要求》第4.2条的要求，要明确技术人员和管理人员的岗位职责。
技术资料管理人员每2个月登录国家卫生和计划生育委员会网站及省标准信息网站查询有无标准更新,并负责变更文本评估内容的汇总。
检验科室负责人负责组织本科室内标准的变更文本评估及验证报告的审核。
技术负责人批准标准变更文本的评估内容和证实报告。
2标准查新及方法验证流程2.1标准查新技术资料管理人员每2个月登录国家卫生和计划生育委员会网站及省标准信息网等相关网站,随时跟踪相关标准的变化。
如出现新版的标准文本或新的标准勘误公告等,应下载相应文件,并登记发放至标准使用科室。
标准使用科室立即组织人员对标准新旧文本或勘误内容进行文本评估。
进行方法标准变更评估的人员应从文本格式描述、仪器设备、环境条件、试剂耗材、样品前处理等方面进行”，对照变更前后标准，评估变更内容,并提出对检测能力的影响以及下一步需要进行的工作,比如不具备能力暂停项目,需要外部培训，需要新增设备等等。
并填写“变更标准文本评估记录表”(见表1)。
若评估发现新的标准文本无重大变化,而仅仅是标准名称、年号或文本格式等发生变化,则可以直接使用。
并将评估结果及时汇总至资料管理员处，向检验检测机构资质认定管理部门申请标准一般变更。
若文本评估发现新标准的方法原理、设备、前处理方法、关键试剂等发生变化，则需要重新进行方法验证。
完成方法验证后,向检验检测机构的管理部门申请申请标准重大变更。
若验证结果表明检测机构暂不具备该标准的检测能力,应向管理部递交“撤销项目”的申请。
2.2方法验证检验检测机构在新标准投人使用前或者标准发生重大变更时应进行验证。
对发生重大变更的应针对变化的条款内容进行技术证实。
食品理化检测方法如果仪器设备、前处理、扩大标准适用范围的,若可能,应按照完整流程从方法的校准曲线、检出限、回收率、精密度、准确度(正确度)几个方面进行技术验证。
2.2.1标准曲线/校准曲线按照检测方法标准要求进行;如标准没有规定，按照日常检测情况进行确定，标准曲线第一点尽量选择在定量限左右。
食品理化检验方法 总则 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品理化检验方法总则范围本标准规定了食品理化检验方法的检验基本原则和要求。
本标准适用于食品安全标准检验方法理化部分。
术语与定义1.1 特异性：指方法定性区分待测物和其它物质的能力。
1.2 准确度：指检测结果与样品真值间的一致程度，准确度大小由定量的正确度和精密度决定。
1.3 精密度：指检测结果间的一致程度，通常用相对标准偏差表示。
1.4 重复性：指在同一实验室在人员、设备、方法等恒定条件下，在短时间内对同一测定对象进行独立测定的精密度。
1.5 再现性：指在不同实验室间，仅在方法相同的条件下对同一测定对象进行独立测定的精密度。
样品采集、保存与检验1.6 样品采集基本要求样品采集应有完整的采样信息如生产日期、批号、数量、生产者等，采集的样品应具有代表性和均匀性。
当样品量较大时需要采用四分法选出能反应该食品的卫生质量和满足检验项目样品量需要的检测样品，一式三份，供检验、复验、备查或仲载，一般每份样品不少于0.5kg，但掺伪食品和食物中毒样品除外。
1.7 样品包装建议有包装产品应采集包装产品，散装产品应根据所需开展的检验项目，采用适宜的、且可真实反映产品特性的容器。
1.8 液体、半流体食品植物油、鲜乳、酒或其他饮料和用大桶或大罐盛装的大包装产品应先充分混匀后再采样，并分层采样。
1.9 粮食及固体食品应自每批食品上、中、下三层中的不同部位分别采部分样品，采样量应符合相关标准要求，混合后按四分法对角取样，再进行几次混合，最后取有代表性样品。
1.10 肉类、水产等食品应按分析项目要求分别采取不同部位的样品或混合后采样。
1.11 罐头、瓶装食品或其他小包装食品应根据批号随机取样，同一批号取样件数，250g 以上的包装不得少于6个，250g 以下的包装不得少于10个。
1.12 掺伪食品和食物中毒的样品采集掺伪食品和食物中毒的样品要尽可能反映出其可能具有的中毒因素。
1.13 样品保存定型包装产品应在产品规定有效期按样品的保存条件予以保存，散装产品应参照相关产品的保存条件予以保存，且应采取有效措施保证样品不变质。
液相色谱法测定食品中合成着色剂
液相色谱法测定食品中合成着色剂作者：***来源：《食品安全导刊·下》2024年第05期摘要：目的：建立一种液相色谱法测定食品中合成着色剂的方法。
