牛血清在细胞培养中的作用与质量要求

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血清在细胞培养中的作用和质量要求

血清在细胞培养中的作用和质量要求

天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用和价值。

比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的,基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体;基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。

细胞工程领域更离不开细胞培养技术,杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。

总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。

细胞培养的发展,培养基的质量是关键,而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。

在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的,所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性,保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。

一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物,其大部分成分已为人所知,但还有一部分仍不清楚,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。

牛血清主要成分有以下几类:1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎牛血清中含胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,最主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。

包括:胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:促生长激素:促进细胞增殖的效应;氢化可的松:血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。

细胞培养时为什么要加入胎牛血清

细胞培养时为什么要加入胎牛血清

细胞培养时为什么要加入胎牛血清?许多临床和做科研的小伙伴们都要涉及到细胞培养,在细胞培养实验中,血清无疑成为影响实验成功与否的重要因素,而在众多血清之中,牛血清是最为常用的。

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,其中含有丰富的细胞生长所必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。

牛血清是一种成分复杂的混合物,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。

牛血清主要成分有蛋白质,多肽类,激素类,其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。

我们都知道牛血清根据取材时间不同而有不同的区分。

分别有胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

由于胎牛从未接触过外界,与新生牛和小牛血清相比,抗体含量明显降低,故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低,是理想的细胞生长补充剂。

市场上胎牛血清的品牌种类很多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣。

小编汇总了多家用户和血清经销商以及网络的经验,分析如下:养过细胞的童鞋大都有着这样的共识:血清,由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素,它既是细胞生长的必备营养,也是细胞死亡的致命毒药,当我们废寝忘食的,呕心沥血的,鞠躬尽瘁的养着细胞同时,也极有可能因为一时的疏忽和大意选错了血清,导致珍贵的细胞意外身外,一切归零,不得不洗心革面重头开始!当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;目前,由于同一厂家,不同批次的血清,内毒素数值也可能有较大差异,因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。

但使用者仍可通过检测报告,自行甄别挑选。

编辑Ausbian品牌许晴将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清,混合在一起,在低温条件下,经七次加压过滤,最后三次为0.1 µm无菌过滤处理,保证用血清的安全性,同事价格上也有较大优势,是一款高性价比的血清品牌。

细胞培养级牛血清白蛋白的用途

细胞培养级牛血清白蛋白的用途

细胞培养级牛血清白蛋白的用途细胞培养级牛血清白蛋白,指的是从牛血清中提取的纯化的白蛋白,通常用于细胞培养和生物技术领域。

牛血清是一种重要的培养基补充剂,含有多种细胞生长因子、蛋白质和其他有益成分,可以提供细胞生长所需的营养物质和环境条件。

而牛血清白蛋白则作为其中最丰富的蛋白质成分之一,具有多种应用价值。

1.作为细胞培养基的补充剂:细胞培养是生物学及生物技术领域的核心实验技术之一,牛血清白蛋白作为细胞培养基的重要组分,可以提供细胞生长、增殖和分化所需的基础营养物质。

牛血清白蛋白中富含的氨基酸、蛋白质和胺基酸代谢产物可以为细胞提供能量和构建蛋白质的原料;牛血清白蛋白还含有多种细胞生长因子和细胞黏附因子,可以促进细胞的粘附和增殖,提高细胞培养的成功率和效果。

