抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义
抗中性粒细胞胞浆抗体检测在肾功能不全肾病中的临床意义
（ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ，Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ
Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ，Ｊｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ １ ０ ０ ２ ９，Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
国际检验 医学杂 志 ２ ０ １ ３ 年Ｉ １ 月第３ ４ 卷第 ２ ２期
ｌ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｎ ｏ ｖ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ００ ９ ・
・
临床 检验 研 究论 著 ・
抗 中性粒 细 胞 胞 浆 抗体 检 测 在 肾功 能不 全 肾病 中 的临床 意 义
赵 春， 符布 清△， 史桂 兰 （ 江 苏省 中医院检 验科 ， 江 苏南京 ２ １ ０ ０ ２ ９ ）
摘 要 ： 目的 探 讨 肾病 患 者 不 同抗 中性 粒 细 胞 胞 浆 抗 体 （ ＡＮｃ Ａ） 结 果 组 肾功 能 变化 规 律 。方 法 测 定 肾功 能 不 全 患 者 不
Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ Ｏ １ ３ ． ２ ２ ． ０ ３ ０
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ ３ ４ １ ３ Ｏ （ ２ Ｏ １ ３ ） ２ ２ — ３ ０ ０ ９ ０ ２
Ｃｌ ｉ ｎｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｉ ｇ ｎｉ ｆ ｉ ｃ ａｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｎｔ ｉ ｎｅ ｕ ｔ ｒ ０ ｐ ｈｉ ｌ ｃ ｙ ｔ ｏ ｐｌ ａ ｓ ｍｉ ｃ ａ ｎｔ ｉ ｂ ｏｄ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎ ｒ ｅ ｎ ａｌ ｉ ｎｓ ｕｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎｃ ｙ ｏ ｆ ｋｉ ｄｎ ｅ ｙ ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｚｈ ａｏ Ｃｈｕ ｎ， Ｆ Ｂ ｕ ｑｉ ｎｇ 。 Ｓｈｉ Ｇｕｉ ｌ ａｎ
肾脏病患者血清ANCA的检测与临床意义
肾脏病患者血清ANCA的检测与临床意义作者：周福利来源：《中国社区医师》2015年第02期摘要目的：探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的检测在肾脏病诊断中的临床意义。
方法：应用间接免疫荧光（ⅡF）法检测抗ANCA，联合ELISA方法检测过氧化物酶（MPO）和蛋白酶3（PR3），观察99例肾脏病患者血清抗中性粒细胞胞浆抗体的阳性率。
结果：应用ⅡF检测ANCA，联合ELISA检测MPO和PR3，肾脏病ANCA阳性率37%，其中‘肾小球肾炎、紫癜性肾炎、狼疮陛肾炎阳性率分别为57%、21%和20%。
结论：ANCA在肾小球肾炎和紫癜生肾炎中阳性率高，有重要诊断意义。
关键词抗中性粒细胞胞浆抗体；间接免疫荧光法；肾脏病抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）是以中性粒细胞胞浆成分为靶原的一类自身抗体。
于1982年在坏死性肾小球肾炎血清中首次发现，并很快证实为系统性原发性小血管炎的重要血清学标记抗体。
ANCA-经发现就在医学界得到了广泛深入的研究，目前被作为自身免疫抗体应用于肾小球疾病的研究。
本文应用间接免疫荧光法（ⅡF）检测ANCA联合ELISA法检测MPO和PR3，观察99例多种疾病导致的肾脏病ANCA阳性率，以探讨ANCA在肾脏病中的临床意义。
资料与方法2010年9月-2012年12月收治肾脏病患者99例，临床诊断符合国内统一标准。
其中男37例、女62例，年龄12～62岁，平均（45±15）岁，肾脏病的基础疾病包括急进性肾炎综合征19例，狼疮性肾炎49例，紫癜性肾炎23例，混合性结缔组织病4例，重叠综合征2例，系统性原发性小血管炎2例。
其27例作了肾活检，其病理类型IGA肾炎2例，系膜增生性肾炎8例，新月体性肾炎8例，弥漫增生性肾炎6例，系统性血管炎肾损害3例。
正常对照组为50例健康体检者，其中男15例，女35例，年龄30～70岁，平均（50±10）岁。
抽取静脉血冷冻待测。
实验方法：①采用欧蒙试剂，间接免疫荧光法（ⅡF）检测ANCA：加1：10稀释的待检血清、阴性和阳性血清对照各25uL到反应区。
ANA、ANCA检测及临床应用
干燥综合征 （Sjögren‘s Syndrome）
SS特异性指标
Characteristic Antibodies SS-A SS-B 40-95% 40-95%
Ro-52抗体与SS
疾病 干燥综合征 系统性硬化症 肌炎 SLE MCTD RA n 88 81 26 210 21 165 抗Ro-52 阳性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5 %
SLE相关自身抗体检测的意义
自身抗体能被检测到的时间越早，提示这种抗体对早期预 防的意义越大。
