质谱分析方法开发及优化版
气相色谱质谱分析样品制备方法和技术
气相色谱质谱分析样品制备方法和技术气相色谱-质谱（GC-MS）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物学、环境科学等领域。
它通过将样品中的化合物分离，然后对这些化合物进行质谱分析，以确定它们的化学结构。
以下将详细介绍气相色谱-质谱分析样品的制备方法和技术。
一、样品制备在进行气相色谱-质谱分析之前，需要对样品进行适当的制备。
通常包括以下步骤：1.样品收集：根据分析的需要，选择合适的容器和收集方法，确保样品的代表性和无污染。
2.样品处理：根据样品的性质和目标化合物，选择适当的处理方法，如萃取、浓缩、净化等，以提取和分析目标化合物。
3.样品衍生化：对于一些不易挥发或不易电离的化合物，需要进行衍生化处理，以提高其挥发性和电离能力。
4.样品注入：将处理后的样品注入到气相色谱-质谱系统中进行分析。
二、色谱条件优化气相色谱是GC-MS分析中的关键部分，需要通过优化色谱条件以提高分析的分离效果和灵敏度。
以下是一些常用的优化方法：1.选择合适的色谱柱：根据目标化合物的性质和类型，选择适合的色谱柱，以提高分离效果。
2.调整柱温：通过调整柱温，可以改善样品的分离效果和色谱峰的形状。
3.调整载气流速：通过调整载气流速，可以控制样品的分离速度和灵敏度。
4.调整分流比：通过调整分流比，可以控制样品的进样量，从而影响色谱峰的形状和灵敏度。
三、质谱条件优化质谱是GC-MS分析中的另一个关键部分，需要通过优化质谱条件以提高分析的准确性和灵敏度。
以下是一些常用的优化方法：1.选择合适的离子源：根据目标化合物的性质和类型，选择适合的离子源，以提高电离效率和灵敏度。
2.调整离子源温度：通过调整离子源温度，可以控制样品的电离效率和质谱峰的形状。
3.调整传输线温度：通过调整传输线温度，可以改善样品的离解效果和质谱峰的形状。
4.调整碰撞能量：通过调整碰撞能量，可以控制样品的离解方式和灵敏度。
5.调整扫描方式：通过调整扫描方式，可以控制质谱图的分辨率和质量范围。
化学实验中的常见质谱分析方法
化学实验中的常见质谱分析方法在化学实验中，质谱分析方法被广泛应用于物质的鉴定、结构分析以及反应机理的研究等方面。
通过质谱仪器的测量，我们可以获得物质分子的质量信息和碎片离子的相对丰度，从而推断出物质的分子结构、化学组成和性质等重要信息。
本文将介绍几种常见的质谱分析方法及其原理，并讨论其在化学实验中的应用。
一、质谱分析方法1. 电子轰击离子化质谱法（EI-MS）电子轰击离子化质谱法是最常用的质谱分析方法之一。
其原理是在真空条件下，将待分析样品通过电子轰击使其产生离子化，然后通过质谱仪器进行质量分析。
通过测量生成的离子的质量-荷比（m/z）比值，可以确定分子离子的质量，并推断出物质的结构。
该方法具有高灵敏度和分辨率高的优点，适用于大多数有机化合物的分析。
2. 化学电离质谱法（CI-MS）化学电离质谱法是一种常用的质谱分析方法，其主要特点是在质谱仪器中加入高速气流，通过化学反应的方式将待分析样品转化为离子。
相比于电子轰击离子化质谱法，化学电离质谱法可以将样品中的非挥发性化合物转化为易挥发的离子，从而提高分析的灵敏度。
该方法广泛应用于药物代谢、天然产物分析和农药残留等领域。
3. 电喷雾质谱法（ESI-MS）电喷雾质谱法是一种常见的离子化技术，其原理是通过电场作用将液相样品转化为气相离子。
在电喷雾过程中，待分析样品溶解于溶剂中，并通过高电压加速离子化。
该方法适用于极性和中性化合物的分析，特别是在生物医药领域中，常用于蛋白质和核酸的质谱分析。
二、质谱分析在化学实验中的应用1. 化合物的鉴定与结构分析质谱分析在化合物的鉴定与结构分析中具有不可替代的作用。
通过测量待分析样品的质谱图谱，包括分子离子峰和碎片峰等信息，我们可以推断出有机化合物的分子式、结构以及它们之间的关系。