方法：用乙醇氨水溶液提取食品中的合成着色剂，经固相萃取柱净化后，用液相色谱仪（配二極管阵列检测器）测定，外标法定量。
结果：11种合成着色剂在0.2～10.0 μg·mL-1线性关系良好，线性相关系数为0.999 4～1.000 0，加标回收率为94.2%～109.6%，相对标准偏差在0.55%～5.52%。
柠檬黄、喹啉黄、日落黄、胭脂红、新红和赤藓红的检出限均为0.5 mg·kg-1，定量限均为1.5 mg·kg-1；苋菜红、诱惑红、亮蓝、酸性红和靛蓝的检出限均为0.3 mg·kg-1，定量限均为1.0 mg·kg-1。
结论：该方法的重复性好、灵敏度高、实用性强，可以同时测定食品中多种合成着色剂的含量。
关键词：合成着色剂；液相色谱法；固相萃取Determination of Synthetic Colorants in Food by Liquid ChromatographyZHU Xiaolei（Guangdong Dongguan Quality Supervision & Testing Center， Dongguan 523000， China）Abstract： Objective： To establish a method for the determination of synthetic colorants in food by liquid chromatography. Method： The synthetic colorants in food were extracted with ethanol ammonia solution， purified by solid phase extraction column， determined by liquid chromatography （ with diode array detector ）， and quantified by external standard method. Result： The linear range of 11 synthetic colorants was 0.2～10.0 μg·mL-1， the linear correlation coefficient was 0.999 4～1.000 0， the recovery rate was 94.2%～109.6%， and the relative standard deviation was 0.55%～5.52%. The detection limits of tartrazine， quinoline yellow， sunset yellow， carmine， new red and erythrosine were 0.5 mg·kg-1， and the limits of quantification were 1.5 mg·kg-1. The limits of detection of amaranth， allura red， brilliant blue， acid red and indigo were 0.3 mg·kg-1， and the limits of quantitation were1.0 mg·kg-1. Conclusion： The method has good repeatability， high sensitivity and strong practicability， and can simultaneously determine the content of various synthetic colorants in food.Keywords： synthetic colorants; liquid chromatography; solid-phase extraction着色剂在食品加工过程中可以改善食品的口感和外观，但过量使用会对人们的健康造成不良影响。
食品仪器实验方法学验证
方法学的验证1.选择性一般情况下，分析方法在没有重大干扰的情况下具有一定的选择性。
对于化学分析方法，在有干扰的情况下，如：基质成分、代谢物、降解产物、内源性物质等，保证检测结果的准确性至关重要。
