马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点
试析脱毒马铃薯高产栽培技术要点
试析脱毒马铃薯高产栽培技术要点脱毒马铃薯是指通过特定的处理方法，将马铃薯中的病毒和细菌进行去除，以达到提高产量和品质的目的。
脱毒马铃薯的高产栽培技术要点主要包括以下几个方面：病毒株的选择、脱毒方法的选择、种薯的处理和管理、病害防治等。
一、病毒株的选择脱毒马铃薯的病毒株选择是关键。
一般情况下，选择病毒株的方法有两种：一种是选择自然感病阳性特征弱的病毒株，这样可以减少病毒的传播；另一种是选择单株繁殖或辅助细胞培养的病毒株，通过检测来筛选出无病毒的株系。
二、脱毒方法的选择根据不同的病毒类型，可以选择不同的脱毒方法。
常见的脱毒方法有体细胞培养法、组织培养法、生物切割法和物理处理法等。
体细胞培养法是一种比较常用的脱毒方法，通过将马铃薯组织培养在无菌条件中，可以有效去除病毒。
组织培养法是一种将马铃薯幼苗或茎尖通过离体培养的方式进行病毒去除的方法。
生物切割法是通过利用细菌或真菌等生物杀灭病毒株系。
物理处理法是将种薯进行特定的温度和时间处理，通过高温或低温来去除病毒。
根据具体情况选择适合的脱毒方法进行处理。
三、种薯的处理和管理种薯是脱毒马铃薯高产栽培的基础。
种薯的处理和管理工作是确保高产的重要环节。
首先要从正规渠道购买种薯，避免带有病毒的种薯。
在种薯的繁育和培养过程中，要保证无菌条件，并进行病毒检测和筛选。
种薯在管理方面要注意定期喷洒杀菌剂，预防病毒的传播。
要做好定期施肥、灌溉和病虫害防治工作，保持种薯的良好生长状态。
四、病害防治脱毒马铃薯在生长过程中还是会受到一些病害的影响，因此要采取相应的防治措施。
一方面要做好病害的预防工作，保持田间环境的清洁卫生，避免病毒传播。
另一方面要及时发现和处理病害，采取合适的药物进行防治。
在防治过程中要注意合理使用药物，以避免对环境造成污染。
马铃薯组织培养技术
Zhongfeinongyao
马铃薯组织培养技术
刘志强
一、马铃薯的组织培养
1、种薯的茎尖脱毒 植 物 组 织 培 养 也 叫 PlantTissueCul－ ture，广义指在特定条件下，植物生长过程
灯火焰下 10cm 以内接入到三角瓶内，每 遍，要求认真细心，避免折断薯苗，清洗后 瓶接种 10 段左右，火焰封口后，贴上标签， 的薯苗再置于一定浓度的杀菌剂溶液中浸 标签上要标注接种时间、品种及接种人。重 泡 5min 后，立即移栽。按 6～8cm 的株距移
接种人员先换上拖鞋、剪掉手指甲、用
香皂洗净双手后，进入到缓冲间内。换上拖 鞋及工作服后，进入接种室，用 75%的酒精 对双手、套袖进行喷雾消毒，然后就座于超
移栽前一天揭开封口膜。移栽时，小心
的用手洗去根部附着的培养基，水温在 22℃左右，去掉培养基的苗再用清水洗两
活。因此要采取防治手段，主要有下面几 点：①使用固体培养方法，提升琼脂浓度，
品，每次接种前需将超净工作台用紫外灯 改变了人为的条件，短时间中组培苗适应 组织结构发生变化，生理功能产生异常，主
进行杀菌半小时左右，20min 后工作人员 不能适应。因此，组培苗必须移出培养室， 要体现为分化能力下降，不能独立增殖成
方可进入。
在室温下炼苗 3-5 天。
芽或者生根，移栽到自然界中更是很难成
管斜面上，每个试管内接种一块愈伤组织， 生长出浓密而粗壮的不定根，以提高组培 操作环境方法减少真菌产生。另外植物组
在 25℃左右的培养室进行培养。脱毒培养 苗对外界环境的适应力及驯化移栽的成果 织培养过程中，内源菌污染的处理工作比
基一般为 MS 培养基中加入 0.5mg·L-16- 率，获得更多高质量的商品苗。马铃薯组培 较复杂。该污染指外植体材料内部中微生
马铃薯脱毒技术
二、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的 方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通 过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红， 茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫 网室中培养。 ３.接种液制备及接种 放置防虫室中，一般5－10d可发病。
用微茎尖组织培养法，诱导出苗，联免疫
吸附法或指示植物法鉴定马铃薯病毒，经 鉴定后无主要病毒的试管苗可定为脱毒试 管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液 体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗， 在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原
原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔 离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2
25 ℃ ，3000-4000LX，14-16h/d，每3周继代一次，单 芽茎段约1cm，可插也可平放，原则试管苗用2年-3年。
(3) 驯化移植
3. 脱毒苗切繁
基础苗成活后便可切繁，但切繁量的多 少和质量的高低，除与水与温湿度条件有
关外，正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄
也非常重要。脱毒苗切繁主要是剪取顶部
三、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植 株，而生产上需要数以万计的健康种薯。 同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫 能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以 后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一 环。 繁殖主要: (１) 直接块茎繁殖 (２) 扦插繁殖 (３) 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
