马铃薯茎尖培养方法

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10.3.微茎尖培养法

10.3.微茎尖培养法

微茎尖培养法
植物微茎尖培养过程
一、病毒在植物体内成不均匀分布
病毒在植物体内成不均匀分布,越靠近生长点的部位,病毒含量越低,生
长点(约0.1-1.0毫米区域)则几乎不含
或含病毒很少。

二、微茎尖培养法
在切取茎尖时越小越好,但太小则不易成活,过大又不能保证完全除去病毒。

茎尖培养脱毒,由于其脱毒效果好,后代稳定,所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。

茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响茎尖长
(mm)
叶原基

小植株

脱毒植株

脱毒率
(%)
0.121502448
0.272421842.9
0.646400
三、操作过程
1.幼苗的形态
2.剪取茎尖
3.倒入70%酒精处理1分钟
4.倒去酒精
5.倒入消毒液处理15分钟
6.倒去消毒液
7.无菌水冲洗5次8.滤纸吸干水分
解剖镜下,微茎尖剥离脱毒
剥离茎尖时,应尽快接种,茎尖暴露的时间应当越短越好,以防茎尖变干。

思考题
1.微茎尖脱毒法的原理是什么?
2.简述微茎尖脱毒法的操作过程。

参考文献与网站
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马铃薯大西洋品种的茎尖组织培养技术

马铃薯大西洋品种的茎尖组织培养技术

马铃薯大西洋品种的茎尖组织培养技术摘要马铃薯品种大西洋是国内外广泛种植的品种,青海省在大西洋品种的组织培养中试管苗出现了生长势减弱、茎叶嫩黄、繁殖系数减小退化等问题,通过对其茎尖剥离、病毒检测及组织培养管理技术总结,为解决生产中的实际问题、生产优质的脱毒组培苗提供参考依据。

关键词马铃薯;茎尖剥离;组织培养马铃薯品种大西洋是目前国内外广泛种植的炸片型、加工型品种,但该品种易感晚疫病,适合在我国北方晚疫病发生较轻的地区种植或繁种。

青海省由于气候寒冷、隔离条件好、晚疫病和病毒病发生危害轻等优势已成为马铃薯种薯繁育的理想基地。

近年来,随着脱毒技术和组织培养技术的应用,青海种植大西洋种薯的规模在不断扩大,但是在大西洋组培快繁过程中,随着继代次数的增加、继代时间的延长和外源生长延缓剂在植物体内的累积,其试管苗也发生了严重退化,表现为苗的生长势减弱、茎叶嫩黄、繁殖系数减小,影响移栽成活率和降低微型薯的生产潜力,甚至产生变异苗,因此每过一段时间就要对其进行茎尖剥离,以达到脱毒复壮及保证脱毒种薯质量的目的。

本文对马铃薯大西洋品种的脱毒及组培管理技术进行总结,以期为生产优质脱毒苗,保证种薯源头质量提供参考依据。

1茎尖剥离1.1材料的选择和处理在大田选择生长健壮、没有病虫危害且大西洋品种特性表现典型的植株,小心挖出其薯块后进行常规窖藏;待薯块通过自然休眠期后置于网袋中,在室内进行自然光催芽或用5~8mg/kg的赤霉素浸种0.5~1.0h进行催芽处理;待芽长到4~5cm未充分展开叶时,将芽从薯块取下,剥去外面多层的叶片并将底部剪去2cm左右后进行消毒处理。

1.2外植体消毒及茎尖剥离剪取的芽用纱布包好放入烧杯中,用自来水流水冲洗20~30min去除表面杂质,在无菌条件下先用无水乙醇浸润3s左右去除表面张力,放入盛有0.1%升汞的无菌培养瓶中灭菌6~8min,期间轻轻晃动培养瓶使灭菌完全,然后用无菌水冲洗4次。

