1.检测限和定量限的确定方法
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限（LOD）和定量限（LOQ）是分析方法灵敏度的两个重要指标，它们通常使用对照品来测定。
检测限是指分析方法能够从样品中可靠地检测出被分析物的最低浓度。
通常，检测限被定义为信号与噪声之间的差异，即当分析物的信号超过背景噪声的3倍时，被认为是可检测到的。
在确定检测限时，一般将对照品溶液的浓度设定为预期的检测限浓度的3～5倍，然后通过重复测量7次来计算检测限。
例如，如果预期的检测限浓度为10ng/ml，则配制一个约为30ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为3倍），然后将该溶液稀释到3/10倍，基本即为该物质的检测限。
定量限是指分析方法能够准确地定量测定样品中分析物的最低浓度。
这个浓度通常被定义为信噪比为10：1时的浓度。
与检测限类似，在确定定量限时，也需要使用对照品溶液。
具体方法是将对照品溶液的浓度设定为预期的定量限浓度的10倍，然后通过重复测量7次来计算定量限。
例如，如果预期的定量限浓度为10ng/ml，则配制一个约为100ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为10倍），然后将该溶液稀释到1/10倍，基本即为该物质的定量限。
需要注意的是，以上计算方法是一种常规做法，具体的
操作方法可能因不同的分析方法和仪器而有所不同。
检出限和定量限
检出限和定量限3倍信噪比是检出限，10倍信噪比是定量限，这个有必要知道。
除此之外，检出限表示方法能测出该物质时的最低浓度。
定量限则表示方法能准确定量出该物质的最低浓度。
具体来讲：检测限：分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量；定量限：分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。
※两者的区别在于：检测限：检测限指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。
它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。
非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
信噪比法：用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠检测出的最低浓度或量。
一般以信噪比3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限也可采用标准差法：空白值＝0时；①定背景10次以上，求出标准差σ。
②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X，即为方法的检出值；空白值不等于0；定量限：1、指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。
2、常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。
方法检出限和定量限标准做法什么时候需要进行测定？检出限（LOD）或定量限（LOQ）的测定通常是在目标物的含量接近于“零”的时候才需要进行测定。
当方法应用于所测定的分析物浓度要比定量限大的多时，检出限与定量限评定就显的不是非常有必要了。
但是对于那些浓度接近于检出限与定量限的痕量和超痕量测试，常报出“未检出”时，这时检出限或定量限对于风险评估或法规决策则就显得非常的重要。
不同的基体需要独立评估其检出限和定量限检出限（LOD）？对于大多数现代的分析方法检出限（LOD）分为两个部分，方法检出限（MDL）和仪器检出限（IDL）。
检出限值和定量限值的确定
确定检出限值和定量限值的协议1.范围此文件明确了确定临床检验方法的最低检出限值，确认所声明的限值，以及合理使用和解释这些限值的建议。
同时，还提供了根据实验室在低值方面的目标来确定最低定量限值的方法。
EP17可以应用于所有测量程序（包括定量检测），尤其是对于那些在较低值上才能做出医学鉴定的程序。
此文件的预期用户是临床实验室管理人员和体外诊断试剂生产厂家。
2.背景介绍在实验室测量中，存在许多方法来确定最低检出限值和最低定量限值的方法。
本文并不准备对所有这些方法做一个总结，也不准备找出它们之间一致的地方。
临床实验室的需求很特别因为所建议的方法必须适用于在特定的实验室条件下所使用的分析设备。
通常情况下，这意味按照厂家或其代表原来安装的状态使用这些设备。
测量检出限值和定量限值最常用的方法，包括ISO11843，假设单纯靠仪器的输出可能会得到负的浓度值。
这些方法也假设空白样本所产生的信号是在一个很低的平均值周围分布的（通常是0值）。
但是，许多常见的临床实验室仪器都仅仅能够产生正的信号,此外，最原始的检测信号是无法从仪器里提取出来的，因此优先的参数模型是不适用的。
此协议是用于结果以质量或浓度为单位的方法的。
尤其是那些在临床上有必要测量很低浓度的情况。
EP17的预期是适用于所有测量程序的，但是更加适用于那些得出0浓度或正值浓度的测量程序。
对于能够获得仪器最原始信号的厂家，应该考虑选择参考ISO11843-1和ISO11843-2或11843-3（这两者的选择取决于校准关系是否为线性）。
上述的这些文件描述国际公认的测量检出限值的方法。
通常情况下，EP17所描述的协议应该和ISO文件产生同样的检出限值，但是ISO方法所得到的值会有更加低的不确定度。
然而，必须要注意的是ISO方法要求在所有的检测水平（包括空白样本）上都是正态分布的。
对ISO方法的恰当使用还要求有较高的统计学水平，这一水平是大多数实验室达不到的。
EP17的目的就是让大多数实验室在现有资源的前提下能够得以应用和理解。
方法学验证 定量限与检测限积分
方法学验证定量限与检测限积分一、概述在临床和科学研究中，定量分析方法的验证是非常重要的。
其中，定量限（QL）和检测限（DL）是两个用于评估分析方法性能的关键参数。
本文将对方法学验证中的定量限和检测限进行深入探讨，并分析其在定量分析中的应用。
二、定量限与检测限的定义1. 定量限（QL）定量限是指分析方法能够准确和可靠地测定目标分析物浓度的最低限度。
通常情况下，定量限的确定需要考虑测量仪器的灵敏度、信噪比、精密度等因素。
定量限通常由标准曲线的斜率和截距计算得出，可以用于确定测定结果的可靠性和准确性。