这对于新合成化合物的鉴定、天然产物的结构分析以及有机反应的机理研究等方面具有重要意义。
2. 反应过程的在线监测质谱分析方法还可以应用于反应过程的在线监测。
安捷伦质谱mrm模式的方法开发
安捷伦质谱MRM模式的方法开发随着科学技术的不断进步，质谱技术在生命科学领域中扮演着越来越重要的角色。
其中，安捷伦质谱MRM（多反应监测）模式作为一种高效灵敏的质谱分析方法，广泛应用于蛋白质组学、代谢组学和药物代谢动力学等领域。
本文将针对安捷伦质谱MRM模式的方法开发进行探讨，讨论MRM模式的基本原理、方法开发的关键步骤及其在生命科学研究中的应用。
一、安捷伦质谱MRM模式的基本原理MRM是一种质谱扫描模式，其基本原理是通过选择两个或多个特定的离子反应对来进行分析。
在MRM模式中，首先选择一个前体离子进行碎裂，然后选择一个或多个产物离子进行检测。
这种方法能够提高分析的特异性和灵敏度，因此在生命科学研究中得到广泛应用。
二、安捷伦质谱MRM模式方法开发的关键步骤1. 目标分子筛选：首先需要确定待测分子的化学结构特征以及其在样品中的丰度范围。
通常可以通过文献调研和实验分析来获得相关信息。
2. MS参数优化：根据待测分子的特性，对质谱扫描参数进行优化，包括碰撞能量、离子传输电压和离子源温度等。
3. 质谱方法建立：根据所选择的前体离子和产物离子，建立MRM扫描方法，并进行方法的优化和验证。
4. 样品前处理：对待测样品进行适当的前处理，包括提取、富集和洗脱等步骤，以提高待测物质的检测灵敏度和准确性。
5. 数据分析：对得到的质谱数据进行处理和分析，包括信号去噪、质谱峰识别和定量计算等。
三、安捷伦质谱MRM模式方法在生命科学中的应用1. 蛋白质组学研究：MRM模式可以用于蛋白质的定量分析，包括蛋白质的表达水平和修饰情况等。
通过MRM方法，可以实现对复杂蛋白混合物的快速、准确的定量分析。
2. 代谢组学研究：MRM模式可以用于代谢产物的定量分析，包括小分子代谢产物和中间代谢产物等。
通过MRM方法，可以实现对代谢通路和代谢产物的全面分析。
3. 药物代谢动力学研究：MRM模式可以用于药物及其代谢产物的定量分析，包括药物的代谢途径和代谢产物的药效学评价等。
化学分析技术中的质谱分析法
化学分析技术中的质谱分析法质谱分析法是化学分析技术领域中最先进的必杀技，可以有效地分析物质的组成、结构和属性。
该技术被广泛应用于制药、环境保护、食品安全、石油化工等行业，成为现代化学分析的重要手段之一。
一、质谱分析法的基本原理质谱分析法是指将被测物质中的分子转化成离子，并对离子进行加速、分离和检测的过程。
具体来说，质谱分析法主要由以下四个步骤组成：1.离子化：将被测物质离子化后得到离子，离子化的方法包括电子轰击、化学电离、MALDI-TOF等。
2.加速：将离子加速至高速运动状态，提高离子动能和动量。
3.分离：由于离子动能不同，其轨迹也不同，因此根据离子动能和质荷比，可以通过质谱仪中的电场、磁场、电磁场等设备实现离子的分离。
4.检测：分离后的离子进入检测器，产生电信号，经计算机处理后，可得到离子的质量、相对丰度等信息。
二、质谱分析法的应用1.制药行业。
在新药研发过程中，质谱分析法可以帮助制定新药剂型、优化生产工艺、提高产品质量。
2.环境保护。
质谱分析法可用于监测大气、水、土壤等环境中的污染物含量，提高环保管理水平。
3.食品安全。
质谱分析法能够准确测定食品中的营养成分、有害物质等，提高食品安全水平。
4.石油化工。
质谱分析法在石油化工行业中广泛应用，可实现燃料油质检，提高石化企业的生产效率和产品质量。
三、质谱分析法的发展趋势随着质谱仪技术的不断创新和突破，质谱分析法在化学分析技术领域中的应用范围也在不断扩大。
未来发展趋势主要有以下三点：1.万能探测器技术。
目前质谱仪中使用的探测器种类有限，未来发展方向主要是研制出基于电光效应、球形电容、爆炸探测器的万能探测器，实现更加精细、灵敏的离子检测和测量。
