脐血间充质干细胞的体外扩增及向类肝细胞分化的实验研究
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人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展论文
人脐血间充质干细胞治疗肝纤维化的研究进展【中图分类号】r329 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）13-0068-02研究发现，具多向分化潜能的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，mscs），脐带间充质干细胞具有无限增殖和多项分化潜能，可以向肝细胞分化，能在体外自我增殖，并可以定向分化为内、中、外3 个胚层来源的多种细胞，如骨、软骨、脂肪、神经及类肝细胞等，有望用于肝脏疾病的治疗。
脐带来源广泛，无伦理道德方面的争议。
如果能够利用易于获得的mscs在体内外定向分化为肝前体细胞，则可做为肝细胞移植的一个主要来源。
不过脐血中的间充质干细胞含量很少，如何分离纯化？如何使其较长时间保持干细胞特性？如何诱导其向肝细胞分化？据研究表明，人脐血间充质干细胞能够贴壁生长，而体外培养的贴壁细胞是一个异质细胞群，可能含有多种细胞成分。
一般呈现类纤维细胞形态，并可分裂增生，且同时具有间皮细胞标志的贴壁细胞，如cd44+ 细胞，可以初步判断为是mscs。
之前，报道hucmscs可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得，并可冷冻保存；复苏后在肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4 的联合诱导下，能定向分化为表达ck8&18，并合成白蛋白和糖原的类肝细胞，类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。
脐血中存在mscs， ucbmsc 形态与mscs相似，倍增时间为48 h ，传代后形态基本无变化； ucbms c 不表达cd34及cd45，强表达cd44及cd166 ，与mscs的表面抗原特性一致，是脐血中区别于造血干细胞的一群处于未分化状态的非定向干祖细胞。
本研究先通过对hucmscs 的体外培养，对hucmscs进行纯化、扩增和鉴定；初步掌握hucmscs分离、培养及冻存的技术和方法，探索有效诱导hucmscs 分化为肝前体细胞的途径；然后，将诱导和未诱导的hucmscs在体外与人肝星状细胞（hsc）共培养，为下一步研究其在体内通过不同途径移植到肝纤维化鼠体内，以观察其对肝功能的修复情况及对肝纤维化进程的影响奠定基础。
脐血间充质干细胞在神经系统疾病中的研究进展及应用前景
多 向分 化潜 能 ， 后 的研 究 相继 报 道 了从 骨 髓 中可 随
因疗 法 的一种理 想 的靶 细胞 ， 生物 学 和组 织 工 程 在 中具 有 巨大 的科 学价 值 ， 为 ＭＳ ｓ 典来 源 的骨 作 Ｃ 经 髓 间充 质 细胞 已被 广 泛 应 用 于研 究 领 域 。新 近 研
２１ 脐血采集 ．
选 择 健 康 足 月产 或 早 产 妇 ， 胎 待
儿娩 出后 ， 在距 胎儿 ５ １ 的脐 带处进 行双结 扎 ， —７Ｃ Ｉ Ｔ
剪断脐 带 ， 消毒母 侧 脐 带断 端 ， 刺脐 静脉 ， 含 抗 穿 用 凝保 护液 的一次 性负压 采血 袋抽 取 ５ 左 右 的脐 ０ｍｌ 带血 ， ４℃冰箱保 存 ， 标本 在 ４ｈ内进行处 理 。 ２． 脐血 ＭＳ ｓ ２ Ｃ 的分 离 主 要有 密度 梯 度 离心 法 、
１ 脐 血 间充质 干细胞 的发 现
作 为人成 体 干 细胞 的一 种 ， 有 自我更 新 、 度 增 具 高 殖 和多 向分化 潜能 的特性 ， 且 其应 用 避 免 了胚 胎 并
干细胞所 带来 的伦 理 问题 ， １ 成 为细 胞疗 法 和基 ３渐
１７ ９６年 ， ｒ ｄｎｔｉ 先 研 究 发 现 骨 髓 中存 Ｆｉ ｅｓｅ ｅ ｎ首 在一种 纺锤 形 的成 纤维 细胞 集 落 ， 有 自我更 新 和 具
胞［ 。而且 脐 血 取 材 容 易 ， 源 丰 富 ， 疫 源 性 较 来 免 弱 ， 耐受 更 大程 度上 的 ＨＬ 能 Ａ配 型不符 ， 就 为脐 这
２ 脐 血 间充质 细胞 的分 离培养
血 Ｍｓ 作为 “ 种子 ” 细胞治 疗多 种系统 疾病 提供 了
