溶液各种配制
附录:常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂得配制碳酸盐缓冲液(CarbonateBicarbonate Buffer)由于碳酸盐pH值偏碱,因此,常用于pH>9得缓冲液配制(附表1)。
附表1、 0、2 mol/L碳酸盐缓冲液(pH9、2～10、7)磷酸缓冲液(Phosphate Buffers,PB)磷酸盐就是使用最广泛得一种缓冲剂,由于它们就是二级解离,有二个pKaPO4:pKa1＝2、12,pKa2＝7、21; 值,所以用它们配制得缓冲液,pH 范围最宽。
NaH2HPO4:pKa1＝7、21,pKa2＝12、32。
Na2另外,磷酸盐还有钾盐分子形式,一般来说,低温时钠盐难溶,钾盐易溶,因此,配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂,但若配制十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳得缓冲液时,只能用钠盐而不能用钾盐,因为SDS会与磷酸钾生成难溶得十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液得优点为:①可配制成不同离子强度得缓冲液;②适用pH缓冲范围较宽;③受温度影响缓冲液pH值变化较小;④离子强度对缓冲液pH影响较小,如0、1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0、1。
磷酸缓冲液得缺点就是:①磷酸盐易与钙离子(Ca2+)、镁离子(Mg2+)及重金属离子结合生成不溶得沉淀物;②可能干扰某些生物化学反应过程,如对某些酶得催化活性具有一定程度得抑制作用。
NaH2PO4得pH值偏酸性,可用作pH<4得缓冲液。
Na2HPO4得pH值偏碱性,可用作pH>10得缓冲液。
而pH＝6～8得中性缓冲液就是更常用得缓冲液,需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制(附表2)。
附表2、 0、2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH5、7～8、2)磷酸盐缓冲溶液(Phosphatebuffered saline, PBS)磷酸盐缓冲液就是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液得渗透压,因此,PBS适用于做细胞缓冲液,常用PBS配制如下。
NaCl 8gKCl 0、2gNa2HPO41、44gKH2PO40、24g在800ml蒸馏水中溶解,用HCl调节溶液得pH值至7、2～7、4加水定容至1L,15psi(1、05kg/cm2)高压灭菌20min,室温保存备用。
Tris缓冲液(TrisHCl Buffer, TB)Tris得pH值偏于碱性,因此,通过添加HCl调节pH至所需值,TrisHCl缓冲液得离子强度(mol/L)就是专指Tris得浓度,如某一特定pH得0、05 mol/L Tris 缓冲液得配制就是将50ml 0、1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积(ml)得0、1 mol/L HCl混合,加水至将体积100ml,即为0、05 mol/L Tris缓冲液。
另外,按附表3制备得缓冲液,由于试剂来源得不同,缓冲液pH可能与所需略有差异,此时可通过稍许减少或增加HCl用量,精细调节pH至所需值。
附表4、 0、05 mol/L Tris缓冲液Tris盐缓冲液(TBS):Tris盐缓冲液就是在Tris缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液得渗透压,因此,TBS也适用于做细胞缓冲液,常用TBS配制如下。
8g NaCl、0、2g KCl以及3g Tris溶解于800ml蒸馏水中,加入0、015g酚红并用HCl调pH至7、4用蒸馏水定容至1L,分装后在15psi(1、05kg/cm2)高压灭菌20min,室温保存。
现在常用Tris盐缓冲液通常不加pH指示剂,而且该溶液如果不用于细胞培养,通常不加KCl及酚红。
Hank’s液 (Hank’s Balanced Salt Solution)Hank’s液就是一种平衡盐溶液,主要用于细胞培养取材时组织块得漂洗、细胞得漂洗等。
贮存液A液:(I)NaCl 80gKCl 4gMgSO4·7H2O 1gMgCl2·6H2O 1g用双蒸馏水定容至450ml。
(II)CaCl2 1、4g (或CaCl2·2H2O 1、85g)用双蒸馏水定容至50ml。
将I与II液混合,即成A液。
贮存液B液:Na2HPO4·12H2O 1、52g,KH2PO40、6g,酚红 0、2g,葡萄糖 10、0g,酚红应先置研钵内磨细,然后按配方顺序一一溶解,用双蒸馏水定容至500ml。