自身抗体按照一定的时间顺序依次出现，可以作为反映疾
病进程的标记物。SLE自身抗体产生至少经历三个时期：
1）无临床症状，无自身抗体；2）无临床症状，但实验室检
查能发现自身抗体，如ANA，SSA等；3）导致疾病的特异性 自身抗体产生，如dsDNA,Sm等。 SLE抗体的检测应该保持连续性，才能实现有效预防自身抗 体对受累器官和疾病表型的预测。
某些自身抗体对自身免疫疾病发病有预警价值
ANA检测的临床意义
系统性红斑狼疮 活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎
进行性系统性硬化症
多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征 慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎 其它风湿病
正常人
ANA阳性率% 95－100 80－100 100 100 20－40 20－50 85－95 30－50 70－80 30－40 26 5-10
局部的血管炎，这是神经精神狼疮的病理基础。
2012年系统性红斑狼疮国际临床合作组 （SLICC）制定的SLE分类标准
临床标准 1 急性皮肤狼疮 2. 慢性皮肤狼疮 3. 口腔溃疡 4. 非疤痕性脱发 5. 2个以上关节炎 6.浆膜炎（胸膜炎或心包炎） 7. 神经（癫痫或精神病） 8 肾脏（尿蛋白/肌酐比值尿蛋白> 0.5g/24h或红细胞管型） 9. 溶血性贫血 10. 白细胞减少症（<4000/ml）1次或 淋巴细胞减少症（<1000/ml）1次 11. 血小板减少症（<100000/ml） 至 少1 次 免疫学标准 1. ANA阳性 2. dsDNA抗体阳性（ELISA法需 两次阳性） 3. Sm抗体阳性 4. 磷脂抗体阳性(狼疮抗凝物或 梅毒血清试验假阳性、或中高 滴度心磷脂抗体（IgA、IgG或 IgM）、或抗β2糖蛋白I（ IgA、 IgG或IgM ）阳性） 5. 补体下降（C3 C4 CH50） 6. 直接Coombs试验阳性（除外 溶血性贫血）
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义教学提纲
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义――间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟）一、ANCA概念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。
目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA的靶抗原，蛋白酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。
根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。
在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。
其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。
另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。
由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。
不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。
抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。
而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA。
故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非MPO三类。
二、ANCA 的检测间接荧光免疫方法是检测ANCA 的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意思之阳早格格创做――间交荧光免疫(IIF)要领（欧盟）一、ANCA观念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞战单核细胞胞浆成份为靶抗本的自己抗体，对于系统性血管炎炎症性肠病等多种徐病的诊疗战鉴别诊疗具备要害的意思，已成为自己免疫性徐病的一项非常要害的惯例检测名目.暂时，已经有十余种中性粒细胞胞浆身分被证据为ANCA的靶抗本，蛋黑酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防卫素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶.根据乙醇牢固的中性粒细胞基量片中，不妨区别二种分歧的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是匀称分集正在所有中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光.正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示相共.其主要的靶抗本是蛋黑酶3(PR3).另一种是核周型（p-ANCA），是盘绕中性粒细胞细胞核周围的仄滑戴状荧光.由多种抗本引起，主要靶抗本是髓过氧化物酶(MPO)，人黑细胞弹性蛋黑酶(HEL)，乳铁蛋黑(LF)，构造蛋黑酶G(Cath G)，杀菌/通透性巩固蛋黑(BPI)，人溶酶体相闭膜蛋黑2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等.