新 的思 路 ， 其 由原来 普 遍应 用 于 血 液 系统 疾 病 扩 使 展到多种 疾病 的研 究 和 治疗 中 ， 一步 扩 展 了脐血 进
因疗 法 的一种理 想 的靶 细胞 ， 生物 学 和组 织 工 程 在 中具 有 巨大 的科 学价 值 ， 为 ＭＳ ｓ 典来 源 的骨 作 Ｃ 经 髓 间充 质 细胞 已被 广 泛 应 用 于研 究 领 域 。新 近 研
２１ 脐血采集 ．
选 择 健 康 足 月产 或 早 产 妇 ， 胎 待
儿娩 出后 ， 在距 胎儿 ５ １ 的脐 带处进 行双结 扎 ， —７Ｃ Ｉ Ｔ
剪断脐 带 ， 消毒母 侧 脐 带断 端 ， 刺脐 静脉 ， 含 抗 穿 用 凝保 护液 的一次 性负压 采血 袋抽 取 ５ 左 右 的脐 ０ｍｌ 带血 ， ４℃冰箱保 存 ， 标本 在 ４ｈ内进行处 理 。 ２． 脐血 ＭＳ ｓ ２ Ｃ 的分 离 主 要有 密度 梯 度 离心 法 、
１ 脐 血 间充质 干细胞 的发 现
作 为人成 体 干 细胞 的一 种 ， 有 自我更 新 、 度 增 具 高 殖 和多 向分化 潜能 的特性 ， 且 其应 用 避 免 了胚 胎 并
干细胞所 带来 的伦 理 问题 ， １ 成 为细 胞疗 法 和基 ３渐
１７ ９６年 ， ｒ ｄｎｔｉ 先 研 究 发 现 骨 髓 中存 Ｆｉ ｅｓｅ ｅ ｎ首 在一种 纺锤 形 的成 纤维 细胞 集 落 ， 有 自我更 新 和 具
胞［ 。而且 脐 血 取 材 容 易 ， 源 丰 富 ， 疫 源 性 较 来 免 弱 ， 耐受 更 大程 度上 的 ＨＬ 能 Ａ配 型不符 ， 就 为脐 这
２ 脐 血 间充质 细胞 的分 离培养
血 Ｍｓ 作为 “ 种子 ” 细胞治 疗多 种系统 疾病 提供 了
新 的思 路 ， 其 由原来 普 遍应 用 于 血 液 系统 疾 病 扩 使 展到多种 疾病 的研 究 和 治疗 中 ， 一步 扩 展 了脐血 进
人脐血CD34^+造血干细胞的分离和体外扩增培养问题
３ 讨 论
脐带血 ， 指的是胎儿娩 出、 脐带结扎并离断后 ， 残 留在 脐 带 内以及胎盘 近胎 儿 侧血管 内的血液 ， 其 中含有 大量 干 细 １ 材 料 与 方 法 胞， 包括造 血干细胞和间充质干细胞等。干细胞具有较强 的 １ ． １ 材料 自我复制能力 。胚胎 干细胞在 一定 的环境 条件下 可 以分 化 １ ． １ ． １ Ｕ Ｃ Ｂ来源 ： 人脐带血 由相 关医院妇 产科 提供 。 为多能干细胞 。造血 干细胞是 多能干细胞的一种 ， 是骨髓 中 １ ． １ ． ２ 仪器 和药品 ： 使用的主要仪器包括细胞 培养箱 ， 超净 的干细胞 ， 它具有 自我更 新 的能 力 ， 也能 够分化成 为各种 血 工作 台； 细胞培养 板 ， 流式 细 胞仪 ； 显 微镜 ， 照相 机 ； 电子 天 细胞前体 细胞并 最终分化 为各种血 细胞 ， 如 红细胞 、 白细 胞 和血小板 。脐带 血可以重 建骨髓造血和人体免疫 ， 多 用来治 平， 离 心机 ； 低 温冰箱等 。 使用 的药品主要包括 细胞 因子 Ｓ Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 疗骨髓 衰竭 以及严重的血液疾病 ， 在一些遗传病 和严重 的免 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ； 青霉素 、 链霉素 ； Ｎ ａ Ｃ １ 、Ｋ Ｃ Ｉ ； 甲醇 、 乙醇 ； Ｎ ａ ２ Ｈ Ｐ Ｉ Ｍ、 疫缺陷疾病 中也 被广泛应用 ， 并且获得了一定的成功。有研 Ｋ Ｈ ２ Ｐ ０ ４； Ｆ ｉ ｃ ｏ ｌ ｌ 淋巴细胞分离 液 ； 胎牛血清 ； Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液。 究表明脐带血中含有大量的干细胞 ， 无论是对外 界刺激的反 １ ． ２ 方法： 采用胎 盘娩 出后采血法采集脐带血 ， 要求 孕妇无 应还是增值能力都 比骨髓 干细胞 强。在 体外生 长培养 中也 产科 ， 内科合并症 以及其他血液疾病。采血过程 由助产士帮 显示出 由于骨髓 干细胞 的特点 ， 比骨髓干 细胞生 长的更好 ， 助 完成 。在 无菌条件下抽取脐带血 ， 注入无 菌采血袋后置 于 即更适合做体外扩增 培养… 。脐带血不仅含 有丰 富的干细 ４℃保存 。２ ４ ｈ内分离 制备 ＭＮ Ｃ悬液 后用 Ｉ ｓ ｏ ｌ ｅ ｘ ５ ０免疫磁 胞 ， 其分泌生长 因子的能力 也很强 。