2.作为抗氧化剂和稳定剂:牛血清白蛋白具有良好的抗氧化性能,可以帮助细胞对抗氧化应激,减少氧自由基对细胞的损伤。

它还可以稳定细胞培养基的pH值和渗透压,维持培养基的稳定性和一致性。

在细胞培养的过程中,添加适量的牛血清白蛋白可以提高培养基的稳定性,增强细胞生长和维持细胞的正常功能。

3.作为纯化蛋白的辅助剂:在生物技术研究中,常常需要纯化重组蛋白或其他生物大分子。

牛血清白蛋白可以作为纯化过程中的辅助剂,帮助使蛋白质易于溶解和稳定,并减少非特异性结合和不必要的蛋白质互作,提高纯化效率和纯度。

此外,在一些生物技术过程中,牛血清白蛋白还可以作为载体或稀释剂,方便蛋白质的储存、运输和使用。

4.用于细胞研究和细胞治疗:细胞研究和细胞治疗是现代医学和生物技术研究的热点领域,牛血清白蛋白可以作为细胞研究和细胞治疗的重要辅助物质。

在细胞研究中,添加牛血清白蛋白可以提供细胞生长所需的环境和营养,帮助研究人员更好地观察和了解细胞的行为和功能;在细胞治疗中,牛血清白蛋白可以作为细胞注射和移植的载体,保护细胞并促进其存活和功能恢复。

总之,细胞培养级牛血清白蛋白在细胞培养和生物技术研究中具有重要的应用价值。

细胞培养级牛血清白蛋白的用途

细胞培养级牛血清白蛋白的用途

细胞培养级牛血清白蛋白的用途细胞培养级牛血清白蛋白(Fetal Bovine Serum,FBS)是一种从胎牛胎血中提取的血清,它在细胞培养研究中具有广泛的应用。

FBS富含丰富的生长因子、营养物质和抗体,能够提供细胞所需的营养和生长条件,因此被广泛用于细胞培养、细胞凋亡、细胞增殖和细胞分化等方面的研究。

本文将介绍细胞培养级牛血清白蛋白的用途及其在各个领域的应用。

细胞培养级牛血清白蛋白在细胞培养中起到了至关重要的作用。

细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的技术,常用于生物医学研究和药物开发。

在细胞培养过程中,细胞需要获得足够的营养物质和生长因子才能正常生长和分裂。

而细胞培养级牛血清白蛋白中含有丰富的营养物质和生长因子,能够满足细胞的需求,促进细胞的生长和分裂。

细胞培养级牛血清白蛋白还被广泛应用于细胞凋亡研究。

细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡方式,常常在生长发育、免疫调节和疾病发生等过程中发挥重要作用。