(3)应用液:A、B储存液分别经112、6℃湿热灭菌20min,取A与B液各25ml,加无菌双蒸馏水至450ml,使用前用无菌得3、5%或5、6% NaHCO3调至所需pH。
注意:药品必须全部用A、R试剂,并按配方顺序加入,用适量双蒸水溶解,待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品,最后补足水到总量。
无Ca2+、Mg2+ Hank’s液(Hank’s Solution without calcium, magnesium sulfate)NaCl 80g,KCl 4g,Na2HPO4·12H2O 1、52g,KH2PO40、6g,葡萄糖 10g,用双蒸馏水溶解后,加入0、4％酚红溶液50ml,再加入双蒸水至1000ml,112、6℃湿热灭菌20min,4℃ 冰箱保存。
临用前将原液用无菌双蒸水作1:10倍稀释,用无菌得3、5%或5、6% NaHCO3调至所需pH。
pH7、2柠檬酸盐缓冲液(Citrate Buffer)柠檬酸 0、327g柠檬酸钠 2、63g磷酸氢钠 0、222葡萄糖 0、00255mg蒸馏水加至100ml。
pH3、3枸橼酸磷酸盐缓冲液(Citric acid Phosphate Buffer)0、131mol/L citrate acid,0、066mol/L Na2HPO4,等量混合,调节pH至3、3。
0、5 mol/L EDTA, pH 8、0EDTA·2H2O 186、1 gNaOH ～20 g将EDTA·2H2O加入800ml水中,在磁力搅拌器上剧烈搅拌。
用NaOH调节pH 至8、0,EDTA直到接近pH 8、0才完全溶解,定容至1L。
分装后高压蒸汽灭菌。
0、4%酚红溶液取酚红0、4g置于研钵中逐滴加入1mol/L NaOH溶液11、28ml,边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中,加双蒸水至100ml,过滤后,4℃ 冰箱保存。
醋酸钾(Potassium Acetate)在60ml 5mol/L醋酸钾溶液中,加入11、5ml冰醋酸与28、5ml水。
该溶液用于碱性裂解。
3mol/L 醋酸钠(Sodium Acetate),pH5、2与pH7、0在800ml水中溶解408、1g三水醋酸钠,用冰乙酸调pH至5、2或用稀释乙酸调pH至7、0,加双蒸水至1L。
分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液(Sodium Citrate Buffer)柠檬酸钠 1、8gHCl(1mol) 4ml无水乙醇 95ml先用100ml去离子水溶解柠檬酸钠,然后加入HCl与无水乙醇,再补充去离子水至总量200ml。
饱合硫酸铵溶液(Saturated Ammonium Sulfate Solution)取500ml双蒸馏水,加入约400克硫酸铵,水浴加热至70℃,磁力搅拌器充分搅拌,直到加入得硫酸铵不再溶解,以氨水(也可用NaOH)调pH7、2,室温保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制包被液(Coating Buffer)(pH9、5碳酸盐缓冲液)Na2CO3·10H2O 8、58gNaHCO35、8g溶于双蒸水至1000ml。
封闭液(Confining liquid)(5%脱脂乳PBS溶液,pH7、4) 脱脂乳 50g加0、02mol/L pH7、4磷酸盐缓冲液(PBS)至1000ml溶解。
洗液(washing liquid)氯化钠 8、0g磷酸二氢钾 0、2g磷酸氢二钠(12H2O) 2、9g吐温20 0、5ml加去离子水至1000ml溶解即可。
终止液(stop buffer)(2mol/L H2SO4):21、7ml H2SO4加去离子水至200ml。
缓冲甘油(glycerine buffer)甘油 9份PB(pH8、0) 1份将9份甘油与1份PB合并,充分混匀。
0、5%H2O2甲醇液(Hydrogen PeroxideMethanol Solution)(总体积120ml)3%H2O220ml甲醇 100mlDABH2O2底物缓冲液(DAB H2O2Substrate Buffer)取6mg二氨基联苯胺(3,3’Diaminobenzidine Tetrahydrochloride DAB)溶解于10ml 0、05mol TrisHCl pH7、6。
使用前取0、3%H2O20、1ml加入到DAB溶液中(H2O2得终浓度为0、003%)。
如有沉淀生成,则用滤纸过滤。
5溴4氯3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液(BCIP/NBT Substrate Solution) 贮存液配制:NBT:在10ml 70%得乙醇中溶解0、5g NBT。
BCIP:在10ml 100%二甲基甲酰胺中溶解0、5g BCIP。
贮存液4℃保存,可稳定一年。