解剖镜下在灭过菌的培养皿中进行茎尖剥离,小心剥取带1~2个叶原基的茎尖0.1~0.3mm,迅速接种到分化培养基中,防止茎尖风干死亡。

马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点

马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点
水, 注意控制好 浇水量 , 不宜过大 。在浇水时 可随水 冲入化肥 水, 但化肥的种类要求很严 , 要求挥发量小或不挥发 , 在低温 且
灵、 绿亨一号等杀菌剂及时 涂抹防治 , 阻止病菌 浸入危害 。将 去掉的老叶清出棚外深埋 , 防止病菌的传染 。 2 采 用吊秧栽培 管理 吊秧是调节长势 、增加 生长空间 、 . 3 合理利用光能 、 增产增效 的一 种新 的栽培措施 。在吊秧栽培中 应注意 以下 几点 : 吊绳 要选择抗老化 的聚乙烯高 密度塑料线 ; 铁丝架设高 度控 制在距离棚膜 3c 0m左右 , 如果架设过矮会 影 响棚室空 间利用率 ;吊绳 的方法是下端用 一活扣固定在植株 上或用死扣 系在 叶柄上 ,上端 用活扣 系在 铁丝上并应 多余一 部分 , 以便后期落秧时随 秧一起下落 ; 吊绳调节瓜秧 的长 利用 势 。如果瓜秧长势过 旺或出现徒长 , 要将 生长 点向下弯 曲 , 如 果 瓜秧 长势较弱 , 要把生长点夹在吊绳缝中让 其直立 生长 。通 过 吊秧 ,还可以控制 瓜秧的生长 点由南到北成为一 稍微倾斜 的斜线 , 达到北高南低 , 以使受光均匀 , 产量一致 。
技 术版 块

园艺
is ub u Ji h ank i J shu b n k a a u
技 术l

1法 国 冬 玉 西 葫 芦 的 经 济效 益 .
不暴露 在空气中 , 待温 室内干燥 后 自然变黄枯 萎 ; 次去叶数 每
冬玉西葫芦 是从法国 引进 的极 耐寒越冬 1光 温室栽培 的 9 优 良品 种 ,并在 公主 岭 大 岭 乡温 室 试 种成 功 。每 栋 温 室 (0 m2平均产西葫芦 2 0k , 60 ) 5 0 g 在市 场上平均批 发价是 0 . 9元 /g每栋温室收入 90 元 。 k, 00 每栋温室年产值 6 万元 , 扣除每栋 费用 1 . 5万元 , 每栋年纯收入 45 .万元 。

马铃薯茎尖培养脱毒快繁技术

马铃薯茎尖培养脱毒快繁技术

随着农业产业结构的调整,我国马铃薯的种植面积和总产量也在不断的增加。

但在连年的栽培过程中,病毒在马铃薯植株中易系统感染,能阻碍病毒增殖的药剂往往也会影响寄主植物的代谢系统,到目前为止,还没有像防治病虫害一样能有效防治植物病毒病的化学剂。

病毒的侵染及其在薯块内积累引起了马铃薯的退化,马铃薯退化后一般减产20%~30%,严重者减产80%以上。

随着病情逐年加重,严重者失去发芽能力,最后失去利用价值,给马铃薯生产带来十分严重的危害,将使得栽培面积及产量难以进一步提高。

采用无病毒植株是解决马铃薯退化的有效途径,获得无病毒植株的途径有自然选择、物理学方法、化学药剂处理和生物学方法。

最行之有效的方法便是生物学方法中的茎尖脱毒。

马铃薯茎尖脱毒的效果最好,其原理是利用病毒在植物体内分布的不均匀性,即根尖和芽尖的分生组织含病毒量少或不含病毒的特性。

导致这一现象的原因可以由以下因素引起:①分生组织旺盛的新陈代谢活动。

病毒的复制须利用寄主的代谢过程,无法与分生组织旺盛的代谢活动竞争。

②分生组织缺乏真正的维管组织。

大多数病毒在植株内通过韧皮部进行迁移,或在细胞间通过胞间连丝传输,因为细胞与细胞间的移动速度较慢,在快速分裂的组织中病毒浓度高峰被推迟;③高浓度的生长素。

分生组织的生长素浓度通常很高,可能影响病毒的复制。

根据这些原则,利用茎尖组织培养,获得了无病毒植株。

现在几乎所有马铃薯生产区都在使用茎尖脱毒技术,去除了主要病毒,恢复了原品种的特征特性,有效解决了马铃薯退化的问题。

1脱毒种薯生产过程采用微茎尖组织培养的方法,诱导出苗,采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒,鉴定后,无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。