此外 ， 其端 粒酶 活性也 珠分 离系统收集 Ｃ Ｄ ３ ４ 造血 干细胞 ， 用 流式 细胞 仪 检测 收 远远高于骨髓和外周血干细胞 ， 这些特点导致 了脐带干细胞 集的 Ｃ Ｄ ３ ４ 纯度 后行体外扩增 培养 。通过 血液涂 片进行形 扩增会有更强的分裂存活能力 。 态学观察。根据细胞计数调整细胞悬 液量 ， 加入胎牛血清 和 造血生长 因子分 为刺 激增殖 的刺激因子 和维持 细胞存 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ溶液 。在 ２ ４孔培养板上做 ５组不同细胞因子组合 的 活 的存活因子 。根据各种生长 因子的不同功 能 ， 合理搭配 可 Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 培养孔 ， 以不加细胞 因子 的培 养孔作 为生长对 照 ， 每组重 复 以起 到 协 同作 用 。 本 研 究 结 果 表 明 Ｓ 三次 ， 共培养 ６周 。每周计数单个核细胞数和集落形成单 位 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ ５种细胞 因子联合 应用诱 导 Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干 细胞 体 且Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干细胞 体外 培养第 １ ３ （ Ｃ Ｆ Ｕ ） 。细胞因子分组为 ： （ １ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６ ； （ ２ ） Ｓ Ｃ Ｆ 外扩增培养效果 最好 ， 脐 带 血 造 血 干 细 胞 的 研 究 有 不 少 成 ＋Ｉ Ｌ一３＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ３ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ４ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ ｄ时 达 到 高 峰 。 目前 ， ３＋Ｉ Ｌ一 ６＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ５ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ＋ 果， 但至今成功移植的例子却很有限。一方 面是 因为 干细胞 Ｅ Ｐ Ｏ。其 中浓度分 别为 ： Ｓ Ｃ Ｆ １ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ一３ １ ０ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ 的数量较少 ； 另一方面则是 由于脐带干细胞 移植入成人 骨髓 ６ ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ８ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 ＥＰ Ｏ ２ Ｕ。 的成功率较 低 Ｊ 。所 以 ， 如何提高脐带血造血干细胞 的移植 １ ． ３ 数 据分析 ： 用Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０软件对 数据进行 统计学分析 ， 成功率 ， 如何在体外扩增和培养脐带血造血干细胞就成为 了 也是其进一步 发挥 于临床医学应用所要面对的 对数据进行 卡方 检 验。剂 量 资料采 用 平均 数标 准 差表示 。 研究的热点 ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５表 明差异具有统计 学意义。 重费挑战。 参 考 文 献