2.高通量质谱技术。
随着药物研究和生物分子分析的深入，质谱分析法需要具备高通量、高灵敏度、高分辨率的特点，以适应大规模数据的处理需求。
3.质谱与其他技术的结合。
未来质谱分析法将与红外光谱、拉曼光谱、同步辐射等技术结合，实现更为复杂的物质分析与研究。
Optimizer质谱方法自动优化软件的使用
Fragmentor
Coarse range：在设定起止范围内对 Fragmentor 进行粗略优化； Fine：以指定步长在 Coarse 基础上对 Fragmentor 进行细致优化； Fixed：以固定 Fragmentor 进行优化。
Collision Energy: 在 CE range 填入起止范围；
Sample introduction
Injection (with or without column)：使用自动进样器进行多次进样，要求色谱峰
宽大于 10 秒，推荐使用；
Automatic infusion using Loop injection：定量环进样，需要连续进样 30 秒以上； Manual infusion using syringe：使用蠕动泵连续进样 30 秒以上，直接进入质谱，
为绿色)。如果需要停止自动优化，点击
。
Start Optimization：开始自动优化，优化结果自动存入 database，
可以直接导入 Masshunter Acquisition;
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ion Breakdown Profile: 在保存优化结果之前手动选择 Product Ion
的 Collision Energy，然后点击 Save & Exit；如果放弃手动修改结果，点
就可将钾离子加入列表；
Negative ions：正模式下化合物可能的加合离子；系统默认负模式为-H； Charge state：所带电荷数；
-3-
Use most abundant precursor ion：如果选中此选项，Optimizer 将使 用具有最大丰度的 precursor ion；
第九章质谱分析法(共156张PPT)
[M-58]
[M-17]
3 快原子轰击(fast atom bombardment FAB)
原理：快原子(Ar或Xe）轰击样品产生离子 特点：
1. 适用于极性强，难汽化，分子量大的化合物分析
2. 得准分子离子，如（M+H)+ （M+Na)+ 碎片离子很少
3. FAB一般用作磁式质谱的离子源
结构:
四根棒状电极，形成四极场 1，3棒： (Vdc +Vrf) 2，4棒：- (Vdc+ Vrf ) 原理：在一定的Vdc Vrf 下 ， 只有一定质量的离子可通过四极场， 到达检测器，其他质量的离子碰到四极杆被吸收，在另外的 Vdc Vrf 下可接收到另外质量的离子。在一定的Vdc/Vrf)下，连续改 变Vrf或Vdc可实现质量扫描. 特点：扫描速度快，灵敏度高.
检测器（detecter）
真空系统（Vacuum system）
9.2.1 有机质谱仪的构成
GC LC 直接进样探头
进样系统
四极质量分析器 Quadrupole 四极离子阱 IT 扇形场质谱量分析器 Sector 飞行时间质谱仪 TOF-MS 离子回旋共振质谱仪 ICR-MS
离子源
质量分析器
离子检测器
某化合物的组成式为C8H8O2，其质谱图如图，确定化合物结构式。
m* 亚稳离子
它们的存在从质谱图中很容易判别。
酯可以发生α-裂解丢失 或OR自由基产生m/z59＋n×14和29＋n×14的离子.
根据精密质量就可以将这些物质区别开来
1960年代：研究GC-MS联用技术
分子离子一般指由天然丰度最高的同位素组合的离子，相应的有相同元素的其他同位素组成的离子称为同位素离子，在质谱中称为同位素峰.