2. 检测限（DL）检测限是指分析方法可以识别目标分析物存在的最低浓度，即测定结果具有可信度的最低限度。
检测限通常由仪器检测峰的信噪比及基线偏移计算得出，可以用于评估分析方法的灵敏度和可靠性。
三、定量限与检测限的计算方法1. 定量限的计算方法定量限的计算通常采用以下公式：QL = 10 * （标准差 / 斜率）其中，标准差为分析方法的重复测定结果的标准偏差，斜率为标准曲线的斜率。
2. 检测限的计算方法检测限的计算通常采用以下公式：DL = 3.3 * （标准差 / 斜率）其中，标准差和斜率的含义同定量限的计算方法。
四、方法学验证中的应用1. 定量限和检测限在质量控制中的作用定量限和检测限是质量控制中常用的参数，可以有效地评估分析方法的性能，确保分析结果的准确性和可靠性。
在药品生产和质量检验中，定量限和检测限通常用于确定分析方法的灵敏度和可靠性，以确保产品的质量符合标准。
2. 定量限和检测限在实验设计中的应用在科学研究中，定量限和检测限也起着至关重要的作用。
科研人员可以通过确定定量限和检测限，来评估实验方法的可行性和可靠性，从而确保实验结果的科学性和可信度。
3. 定量限和检测限在环境监测中的作用在环境监测领域，定量限和检测限也具有重要意义。
通过确定分析方法的定量限和检测限，可以有效地监测环境中微量污染物的存在和浓度变化，为环境保护和污染治理提供科学依据。
1.检测限和定量限的确定方法
样本量
评估与验证
•在精密度和成本之间合理取舍，建议估计LoD时用60次测量的最小数量 （空白和低水平样本）。应由方法开发者执行 •为验证LoD声称值，在声称水平使用20次结果。以及必要时，在LoB水平。 这通常由实验室或用户执行
样本性状
样本代表性
•尽可能地，用自然样本取代空白和阳性低值样本，即对于药物分析应有游离药物的血清
目前的一些常用方法的缺陷
空白
真实
SD
低值
假设
导致低
LOD/Q
无法 区分
虚假
分布
对称
忽略事 实(LOD)
LOB
LOB
空白样本结果接近零时的分布
仪器内部产生该类型的信号时，许多仪器自动转换阴性值信号为零或一个 低值阳性值。因此只提供非阴性浓度值输出 假设该值超过空白测量中实际空白样本显著变异分布的第95百分位数 如果样本产生一个超过该限值的观测值，它可以宣称分析物含量大于零
α=β=5%。一个α值为5%对应使用空白值分布第95百分位数，宣称测量值显著高于空白限值 一个空白值呈Gaussian分布：LoB=µB+1.645σB
LOB
计算方法
•浓度低于零的情况下不被报告或空白值不呈Gaussian分布时（空白值呈不 对称分布），第95百分位数通过其他方法估计 直截了当的程序使用基于命令值的非参数原理。通过大量的Nb值排序，第 95百分位数作为阳性第Nb(95/100+0.5)位观测值来估计
设计考虑
操作条件稳定
•假设在单一系统或一组实验设备条件下设计。稳定的条件下操作（无试剂 批号变化或主校准的重大变化）。推荐考虑包括时间（运行）引起的变异 和受试对象之间的差异
设计考虑
元素定量限与检测限
元素定量限与检测限
元素的定量限和检测限是在分析化学中常用的两个概念，它们在确定分析方法的灵敏度和可靠性方面起着重要作用。
首先，让我们来谈谈元素的定量限。
元素的定量限是指在分析过程中，能够准确测定元素含量的最低限度。
通常情况下，定量限是指在一定置信水平下，仪器能够检测到元素含量的最低浓度。
定量限的确定通常依赖于仪器的灵敏度、背景噪声水平以及分析方法的准确性等因素。
定量限的确定对于保证分析结果的准确性和可靠性至关重要。
其次，让我们来讨论一下元素的检测限。
元素的检测限是指在分析中能够被检测到但不能准确测定含量的最低限度。
检测限通常是指在一定的信噪比下，仪器能够检测到元素的最低浓度。
检测限的确定同样受到仪器灵敏度、背景噪声水平以及分析方法的影响。
检测限的确定对于评估分析方法的灵敏度和可靠性至关重要。
在实际分析中，定量限和检测限的确定是非常重要的。
确定这两个限度可以帮助分析人员评估分析方法的适用范围，以及在分析过程中遇到的潜在问题。
同时，定量限和检测限的确定也对于保证
分析结果的准确性和可靠性至关重要。
总之，元素的定量限和检测限在分析化学中扮演着非常重要的角色。
它们的确定需要考虑多种因素，并且对于分析结果的准确性和可靠性具有重要意义。
方法检出限和定量限的确定方法
方法检出限和定量限的确定方法一、概述在药物分析和环境监测等领域，确定方法检出限和定量限是非常重要的。
方法检出限是指在实际检测过程中，仪器可以检测到目标物质的最小浓度，而定量限则是指在一定的信噪比下可以准确测定目标物质的浓度。
确定准确的方法检出限和定量限对于保障药物质量和环境监测的准确性具有重要意义。
二、确定方法检出限的方法1. 实验样品的制备为了确定方法检出限，首先需要准备一系列浓度不同的标准溶液。
通常情况下，可以选择目标物质的纯品进行溶解，制备出不同浓度的标准溶液。
另外，也可以选择同质性好的实际样品进行稀释，得到各种不同浓度的实验样品。
2. 仪器分析条件的确定在确定方法检出限的过程中，需要对仪器的分析条件进行优化。
首先是选择合适的分析仪器，比如气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）或者液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）。
其次是确定仪器的分析条件，包括进样量、柱温、流速、检测器的信噪比等参数。
3. 实验测定在实验条件确定后，可以开始进行测定实验。
将一系列浓度不同的标准溶液或者实验样品进样，测定仪器的响应值。
一般来说，响应值与浓度之间应该呈线性关系。
4. 数据处理和计算通过实验数据，可以使用统计学方法进行数据处理和计算。
比较常用的方法包括准备多重标准曲线、计算斜率、截距和相关系数等。
最终得到方法检出限的数值。
三、确定定量限的方法1. 信噪比的确定在确定定量限时，需要首先确定信噪比。
信噪比是指在一定信号强度下的噪声水平。
可以通过在空白样品中测定一系列次，得到多次测定的标准差作为噪声水平，然后再测定一系列不同浓度标准溶液的信号强度，计算信噪比。
2. 定量限的计算一般来说，定量限是信噪比乘以方法检出限的数值。
在确定了信噪比和方法检出限后，可以将两者相乘得到定量限的数值。
3. 定量实验的确定为了验证定量限的准确性，可以选择一系列浓度不同的标准溶液，进行测定并计算出浓度值。
然后与实际浓度进行比较，得出定量限的准确性。
2020版《中国药典》解读一：真菌毒素分析方法验证