研究人员通过添加细胞培养级牛血清白蛋白到培养基中,可以提供细胞所需的生长因子和营养物质,维持细胞的生存状态,从而研究细胞凋亡的发生机制和调控途径。

细胞培养级牛血清白蛋白还在细胞增殖研究中发挥着重要作用。

细胞增殖是指细胞数量的增加和细胞生长的过程,通常与细胞分裂密切相关。

细胞培养级牛血清白蛋白中含有丰富的生长因子和营养物质,能够为细胞提供必要的条件,促进细胞增殖。

研究人员可以通过调整细胞培养级牛血清白蛋白的浓度和添加时间,来控制细胞的增殖速率,从而研究细胞增殖的机制和调控途径。

细胞培养级牛血清白蛋白还被广泛应用于细胞分化研究。

细胞分化是指细胞从一种形态和功能上不同的状态向另一种形态和功能上不同的状态转变的过程。

细胞培养级牛血清白蛋白中富含的生长因子和营养物质能够为细胞提供分化所需的条件,促进细胞分化。

研究人员可以通过调整细胞培养级牛血清白蛋白的浓度和添加时间,来控制细胞的分化方向和程度,从而研究细胞分化的机制和调控途径。

牛血清白蛋白配制注意事项

牛血清白蛋白配制注意事项

牛血清白蛋白配制注意事项
牛血清白蛋白是一种重要的生化试剂,常用于细胞培养、免疫
学和生物化学实验中。

在进行牛血清白蛋白的配制时,有一些注意
事项需要牢记。

首先,要确保在配制过程中严格遵守无菌操作的原则,使用经
过消毒的器皿和工具,并保持清洁的工作环境,以防止外源性污染。

其次,牛血清白蛋白的配制需要使用高纯度的蒸馏水或无菌缓
冲液,以确保配制出的溶液不受微生物污染和离子污染。

在配制过
程中,要注意溶解牛血清白蛋白的温度和速度,通常建议在室温下
缓慢加入溶剂,并轻轻振荡而非搅拌,以避免产生气泡或使蛋白质
变性。

另外,牛血清白蛋白在配制过程中可能会出现凝聚或沉淀的情况,这可能是由于溶剂选择不当或溶解过程中的机械刺激所致。

因此,在溶解过程中要轻柔操作,避免剧烈振荡或搅拌。

此外,配制好的牛血清白蛋白溶液需要进行无菌过滤,以去除
悬浮的微生物和杂质,确保最终溶液的纯度和无菌性。

最后,配制好的牛血清白蛋白溶液要储存在干燥、阴凉、避光
的环境中,并且要密封保存,避免受到空气、光线和污染物的影响。

总的来说,牛血清白蛋白的配制需要严格遵守无菌操作原则,
注意溶剂选择和溶解过程中的操作细节,以及储存条件,确保最终
溶液的质量和稳定性。

希望这些注意事项能够对你有所帮助。

牛血清在细胞培养中的作用

牛血清在细胞培养中的作用

牛血清在细胞培养中的作用1.提供养分和生长因子:牛血清中含有多种营养物质,如葡萄糖、氨基酸、无机盐等,可以提供细胞生长所需的养分。

此外,牛血清还含有多种生长因子和激素,如胰岛素样生长因子、表皮生长因子等,它们可以促进细胞的增殖和分化。

2.维持细胞外基质的完整性:细胞外基质是细胞外的支持结构,对于细胞的附着、生长和分化起着重要作用。

牛血清中的纤维蛋白原和胶原蛋白可以在培养基中形成凝胶,维持细胞外基质的完整性,并且提供了一个支持细胞生长的三维结构。

3.抗氧化和抗炎作用:牛血清中含有多种抗氧化剂,如谷胱甘肽和超氧化物歧化酶等,可以减少细胞受到氧化应激的损伤。

此外,牛血清中的一些成分还具有抗炎作用,可以抑制细胞因子的释放和炎症反应的发生。

4.提供细胞黏附基质:牛血清中含有一些黏附蛋白,如纤连蛋白、胶原蛋白等,它们能够在培养基中与细胞表面的受体结合,促进细胞的附着和生长。

5.调节细胞凋亡:牛血清中的一些成分可以调节细胞的凋亡(程序性死亡)过程。

它们可以促进细胞的存活或促使细胞死亡,从而对细胞发育和功能提供调控。

然而,也需注意到牛血清在细胞培养中存在一些问题。

首先,由于牛血清是从动物体内提取得到的,存在一定的批次差异,质量和成分的稳定性有时会不稳定。

其次,牛血清中可能含有一些未知的病原体,如病毒、细菌等,这些病原体可能会对细胞培养产生不良影响。

此外,牛血清也存在一些伦理和道德问题,因为获取牛血清需要对动物进行捕杀和处理。

总之,牛血清在细胞培养中扮演着关键角色,可以提供细胞生长所需的营养和生长因子,维持细胞外基质的完整性,具有抗氧化和抗炎作用,调节细胞凋亡等。

然而,随着对血清替代品的不断研究和发展,未来可能会有更好的替代选择来替代牛血清在细胞培养中的作用。

动物血清在细胞培养作用论文

动物血清在细胞培养作用论文

动物血清在细胞培养中的作用[摘要]在动物细胞培养培养基中要加入动物血清,因其成分十分复杂,其功能并不明确。

本文从血清的成分入手,逐一分析各成分在动物细胞培养中的作用,从而解决高中教学中的相关问题。

[关键词]动物细胞培养动物血清动物细胞培养培养基中要加入动物血清,而其在培养过程中究竟起什么作用,一直是高中教学的疑点。

为了解决这个问题通过查阅相关资料从血清的成分出发得出以下结论。

一、血清及其成分血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体。

如将血液自血管内抽出,放人试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。

凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝血后经离心取得。

从成分上看动物血清的成分主要包括:水90.7血清白蛋白4.4血清球蛋白2.1氨基酸氮0.005尿素氮0.012其他非蛋白氮0.025葡萄糖0.08乳糖0.025各种脂肪酸0.38脂肪0.14卵磷脂0.2胆固醇o,22钠离子0.38钾离子0.02钙离子0.01镁离子0.0035亚铁离子0.0001氯离子0.36磷酸氢根离子0.01硫酸根离子0.001碳酸氢根离子0.17dpg sgot各种激素酶碱基各种氨基酸(以上数据均为百分比)。