实验室联合使用但不限于下述两种方法检查干扰：A）分析一定数量的代表性空白样品，检查在目标分析物出现的区域是否有干扰（信号、峰等）；B）在代表性空白样品中添加一定浓度的有可能干扰分析物定性和/或定量的物质。
将浓度为待测物质加入空白基质中在选定的色谱条件下测定，进样量为μL，观测待测物质保留时间附近，是否存在干扰。
结果见谱图。
2.测量范围方法的测量范围通常应满足一下几个条件：A）方法的测量范围应覆盖方法的最低浓度水平（定量限）和关注浓度水平；B）至少需要确认方法的测量范围的最低浓度水平（定量限）、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平；C）若方法的测量范围呈线性，还需满足3条款的要求。
3.线性范围线性范围通常可参考相关国家标准或国际标准，尽量满足如下要求：A）采用校准曲线法定量，并至少具有6个校准点（包括空白），浓度范围尽可能覆盖一个或多个数量级，每个校准点至少以随机顺序重复测量2次，最好是3次或更多；对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98；对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99。
B）校准用的标准点应尽可能地分布在关注的浓度范围内并能覆盖改范围。
在理想的情况下，不同浓度的校准溶液应独立配制，低浓度的校准点不宜通过稀释校准曲线中的高浓度的校准点进行配制。
C）浓度范围一般应覆盖关注浓度的50%~150%，如需做空白实验时，则应覆盖关注浓度的0%~150%。
D）应充分考虑到可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。
根据分析物的灵敏度，分别配制含待测物浓度为ng/mL混合标准溶液，在选定的色谱条件下测定，进样量为1μL，用峰面积对混合标准溶液中各组分的浓度做图，其线性方程、线性相关系数，结果见表1。
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限和定量限是在分析化学中常用的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
本文将从理论和实际应用两方面介绍检测限和定量限的概念和计算方法。
一、概念解释检测限（Limit of Detection，LOD）是指在特定仪器条件下，能够被检测出来但无法准确测量的最低浓度。
通常来说，检测限是指信号与噪声之间的比例，即信噪比（S/N）达到一定阈值时的浓度。
定量限（Limit of Quantitation，LOQ）是指在特定仪器条件下，能够被准确测量的最低浓度。
与检测限相比，定量限要求信噪比更高，以保证测量结果的准确性和可靠性。
二、计算方法1. 检测限的计算方法检测限的计算方法有多种，其中常用的方法有信号与噪声法、标准差法和3倍标准差法。
信号与噪声法是指在低浓度下测量多个空白样品的信号与噪声，并计算其平均值和标准差；标准差法是指根据多个相同浓度的样品测量结果计算标准差；3倍标准差法是指将标准差乘以3作为检测限。
2. 定量限的计算方法定量限的计算方法与检测限类似，但要求信噪比更高。
通常可以使用3倍标准差法或线性回归法来计算定量限。
其中，线性回归法是指通过绘制浓度与仪器信号之间的标准曲线，根据信号与浓度的线性关系来计算定量限。
三、实际应用检测限和定量限在实际分析中具有重要意义。
首先，它们可以评估分析方法的灵敏度，判断方法是否适用于特定样品的测量。
其次，检测限和定量限可以帮助选择合适的仪器和方法，以确保分析结果的准确性和可靠性。
此外，检测限和定量限还可以用于质量控制和比较不同方法或仪器的性能。
在实际应用中，为了准确计算检测限和定量限，需要注意以下几点。
首先，要选择合适的样品和浓度范围，以涵盖需要测量的目标浓度。
其次，要控制实验条件的稳定性和一致性，避免误差的产生。
最后，要根据具体情况选择合适的计算方法，并对结果进行验证和确认。
检测限和定量限是分析化学中重要的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
方法检出限和定量限
三、定量限（Limit of quantitation），LQ
也称测定限，为定量范围的两端，分别为测定上限与测定下限。