质谱仪的操作步骤与参数优化技巧
质谱仪的操作步骤与参数优化技巧质谱仪是一种用于分析物质的仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
在使用质谱仪进行分析之前，正确的操作步骤和参数优化技巧是非常重要的。
本文将介绍质谱仪的操作步骤和一些常用的参数优化技巧。
一、质谱仪的操作步骤1. 样品准备：首先，需要准备好待分析的样品。
样品的准备包括样品的提取、纯化和浓缩等步骤。
确保样品的质量和浓度符合分析要求。
2. 仪器准备：在使用质谱仪之前，需要对仪器进行准备工作。
包括打开仪器电源、检查仪器的连接状态和仪器的运行状态等。
3. 仪器校准：质谱仪需要进行校准，以确保仪器的准确性和稳定性。
校准包括质量标准品的校准和仪器的校准曲线的建立。
4. 参数设置：根据分析的需要，设置质谱仪的相关参数。
参数设置包括离子源温度、离子化方式、碰撞能量等。
根据不同的样品和分析目的，参数设置会有所不同。
5. 样品进样：将样品进样到质谱仪中进行分析。
进样可以通过气相进样、液相进样等方式进行。
进样过程中需要注意样品的稳定性和进样量的控制。
6. 数据采集：在样品进样后，质谱仪会自动进行数据采集。
数据采集包括质谱图的记录和数据的存储。
在数据采集过程中，需要确保仪器的稳定性和数据的准确性。
7. 数据分析：获得数据后，需要进行数据的分析和解释。
数据分析可以使用质谱软件进行，通过对质谱图的峰识别和峰面积计算等，得到样品的分析结果。
二、参数优化技巧1. 离子源温度优化：离子源温度是质谱仪中一个重要的参数，影响着样品的离子化效率和离子信号强度。
在进行质谱分析时，需要根据样品的特性和离子化方式来优化离子源温度。
2. 离子化方式优化：质谱仪中常用的离子化方式包括电子轰击离子化、化学离子化和电喷雾离子化等。
选择适合样品的离子化方式可以提高分析的灵敏度和选择性。
3. 碰撞能量优化：碰撞能量是质谱仪中用于碰撞诱导解离的参数。
通过优化碰撞能量，可以提高分析的灵敏度和选择性。
不同的样品和分析目的需要不同的碰撞能量。
应用机器学习技术优化蛋白质质谱分析
应用机器学习技术优化蛋白质质谱分析分析蛋白质质谱数据是生物医学领域中非常重要的任务之一，可以帮助研究人员发现和识别特定蛋白质，从而深入了解疾病的发生机制并找到相应的治疗方法。
传统的质谱分析方法需要大量人工干预和专业知识，难以处理大规模的数据和实时分析。
然而，随着机器学习技术的不断发展，越来越多的研究人员开始尝试利用机器学习算法来优化蛋白质质谱分析过程，从而提高数据处理和分析的效率和准确性。
在机器学习技术的帮助下，研究人员可以自动化分析海量的蛋白质质谱数据，并利用算法进行模式分析、聚类和分类。
其中，深度学习技术在蛋白质质谱分析中表现出了极其出色的性能。
深度学习算法通常通过训练来学习如何对数据进行逐层抽象和表示，从而发掘数据中的潜在信息和特征。
利用深度学习算法，可以精确地识别蛋白质中的各种氨基酸残基，进行定量分析和质谱成像等复杂的分析。
例如，对于质谱成像的分析，深度学习算法可以自动分割图像中的蛋白质区域，并恢复不同蛋白质之间的空间信息。
这种方法不仅可以提高质谱成像的分辨率和质量，还可以帮助研究人员更好地理解蛋白质分子在细胞环境中的空间结构和功能。
此外，利用深度学习算法进行蛋白质质谱分析还可以优化质谱图像的峰识别和去噪，提高数据处理的速度和准确性。
通过机器学习技术优化蛋白质质谱分析可以带来许多重要的应用。
例如，通过蛋白质质谱分析可以发现新的生物标志物并加速疾病的诊断和治疗，同时也可以帮助药物设计和生物工程领域中的新药研发。
利用机器学习技术进行蛋白质质谱分析还可以为环境保护和工业生产等领域的卫生和安全方案提供支持。
然而，机器学习技术在应用于蛋白质质谱分析时也存在一些挑战。
例如，针对数据的高峰密度、大量的异常峰和样本量的不平衡等问题，研究人员需要在算法设计和实验方案中进行细致的优化和调整。
同时，真实的蛋白质质谱数据还面临着实验误差和不确定性等因素的干扰，这些可能会极大地影响算法的准确性和可靠性。