脐带血 ， 指的是胎儿娩 出、 脐带结扎并离断后 ， 残 留在 脐 带 内以及胎盘 近胎 儿 侧血管 内的血液 ， 其 中含有 大量 干 细 １ 材 料 与 方 法 胞， 包括造 血干细胞和间充质干细胞等。干细胞具有较强 的 １ ． １ 材料 自我复制能力 。胚胎 干细胞在 一定 的环境 条件下 可 以分 化 １ ． １ ． １ Ｕ Ｃ Ｂ来源 ： 人脐带血 由相 关医院妇 产科 提供 。 为多能干细胞 。造血 干细胞是 多能干细胞的一种 ， 是骨髓 中 １ ． １ ． ２ 仪器 和药品 ： 使用的主要仪器包括细胞 培养箱 ， 超净 的干细胞 ， 它具有 自我更 新 的能 力 ， 也能 够分化成 为各种 血 工作 台； 细胞培养 板 ， 流式 细 胞仪 ； 显 微镜 ， 照相 机 ； 电子 天 细胞前体 细胞并 最终分化 为各种血 细胞 ， 如 红细胞 、 白细 胞 和血小板 。脐带 血可以重 建骨髓造血和人体免疫 ， 多 用来治 平， 离 心机 ； 低 温冰箱等 。 使用 的药品主要包括 细胞 因子 Ｓ Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 疗骨髓 衰竭 以及严重的血液疾病 ， 在一些遗传病 和严重 的免 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ； 青霉素 、 链霉素 ； Ｎ ａ Ｃ １ 、Ｋ Ｃ Ｉ ； 甲醇 、 乙醇 ； Ｎ ａ ２ Ｈ Ｐ Ｉ Ｍ、 疫缺陷疾病 中也 被广泛应用 ， 并且获得了一定的成功。有研 Ｋ Ｈ ２ Ｐ ０ ４； Ｆ ｉ ｃ ｏ ｌ ｌ 淋巴细胞分离 液 ； 胎牛血清 ； Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液。 究表明脐带血中含有大量的干细胞 ， 无论是对外 界刺激的反 １ ． ２ 方法： 采用胎 盘娩 出后采血法采集脐带血 ， 要求 孕妇无 应还是增值能力都 比骨髓 干细胞 强。在 体外生 长培养 中也 产科 ， 内科合并症 以及其他血液疾病。采血过程 由助产士帮 显示出 由于骨髓 干细胞 的特点 ， 比骨髓干 细胞生 长的更好 ， 助 完成 。在 无菌条件下抽取脐带血 ， 注入无 菌采血袋后置 于 即更适合做体外扩增 培养… 。脐带血不仅含 有丰 富的干细 ４℃保存 。２ ４ ｈ内分离 制备 ＭＮ Ｃ悬液 后用 Ｉ ｓ ｏ ｌ ｅ ｘ ５ ０免疫磁 胞 ， 其分泌生长 因子的能力 也很强 。此外 ， 其端 粒酶 活性也 珠分 离系统收集 Ｃ Ｄ ３ ４ 造血 干细胞 ， 用 流式 细胞 仪 检测 收 远远高于骨髓和外周血干细胞 ， 这些特点导致 了脐带干细胞 集的 Ｃ Ｄ ３ ４ 纯度 后行体外扩增 培养 。通过 血液涂 片进行形 扩增会有更强的分裂存活能力 。 态学观察。根据细胞计数调整细胞悬 液量 ， 加入胎牛血清 和 造血生长 因子分 为刺 激增殖 的刺激因子 和维持 细胞存 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ溶液 。在 ２ ４孔培养板上做 ５组不同细胞因子组合 的 活 的存活因子 。根据各种生长 因子的不同功 能 ， 合理搭配 可 Ｃ Ｆ 、 Ｉ Ｌ一３ 、 Ｉ Ｌ一６ 、 Ｇ— 培养孔 ， 以不加细胞 因子 的培 养孔作 为生长对 照 ， 每组重 复 以起 到 协 同作 用 。 本 研 究 结 果 表 明 Ｓ 三次 ， 共培养 ６周 。每周计数单个核细胞数和集落形成单 位 Ｃ Ｓ Ｆ 、 Ｅ Ｐ Ｏ ５种细胞 因子联合 应用诱 导 Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干 细胞 体 且Ｃ Ｄ ３ ４ 造 血干细胞 体外 培养第 １ ３ （ Ｃ Ｆ Ｕ ） 。细胞因子分组为 ： （ １ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６ ； （ ２ ） Ｓ Ｃ Ｆ 外扩增培养效果 最好 ， 脐 带 血 造 血 干 细 胞 的 研 究 有 不 少 成 ＋Ｉ Ｌ一３＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ３ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ４ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ ｄ时 达 到 高 峰 。 目前 ， ３＋Ｉ Ｌ一 ６＋Ｇ—Ｃ Ｓ Ｆ ； （ ５ ） Ｓ Ｃ Ｆ＋Ｉ Ｌ一 ３＋Ｉ Ｌ一６＋Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ＋ 果， 但至今成功移植的例子却很有限。一方 面是 因为 干细胞 Ｅ Ｐ Ｏ。