采无菌条件下采用固体、液体培养基相结合的方法,进行扩繁基础苗,在防虫网室栽植或封闭温室扦插,生产出原原种(脱毒小薯)。

用原原种在一定隔离条件下产生原种1代,以后逐渐级称为原种2代、良种1代、良种2代。

【精品】:马铃薯组织培养技术

【精品】:马铃薯组织培养技术

马铃薯茎尖组织脱毒培养及植物激素在培养中的作用摘要:马铃薯茎尖组织脱毒培养,愈伤组织解除分化形成新个体时,体细胞有丝分裂的异染色质延迟复制行为较正常活体植株更严重,后代变异较自然群体变异高出500倍,若在培养过程添加辐射和化学诱变试剂变异率会更高。

因此,组织培养环境不只是现代生物技术辅助育种的一个重要条件,更是诱变育种的一个有效途径,对于以营养体繁殖的马铃薯作物效果更好。

本文介绍了马铃薯茎尖培养的意义和方法,综述了植物激素在马铃薯生长中的作用。

关键词:茎尖体细胞组织培养变异植物激素Abstract: Potato virus-free cultivation of the tip meristem, callus formation of new individual remove differentiation, somatic cell mitosis heterochromatin delay of normal living plant copy behavior more serious than natural group, variation and variation of 500 times higher in the training process, if add radiation and chemical mutagenesis reagent mutation rate is higher. Therefore, tissue culture of modern biological technology environment is not only an important supplementary conditions, is an efficient way of mutation breeding for excessive n-redistribution breeding, potato crop effect is better. The paper introduces the significance of potato meristem-tip culture were reviewed, and the method of plant hormone role in growth of potatoes.Key words: Stem cells; Tissue culture; variation; Plant hormones1马铃薯生态习性和种类对土壤的适应性很强,但对气候要求凉、冷、燥,在湿热地区虽然也能生长,不过一代以后品种就会演化,需要经常从寒冷地区引进新的种。

马铃薯茎尖组织培养技术研究

马铃薯茎尖组织培养技术研究

马铃薯茎尖组织培养技术研究吴兴泉,陈士华,王朔,杨岫峰(河南工业大学生物工程学院,河南郑州450001)摘要 [目的]提高离体马铃薯茎尖组织培养的成苗率和脱毒率。

[方法]从马铃薯上取生长健壮的芽,经消毒后在显微镜下切取1.0到1.5m m 长度的茎尖,接种于诱导分化培养基上,研究了不同浓度的GA 3、KT 与6-B A 和不同激素配比以及不同浓度的基础培养基的诱导效果,探讨了茎尖组织诱导分化的最适培养条件。

[结果]低浓度的GA 3可促进愈伤组织的形成,过高的GA 3浓度会抑制愈伤组织的形成;K T 比6-B A 具有更好的诱导效果;在MS +GA 30.1m g/L +NAA 0.1mg/L +6-B A 0.5m g/L 培养基中激素配比的诱导效果较好。