底物显色液:取66μl NBT贮液与33μl BCIP加入到10ml碱性磷酸酶缓冲液中,充分混匀,底物显色液应在用前1小时内配制。
三、细胞相关试剂配制L谷氨酰胺(LG)溶液(Lglutamin Solution)(0、2 mol/L)称2、9 g L谷氨酰胺(分子量为146、15)用去离子水溶解至100 ml,过滤除菌,分装小瓶,4～5 ml/瓶,20℃冻存。
100x青链霉素(双抗)溶液(P/S Penicillin/Streptomycin Solution) 取青霉素G(钠盐)100万单位与链霉素(硫酸盐)1 g,溶于100 ml去离子水中,分装小瓶,4～5 ml/瓶,20℃冻存。
7、5% NaHCO3溶液(NaHCO3Solution)称分析纯NaHCO37、5 g,用去离子水溶解至l00ml,过滤除菌,分装小瓶,4～5 m1/瓶,盖紧瓶塞,4℃保存。
HEPES溶液(HEPES Solution)(1mol/L)称23、83 g HEPES(N2HydroxyethylpiperazineN'2ethanesulfonic acid,N2羟乙基呱嗪N'2乙基磺酸,分子量为238、3),用去离子水溶解至100 ml,过滤除菌,分装小瓶,4～5 m1/瓶,4℃保存。
氨基喋呤(A)贮存液(Aminopterin Stocking Solution)(100×, 4×105 mol/L) 称1、76 mg氨基喋呤(Aminopterin, 分子量440、4),溶于90 m1去离子水中,滴加l mol/L NaOH 0、5 m1,并不断搅动,待氨基喋呤完全溶解后,加1 mol/L 得HCl 0、5m1中与,再补加去离子水至100 m1。
常用溶液的配制方法
分析化学常用溶液的配制方法乙醇制氢氧化钾试液可取用乙醇制氢氧化钾滴定液0.5mol/L。
乙醇制氨试液取无水乙醇加浓氨溶液使每100ml中含NH3 911g即得。
本液应置橡皮塞瓶中保存。
乙醇制硝酸银试液取硝酸银4g加水10ml溶解后加乙醇使成100ml即得。
乙醇制溴化汞试液取溴化汞2.5g加乙醇50ml微热使溶解即得。
本液应置玻璃塞瓶内在暗处保存。
一氯化碘试液取碘化钾0.14g与碘酸钾90mg加水125ml使溶解再加盐酸125ml即得。
本液应置玻璃瓶内密闭在凉处保存。
N乙酰L酪氨酸乙酯试液取N乙酰L酪氨酸乙酯24.0mg加乙醇0.2ml使溶解加磷酸盐缓冲液取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.6ml混合pH值为7.02ml加指示液取等量的0.1甲基红的乙醇溶液与0.05亚甲蓝的乙醇溶液混匀1ml用水稀释至10ml即得。
乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液取对二甲氨基苯甲醛1g加乙醇9.0ml与盐酸2.3ml使溶解再加乙醇至100ml即得。
二乙基二硫代氨基甲酸钠试液取二乙基二硫代氨基甲酸钠0.1g加水100ml溶解后滤过即得。
二硝基苯试液取间二硝基苯2g加乙醇使溶解成100ml即得。
二硝基苯甲酸试液取35二硝基苯甲酸1g加乙醇使溶解成100ml即得。
二硝基苯肼试液取24二硝基苯肼1.5g加硫酸溶液1→220ml溶解后加水使成100ml滤过即得。
二乙基二硫代氨基甲酸银试液取二乙基二硫代氨基甲酸银0.25g加氯仿适量与三乙胺1.8ml加氯仿至100ml搅拌使溶解放置过夜用脱脂棉滤过即得。
本液应置棕色玻璃瓶中密塞置阴凉处保存。
二苯胺试液取二苯胺1g加硫酸100ml使溶解即得。
二氨基萘试液取23二氨基萘0.1g与盐酸羟胺0.5g加0.1mol/L盐酸溶液100ml必要时加热使溶解放冷滤过即得。
本液应临用新配避光保存。
稀二硝基苯肼试液取24二硝基苯肼0.15g加含硫酸0.15ml的无醛乙醇100ml使溶解即得。
实验室溶液配制
实验室所需溶液配制1.费休氏试液,购买；2.氢氧化钠溶液,C=0.01mol/l;氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体0.4g溶于200ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；3.中性红溶液,C=1%;准确称取中性红固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；4.溴百里香酚蓝溶液,C=1%;准确称取溴百里香酚蓝固体1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；5.碘化钾溶液,C=10%;准确称取KI固体50g溶于50ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；6.硫代硫酸钠溶液,C=0.1mol/l;硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体15.811g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；7.