总的来说，应用机器学习技术优化蛋白质质谱分析是一个非常有前景的研究领域。
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液质联用分析方法开发及条件优化一、概述• LC-MS 的实验目的 •电离方式的选择 ESI 或APCI 正离子或负离子 •色谱柱因素直径和流速管路连接（Plumbing ） •流动相因素 pH 溶剂 其他•液质联用应用实例二、样品的预处理•认为LC/MS/MS 不需要样品预处理的理解是片面的 •LC/MS/MS 分析方法的现实情况•由于MS/MS 有很好的选择性, 用户很少能够“看到”基质 MS/MS 模式下，成百上千的基质谱峰是“看不见”的 •MS/MS 用户希望有最低的检测限, 因此他们可能会进更多的样品到LC/MS/MS 系统当中“看不见” 的基质谱峰会变得更加严重•许多后流出化合物并不是完全适合色谱分析，因此色谱柱当中会有残留物产生– 这些残留物会随着不断的进样而渐渐增多– 样品分析的越多，基质之间的互相干扰也越严重 •大量的基质会使离子源污染得更快并且损失灵敏度(一)、样品的预处理目的为什么需要液相分离串联质谱具有高选择性，为什么需要液相分离 –离子化过程中的基质效应基质物质与分析物共同流出喷雾针时，可影响待分析物的雾化、挥发、裂分、化学反应及带电过程，导致进入质谱的离子减少（离子抑制）或增多（离子增强），从而影响定量结果的可靠性和准确性，以及方法的重现性及线性–改善线性和准确性–提高灵敏度 –更好的专属性基质干扰：Loop 进样基质干扰 : 用色谱柱将基质和分析物分离二、样品的预处理•从保护仪器角度出发，防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴，防止污染仪器，降低分析背景，排除对分析结果的干扰 •从ESI 电离的过程分析ESI 电荷是在液滴的表面，样品与杂质在液滴表面存在竞争，不挥发物（如磷酸盐等）防碍带电液滴表面挥发，大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态，增加电荷中和的可能(一)样品的预处理目的（二）样品基质影响质谱检测器可耐受挥发性缓冲盐的使用然而…缓冲盐的类型和浓度干扰离子化过程（二）样品基质影响（三）样品的预处理常用方法•超滤•溶剂萃取／去盐 •固相萃取•灌注（Perfusion ）净化／去盐 •色谱分离反相色谱分离 亲和技术分离 •甲醇或乙腈沉淀蛋白 •酸水解，酶解 •衍生化三、LC-MS 分析条件的选择（一）、接口的选择•ESI 和APCI 在实际应用中表现出它们各自的优势和弱点•这使得ESI 和APCI 成为了两个相互补充的分析手段•概括地说，ESI 适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（蛋白质）•只要有相对强的极性，ESI 对小分子的分析常常可以得到满意的结果1、液质联用技术的相对适用范围2、接口的选择•APCI 不适合可带有多个电荷的大分子，它的优势在于非极性或中等极性的小分子的分析•ESI 对高分子量生物大分子和聚合物电离会生成多电荷离子，而APCI 在任何化合物电离中不能产生多电荷离子，并以（准）分子离子为主 •ESI 多适合反相液相色谱•APCI 要比ESI 更适合正相液相色谱（1）ESI 和APCI 的比较比较项目 ESIAPCI可分析样品 蛋白质、肽类、低聚核苷酸；儿茶酚胺、季铵盐等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯等，可用热喷雾分析的化合物 非极性／中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等，可用热喷雾、粒子束技术分析的化合物 不能分析样品 极端非极性样品非挥发性样品，热稳定性差的样品基质和流动相的影响对样品的基质和流动相组成比APCI 更敏感；对挥发性很强的缓冲液也要求使用较低的浓度；出现Na +，K +．