分歧抗体正在乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片中，其荧光模型表示有所分歧.抗MPO抗体爆收的p-ANCA果耐甲醛，其荧光模型与正在乙醇牢固的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故喊甲醛抗性的p-ANCA.而其余非MPO 抗体没有与甲醛牢固的中性粒细胞反应，无荧光表示，那种典型又称为甲醛敏感的p-ANCA.故根据乙醇战甲醛牢固的中性粒细胞片表示，可收端判决ANCA 的靶抗本PR3，MPO ，非MPO 三类.二、ANCA 的检测间交荧光免疫要领是检测ANCA 的参照要领大概者尺度要领，于今也是最时常使用的典范要领.IIF 是区别c-ANCA 战p-ANCA 的前提，有较下敏感性，可半定量，但是IIF 测定的是总ANCA ，没有克没有及准确区别靶抗本，需特同性的检测要领动做补充.由于多种免疫性徐病患者存留ANA ，用IIF 法检测ANCA 时，会爆收搞扰真验截行的推断.为预防搞扰局面，采与了四基量共同的检测即：乙醇牢固的粒细胞；甲醛牢固的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞.基量片各细胞分集及意思如表一所述.ANCA 荧光模型及表示如表二所述.表一：四联基量片分集及意思区别ANA 的搞扰：Hep-2细胞有典型荧光表示，Hep-2细胞甲醛牢固 粒细胞1：推断c-ANCA ，2：区别 p-ANCA 对于甲醛敏感仍旧耐受甲A 粒甲A ，表二：ANCA 荧光模型及表示三、注意事项为普及对于徐病诊疗的特同性，检测时应注意以下问题1、检测ANCA ，普遍修议共时搞IIF 初筛战确认真验，以普及ANCA 的临床应用价格，没有搞单独初筛大概单独确认真验，免得落矮对于徐病诊疗的特同性.2、没有克没有及仅检测抗PR3战MPO 二种特同性抗体，而没有检测，那样简单节造ANCA 对于徐病诊疗的特同性.3、用IIF 检测时，仅使用乙醇牢固的粒细胞片，那样没有克没有及庄区别ANA 与ANCA ：借帮猴肝细胞战其中的肝血窦粒细胞.ANCA 阳性，惟有肝血窦粒细胞出现荧光，.如果二者共时阳性，所有肝细胞核皆有荧光.猴肝细胞乙醇牢固 粒细胞是尺度真验基量.区别二种荧光模型：c-ANC荧光模型荧光表示乙醇牢固粒细胞 甲醛牢固粒细胞 Hep-2细胞 猴肝细胞A N A 阳性c-ANCA 阳性胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固. 阳性肝细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.p-ANCA 阳性甲醛耐受p -ANC A 浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.胞量浮现弥集的细颗粒荧光，胞量荧光浑晰勾勒出核的表面，分页核之间荧光巩固.阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.甲醛敏感p -ANC A浮现核周胞量仄滑丝状戴荧光.荧光阳性的胞量主要集结正在分页核周围，产死环状大概没有准则的块状.阳性 阳性肝净细胞自己无荧光. 仅肝血窦粒细胞出现荧光.A N A 阳性ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度巩固 阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述 肝细胞核阳性.肝血窦粒细胞已睹荧光.甲醛耐受p-ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度巩固荧光表示如c-ANCA 阳性，乙醇，甲醛牢固粒细胞所述细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.甲醛敏感p-ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度巩固阳性细胞核浮现荧光表示，如ANA 所述.肝细胞战肝血窦粒细胞皆有荧光.重排除ANA的搞扰，简单出现假阳性.四、临床意思（一）ANCA与本收性小血管炎韦格纳肉芽肿(WG)，隐微多动脉炎(MPA)，坏死性月牙体性肾小球肾炎(NCGN)战变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等本收性系统性小血管炎的收病与ANCA稀切相闭，临床上已将上述徐病统称为ANCA相闭小血管炎.ANCA,特同性PR3抗体战抗MPO抗体的检测已成为本收性小血管炎的敏感特同的血浑教检测名目.1、抗PR3抗体特同性PR3抗体为WG的标记性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为主.但是以c-ANCA诊疗WG特同性为90％，而以抗PR3抗体的特同性可超出95％.抗PR3抗体正在其余的本收性血管炎中业不妨检测出去，但是阳性率较矮.抗PR3抗体敏感度与徐病的活动性及病程有闭，正在徐病的早期症状没有明隐时，便可出现阳性.果而抗PR3抗体常动做WG的早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.2、抗MPO抗体抗MPO抗体荧光模型以p-ANCA为主，主要与MPA、NCGN、CSS相闭.还可睹于其余徐病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty概括症等.抗体滴度与徐病活动性相闭，可用于早期诊疗、疗效推断、复收预计的指标，对于临床治疗有要害的参照价格.抗MPO抗体阳性下度提示坏死性血管炎大概特收性NCGN，对于诊疗本收性小血管炎的特同性达到99％.果而每一个没有明本果的血管炎大概肾小球肾炎的患者，皆该当检测ANCA.