硫酸溶液,C=2mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体108.78ml稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；8.淀粉溶液,C=0.5%;准确称取可溶性淀粉0.5g,溶于50ml水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；9.铬酸钾溶液,C=50g/L;准确称取铬酸钾固体50g,溶于500ml水中,并在1000ml容量瓶中定容,搅拌下逐滴加入10%的硝酸银溶液,直至溶液出现棕红的悬浮物为止.静置1昼夜,用干净的滤纸漏斗过滤即可,不一定用饱和硝酸银溶液,用10%硝酸银溶液即可.配制方法:1克硝酸银+10毫升纯水溶解,置于棕色瓶中；10.氯化钠基准试剂,C=0.1mol/l,氯化钠分子量58.5,准确称取氯化钠固,5.85g溶于500ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；11.硝酸银溶液,C=0.1mol/l,硝酸银分子量169.87,准确称取硝酸银固体8.49g溶于200ml蒸馏水中,并在500ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液,用前采用基准氯化钠试剂10标定,需保存于棕色试剂瓶中；12.酚酞指示剂,C=0.1%,准确称取酚酞固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；13.氯化钡溶液,C=10%,准确称取氯化钡固体10g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；14.乙醇溶液,C=1%,准确移取乙醇AR1ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；15.盐酸标准溶液,C=1mol/l,分子量36.46,D154=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸77.68ml或称取93.216g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；16.甲基橙指示剂,C=0.1%,准确称取甲基橙固体0.1g溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；17.邻苯二甲基二辛酯DOP标准液C=100ppm配制：用1ml移液管移取1mlDOPAR加入250ml容量瓶中,并用二氯甲烷稀释至250ml定容,摇匀即可得DOP浓度为4000ppm溶液;用5ml移液管移取浓度为4000ppmDOP溶液2.5ml,加入100ml 容量瓶中,用二氯甲烷稀释至100ml,摇匀即可得浓度为100ppmDOP溶液；18.钼酸铵溶液的配制,C=5%,准确称取钼酸铵固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；19.硫酸溶液,C=10mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体543.9ml稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；20.氢氧化钠溶液,C=5%,准确称取氢氧化钠固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；21.氯化亚锡溶液,C=10%,准确称取氯化亚锡固体5g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,溶液配置完成后向其中投入锡粒一颗并保存于大口瓶中；22.二氧化硅贮备液,1ml相当于1.0mg二氧化硅：准确称取分析纯硅酸钠4.730g分子式Na2SiO3·9H2O,分子量284.22溶于200ml蒸馏水中,并与1L容量瓶中定容,保存于塑料瓶中;23.二氧化硅工作液,C=20ppm,用移液管移取二氧化硅贮备液20ml与1L容量瓶中定容,即可得上述浓度溶液,保存于塑料瓶中;24.硫酸溶液,C=1mol/l,硫酸分子量98.08,浓度98%时密度约1.84g/ml,准确量取硫酸液体54.4ml或称取100.096g稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入硫酸而非向硫酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；25.硫代硫酸钠溶液,C=0.05mol/l,硫代硫酸钠分子量158.11,准确称取硫代硫酸钠固体7.9055g溶于200ml蒸馏水中,并在1000ml容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；26.