2020版药典真菌毒素分析方法验证*方法依据：《中国药典》2020版 第四部 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则一 检测限、定量限信噪比法 1. 检测限：取黄曲霉毒素标准品，不断将其稀释（逐级稀释法），按照供试品进样体积进液相色谱检测，直至信噪比为3或略大于3，此时的标准品浓度（单位为μg/mL ），乘以5除以3得到的就是检测限，单位为μg/kg 。
2. 定量限：取黄曲霉毒素标准品，不断将其稀释（逐级稀释法），按照供试品进样体积进液相色谱检测，直至信噪比为10或略大于10，此时的标准品浓度（单位为μg/mL ），乘以5除以得到的就是定量限，单位为μg/kg 。
上述计算方法获得的数据须用含量相近的样品进行验证。
应附测试图谱，说明测试过程和结果。
二 准确度回收率验证： （以黄曲霉毒素为例）称取未检出黄曲霉毒素的样品6份，每份15g ，分别加入75μL 浓度为2.6ppm 的黄曲霉毒素混合标准品，按照2020版药典《通则2351 黄曲霉毒素测定法》进行操作。
回收率计算如下：1．黄曲霉毒素B 1、G 1回收率计算公式：%1005)(-)()(111111⨯=含量样品含量加标样品回收率黄曲霉毒素G B G B G B2．黄曲霉毒素B 2、G 2回收率计算公式：%1005.1)(-)()(222222⨯=含量样品含量加标样品回收率黄曲霉毒素G B G B G B表1 样品中待测定成分含量和回收率限度三 精密度1. 重复性在规定范围内，取同一浓度的供试品，用至少6份的测定结果进行评价。
或设计至少3种不同浓度，每种浓度分别制备至少3份供试品溶液进行测定，用至少9份样品的测定结果进行评价。
2. 中间精密度考查随机变动因素，如不同日期、不同分析人员、不同仪器对精密度的影响，应进行中间精密度试验。
3. 重现性国家药品质量标准采用的分析方法，应进行重现性试验，如通过不同实验室协同检验获得重现性结果。
表2 样品中待测定成分的含量与精密度可接受范围关系。
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样本量
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样本量
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样本性状
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样本性状
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样本性状
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样本性状
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样本性状
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结果
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LOD
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LOD
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LOD
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LOD
排序
100 99 98 97 96 95 94
LOD、LOQ
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LoD的标准偏差和样本量估计
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LOD的标准偏差和样本量估计
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LOQ解释
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评价样本至关重要，应考虑基质影响
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空白值
0.0653 0.0603 0.0560 0.0554 0.0548 0.0539 0.0538
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LOD
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LOD
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LOD
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LOD
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LOD
次数 20 30 40 50 60 70 80 90 100 150 200 250 300 400 500 1000
观测比例低限 85 87 88 88 88 89 89 90 90 91 92 92 92 93 93 94
诊断灵敏度
•体外诊断检查程序可以识别特定疾病或状态存在的能力
注：诊断灵敏度是一个数值分数。以真阳性值除以真阳性值加上假 阴性值的和来计算
功能灵敏度
•测量程序测量很低浓度的能力，它比定量限也无任何优势。因此
不鼓励使用功能灵敏度
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类型
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不同类型之间的关系
✓LOB：最高
✓LOD：高于LOB，可能被声称
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LOQ
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LOQ
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LOQ
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LOQ
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LOQ
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LOQ