[结论]MS +0.5mg/L K T +0.2mg/L GA 3+0.1m g/L NAA 是最为适宜的茎尖组织培养基。

在28e 、每天光照16h 、光照强度>2000lx 的培养条件下,经7d 左右即可得到形态良好愈伤组织,经15d 左右即可得到分化良好的试管植株。

关键词 马铃薯;茎尖组织;组织培养中图分类号 S603.6 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)03-01039-02Research on Tissue C ulture T echnolo gy for Potato Stem -tip WU X ing -quan et al (College of B ioen gineerin g,Hen an Ind ustrial University,Zhen gz hou,Henan 450001)Abstract [Objective]The study ai med to enhance the seedling rate an d vi rus free rate of s tem -ti p tis sue cul ture of potato i n vitro.[Method]The l usty bu d was taken from potato,an d the stem -tip wi th len gth from 1to 1.5mm was cu t u nder microscope after di si nfection,and then i t was inoculated to the m edi um for ind ucti on an d differentiati on,the i nduction effects of GA 3,KT and 6-B A wi th different concn.and the different h orm one matchi ng as well as the basic mediu m wi th differen t concn.were s tu died,and the m ost p roper culture condi tions for in duction and differentiati on of stem -tip tiss ue was discussed.[Result]The GA 3with low concn.could promote callus formati on,the exorbitant G A 3concn.would res train form ation of callu s;KT had better i nduction e-ffect than that of 6-B A.In the mediu m of MS +G A 30.1m g/L +NAA 0.1mg/L +6-B A 0.5m g/L,the indu ction effect was good for the hormone m atchin g.[Conclusion]The MS +0.5mg/L KT +0.2mg/L GA 3+0.1mg/L NAA was the most suitable m edi um for stem -tip ti ssue.Under the cu-l tu re condi tions of li ght in ten si ty >2000l x,temperatu re of 28e ,illu minati on of 16h p er d ay,the callu s wi th good sh ape would be attain ed about 7d lat -er,and the test tube plan tlets with good differenti ation coul d be acq uired about 15d later.Key w ords Potato;S tem -ti p tis sue;Tiss ue cultu re基金项目 河南省教育厅自然科学基础研究项目(2006210003);河南工业大学校科研基金项目(07XJC008)。

20.项目七 马铃薯茎尖培养脱毒技术

20.项目七  马铃薯茎尖培养脱毒技术
• 还可以借助化学药剂处理来提高脱毒效果。
• 三、脱毒苗的保存方法
• 无毒苗要很好的保存,可以在生产上经济有效地发挥作 用。常用的瓶苗继代保存需要在培养基中加入一些生长 延缓剂。
• 但无病毒植株并没有获得额外的抗病性,它还可能被同 一病毒或不同病毒感染。
• 低温保存是在苗长到2cm左右时,放在4℃冰箱内的暗处 保存,可保存一年。而在液氮低温-196℃中保存,细胞 的代谢完全停顿,可以长期保存。
• 一、马铃薯脱毒苗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ段组培技术
• 目前多应用茎段组织培养技术来快速繁殖脱毒苗,茎段组 织培养是指带有腋芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体 培养。
• (一)茎段培养的培养基
• 在实践中,一般茎段培养用的培养基仍然是MS培养基, 但不像茎尖培养严格,为了降低成本,有时有机成分和微 量元素可酌减,只用大量元素和少数微量元素,并用白糖 代替蔗糖,琼脂改用0.5%等。
• 马铃薯茎尖培养一般常采用半固体(琼脂培养基)培养, 但去掉琼脂的液体培养基培养效果更好。
马铃薯茎尖培养培养基的成分表(mg/l)
成分 硫酸镁 磷酸二氢钾 硝酸钙 硫酸铵 硝酸钾 氯化钾 盐酸吡哆醇 马铃薯
蔗糖 琼脂
含量 125 200 100 100 1000 35
1 10% 90000 0.6%
• 已知感染马铃薯的病毒有18种,类病毒有1种。
• 在我国已发现7种专门寄生于马铃薯的病毒,即马铃薯X病 毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯 S病毒(PVS)、马铃薯 M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯奥古巴花叶病毒 (又叫黄斑花叶病毒,简称PAMV)和马铃薯卷叶病毒 (PLRV)。
• 马铃薯由于具有高产、生育期短、适应性广、抗灾害能力 强、营养丰富、用途广泛等优势,在世界范围内广泛种植, 已成为世界第四大粮食作物。