硼酸溶液,C=2%,准确称取硼酸固体2g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中；27.氢氧化钠溶液,C=40%,准确称取硼酸固体40g,溶于50ml蒸馏水中,冷却后在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液,保存于塑料大口瓶中或胶塞玻璃瓶中；=1.2039.11%,1.1529.57%、28.盐酸溶液,C=0.05mol/l,分子量36.46,D1541.1020%、1.0510.17%;准确量取39.11%盐酸3.884ml或称取4.661g,稀释与500ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；29.甲基红乙醇溶液,C=1%,准确称取甲基红固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；30.溴甲酚绿乙醇溶液,C=1%,准确称取溴甲酚绿固体1g,溶于50ml蒸馏水中,并在100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；31.甘油水溶液,C=2%,准确移取甘油AR2ml与100ml容量瓶中定容,即可得到上述浓度溶液；32.盐酸溶液,C=6mol/l,分子量36.46,D15=1.2039.11%,1.1529.57%、1.1020%、41.0510.17%;准确量取39.11%盐酸466.08ml或称取559.296g,稀释与300ml蒸馏水中,向水中加入盐酸而非向盐酸中加水,冷却后在1000ml容量瓶中定容即可得到上述浓度溶液；33.氢氧化钠溶液,C=6mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体240g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；34.氢氧化钠溶液,C=1mol/l,氢氧化钠分子量40.0,准确称取氢氧化钠固体40g溶于500ml蒸馏水中,并在1L容量瓶中定容,即得到上述浓度溶液；。
溶液配置
实验常用试剂配置1.铜标准贮备溶液：称取1.000±0.005g金属铜(纯度99.9%)置于150ml烧杯中，加入20ml1+1硝酸，加溶解后，加入10ml1-1硫酸并加热至冒白烟，冷却后，加水溶解并转入1L容量瓶中，用水稀释至标缓。
此溶液每毫升含1.00mg铜。
2.铜标准溶液：吸取5.00ml铜标准贮备溶液于1L容量瓶中，用水稀至标线。
此溶液每毫升含5.0μg铜。
3.二乙基二硫代氨基甲酸钠0.2%(m/v)溶液：称取0.2克二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物(C5H10NS2Na •3H2O，或称铜试剂cupral)溶于水中并稀释至100ml，用棕色玻璃瓶贮存，放于暗处可用两星期。
4.EDTA-柠檬酸铵-氨性溶液：取12g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na-EDTA•2H2O)、2.5g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7]，加入100ml水和200ml浓氨水中溶解，用水稀释至1L，加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液，用四氯化碳萃取提纯。
4.1EDTA-柠檬酸铵溶液：将5g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na2-EDTA•2H2O)20g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7]溶于水中并稀释至100ml，加入4滴甲酚红指示液，用1+1氨水调至PH=8～8.5(由黄色变为浅紫色)，加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液，用四氯化碳萃取提纯。
5.氯化铵-氢氧化铵缓冲溶液将70g氯化铵(NH4Cl)溶于适量水中，加入570ml浓氨水，用水稀释至1L。
6.甲酚红指示液0.4g/L：称取0.02克甲酚红(C21H18O5S)溶于50ml195%(v/v)乙醇中。
7.碘溶液C=0.05mol／L：称12.7g碘片，加到含有25g碘化钾+少量水中，研磨溶解后用水稀释至1000mL。
8.丁二酮肟[(CH3)2C2(NOH)2]溶液5g／L：称取0.5g丁二酮肟溶解于50mL浓氨水中，用水稀释至100mL9.丁二酮肟乙醇溶液，10g／L：称取1g丁二酮肟，溶解于100mL乙醇(3.4)中。
溶液各种配制