3.1 测定下限 在测定误差能满足预定要求的前提下，用特定方法能准确地定量测定待测物质的最小浓 度或量，称为该方法的测定下限。 测定下限反映出分析方法能准确地定量测定低浓度水平待测物质的极限可能性。在没有 (或消除了)系统误差的前提下，它受精密度要求的限制(精密度通常以相对标准偏差表示) 。分析方法的精密度要求越高，测定下限高于检出限越多。 美国EPA SW-846(固体废弃物化学物理分析方法)规定4MDL为定量下限(RQL)，即4倍 检出跟浓度作为测定下限，其测定值的相对标准偏差约为10％。 日本JIS规定定量下限为10倍的MDL。 IUPAC 1982年的一篇报告中对测定下限作了规定,以空白测量值标准偏差的10倍相对应 的浓度值作为分析方法的测定下限。国内一般都IUPAC采用的建议,采用10倍空白测量值 标准偏差对应的浓度作为测定下限,它的置信水平约为90%。
3.样品检出限
样品检出限：即单个样品的检出限。分析方法检出限采用的是一系列标准物 质，基体各不相同，因此只能是一类型样品的平均检出限，并非严格适用于单个 样品。对于单个样品确定检出限，必须固定样品基体，即样品检出限的确定应 使用样品本身，采取标准加入法作出和方法检出限类似的曲线，使用外推法进 行计算。当样品中待测元素含量较高时，此类检出限的确定不具有明显的意义。
将产生两倍噪声信号时，单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分 量称为仪器检出限。仪器检出限不考虑任何样品制备步骤的影响,一般以溶剂 空白测定检出限,则：
D=2N/S 式中：N——噪声(mV或A)； S——检测器灵敏度； D——仪器检出限，其单位随S不同也有三种： Dg=2N/Sg，单位为mg／ml； DV=2N/SV ，单位为ml／ml； Dt=2N/St，单位为g/s 。
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食品分析中的检出限和定量限
在教科书和文献上常常用到检出限这个概念，但说法五花八门，如最常见到有检出限、检测限、最低检出限、最低检测浓度、定量限、定量下限、最低定量浓度、测定限、仪器检出限、方法检出限、样品检出限等，听起来云里雾里，容易被混淆，有必要进行一个梳理。
这里最主要的是两个概念，目前已经基本达成共识：检出限（LOD）和定量限（LOQ）。
早在1991年8月，全国自然科学名词审定委员会公布的《化学名词》规定了检出限（detection limit，编号03.0090）与测定限（determination limit，编号03.0091），并得到认可，而国际纯粹与应用化学联合会（IUPAC）1997年通过、1998年发表的《分析术语纲要》（IUPAC Compendium of Analytical Nomenclature）中规定：“检出限以浓度（或质量）表示，是指由特定的分析步骤能够合理地检测出的最小分析信号xL求得的最低浓度cL（或质量qL）”。
对测定限（determination limit，limit of determination）改称为定量限（quantification limit, 18.4.3.7）或最小定量值（minimum quantifiable value，18.4.3.7）[2]，不同的组织和机构如世界卫生组织（world health organization，WHO）、国际临床化学联合会(international federation of clinical chemistry，IFCC)；生物学标准化专家委员会（expert committee on biological standardization）；美国国家临床实验室标准委员会（national committee on clinical laboratory standards，NCCLS）等,根据各自专业领域的实际情况，对检出限、测定限（定量限）、检测限的定义与IUPAC的规定并不完全相同。
近几年实验室认可和资质认定等对实验室的规范化管理让质量控制进入了食品理化检验常规工作，检出限和定量限越来越得到重视和应用。
其基本内涵是：检出限（limit of detection，LOD）是能以适当的置信度被检出的组分的最小量或最小浓度，检出限是我们判断被分析物是否存在的含量水平即有无的判断。
定量限（limit of quantification，LOQ）是我们按规定准确度能对被分析物量化的含量水平，即定量的判断，包含客户可以接受的不确定度如20%。