其 中浓度分 别为 ： Ｓ Ｃ Ｆ １ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ一３ １ ０ ｉ ｒ ｇ ／ ｍ Ｌ 、 Ｉ Ｌ 的数量较少 ； 另一方面则是 由于脐带干细胞 移植入成人 骨髓 ６ ５ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 Ｇ —Ｃ Ｓ Ｆ ８ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ、 ＥＰ Ｏ ２ Ｕ。 的成功率较 低 Ｊ 。所 以 ， 如何提高脐带血造血干细胞 的移植 １ ． ３ 数 据分析 ： 用Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０软件对 数据进行 统计学分析 ， 成功率 ， 如何在体外扩增和培养脐带血造血干细胞就成为 了 也是其进一步 发挥 于临床医学应用所要面对的 对数据进行 卡方 检 验。剂 量 资料采 用 平均 数标 准 差表示 。 研究的热点 ， Ｐ＜ ０ ． ０ ５表 明差异具有统计 学意义。 重费挑战。 参 考 文 献
人脐血间充质干细胞的体外培养
１１ 材 料 ．
无菌 条 件下 取 本 院 正 常 足 月剖 腹 产 胎
的 Ｍ ｓ ｃｋＴ ｅｅ ｕ Ｍ进行培养 ， ｎ 观察细胞贴壁延伸及原 代培养时间。⑤观察首次换液时间对细胞生长的影 响 ： 行 以上 研究 时 ， 进 分别 于接 种 后第 ２—７ｄ首 次 换液， 将换下的液体转人新瓶继续培养至少 ６ｄ 观 ， 察是否仍有贴壁细胞 ， 以确定首次换液时间。⑥观 察 不 同培 养基 对 细 胞 生 长 的影 响 ： ８份脐 血 ， 取 以
１ ｎ分 离 ， 获 得 的单 个核 细胞 均分 ， １×１ ５ｍｉ 将 以 ０／
ｍｌ１×１ 。 ｌ １×１ ｍｌ１×１ ｍｌ 种 于 Ｆ Ｓ包 、 ０ｍ 、 ０／ 、 ０／ 接 Ｂ
性， 为其在组织工程方面的应用进行初步探索。
１ 材பைடு நூலகம் 与方 法
被 的培 养 瓶 中 。首 次 换 液 时 间 ３ｄ 用 含 １％ Ｆ Ｓ ， ０ Ｂ
液面清晰， 稀释脐血与淋 巴细胞分离液的柱高 比为
３— ： 。用 Ｆｃ ｌ 以适 当 的 速 度 及 时 问 离 心 ， ５】 ｉ 法 ｄ 取 中间界面 白膜层 ， Ｐ Ｓ后 吹 打 ， １５０ｒｍｉ 加 Ｂ 以 ０ ／ ｎ离
心 ５ｍ ｎ弃上清 ， ｉ， 共洗涤 ２次， 后加入培养基 ； 以一 定密 度接 种于 培养 瓶 中 ， ３ 置 ７℃ 、 积 分数 为 ５％ 体 的 Ｃ Ｏ 饱和湿度的孵箱中培养， 细胞到 ８％融合时 ０ 用 ０２ ％胰 酶和 ００ ％ 乙二胺 四乙酸 （ ： ） ．５ ．４ １１ 消化 ， １ ： 传代培养。 ２ １２ 方法 ①不 同离心速度及时间分离脐血单个 ．
以往 研究 ¨ 表 明 ， 血 中存 在 间 充 质 干 细 胞 脐
维甲酸联合神经生长因子体外诱导人脐血间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究
摘 要 目的 ： 讨 脐 血 间 充 质 干 细 胞 （ Ｃ ） 探 ＭＳ ｓ 向神 经 样 细 胞 定 向 诱 导 分 化 的 条 件 及 方 法 ，
以明确 其神 经分化 潜 能。方法 ： 将人 脐血 间充质 干 细胞体 外培养扩 增 、 保存 后 ， 第 ５代 的 ＭＳ ｓ 取 Ｃ
分 别 用维 甲酸 （ Ａ） 维 甲酸联 合神 经 生长 因子 （ Ｆ） Ｒ 、 ＮＧ 诱导 方 法向神 经样 细胞诱 导 ， 导分化 期 诱
间观 察 细 胞 形 态 变化 ， 比较 表 达神 经元 特 异 性 烯 醇 化酶 （ ｓ 并 ＮＥ ）ｍＲ ＮＡ、 质 纤 维 酸性 蛋 白 胶
（ ＡＰ） ＧＦ ｍＲＮＡ 的差 异 。结果 ： 两种 不 同诱 导方 法均能诱 导 细胞发 生典 型变化 ， 对照 组未发 现神
经样 细胞 生长 。 免疫 组化 法显示 三种诱 导方 法诱 导后 均表 达 Ｎ ｓｉ 、 Ｅ、 ＡＰ， ＧＦ ｅｔ ＮＳ ＧＦ ｎ Ｎ ＋Ｒ 组 Ａ 多于 Ｒ 组 。 ｅｌｔ — Ｃ 显 示诱 导组及 对照 组均有 ＮＳ ＮＡ、 ＡＰ ｍＲ Ａ Ｒ ａ— ｍｅＲＴ Ｐ Ｒ ｉ Ｅ ｍＲ ＧＦ ＮＡ 表 达 ， 但
【 中图分 类号】 Ｒ７ １ ０ 【 ４ ． ５ 文献标 识码】 Ａ
【 文章编号 １ １ ０ — ３ ７ ２ １ ）４ ０ ０ —４ ０ ０７ ７ （ ０ ０ ０ — ４ ４０