附录：常用试剂配制及应用一、常用缓冲液、试剂的配制碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer)由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH>9的缓冲液配制（附表1）。
附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB)磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21；所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。
NaH2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。
Na2另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。
磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH<4的缓冲液。
Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH>10的缓冲液。
而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。
附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2）磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS)磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。
20种实验室常用溶液配制与标定方法
20种实验室常用溶液配制与标定方法乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)C10H14N2Na2O8•2H2O=372.2418.61g→1000mL 【配制】取乙二胺四醋酸二钠19g，加适量的水使溶解成1000mL，摇匀。
【标定】取于约800℃灼烧至恒重的基准氧化锌0.12g，精密称定，加稀盐酸3mL使溶解，加水25mL，加0.025％甲基红的乙醇溶液1滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25mL与氨-氯化铵缓冲液(pH10.0)10mL，再加铬黑T指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L)相当于4.069mg的氧化锌。
根据本液的消耗量与氧化锌的取用量，算出本液的浓度，即得。
【贮藏】置玻璃塞瓶中，避免与橡皮塞、橡皮管等接触。
乙醇制氢氧化钾滴定液(0.5mol/L)KOH=56.1128.06g→1000mL【配制】取氢氧化钾35g，置锥形瓶中，加无醛乙醇适量使溶解并稀释成1000mL，用橡皮塞密塞，静置24小时后，迅速倾取上清液，置具橡皮塞的棕色玻瓶中。
【标定】精密量取盐酸滴定液(0.5mol/L)25mL，加水50mL稀释后，加酚酞指示液数滴，用本液滴定。
根据本液的消耗量，算出本液的浓度，即得。
本液临用前应标定浓度。
【贮藏】置橡皮塞的棕色玻瓶中，密闭保存。
四苯硼钠滴定液(0.02mol/L)(C6H5)4BNa=342.22 6.845g→1000mL【配制】取四苯硼钠7.0g,加水50ml振摇使溶解,加入新配制的氢氧化铝凝胶（取三氯化铝1.0g，溶于25mL水中，在不断搅拌下缓缓滴加氢氧化钠试液至pH8～9），加氯化钠16.6g，充分搅匀，加水250mL，振摇15分钟，静置10分钟，滤过，滤液中滴加氢氧化钠试液至pH8～9，再加水稀释至1000mL，摇匀。
【标定】精密量取本液10mL，加醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)10mL与溴酚蓝指示液0.5mL，用烃铵盐滴定液(0.01mol/L)滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。
常用溶液的配制
15mmol/L NaCl
工作液配方
solution
Ingredients
materials
Dose
Note
溶液Ⅰ
50mmol/L Glucose
Glucose(C6H12O6•H2O)198.17
0.99g
搅拌溶解后定容至100ml，高压灭菌4℃保存
酵母提取物(Yeast extract)
5 g
NaCl
10 g
LB固体培养基
LB液体培养基
100ml
高压灭菌后成凝胶状，用时微波炉加热至100℃以上溶解，加入5mg/ml Ampcillin 1ml（终浓度为50ug/ml），摇匀后倒入培养皿中，冷却凝固即可涂板
琼脂粉
1.2g
氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)工作液