马铃薯茎尖培养一步成苗技术研究

马铃薯茎尖培养一步成苗技术研究

序, 缩短育苗周期 , 降低生产成小 。
关键 词 : 脱毒码铃磐 ; 茎尖培养 ; 试管壮苗 ; 步成 茸
中 图分 类号 :52 ¥3
文 献 标 识 码 : A
文 章编 号 :0600 (0 I1一090 10—6X 21 )l05—4
St dy o c u n Te hni e o qu fOne t p S e i g Cu t e f r S o p o t t -s e e dln lur o ho tTi fPo a o
s e l g c l r o lr e s a e p o u t n c n smp i r c s ft s e c h r , h re y l fs e l g b e dn ,a d e d i u t e t a g o l rd c i a i l y p o e s o s u u u e s o tn c ce o e d i r e i g n n u ' o f i n
s e ig h d s o t e e dln s a h r tmpo a y plntn ro d i o o s r wt a e r ns l n i .Ap y n e niue f o  ̄ r a i g pe id an vg r u g o h f r ta p a tng t pli g tch q o ne— tp se
W ANG Xin — u HUANG if n ’, a g h i , L- a g ZHANG a - u , Xin t QUAN Hu W U G u n -h FSHI n - a g a. a g u, Yo g f n
f.Hu a rc l rl U ie st C c s a 4 0 2 , RC i n n Ag iu t a n v r i u y h mg h 1 1 8 P ;
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的条件下切取 010 毫米 ,植到人工配制的培养基 . - ~3 上培养 , 使之形成小植株 , 然后再用指示植物, 病毒抗 血清及 电子显微镜镜检等方法进行鉴定 , 凡是不表现
红、 洋酸浆 、 酸浆 、 假 指尖椒 、 毛蔓陀萝 、 心叶菸 、 丛生 番茄 、 鲁特格尔斯番茄等指示植 物鉴定 , 也可用病毒
26 培 养室设 备 : . 主要是 培 养架 、 管 架 。在 培养 架 试
上安上 1 3 光灯作光源 , 为了增温和补光还可用普通灯
泡 与 日光灯 配合 , 效果 更好 。 冬季 寒冷地 区 , 培养 室上 面安 装 一 种 高照 度 的碘 钨 灯 ,这 种 灯具 有 很 高 的热 能, 而具有 全色 的光谱 , 辅助 加温 的作 用 , 了增 温 起 为
7% 0 酒精擦拭操作台及其表面。 接种材料的表面消毒 剂一般采用漂白粉的饱和溶液。 23 无菌操作设备 : - 接种室或接种箱及各种小工具 ,
酒精灯 , 贮存浸有酒精 (0 棉球 的广 口瓶及一套接 7 %)
种设备 , 后者包括镊子 、 接种环或接种钩 、 剪子 、 解剖
毫克/ o 萘乙酸; M + . 毫克/ 6 苄基 嘌呤+ 升 【 一 或 A 00 5 升 一
刀。较先进的无菌操作设备是超净工作台 , 由于有机 动的滤尘装置 , 以使工作台面处于无菌状态。 可
2 培养基的原料 , - 4 配制与贮存设备 : 一般用做组织 培 养 的化学 药 品的纯度 用 三级 品 ( 学纯 ) 可 以。 化 就 化 学药品需要有专门的柜存放 , 对于一些容易变质的有 机药品如维生素 、 氨基 酸和核酸类及各种激素 , 最好 贮藏在冰箱 中, 配制好 的培养基母液 ( 良好保存可使 用 12 ~ 个月 ) 也需贮藏在冰箱中。 因此在条件许可时 , 实验室内应配备冰箱。 配制培养基 的用具主要是一些玻璃器皿。包括 5 、0 、 00 2 0 05 0 1 0 、 0毫 升的烧杯 ,、05 、0 、0 、 0 5 1 、 10 50 0