表三：ANCA 与本收性小血管炎（二）ANCA 与药物诱导性血管炎连年去没有竭有药物治疗引起的ANCA 阳性的病例报导，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡果酰胺，青酶胺，好谦霉素，他巴唑/甲巯咪唑等.其中报导比较多的是少久使用丙基硫氧嘧啶引起的ANCA ，其特性是滴度下，抗体谱广（抗本主假如MPO ，也可共时陪随大概单独出现其余靶抗本，如PR3，LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等）.药物诱导性血管炎患者临床表示与本收性血管炎类似，停行丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状佳转，ANCA 可转阳.果此，少久使用丙基硫氧嘧啶治疗历程中，应定期检测ANCA ，趁早创造药物诱导性血管炎.（三）ANCA 与其余徐病除本收性血管炎中，其余一些徐病中也可出现ANCA ，主要为p-ANCA ，其靶抗本并没有是PR ，MPO ，而是LF ，Cath G ，BPI ，LYS 等1、缓性炎症性肠病(CIBD)CIBD 是一种消化系统的自己免疫性徐病，包罗溃疡性结肠炎（UC ），克罗恩病（CD ）二种.往常的CIBD 诊疗依好X 线查看，内窥镜及构造教诊疗，缺累灵验的考查室指标.连年去钻研创造UC 病人血浑中ANCA 阳性率为60-80％，而CD 患者的阳性率为10-20％，多为p-ANCA ，相闭靶抗本有BPI 等.滴度与徐病的活动度战病程无闭.果相闭徐病荧光模型靶抗本（％）韦格纳肉芽肿(WG) C ，P （少睹） PR3（85），MPO （10） 隐微多动脉炎(MPA)C ，PPR3（45），MPO （45） 坏死性月牙体性肾小球肾炎(N CGN)C ，P （少睹） PR3（25），MPO （65） 变应性肉芽肿性血管炎(CSS) C ，P （少睹） PR3（10），MPO （60） 结节性多动脉炎（PAN ）少睹 PR3（5），MPO （15） 抗肾小球基底膜病（抗GBN ）PMPO为p-ANCA正在UC阳性率下，CD阳性率矮，故可动做二者的鉴别诊疗及UC早期诊疗指标.2、结缔构造病正在结缔构造病中，ANCA阳性主要睹于SLE战RA，其余结缔构造病中少睹.但是文件报导正在SLE战RA阳性率好别特地大（16-69％），那大概与使用要领，抗本基量片及处事人员火仄有很大闭系.SLE中ANCA阳性大概与缓性炎症反应有闭，如动脉炎，浆膜炎战CRP减少等.有报导抗MPO抗体与RA的闭节中益伤及血管益伤有闭.3、自己免疫性肝病正在自己免疫性肝病中，也可检测到p-ANCA.正在本收性软化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA阳性率下达70-80％，是该病要害的血浑教指标.4、其余徐病有文件报导，HIV,阿米巴，细菌熏染以及没有明本果的肺部缓性炎症及纤维化患者中有p-ANCA阳性.。
抗中性粒细胞胞浆抗体检测及临床意义论文
抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义【摘要】目的：探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（anca）检测及其临床意义。
方法：采用间接免疫荧光法（iif）和酶联免疫吸附法（elisa）对610例患者进行anca检测。
结果：患者中panca阳性69例，占11.31%，canca阳性43例，占7.05%，不典型anca（aanca）6例，占0.98%。
结论：采用iif法elisa法联合检测anca有利于anca相关疾病的诊断与鉴别诊断。
anca阳性患者临床表现为多脏器受累， anca检测对及时诊断，尽早开展治疗提供有力依据，有助于提高生存率。
【关键词】抗中性粒细胞胞浆抗体；pr3；mpo【中图分类号】r446 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）06-0480-01抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic autoanti bodies）是以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要意义。
anca作为特异性血清学诊断工具对anca相关疾病的诊断、疗效观察、判断病情活动和复发有重要意义。
为此，对我院610例行anca检测的患者分析，情况如下：1 资料与方法1.1一般资料采样鞍山市中心医院2010年5月～2011年4月检测anca的610例患者，女性占57.4%，男性42.6%。
1.2采用间接免疫荧光技术（iif）对anca进行检测。
抗原基质为hep-2细胞/猴肝/甲醛固定的中性粒细胞/乙醇固定的中性粒细胞。
乙醇固定的基质显示两种荧光模型：一种是胞浆型（canca），为均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光。
其主要靶抗原为位于中性料细胞嗜苯胺蓝颗粒中的蛋白酶3（pr3）。
另一种是核周型（panca），是围绕细胞核的平滑带状荧光。
主要靶抗原为髓过氧化物酶（mpo），其它还有粒细胞特异性弹性蛋白酶、乳铁蛋白、溶菌酶、组织蛋白酶g等。
间接ELISA检测抗中性粒细胞胞浆总抗体及其临床意义