约5ml
T·H2O
80ml
0.1M/L EDTA
EDTA（C10H6N2O8）
292.25
2.92g
微波炉加热溶解，冷却后10M/L NaOH调pH至8.0，加三蒸水定容至100ml
T·H2O
80ml
RNA酶A母液10mg/ml
RNA酶A
100℃加热15分钟,使混有的DNA酶失活。冷却后用1.5ml eppendorf管分装成小份保存于-20℃
Ampcillin（规格0.48g,80万U）
1支
5mg/ml贮存液（终浓度为50ug/ml）, -20℃保存备用
三蒸水
100ml
溶菌酶溶液(10mg/ml)
溶菌酶溶液
0.1g
分装成1ml/小份，保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃
溶液配制方法
溶液配制方法一、指示剂配制1.0.3%二甲酚橙指示剂：称取0.15g二甲酚橙，加5ml无水乙醇，用水稀释至50ml。
2.5g/L液体铬黑T：称取0.5g铬黑T和2.0g氯化羟胺，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml，此使用前配备。
贮存于100ml棕色试剂瓶中。
3.固体铬黑T：称取1.0g铬黑T和100g氯化钠研磨混合均匀，贮存于100ml棕色广口瓶中备用。
4.1%紫脲酸胺：1g紫脲酸胺与100g固体氯化钠混合，研磨，烘干。
5.1g/L酚酞指示剂：称取0.1g酚酞指示剂，加乙醇100ml溶解混合。
6.10 g/L酚酞指示剂：称取1.0 g酚酞指示剂，加乙醇100ml溶解混合。
7.甲基红—溴甲酚绿指示剂：1份2g/L甲基红乙醇溶液与三份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液混合。
8.甲基红-亚甲基蓝指示剂：一份甲基红乙醇溶液（1g/L）与两份亚甲基蓝乙醇溶液（1g/L）混合。
9.品红试剂（0.15%）：称取0.15g酸性品红，加75ml水，加热到品红溶解，冷却到室温，加4ml盐酸搅拌。
再加15ml10%亚硫酸钠溶液搅匀，放置过夜，加活性炭过滤于100ml容量瓶中。
二、标准溶液的配制1．钴标准溶液：称取3.000g金属钴（99.98%）置于250ml烧杯中，加少量蒸馏水润湿，盖上表面皿，缓慢加入20ml硝酸，加热溶解完全后，洗表面皿及烧杯壁于烧杯中，移入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
此溶液1ml含钴3.000mg。
2．铁氰化钾标准溶液：C﹝K3Fe(CN)6﹞=0.03mol/L,称取9.9g铁氰化钾溶于水中，并稀释至1000ml，摇匀，贮存于棕色瓶中。
3．硫酸钴标准溶液：C（CoSO4）=0.15mol/L，称取4.2g硫酸钴（CoSO4·7H2O）溶于水中，并稀释至1000ml，摇匀，此溶液1ml含钴大约0.9mg。
4．锂标准贮存溶液：称取 5.3228g光谱纯级碳酸锂（预先于110℃、烘2个小时置于干燥器中冷却）置于250ml烧杯中，加少量水润湿，盖上表面皿，沿杯壁缓慢加入15ml盐酸，待溶解后转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水定容。
65种溶液与指示剂的配制
65种溶液、指示剂配制方法1、淀粉指示液1.1称1g淀粉加入100mL H2O中煮沸完全溶解，冷却后加入几滴氯仿。
1.2称可溶性淀粉0.5g，加5mL H2O搅拌后，缓缓倾入100mL沸水中，边加边搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液。
此指示液应临用新配。
2、酚酞指示液：1g酚酞溶于80mL酒精，以酒精稀释到100mL，变色范围PH8.3-10.0，无色变红色3、靛红指示液：0.5g靛红+50%的酒精，以H2O稀释至100mL。
4、石蕊指示液：称10g石蕊粉末，加40mL乙醇，回流煮沸1小时，静置，倾去上层清液，再用同以方法处理2次，每次用乙醇30mL，残渣用水10mL洗涤，倾去洗液，再加H2O50mL 煮沸，放冷，滤过，即得。
变色范围：PH4.5-8.0，红色变蓝色。
5、间苯二酚指示液：0.2间苯二酚溶于20mL丙酮，以H2O稀释至100mL，摇匀。
6、甲基红指示液5.1称0.1g甲基红溶解于60mL酒精，以H2O稀释至100mL。
5.2称0.1g甲基红，加7.4mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液，使溶解，再加H2O稀释至200mL，变色范围：PH4.2-6.3，红色变黄色。
7、甲基橙指示液：称0.1g甲基橙溶解于100mL热H2O中，若有不溶物应过滤，变色范围：PH3.2-4.4，红色变黄色。
8、二甲酚橙指示剂：称0.2g干燥的二甲酚橙，加入100g无碘氯化钠，研匀，可长期保存。