病毒病症的植株称为无病毒植株 , 它们所结的块茎 中 无病毒种薯或脱毒种薯。 此法是减轻和避免马铃薯 因
带毒产生退化减产影响产量最有效 的办法 , 现介绍马 铃薯茎尖培养方法如下。
搞血清鉴定 , 把有毒植株及早消灭掉 , 保留无毒植株 , 做为原原种隔离加速繁殖。
2 组织培养 实验室 的设备
2 清洗设备 : . 1 玻璃器皿清洗设备包括水桶 、试管 刷、 自来水池 、 适用的工作 台、 洗涤架等。 此外 , 还需配
1 茎 尖培 养技术
1 取材与消毒 : . 1 取刚 出土的幼苗或块茎上芽子 , 切 下 12 — 厘米长一段 , 放在烧杯里 , 面盖好纱 布 , 自 上 用 来水 冲洗 1 小时 , 然后拿到无 菌室内浸在饱和的漂 白 粉溶液中 5 l ~0分钟 , 取出后用无菌水冲洗 2 3 ~ 次。 1 分离和接种 :放在 4 倍的双筒解剖显微镜下 , . 2 0 用解剖针去掉幼 叶, 直至露 出半光滑的生长点 , 用解 剖刀从 010 毫米处切下来 ,接到试管中培养基表 . . ~3 面上 , 每个试管接种一个茎尖 , 接后在试管上端外面 的纸 帽上 写上 处理 和接 种 E期 。 l 1 培养基 :采用 MS 0 . 3 +. 5毫克/ 6 苄基 嘌呤+ . 升 一 0 5
置一些洗涤剂 , 如肥皂、 洗衣粉和洗液等。
22 消毒设备 : . 培养基消毒 , 一般用热压灭菌锅 。接 种室( ) 箱 的消毒常用紫外灯灭菌 , 同时结合用化学药
剂 甲醛 ( 向甲醛 内加入高锰酸钾使 甲醛剧烈挥发 ) 熏 蒸或用 01 升汞喷射( . % 升汞有剧毒, 使用时要小心 ) 用
01 . 毫克/ 升赤霉素+ . 毫 升 O 萘乙酸 。 Ol O / . 一 培养基用 蒸馏水配制 , 培养基配成后装在小试管 中, 每管装 1 0 毫升左右 。试管 口塞上包纱布的棉花球 , 然后把 1~ 0 2 0支试 管 放在 硫 酸纸 袋 中 ,将 这一 袋 袋 的培 养 基放 在 08 1 . 千克/ — 厘米高压锅 中消毒 1 分钟。 5 1 培养条件 : . 4 接种 的试管放到培养室 中培养 , 适宜 的温度为 2 ~ 5 光照 3 0 ~ 00 光 , l2 ℃, 004 0 烛 茎尖培养 1 ~ 个月 , .2 5 可更换一次培养基( 原配方 ) 。 1 土壤移植 : . 5 小植株在试管里长到 3 5 ~ 厘米高, 取
出移栽到装有肥沃疏松土壤的营养钵 中,钵体 和土 ( 壤需在 1 千克/ 厘米条件灭菌 4 分钟 ) 0 ,栽植小植株
要洗掉根上 的培养基或将根深埋 , 避免杂菌感染造成 小苗死亡 , 为了保湿用烧杯倒扣上 , 两星期左右缓苗 后取 下烧 杯 。花 盆始 终放 在 防虫 的温 室或 网室 中 。
只有合作 , 才会成功。吉林蔬菜杂志, 圆您致富之梦!・】 ・ 9
诛蔬 菜
较适宜。
致富经典
3 防止杂菌污染措施 :茎尖培养和培养基单节扦 . 4 插繁殖都是在无菌条件下进行 的, 这是生产脱毒薯的
关键 , 不 Байду номын сангаас 心就使 培 养 材 料遭 到 杂 菌污 染 , 成 工 稍 造 作的 失败, 损失很大。因 必须严格执行无菌操怍技 此, 术。 3 . 防止 培养基 灭 菌不彻 底 : 经 常检 查高 压消 毒 .1 4 要 器 的压 力 表 , 放汽 阀 , 全 阀是否 失灵 , 安 不灵 敏 的消 毒
10 0毫 升 的量 筒 ,2 12 5移 液 管 , 、0 10 0 O 、、 、 . 2 5 、0 、 5 l0 0毫升的容量瓶 ,贮藏母液的磨 口玻璃瓶和玻璃 0
棒等到,此外还要准备 2 0 ~ 0瓦电炉和 1 0 020 0 5 0 0 瓦调温 电炉,H试纸等 。 p 25 培 养 容器 : 用 2 米 直径 1 ~0毫 米试 管 比 . 采 0厘 82
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