Ｔｈｅ ｅ ｐ ｒ ｍ ｅ ｎ ｒ ｔｎ ｉ ｃ ｄ ａ ｖ ｒ ｇ ｏ ｈ ｆ ｃ ｏ ｎｄ ｃ ｘ ｅ ｉ ｎｔｏ ｅ ｉ ｏ ｃ ａ ｉ ｎｄ ｎｅ ｅ ｒ ｗｔ ａ ｔ ｒ ｉ ｕ ｅ
Ｄｅ ｒ ｍｅ ｔｏｆＮｅ ｒ ｌ ｇｙ ，Ｔｈｅ Ａｆｉｉｔ ｄ Ｈｏｓ ｔ ｌｏｆＮｏｒ ｈ ｐａ ｔ ｎ ｕ ｏ ｏ ｆｌａ ｅ ｐｉａ ｔ Ｃｈｉ ａ ｅ ｉａ ｎａ Ｃｏ ｌＭ ｄ ｃ ｌＣｏｌｅ ｌｇｅ（ ｎ ｈａ ６ ００ ） Ｔａ ｇｓ ｎ ０ ３ ０
鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2018)13-02027-062027www.CRTER .org·研究原著·陈俊，男，1991年生，湖北省随州市人，汉族，徐州医科大学在读硕士，主要从事脐血间充质干细胞相关研究。
通讯作者：杨自金，主任医师，硕士生导师，徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002中图分类号:R394.2 文献标识码:A稿件接受：2017-12-18Chen Jun, Master candidate, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Yang Zi-jin, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Pediatrics, Lianyungang Hospital Affiliated to Xuzhou Medical University (First People’s Hospital of Lianyungang), Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化陈 俊，杨自金(徐州医科大学附属连云港医院(连云港市第一人民医院)儿内科，江苏省连云港市 222002) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.0492 ORCID: 0000-0002-3762-1586(陈俊)文章快速阅读：文题释义：鼠神经生长因子：是从小鼠颌下腺分离纯化出的一种细胞因子，对神经元有营养支持作用，能够促进受损神经的修复，对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。
低氧促进人脐带血间充质干细胞向神经细胞分化
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ｕ ｍ ｂ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｏ ｒ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ －
Ｗａ ｎ ｇ Ｈａ ｉ ｙ ａ ｎ， Ｗａ ｎ ｇ Ｇａ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｘｉ ａ ｏ ｙ ａ ｎ， Ｌ ｉ Ｊ ｕ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｈｅ Ｊ ｕ ｘ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ）
导成神经细胞的过程 中， 低氧诱导的间充质干细胞向神 经细胞的分化 能力增强。神经细胞表面标 记Ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 、 Ｎ Ｆ — Ｍ表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组 比具有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。 结论
关 键词
低氧条件可 以提 高脐 带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。 低 氧 脐 带血 间充质 干 细胞 神 经 细胞 分化
ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ —ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ Ｔ ｈ ｅ