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LOQ
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结果报告
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结果报告
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结果报告举例
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LOD、LOQ
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LOD、LOQ
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OD、LOQ
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✓LOQ：最低，U<目标值（U）
✓LLR：最低
• 与被测量的值直接成比例的能力 • 响应值与真实浓度有线性关系
✓LMR：规定条件下的最低
• 包括方法的所有特性，偏倚、不精密度、U
.等
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LOD
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LOD
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LOQ
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定性分析中限值的使用
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定性分析中限值的使用
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定性分析中限值的使用
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定量限//定量下限 Limit of quantitation（LoQ）//Lower limit of quantitation
• 在声称的可接受精密度和正确度以及经验条件下样本中能定量测
定的分析物的最低量
• 注：也称为“检测下限”和“测量范围下限”
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6
测量范围//工作范围 Measuring range//Working range
可能观测到空白样本的最高测量结果（声称概率下）
•注：a）LoB不是通过测量获得的实际浓度。事实上，阳性信号的
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4
检测限 Limit of detection(LoD)
• 在（声称）概率下，样本中能检测到的分析物的最低量，尽管或 许不能量化为一个准确值。
• 注：也称为“检测下限”，“最小可检测浓度”（或量或值）， 以及有时用于表征“灵敏度”
• 测量仪器的误差处在规定极限内的一组被测量的值（VIM93） • 注：
此前，NCCLS文件中使用术语“可报告范围”
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7
灵敏度
“灵敏度”的非标准使用 •不同应用中，“灵敏度”可能单独或修改使用 •常见为：“IUPAC”定义的“分析灵敏度”一致，即“校准曲线 的斜率” •描述非常低分析浓度的分析内精密度的“功能灵敏度” •在低浓度有高精密度要求的诊断分析，术语“诊断”或“临床” 灵敏度用与描述或比较预定的与诊. 断测试性能有关的临床信息（如8
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目前的一些常用方法
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目前的一些常用方法的缺陷
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LOB
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LOD
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LOD
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LOD
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设计考虑
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设计考虑
β错误//第II类错误//假阴性
Beta(β)error//Type II error//False negative
错误地接受无效假设（物质不存在）的概率，事实上物质在指定的
水平存在
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空白 Blank//空白限Limit of blank(LoB）
空白 Blank 不含有感兴趣分析物，或至少浓度远低于感兴趣最低水平的样本 空白限 Limit of blank(LoB）
分析灵敏度
测量仪器响应的变化除以对应的量
•“灵敏度”在医学检验上以两种不同但相关的含义使用：
•（1）以足够置信度可测量的最小浓度差异
• 和（2）以适当置信度可检测的最小被测量的量
✓（1）按照IUPAC定义分析灵敏度可以用校准曲线的斜率来表示
✓（2）已被检出限和定量限取代
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诊断灵敏度、功能灵敏度
体外诊断产品性能评估-
检测限和定量限的确定方法
2020年5月27日 杨宗兵
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α错误// β错误Alpha(α)error// Beta(β)error
α错误//第I类错误//假阳性 Alpha(α)error//Type I error//False positive
错误地拒绝无效假设（物质不存在）的概率，事实上物质真不存在