一级菌种制作

一级菌种的制作过程，主要包括下列几个程序：

培养基的配制◊培养基的灭菌◊菌种的分离◊纯化（提纯）◊转管扩大◊培养◊一级菌种

基本要求

营养成分：必须营养全面且易于吸收。

容器：一级菌种培养基通常用玻璃试管作容器，按不同的配方加上琼脂凝固剂，制成琼脂斜面培养基，又叫斜面培养基，简称斜面。

（二）一级菌种培养基常用的材料

在配制一级菌种培养基时，选用的原材料要具备以下二个条件：一是要能满足食用菌的营养需要；二是所用原材料来源广，成本低。

琼脂（又称洋菜）是一级菌种培养基常用的凝固剂

一级菌种培养基常用的配方

1．常用配方

PDA培养基PSA培养基

马铃薯（去皮）200g 马铃薯（去皮）200g

葡萄糖20g 蔗糖20g

琼脂18～23g 琼脂18～23g

水1000ml 水1000ml

一级菌种培养基常用的配方

2．一级菌种培养基配方设计

组成一级种培养基的材料大致可分为四种：

①天然的有机物：应选择新鲜、无霉味、无虫蛀、无变质的优质材料，经热浸提后取滤液入料，为食用菌生长提供全面的营养。

②可溶性的有机营养制剂：主要是为食用菌生长提供优质的碳源和氮源，要求纯度高，保藏良好。

③矿物质：多在改良培养基或综合培养基中作为食用菌对矿物质需求的补充剂，同时对培养基物理性状的改良起重要作用。其用量为0.01%～0.5%。

④琼脂：是固化培养基最常用的凝固剂，一般用量为2%。

一级菌种培养基的配制

一级菌种培养基配方较多，原料较多，但制作方法大致相同。

平板培养基的制作

平板培养基常用于单孢分离，测定菌丝生长速度，观察菌落的形态，拮抗实验，测定接种空间杂菌数。

制作方法：

①将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。

②取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，略打开灭菌过的培养皿盖（露一小缝），倒入培养基（厚度为0.5cm），封盖、冷凝，倒置备用。

一级菌种培养基的灭菌

1．灭菌设备：手提式高压灭菌锅

2．具体灭菌要求：1.1kg/cm2，121℃，保持20~30min。

3．操作过程

加水◊装锅◊盖盖◊加热◊当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气◊正式升压◊保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）◊停止加热◊自然降压至零◊排放余汽◊开盖◊取出灭菌物品◊趁热摆斜面◊检验灭菌效果（32℃空白培养48h）。