王海燕， 王 刚， 张晓岩 ， 李菊英 ， 贺菊香
（ 青 海 大学 医学 院病 理教 研 室 ）
Ｗａ ｎ ｇ Ｈａ ｉ ｙ ａ ｎ， Ｗａ ｎ ｇ Ｇａ ｎ ｇ， Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｘｉ ａ ｏ ｙ ａ ｎ， Ｌ ｉ Ｊ ｕ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｈｅ Ｊ ｕ ｘ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ）
导成神经细胞的过程 中， 低氧诱导的间充质干细胞向神 经细胞的分化 能力增强。神经细胞表面标 记Ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ 、 Ｎ Ｆ — Ｍ表达阳性。与常氧诱导的脐带血间充质干细胞组 比具有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。 结论
关 键词
低氧条件可 以提 高脐 带血间充质干细胞向神经细胞分化的产率。 低 氧 脐 带血 间充质 干 细胞 神 经 细胞 分化
ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ —ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｒｏ ｇ ｕ ｐ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ Ｔ ｈ ｅ
王海燕， 王 刚， 张晓岩 ， 李菊英 ， 贺菊香
（ 青 海 大学 医学 院病 理教 研 室 ）
人脐血间充质干细胞定向成骨分化的研究进展
干 细 胞 是 一 类 具 有 自我 复 制 能 力 和 多 向 分 化 潜 能 的 细
胞 ， 为胚 胎干 细胞 和 成体 干 细胞 。间 充质 干 细胞 （ Ｃ ） 分 ＭＳ ｓ 属 于 成 体 干 细 胞 的 一 种 ， 早 在 骨 髓 中 被 发 现 … 。 但 由 于 骨 最
髓 源性 ＭＳ ｓ 在 高 度 病 毒 污 染 的 可 能 ， 随 着 年 龄 的 不 断 Ｃ存 且
［ 图分 类 号 ］ Ｒ ２ ． 中 ３９ ２
［ 献标识 码］ Ａ 文
［ 章 编 号 ］ １０ ８ ４ （０ ２ １ 文 ０ ８— ８９ ２ １ ）３—１７ ０ ４ ５— ３
高 密 度 接 种 的 相 关 报 道 。于 海 微 等 以 ５×１ 。 密 度 接 ０Ｌ 种 时 细 胞 一 直 无 法 传 代 ， ５×１ Ｌ 的 密 度 接 种 时 细 胞 贴 以 ０ 壁 时间 、 出现 伸 展 时 间及 原 代 培 养 时 间均 短 于 其 他 接 种 密 度 ， 有显著 性差异 （ ００ ） Ｐ＜ ．５ 。孙 海 梅 等 在 研 究 相 关 问 题 时 ，
法 ， 现有 无 血 清 均 能 培 养 出 ＭＳ ｓ 只 不 过 无 血 清 培 养 ， 胞 发 Ｃ， 细
的 方 法 分 离 脐 血 ， 果 可 得 到 明 显 的 白 膜 层 细胞 ， 左 右 达 结 ２周 到 ８ ％ ～９ ％ 汇 合 。也 有 利 用 沉 淀 法 分 离 脐 血 的 报 道 ， 取 ０ ０ 并 得 了 良好 的分 离 效 果 。 迟 作 华 等 采 用 羟 乙基 淀 粉 沉 淀 法
人 脐 血 间充质 干 细 胞 定 向成 骨 分 化 的研 究进 展
鲁 俊 山 王建伟 。 马 勇。 ， ，
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Ｃ Ｃ 。分阶段诱导 ６ 后 ， Ｄ Ｄ 周 细胞形态呈 多角形 ， 并检测到肝细胞表面标志物 白蛋白 、 Ｆ Ａ Ｐ和 Ｃ 一９ Ｋ １ 。结论 新
生 儿脐血中可分离 出 ＭＳ ｓ并可在体外进行培养扩增 ， Ｃ， 分阶段诱 导可分化 为类 肝细胞 。
关 键 词 ： 血 ； 充 质 干 细 胞 ； 肝 细 胞 ； 化 脐 问 类 分
Ａ ｓ ａｔ０ｂｅｔ ｅ Ｔ ｎｅｔａ ｈ ｅｓ ｉｔ ｏ ｕ ａ ｍ ｉｃｌｃｒ ｌ ｄ ｍ ｓｎｈ ｍ ｌｅ ｅｓ （ Ｃ — ｂｔ ｃ ： ｊｃ ｖ ｏｉｖｓｇｔ ｔｅｆａｉ ｌｙ ｆｈ ｍ ｎ ｕ ｂｌ ａ ｏｄ ｂ ｏ ｅｅ ｃｙ ａ ｔ ｃｌ Ｕ Ｂ ｒ ｉ ｉ ｅ ｂ ｉ ｉ ｏ ｓｍ ｌ