检出限的测定
LOD=ks，LOQ=k’s通过空白或低浓度样品n次测量的标准偏差的倍数来表征检出限和定量限，从统计学的角度不同的k值来保证不同的置信度。
这个取值
及不同空白或低浓度样品的测定次数就是不同组织和机构的主要差别，但本质上来说是相通的，结果也是可比的，见表1
表1 各组织用于检测限和定量限的测定次数和置信度汇总
不同方法的检出限和定量限的特点和应用经验
对原子吸收、原子吸收、等离子发射光谱等容易按照3.2的方法测定，也不会有太大的争议，对其他方法，则有必要进一点探讨。
我们在IUPAC定义的基础上，参考各专业自身的特点，结合多年在分析测试中特别是在主题测试、食品安全检测、突发公共卫生事件检测中的经验，做如下探讨，如有不妥之处欢迎指正。
1 滴定法：滴定法是一个很常用的方法，如果用空白滴定标准偏差计算，很多时候算出来是零，对成熟的方法，空白滴定往往在半滴间就有明显的突跃，可判断终点的来临，我们一般采用半滴即0.025ml对应的含量为检出限和定量限。
2 比色法：比色法空白的变异系数也比较少，加之现代分光光度计的技术进步，大部分仪器采用光栅分光和低杂散光很低、线性可以到3-4A量级，传统教科书要求最佳吸光度在0.2-0.8A往往才能保证结果准确已不必要，我们采用1%吸收也就是0.005A做为检出限和定量限。
3 色谱法：色谱检测一些组分，如农残、兽残、二恶英、多环芳烃、性激素等，除了关注定量外，定性和确证往往更重要。
而对很多样品，在低含量时干扰多，而仪器本身噪声很低，以平均信噪比s/N=3计算，得出的检出限和定量限非常低，常常不能准确反映客观情况。
众所周知，色谱分析一般仅依据保留时间定性，或仅是选择性检测器（如ECD、FPD）或光谱区别（二极管阵列），定性能力不强，加之基体干扰（不仅反应在噪声上），为了避免假阳性的出现，我们认为在满足
客户或卫生标准要求的基础上，选择一个远高于噪声的阈值来做为计算方法的检出限和定量限更为科学、准确，以3倍信噪比更多的是反映仪器能达到的极限情况。
4应用于新方法的研究和方法确认
在方法研究中，检出限是一个与灵敏度、准确度、线性、干扰等同样重要的指标，ISO/IEC 17025 在方法确认中要求确认的参数包括结果的不确定度、检出限、方法的选择性、线性、重复性限和/或复现性限、抵御外来影响的稳健度和/或抵御来自样品（或检测物）母体干扰的交互灵敏度等。
在这些过程中，检出限都是一个不可或缺的重要指标，我们在建议新方法或方法确认中，应根据方法的特点和要求以及我们要达到的目的，制订合理的检出限测定方案，科学合理地反映新方法或实验室检测的能力。
5应用于日常食品理化检验结果报告：
在卫生检验和主题测试中结果报告会遇到低含量或未检出的结果的报告问题，特别是对未检出的样品和低含量样品的判定，最好用报告限（report limit ,limit of report, LOR）来表征。
报告限是一个约定值，是依据检出限和定量限以及客户或国家标准的要求，结合实验室的经验，考虑了实验室的风险而给出的一个相对固定的值。
它与LOD 和LOQ比较具有相对稳定的优点，而检出限和定量限则是可变的。
我们的经验是
5.1对灵敏度高而客户要求低的方法，可以LOR可以比LOQ大较多，降低检验人员的风险
5.2对一般方法和一般需要，可以取LOQ变化的大值做为报告值。
5.3对要求高方法灵敏度达到极限的可以参考文献[5]，LOD加上样品在标准限值附近标准偏差的3倍不超过标准的限值，可按LOD报告，结果有一定的风险。
5.4对科研调查样，以LOD报告是合理的，LOD附近的值虽然有较大的不确定度，在大样本时有统计学意义。
5.5对大自然中可能存在的物质报告<LOR，对一般不存在的物质报告未检出（ND）标注检出限。
参考文献：
[1] IUPAC.IUPAC Compendium of Analytical Nomenclature [S]，1998
[2] 冉敬，杜谷，杨乐山，熊及. 关于检出限定义和分类的探讨[J].岩矿测试，2008，（02）：155
[3]GB/T 5009.1-2003 食品理化检验方法理化部分总则[S]
[4]GB/T 13966-92 分析仪器术语[S]
[5]GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范食品理化检测[S]。