间接ELISA检测抗中性粒细胞胞浆总抗体及其临床意义叶树俊;张葵;陈军浩【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2003(018)005【摘要】目的建立检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),观察韦格纳氏/多血管炎、系统性红斑狼疮(SLE)、肾炎和溃疡性结肠炎患者中ACNA的存在状况.方法用建立的ELISA法检测100例韦格纳氏/多血管炎、SLE、肾炎或溃疡性结肠炎患者血清中的ANCA,同时以特异性MPO-ANCA及PR3-ANCA为对照.结果阳性参考血清批内变异系数(CV)和批间CV分别为0.061%和0.102%.用抗原吸收后吸光度(A)降低明显.总ANCA在韦格纳氏/多血管炎患者中的阳性率为43.8%,高于SLE、肾炎和溃疡性结肠炎患者(分别为15.2%、23.1%和25%),而52份正常人血清均为阴性.用特异性MPO-ANCA及PR3-ANCA与ELISA检测总ANCA结果比较差异无显著性(P>0.05).结论 ANCA可作为韦格纳氏/多血管炎的血清学标志,ELISA检测总ANCA可克服间接免疫荧光法的不足,灵敏度高,适于大样本的ANCA检测.【总页数】3页(P285-287)【作者】叶树俊;张葵;陈军浩【作者单位】南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中心,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中心,江苏,南京,210008;南京大学医学院附属鼓楼医院医学检验中心,江苏,南京,210008【正文语种】中文【中图分类】R446.62【相关文献】1.抗中性粒细胞浆自身抗体在老年疾病检测中的临床意义 [J], 李玉梅;刘俊达;刘潇菡2.类风湿因子、AKA、抗CCP抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体联合检测在类风湿性关节炎的临床意义 [J], 孟菁菁;谷少杰;孟克勤;孟菲菲;贾建民3.下消化道疾病患者血清抗中性粒细胞胞浆抗体和抗酿酒酵母抗体检测的临床意义[J], 王志红;赵晓军;韩英4.抗嗜中性粒细胞胞浆抗体的检测及其临床意义 [J], 李敏; 张立新5.类风湿因子、AKA、抗CCP抗体和抗中性粒细胞胞浆抗体联合检测在类风湿性关节炎的临床意义 [J], 孟菁菁; 谷少杰; 孟克勤; 孟菲菲; 贾建民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光判读与讲解
cANCA: 相关疾病
韦格纳肉芽肿（WG） - 典型的WG：可逐渐发展成为肾小球肾炎 - 局限性的WG：可不累及肾小球
>90% 70%
显微镜下多动脉炎（MPA）
up to 30%
变应性肉芽肿性血管炎（Churg-Strauss 综合征）
10-20%
结节性多动脉炎(PAN)
c, p p, c(少见)
p, c(少见) 低阳性率 p
PR3(30%),MPO(70%) PR3(25%),MPO(65%)
PR3(10%),MPO(60%) PR3( 5%),MPO(15%) MPO(30%)
EUROIMMUN
ANCA临床意义(2)：IBD/ALD/CTD
相关疾病
炎症性肠病 溃疡性结肠炎(UC, 60-80%) 克罗恩病(Crohn’s病, 10-20%)
结果
EUROIMMUN
间接免疫荧光法检测ANCA 间接免疫荧光法是检测ANCA的经典方法
特点：敏感性高，半定量，是区分cANCA和 pANCA的基础
局限性：间接免疫荧光法测定的是总ANCA，不能 区分靶抗原，需要确认实验作为补充
EUROIMMUN
间接免疫荧光法检测ANCA
核周型ANCA（pANCA）
ANA阴阳性
1）ANA阴阳性 2）ANCA：粒细胞是否荧光增强
pANCA
猴肝
注意
ANA阳性 ANA阳性 辅助判读 辅助判读
EUROIMMUN
cANCA
1
4
粒细胞 (乙醇固定)
猴肝
2
3
粒细胞 (甲醛固定)
EUROIMMUNHEp-2 cells
cANCA: 靶抗原
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抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义
一、ANCA概念及分类
抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。
目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCA的靶抗原，蛋白酶3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(H EL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。
根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：
一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。
在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。
其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。
另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。
由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。
不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。
抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。
而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的p-ANCA。
故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非M PO三类。
二、ANCA的检测
间接荧光免疫方法是检测ANCA的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。