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ｍｅｓ ｃｈ ｅｎ ｙｍａｌ ｔ ｅｍ ｌ ｎ ｏ ｆ ｃ ｉ ａｌｈｅ ｔ ｙ ｅ—ｉｅ ｃ ｌ ｎ ｖｉ ｏ ｓ ｃｅｌ ｌｔ ｕｎ ｔ ｓ ｏｎ ｐａ ｏｃ ｐｔ ｌ ｅｌ ｉ ｔ ｋ ｓ ｒ
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化 。 倒 置 相 差 显 微 镜 观 察细 胞 形 态变 化 ， 诱 导后 ４周 和 ６周 的 细胞 分 别 采 用 Ｒ －Ｃ 取 ＴＰ Ｒ法 检 测 Ａ Ｂ Ａ Ｐ和 Ｃ 一９ Ｌ 、Ｆ Ｋ １ 基因 ｍ Ｎ Ｒ Ａ水 平 ， 析 类 肝 细 胞 诱 导 表 达 情 况 。结 果 分 按 １ ｍ 接 种 ， 含 １ ％ Ｆ Ｓ的 Ｄ Ｅ ／ １ ０／ ｌ 用 ５ Ｂ Ｍ Ｍ Ｆ ２培养 基 培养 可 成 功 获 取 Ｕ Ｃ ＭＳ ｓ Ｂ — Ｃ 。细 胞 呈 长 梭 形 ， 胞 表 面 抗 原 测 定 显 示 强 烈 表 达 Ｃ 、 Ｄ 而 不 表 达 造 血 细 胞 的 标 志 物 细 Ｄ Ｃ ，
一ｕ ） ，
（ ｒｖ ｅ ｌ ｏ ｉ ｌ ｆ ｌ ｔ ｈ ｎ ｏｇ Ｕ ｉ ｒ ｔ， ｉａ ５ ０ ， ． ． ｈｎ ） １Ｐ ｏｉ ｉ ｓ ｔ ｆ ｉ ｅ ｔ Ｓ ａ ｄ ｎ ｎ ｅ ｉ Ｊｎ ｎ２ ０ ２ Ｐ Ｒ Ｃ ｉａ ｎ ａ Ｈ ｐａＡ ａｄ ｏ ｉ ｖ ｓｙ １
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Ｍ ＳＣｓ１ ｎ ｕｃ ｄ ｉ ｔ ｕ ｔｏ ｌ ｈ ｐ ｔ ｅ ｐｔ—ｉ ｅｌ ｎ ｉｒ ．Ｍ ｅ ｈｏ ＦＬ —ｅｍ ＵＣＢ— ＳＣｓ ｓ ｍｐ ｅ ｗｅ ｅ ｂ ａｎ ｄ ｎ ｉ ｄ ｅ ｎｏ ｆ ｎｃｉｎａ ｅ ａ ｏ ｙ ｅ ｌｋｅ ｃ ｌｓ ｉ ｖｔｏ ｔ ｄｓ ｍ ｔｒ Ｍ ａ ｌｓ ｒ ｏ ｔ ｉｅ ｉ ｓｅ ｉｅ ｃ ｎ ｔｏ ｎｄ ｉｏａｔｄ ｂｙ ｄ ｎ ｉｙ ｇ ａ ｅ ｔｃ ｎ ｒｆ ａｉｎ ａ ｄ ｄｒ ｃｌ ｄｈ ｒ ｎ ｅ ｇ ｏ ｈ，ｈ ｒ ｕｔ ｒ ｄ ｉ ｉｒ ． ｔｒｌ ｏ ｄｉ ｎ ａ ｓ ｌ ｅ ｅ ｓｔ ｒｄｉｎ ｅ ｔ ｕｇ ｔ ｎ ｉｅ ｔｙ ａ ｅ ｅ ｃ ｗｔ ｔｅｎ ｗｅｅ ｃ ｌｕ ｅ ｎ ｖ ｔｏ ｉ ｉ ｏ ｒ Ａｆｅ ｈｅｆ ｕ ｔ ａ ｓ ｇｅｏ ｔｒｔ ０ ｒｈ ｐ ｓ ａ ｆＵＣＢ— Ｓ Ｍ Ｃｓ， ｕ ￣ ｃ ｎ ｉｅ ｓｗｅｅ ｄ ｔｃ ｅ ｔ ｏ ｃ ｔ ｍｅｒ ｓ Ｙａ ｅ ａ ｔｇ ｎ ｒ ｅ ｅ ｔ ｄ ｗｉｈ ｆ ｗ ｙ ｏ ｔｙ，ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｎｄ ｃ ｄ ｉ ｔ ｕ ｃ ｌ ｎ ｈ ｎ ｗｅ ｅ ｉ ｕ ｅ ｎ ｏｆ ｎ —
山东 医药 ２ １ ０ ０年第 ５ ０卷 第 ７期
脐 血 间充 质 干 细胞 的体 外 扩 增及 向类 肝 细 胞 分 化 的实 验 研究
韩 翠萍 刘 吉勇 ｈ 。 ， 高 蕾 裴 庆 山 孙 欣欣 文婷 玉 ， ， ，
（ １山 东大学 附属 省 立 医院 ， 南 ２ ０ ２ ； 济 ５ ０ １２深圳 市 宝安 区人 民医院 ）
摘要 ： 目的
探讨人脐带血 问充质干细胞 （ Ｂ ． Ｃ ） Ｕ ＣＭＳ ｓ 向类肝 细胞定 向分化 的可能性 。方法
无 菌条件 下Leabharlann 集 新生儿脐带血 ７ ５份 ， 采用密度梯度离心法与直接贴壁法相结合分离 Ｕ ＣＭＳ ｓ体外培养传代 ， Ｂ— Ｃ， 获得第 ４代集落 生长细胞作流式细胞仪 表面抗原 测定 ， 并应用 ａＦ Ｆ ｂＦ Ｆ Ｈ Ｆ Ｏ Ｍ 等多 种成分 ， 阶段 向肝 细胞定 向诱 导分 —Ｇ 、—Ｇ 、 Ｇ 、 Ｓ 分
中图分类号 ：８３１ Ｑ １ ． 文 献 标 志 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ —６ Ｘ（０ ０ ０ － ０ －３ １ ２２６ ２ １ ）７０ ３ ０ ０ ０
Ｅ ｐ ｒ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｔ ｄ ｎ ｔ ｅ ａ ｍｅ ｔ Ｉ ｕ ｙ ｏ ｈ ｍｐ ｉｃ ｔ ｎ ａ ｄ ｄｆ ｒ ｎ ｉ ｔ ｎ ｏ ｕ ｓ ｌｉ ａ ｉ ｎ ｉｅ ｅ ｔ ｉ ｆｈ ｍａ ｍｂ ｌ ａ ｃ ｒ ｌｏ ｆ ｏ ａｏ ｎｕ ｉ Ｉ ｏ ｄ ｂｏ ｄ ｉ ｃ