从成分上看血清在动物细胞培养中的作用是很复杂的。

二、各成分的功能1 可以起到营养物质的作用动物在代谢的过程中所需的营养包括水、无机盐、维生素、糖类、脂肪、氨基酸和纤维素等。

这些成分动物血清都可以提供给体外培养的动物细胞,但这些营养物质(除水以外)的含量在动物血清中所占的比例很少,而且主要的营养物质在动物细胞培养基的配制中已经添加了。

所以,从这些角度看动物细胞培养加入的动物血清虽然能起到为培养的动物细胞提供营养物质的作用,但这并不是主要的作用。

2 可以起到调节的作用动物细胞的代谢离不开调节。

在动物体内有两种调节方式来维持动物代谢的稳定,而细胞本身的代谢调节中激素调节的作用很关键。

血清中提供了适量且比例适中的各种各样的激素来保证动物细胞离体后的正常代谢。

动物血清在细胞培养中的作用

动物血清在细胞培养中的作用
7 提 供蛋 白酶 抑 制 剂 .
使在 细胞 传 代时使 剩余 胰 蛋 白酶失 活 ,保 护细 胞不 受伤 外 )的含量 在 动物 血清 中所 占的 比例很 少 ,而且 主 要的营 养 物质 在动 物 细胞培 养基 的配制 中已经添 加 了 。所 以 ,从这 些 害 。 角度看 动物 细胞 培 养加 入 的动物 血 清虽 然 能起到 为培 养 的动 物细胞 提供 营养 物质 的作 用 ,但这 并 不是 主要 的作用 。 2 可 以起 到调 节的作 用 . 总之 ,动 物血 清是 细胞 培养 中用 量最 大 的天 然培养 基 ,
动物血 清
逐一 分析各 成 分在 动物 细胞培 养 中的作 用 ,从 而 解决 高 中教 学 中的相 关问题 。
[ 关键 词]动物 细 胞培 养
动物 细胞培 养 培养 基 中要加入 动 物血 清 ,而其 在培 养过 们的作用非常重要 ,细胞需要它们合成核酸和蛋 白质 ,缺乏 程 中究竟 起什 么作 用 ,一 直是 高 中教学 的疑 点 。为 了解 决这 要导 致 细胞 生 长不 良甚 至死 亡 ;提供 结 合蛋 白 ,能识 别维 生 个 问题通 过查 阅相 关资 料从 血清 的 成分 出发得 出以下结 论 。 素 、脂类、金属和其他激素等 ,能结合或调变它们所结合的 血 清及 其成 分 物 质 活力 ; . 提供 对 维 持 细胞 指数 生 长的激 素 ,基础 培 养基 血 清 是 血 液 凝 固 析 出 的 淡 黄 色 透 明 液 体 。 如 将 血 液 中没有 或量 很少 的营 养物 ,以及 主要 的低 分 子营养 物 。这些 自血 管 内抽 出 ,放 入 试 管 中 ,不 加 抗 凝 剂 ,则凝 血 反 应 被 物质 都 存在 于血 清 中 ,如 果 在配 制培 养基 的 时候一 项项 添 加 激 活 ,血 液迅 速 凝 固 ,形 成 胶 冻 。 凝 血 块 收 缩 ,其周 围所 是 非常麻 烦 的 。所 以加入 动 物血 清类 似微 生 物培养 中的天 然
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牛血清在细胞培养中的作用与质量要求————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术,在整个科学技术中占据了特殊的显著地位,特别是生命科学的发展更离不生物技术,生命科学的发展备受各国的重视。