9、二甲酚橙指示液：称0.2g二甲酚橙，以H2O稀释至100mL，摇匀，变色范围：PH3.2-4.4，红色变黄色。
10、溴酚蓝指示液：称0.1g溴酚蓝溶解于3.0mL0.05N氢氧化钠溶液中，使溶解，以H2O稀释至200mL，摇匀，变色范围：PH2.8-4.6，黄色变蓝绿色。
11、铬黑T（简称EBT）10.1 称10g干燥的分析纯氯化钠研细，加入0.1g铬黑T，再研匀，可长期保存。
10.2 称0.5g铬黑T，加入盐酸羟胺4.5g，加酒精100mL溶解。
常用标准溶液的配制
常用标准溶液的配制标准溶液的配制⒈ 0.1mol／LHcl:量取分析纯盐酸配(相对密度1.19)9ml；以水稀释至1L ⒉ 1mol／L Hcl:量取分析纯盐酸配（相对密度1.19)90ml；以水稀释至1L ⒊ 0.1mol／LNaOH:称取分析纯4g氢氧化钠溶于水；稀释到1L⒋ 0.1mol／L AgNO3:取分析纯硝酸银于120℃干燥2h；在干燥器内冷却，准确称取17g，溶于水；在容量瓶中稀释至1000ml；储于棕色瓶中⒌ 0.05mol／LEDTA：称取分析纯乙二胺四乙酸二钠20g；以水加热溶解后，冷却；稀释至1L⒍ 0.1mol／L碘溶液：称取分析纯碘26g及碘化钾80g溶于最少量水中；待溶解完全后稀释至1L。
储于棕色瓶中备用⒎ 0.1mol／L硫代硫酸钠溶液：称取硫代硫酸钠（分析纯）25g溶于水中；加入碳酸钠0.1g；稀释至1L⒏ 0.05mol／L硫酸亚铁铵：称取硫酸亚铁铵20g，溶于冷的5％硫酸500ml；溶解完毕后，以5％的硫酸稀释至1L⒐ 0.1mol／L重铬酸钾标准液：取分析纯重铬酸钾于150℃干燥1h；在干燥器内冷却；准确称取29.421g溶解于水，在容量瓶中稀释至1000ml，并加入30g硫酸汞⒑ 25％硫代硫酸钠：称取25g硫代硫酸钠溶于100ml水⒒ 1％丁二酮肟：1g丁二酮肟溶于100ml 5％NaOH溶液中,定容于100ml ⒓ 5％NaOH：称取5gNaOH溶于100ml水中⒔ 5％过硫酸铵：称5g过硫酸铵溶于100ml水中⒕ 柠檬酸铵EDTA二钠溶液：称取20g柠檬酸铵及5gEDTA二钠溶于水；加水稀释到100ml,PH=5的缓冲溶液，160g无水乙酸钠+60ml/L的冰乙酸配成1000ml ⒖100g�MLNaOH:称取100gNaOH溶于1L水中⒗ 100g�ML氯化钡：称100g氯化钡深于1L水中⒘ 100g�MLKI：称100gKI溶于1L水中⒙ PH=10缓冲溶液：溶解54g氯化铵于水中，加入350ml氨水（相对密度0.89）；加水稀释至1L ⒚ PH=4.2缓冲溶液：溶解72g无水乙酸钠；加入83.3ml冰乙酸；加水至1000ml ⒛ 甲基橙指示剂：0.1g甲基橙溶解于100ml热水中21 酚酞指示剂：1g酚酞溶解于80ml乙醇中，溶解后加水稀释至100ml22 铬黑T指示剂：10g铬黑T加75ml二乙醇铵，再加25ml无水乙醇（可多加） 23 铬酸钾指示剂：5g铬酸钾溶于100ml水中24 紫脲酸铵：1g紫脲酸铵与氯化钠100g研磨混合均匀 25 二甲酚橙（X.O指示剂）：0.2g二甲酚橙溶于100ml水中26 试亚铁灵指示剂：分别称取1.485g邻菲罗啉和0.695g硫酸亚铁溶于水，稀释至100ml，贮于棕色瓶中27 乙酸钠缓冲溶液：称取68g乙酸钠溶液用水稀释至250ml；另取一份冰乙酸与7份水混合；将两种溶液等体积混合28 铜试剂：称取0.1g二乙氨基硫代甲酸钠溶于100ml水29 淀粉指示剂：取可溶性淀粉1g；以少量水调成浆；倾于100ml沸水中，搅匀煮沸，冷却；加入氯仿数滴30 硫酸银―硫酸催化剂：1000ml浓硫酸中加入10g硫酸银；放置～2天，使之完全溶解31 盐雾试验盐水的配制：称取500g分析纯氯化钠溶于9.5L水中，搅拌均匀，调节PH在6.8～7.2之间32 甘油混合液：称取60g柠檬酸钠溶于水中，加入600ml甘油；另取2g酚酞溶于少量乙醇中，定容至1L感谢您的阅读，祝您生活愉快。
常用溶液的配制
常用溶液的配制一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3％台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。
(三)0.5％酚红指示剂酚红0.5g0.1N(0.4％)NaOH 15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。
(四)5.6％NaHCO3溶液称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)(五)10μg／ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。
(七)2％柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。
（八）0.2％次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。