IIF是区分c-ANCA和p-ANCA的基础，有较高敏感性，可半定量，但IIF测定的是总ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。
由于多种免疫性疾病患者存在ANA，用IIF法检测ANCA时，会产生干扰实验结果的判断。
为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。
基质片各细胞分布及意义如表一所述。
ANCA
荧光模型及表现如表二所述。
三、注意事项
为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题
1、检测ANCA，一般建议同时做IIF初筛和确认实验，以提高ANCA的临床应用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。
2、不能仅检测抗PR3和MPO两种特异性抗体，而不检测，这样容易限制ANCA对疾病诊断的特异性。
3、用IIF检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除ANA的干扰，容易出现假阳性。
四、临床意义
（一）ANCA与原发性小血管炎
韦格纳肉芽肿(WG)，显微多动脉炎(MPA)，坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)和变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等原发性系统性小血管炎的发病与ANCA密切相关，临床上已将上述疾病统称为ANCA相关小血管炎。
ANCA,特异性PR3抗体和抗MPO抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检测项目。
1、抗PR3抗体
特异性PR3抗体为WG的标志性抗体，抗PR3抗体荧光模型以c-ANCA为主。
但以c-ANCA诊断WG特异性为90％，而以抗PR3抗体的特异性可超过95％。
抗PR3抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。
抗PR3抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明显时，就可出现阳性。
因而抗PR3抗体常作为WG的早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。
2、抗MPO抗体
抗MPO抗体荧光模型以p-ANCA为主，主要与MPA、NCGN、CSS相关。
还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty综合症等。
抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。
抗MPO抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性NCGN，对诊断原发性小血管炎的特异性达到99％。
因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者，都应该检测ANCA。
（二）ANCA与药物诱导性血管炎
近年来不断有药物治疗引起的ANCA阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑/甲巯咪唑等。
其中报道比较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的ANCA，其特点是滴度高，抗体谱广（抗原主要是MPO，也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如PR3，LF，Cath G，BPI，LYS等）。
药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状好转，ANCA可转阴。
因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测ANCA，及早发现药物诱导性血管炎。
（三）ANCA与其他疾病
除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现ANCA，主要为p-ANCA，其靶抗原并非PR，MPO，而是LF，Cath G，BPI，LYS等
1、慢性炎症性肠病(CIBD)
CIBD是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC），克罗恩病（CD）两种。
以往的CIBD诊断依赖X线检查，内窥镜及组织学诊断，缺乏有效的试验室指标。
近年来研究发现UC病人血清中ANCA阳性率为60-80％，而CD患者的阳性率为10-20％，多为p-ANCA，相关靶抗原有BPI等。
滴度与疾病的活动度和病程无关。
因为p-ANCA在UC阳性率高，CD阳性率低，故可作为两者的鉴别诊断及UC早期诊断指标。
2、结缔组织病
在结缔组织病中，ANCA阳性主要见于SLE和RA，其他结缔组织病中少见。
但文献报道在SLE和RA阳性率差异特别大（16-69％），这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。
SLE中ANCA阳性可能与慢性炎症反应有关，如动脉炎，浆膜炎和CRP增加等。
有报道抗MPO抗体与RA的关节外损害及血管损害有关。
3、自身免疫性肝病
在自身免疫性肝病中，也可检测到p-ANCA。
在原发性硬化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA阳性率高达70-80％，是该病重要的血清学指标。
4、其他疾病
有文献报道，HIV,阿米巴，细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化患者中有p-ANCA阳性。