Cl -，CF 3COO -等离子的加成 对样品的基质和流动相组成的敏感程度比ESl 小；可以使用稍高浓度的挥发性强的缓冲液；有机溶剂的种类和溶剂分子的加成影响离子化效率和产物2、接口的选择（1） ESI 和APCI 的比较比较项目 ESIAPCI溶剂溶剂pH 对在溶剂中形成离子的分析物有重大的影响，溶剂pH 的调整会加强在溶液中非离于化分析物的离子化效率溶剂选择非常重要并影响离子化过程；溶剂pH 对离子化效率有一定的影响流动相流速 在低流速(<100µL)下工作良好；高流速下(>750µl)比APCI 差 在低流速（<100µl)下工作不好；在高流速下（>750µl ）好于ESI碎片的产生 CID 对大部分的极性和中等极性化合物可产生显著的碎片比ESI 更为有效并常有脱水峰出现 （2）ESI vs. APCI电离方式 流速(mL/mi n)样品类型 MW 范围ESI0.001-1.0 多电荷离子 MW >1000 Da<200,000 Da (M+H)+, (M-H)-及其碎片~̴103Da APCI0.2-2.0 (M+H)+, (M-H)-及其碎片<1000 Da（3）离子化模式的选择Yes化合物是否是极性的?化合物 热稳定吗?化合物是酸性、碱性还是中性?APCI 或 APPINoYesESI 中性 碱性酸性 ESI (正)ESI (负)APCINo（4）正、负离子模式的选择•一般的商品仪器中，ESI 和APCI 接口都有正负离子测定模式可供选择。
选择的一般性原则为： ●(1)正离子模式 适合于碱性样品可用乙酸(pH=3～4),甲酸(pH=2 ～ 3)或三氟乙酸对样品加以酸化。
如果样品的pK 值是已知的，则pH 要至少低于pKa 值2个单位•适合于碱性样品，肽和蛋白、弱极性化合物、环境污染物，例如农药和污染物、毒品、违禁物及其代谢产物有杂原子(N 2> O 2)可接受H +、Na +、NH 4+，如NH 2、N 、NH 、CO 、COOR样品中含有仲氨或叔氨基时可优先考虑使用正离子模式（4）正、负离子模式的选择●(2)负离子模式适合于酸性样品可用氢氧化铵、四乙基铵、四甲基铵以提高其pH值,对样品进行碱化。
pH要至少高于pKa值两个单位某些蛋白、寡核苷酸、有些糖( saccharides) 和多聚糖(polysaccharides)、某些药物的代谢物(例如葡糖苷酸共轭物(glucuronideconjugates)含强负电性基团物质有无杂原子(O2>> N2) 可失去质子? COOH、SH、NO2 ●3.可正可负:比较灵敏度●样品中含有仲氨或叔氨基时可优先考虑使用正离子模式●如果样品中含有较多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式（4）正、负离子模式的选择•有些酸碱性并不明确的化合物则要进行预试方可决定，此时也可优先选用APCI(+)进行测定 具体分析物的pKa值未知化合物时，可选用3个pH区域以正离子和负离子模式分别进行测试，然后选择一个APCI响应高的方法另外也可通过调节电晕放电电压和喷雾温度，使喷雾和电离优化，但在调节喷雾温度时要注意防止分析物的热解离（5）．分析物的衍生化•通过分析物的衍生化，使分析物更易离子化和/或具有高表面活性，对于中性有机分子如烯类、炔类、烷基卤代类、醇类、酚类、硫代类和氨类可以引入易带电类的功能基团，这些功能基团使分析物能通过加合和质子化进行电离；也可以通过引入电化学反应功能基团给这些中性分子使它们通过氧化还原进行电离•另外也可以通过给分析物引入非极性基团来提高分析物在ESI液滴的表面活性，如寡糖是一类高度亲水的物质而不太适合用常规ESI分析，但通过用三甲基-（对-氨苯基）铵(TMPA)衍生化使它带上了疏水性基团，提高了寡糖的质子亲和力和表面活性，其ESI响应提高了500倍以上，最大到5000倍（三）、大气压电离源的操作优化•得到相同的信号强度，绝对进样量和柱径的关系0.5 mm i.d.4 mm i.d. 2 mm i.d.1 mm i.d.4000 ng 1000 ng 250 ng 62 ng（1）、柱径因素1、HPLC柱的选择（三）、大气压电离源的操作优化(1)、柱径因素•Peak Height vs. Column DiameterCONDITIONS:250 pmol促肾上腺皮质激素(ACTH) on a μBondapak C18 column3.