我国在很多大学中都设立了生命科学院。

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。

比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。

基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养,杂交瘤单克隆抗体,完全是通过细胞培养来实现的,既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。

正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。

总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。

细胞培养的发展,培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。

在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。

保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。

ﻫ一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。

ﻫ1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物养物。

ﻫ质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。

ﻫ4.是细胞贴壁、铺展在塑5.起酸碱度缓冲液作用。

ﻫ6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时料培养基质上所需因子来源。

ﻫ使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

ﻫ1.蛋白质是牛血清中主要成份。

除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。

纤维粘连素细胞促进细胞附着; α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。

ﻫ2.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。

ﻫ3.激素:激素对细胞的作用是多方面的。

胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。

类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。

ﻫ促生长激素:促细胞增殖效应。

氢化可的松:血清中含有定量的该成分,它可能兼有促细胞贴附和增殖作用,但有人证明,血清中的氢化可的松,如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。

ﻫ4其他成份ﻫ氨基酸、葡萄糖、ﻫ酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。

与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。

ﻫ三、牛血清的质量要求随着科学技术的发展和生活水平的不断提高对生物医药产品的质量要求也越来越高,所以对制备工艺中所涉及到的各种原材料的质量标准要求也越来越高,特别是对用于细胞培养基中的主要天然成份――牛血清的质量要求也不断提高。

牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。

ﻫ(一)、WH O公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求: ﻫ1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。

并应具备适当的监测系统。

2.有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。

4.血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。

3.证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。

ﻫ5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家要求无细菌噬菌体污染。

6.对细胞有良好的支持繁殖作用。

ﻫ (二)、我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。

包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,支持细胞增殖检查。

(三)、美国对牛血清的质量要求:Gibco和Sigma二家主要的美国牛血清供应商的牛血清都已进入到我国市场,他们对其质量标准要求都极为严格,从血清来源到产品质量都有明确规定。

1)血清来源:可从世界各国收集胎牛血清,但是必须符合他的质量标准和美国农业部进口要求。

地方当局还不清楚本地是否有牛海绵状病毒流行的血清不收集,有说明血清质量的证明资料:包括收集过程的全部资料、检验结果和交付情况。

2)血清的收集:胎牛血清是心脏穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10个月内)血清静脉取血。

血清采集条件必须符合工业生产的标准:低温下采集、一次分离、分离后立即混合冻存。

符合要求的血清56℃水浴30分钟灭活。

ﻫ3)血清的制备:a.超低IgG胎牛血清:通过亲和层析工艺去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBS γ球蛋白含量减到最低,一般IgG≤5ug/ml,生物学活性不变。

b. 血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/过氧化酶方法测定)。

c. γ-射线照射:已经证明γ-射线照射可以有效灭活血清中可能污染的病毒、支原体。

照射剂量为30~45KG。

而且这个剂量的γ-射线照射不会改变血清的理化性质和对细胞培养的影响。

ﻫ4)除菌过滤:经过上述处理的粗制血清再经过一系列除菌滤膜过滤包括0.2微米(micron)和0.1微米滤膜。

ﻫ4.终产品血清质量FBS要通过三层0.1微米滤膜,其他血清可通过0.2微米滤膜。

ﻫ1)化学检定:渗透压 pH 蛋白含量――电泳法白蛋白球蛋白血红蛋白随着牛年龄增加血清中总蛋白含量相应增加,总的血清蛋白含量可以确定产品规格和年龄。

2)微生物学检查:细菌、真菌符合USP标准。

ﻫ支原体:在支原体专业培养基上培养了3~4周,培养温度36℃±2℃分别在需氧和厌氧条件下进行,有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4次,Hoe chst荧光素DNA染色检查那些培养法无法检出的支原体如猪鼻支原体等。