液相条件-色谱柱选择小内径柱改善测定灵敏度200ng联苯柱：Zorbax SB C18•通常来说低的色谱柱内径在相同流速下可以获得更窄的峰宽更高的灵敏度更短的分析时间，然而内径大的色谱柱可以提供高流速及大上样量的分析，分析寿命优于低内径色谱柱（2）.液相条件-选择相应的色谱柱用途 柱内径（ I.D.） 流速标准柱2-4mm 500-2500 μL/min Narrowbore 1-2mm 100-500 μL/min Micro LC 1mm 40 μL/min 800μm 20 μL/min Capillary LC 300 μm 4μL/min 180 μm 2 μL/min Nano LC100 μm 300nL/min 75 μm 180nL/min 50 μm80nL/min（3）.液相条件-色谱柱内径选择ESI流速: 1-1000μl/min内径1.0, 2.1, 3.0mm id 建议用2.1mm 内径 浓度相关 反相流动相APCI流速: 50-1500μl/min内径4.6, 3.0, 2.1mm id 建议用4.6mm 内径浓度不相关，进样多，信号强反相和正相流动相（4）.液相条件-色谱柱颗粒度选择5μm粒径扫描模式：wider peak width 简单样品3.5μm或更小的粒径 SIM, 增加灵敏度 增加分辨率 缩短分析时间 复杂样品等度组份5.液相条件-色谱柱长度选择短柱（15-75mm) •缩短时间•SIM ，Multiple ion mode •简单样品 •易区别分子量长柱（150 or 250mm) •提高分离效果•扫描模式 •Multiple –ion mode •复杂样品 •等度分离LC/MS 柱的选择<1000>1000Molecular WeightLow MediumHigh (or ionizable)ESIAPCIAPCIESIESISample PolarityIonization InterfaceLowHighLow HighRelative Sensitivity Low HighLowHighLow High4.6, 4, 32.1, 1Column Inner Diameter (mm)4.6, 4, 32.1, 12.1, 10.5, 0.320.18, 0.1, 0.0752.1, 10.18, 0.1, 0.0750.5, 0.322.1, 10.18, 0.1, 0.0750.5, 0.32Flow Rate (mL/min)2.0 - 0.20.2 - 0.052.0 - 0.20.2 - 0.050.2 - 0.050.02 - 0.0060.002 0 0.000040.2 - 0.050.02 - 0.0060.002 0 0.000040.2 - 0.050.02 - 0.0060.002 0 0.0000401123液质联用中色谱柱的选择•一般多采用反相柱(C8,C18…)•都是C18色谱柱,难道还有什么不一样吗？ •不同的品牌即是不同的色谱柱•选用能使用简单流动相的新型色谱柱(例如:Xterra, Xbridge, Acquity, Atlantis dC 18, Atlantis HILIC)XTerraMS 色谱柱的益处•色谱柱填料新技术(获2000年R&D100大奖) •突破传统填料技术的极限 高温稳定性宽pH 范围（1-12） 良好的色谱峰形 高速分析•对碱性化合物避免使用离子对试剂,简化流动相,有利于化解液质联用中LC 与MS 的矛盾 •Xterra 升级代色谱柱：XbridgeXTerra ™色谱柱之宽pH 范围 —简化方法开发过程(一以当三)低pH 硅胶柱高pH 聚合物柱中间pH 硅胶柱宽pH 范围的XTerra™杂化填料柱（三）、 大气压电离源的操作优化•流量的大小对LC-MS 成功的联机分析十分重要。