ﻫ病毒检查: ﻫ牛兰舌病毒Bovin bluetongue牛腺病毒Bovine Adenovirus牛细小病毒Bovine Parvovirus牛病毒性腹泄病毒BovineViral DiarheaVirus ﻫ狂犬病病毒Rabies呼肠弧病毒Reovirus ﻫ牛呼吸道合胞病毒BRSV副流感病毒Ⅲ型Parainfluenzaﻫ检查方法:已证明无外源因子污染的牛细胞培养物,在细胞生长液中加15%待测血清,连传3代共21天。

阴性对照细胞培养液中加15%已知无病毒污染的牛血清,与试验组同条件下进行。

在观察期内注意细胞形态变化或细胞病变。

在观察期内第14天待检样品和对照样品用标准病毒检测方法检查。

如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到6个含盖玻片的容器内。

阴性对照样品按同样方法。

再将牛腹泄病毒、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照,再培养7天,用荧光抗体技术进行检查。

细胞病变或病毒引起的其他改变通过苏木精或伊红染色进行观察。

取另外一个待检细胞培养瓶用人“O”红细胞、豚鼠红细胞和新鲜鸡红细胞作血球吸附病毒检查。

试验在2~8℃和20~24℃进行。

阴性对照细胞预先感染副流感Ⅲ型病毒作为阳性对照。

未感染的细胞作为阴性对照。

3)内毒素检测用鲎试剂检查。

4)细菌噬菌体检查主要检查E.Coli(C300 or K-12)噬菌体。

5)激素含量测定ﻫ每批FBS对某些激素含量都要进行测定,包括:雌二醇、胰岛素、孕硐、睾丸素、甲状腺素等。

6)血红蛋白检测血红蛋白与氧合血红蛋白的比≥70%,血红蛋白含量≤mg15/dl。

ﻫ7)细胞生长效果测定a.细胞克隆效果测定细胞选择:Sp20/Ag-14或P3X63-Ag8.653血清浓度与细胞数:10%血清/1个细胞/孔ﻫ4%血清/5个细胞/孔ﻫ细胞培养基RPMI-1640,96孔培养盘36℃±2℃,5%二氧化碳培养10~15天。

试验中选择一个已知参考牛血清作对照。

ﻫ克隆效率计算:ﻫ克隆效率=(阳性孔平均数/培养孔总数)X100% ﻫ相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率b.贴壁效率试验:ﻫ用人的传代细胞作每批血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血清的贴壁变化。

采用6孔培养盘每批血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清――100细胞/孔,4%血清200介细胞/孔。

放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~ 14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效率。

从这两种不同血清浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。

贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率ﻫc. 二倍体纤维细胞促生长试验人二倍体细胞株WI28MRc5 ﻫ25cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5X105细胞连传3代,每代血清浓度和接种细胞数相同,每代培养7天,每代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。

以同样条件用已知参考血清进行平行培养。

每代收获细胞计数,计算每批待检血清与参考血清的相对生长率(RGR)。

ﻫ RGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) X100% ﻫ牛血清主要质量要求(Sigma)胎牛血清新生牛血清成牛血清牛龄胎10~14天<10个月无菌-- -病毒---支原体---噬菌体---内毒素(ng/ml)≤1.0≤10.0≤10(15)ﻫ血红蛋白(g%)3.0~4.5 3.5~6.05.0~8.5ﻫpH6.7~8.0 7.0~8.0 7.0~8.0渗透压(mom/Kg H2O) 240~340 240~340240~340新的药品管理法即将公布,新的药品管理法对生物制品提出更严格的质量要求。

特别是我国即将加入WTO,会有更多的国外生物制品进入中国市场,我国的生物制品也希望更多地走向国际市场,所以在制品质量上要求会更高, 产品的市场竞争应主要靠质量竞争。

所以对产品中的主要原材料的质量要求也会越来越严格。

如实验动物我国SDA 已提出严格的质量标准,并提出全国各使用部门达到标准的期限。

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