3--6月长成2-3cm小芽。
(2) 继代和生根
脱毒苗经ELISA（试剂盒）鉴定 后,采用固、液培养基相结合方法 扩繁。取试管苗单节切段扦插， 每瓶插20个茎段，20d长成5-10cm 高小植株，继续切段繁殖，每月可繁5~8倍。 试管苗多 节接种进行浅层静止液体培养。 培养基: MS+NAA
马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程
目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。
茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。
这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。
目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。
经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。
马铃薯茎尖脱毒技术简介
品基地大气质量标准,灌溉水清洁无污染,符合无公害农产品基地水质标准。
土壤符合无公害农产品基地土壤质量标准。
田间管理的主要技术措施有:一是查田补苗。
当甜玉米长到3~4叶期时,间苗和移苗补缺,移苗时要带土,栽后即浇水,最好在傍晚或阴天进行。
5叶期定苗,每穴留1株,并结合追肥中耕除草。
拔节期至大喇叭口期前培土(耥)。
合理排灌,苗期土壤水分在持水量的50%~60%时,可不灌水。
拔节以后土壤水分应保持在持水量的70%。
甜玉米多具分蘖、分枝特性,为保证果穗产量和等级,应及早除蘖打杈,尽量避免损伤主茎及叶片。
分别在拔节期、抽穗扬花期与灌浆期各进行一次追肥。
二是做好虫害的防治工作。
甜玉米植株比普通玉米甜,极易招致玉米螟、金龟子、蚜虫等害虫,因此,必须抓好苗期害虫和中后期玉米螟的防治。
为了防止食物中毒,在中后期要慎用农药,授粉后要用生物防治虫害,尽量少用化学农药,决不能用残效期长的剧毒高毒农药。
防治地下害虫,每亩用3%米乐尔颗粒剂5千克,混细砂在播种沟撒施;防治玉米螟可在大喇叭口期接种赤眼蜂卵块,用杀螟杆菌、白僵菌粉等灌心叶。
药剂防治在抽雄前、花叶率达10%时为防治适宜期,可用80%敌敌畏乳油2500~3000倍液,每株10~15毫升灌心,防治效果达85%以上,并可兼治玉米蓟马。
用菊酯类农药制成毒土或稀释液灌心,效果也是比较理想的一种方式。
三是及时做好人工辅助授粉与去雄工作。
散粉期人工辅助授粉,可使籽粒饱满,如果在散粉期遇到连续阴雨时就更要加强人工辅助授粉。
为减少养分消耗,在授粉结束后,可把雄穗全部剪去。
除此之外,当甜玉米大部分进入抽穗时期,会出现一株多穗现象,不及时去除会导致果穗不大且发育不良,影响商品价值,及时适当剥去多余的小穗就成为提高产量与果穗商品品质的关键措施。
甜玉米的最佳采收期,当玉米果穗在吐丝后22~25天含糖量最高,皮最薄,最适宜采收。
过早、过晚收获,都会影响甜玉米的品质和口味。
同时,甜玉米加工出售时,宜用水蒸气蒸熟,千万不要水煮,以免甜玉米品质下降。
20.项目七 马铃薯茎尖培养脱毒技术
• 三、脱毒苗的保存方法
• 无毒苗要很好的保存，可以在生产上经济有效地发挥作 用。常用的瓶苗继代保存需要在培养基中加入一些生长 延缓剂。
• 但无病毒植株并没有获得额外的抗病性，它还可能被同 一病毒或不同病毒感染。
• 低温保存是在苗长到2cm左右时，放在4℃冰箱内的暗处 保存，可保存一年。而在液氮低温-196℃中保存，细胞 的代谢完全停顿，可以长期保存。
• 一、马铃薯脱毒苗ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ段组培技术
• 目前多应用茎段组织培养技术来快速繁殖脱毒苗，茎段组 织培养是指带有腋芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行离体 培养。
• （一）茎段培养的培养基
• 在实践中，一般茎段培养用的培养基仍然是MS培养基， 但不像茎尖培养严格，为了降低成本，有时有机成分和微 量元素可酌减，只用大量元素和少数微量元素，并用白糖 代替蔗糖，琼脂改用0.5%等。
• 马铃薯茎尖培养一般常采用半固体（琼脂培养基）培养， 但去掉琼脂的液体培养基培养效果更好。
马铃薯茎尖培养培养基的成分表（mg/l)
成分 硫酸镁 磷酸二氢钾 硝酸钙 硫酸铵 硝酸钾 氯化钾 盐酸吡哆醇 马铃薯
蔗糖 琼脂
含量 125 200 100 100 1000 35
1 10% 90000 0.6%
• 已知感染马铃薯的病毒有18种，类病毒有1种。
• 在我国已发现7种专门寄生于马铃薯的病毒，即马铃薯X病 毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯 S病毒(PVS)、马铃薯 M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)、马铃薯奥古巴花叶病毒 （又叫黄斑花叶病毒，简称PAMV）和马铃薯卷叶病毒 (PLRV)。
• 马铃薯由于具有高产、生育期短、适应性广、抗灾害能力 强、营养丰富、用途广泛等优势，在世界范围内广泛种植， 已成为世界第四大粮食作物。
马铃薯茎尖脱毒组培的理论依据及技术要点
马铃薯茎尖脱毒组培的理论依据及技术要点脱毒马铃薯具有很大的增产潜力，应使其尽快应用于生产。
马铃薯是以块茎作为繁殖器官举行无性繁殖，在育种上是采纳有性杂交、无性繁殖的程序。
首先按照育种任务挑选性状符合要求的亲本，举行杂交授粉。
采得实生种子后，播种育苗，从杂种实生苗中挑选符合育种任务的、综合性状优良的单株举行单独心得，再用其块茎举行无性繁殖。
在无性系里经比较、鉴定并继续挑选，直至挑选出适合在生产中推广的优良品种。
因为马铃薯经杂交后均采纳块茎举行无性繁殖，不再经过有性世代，所以目前生产中推广的优良品种均为杂种一代。
因为马铃薯在其无性繁殖过程中易受病毒感染，病毒随着无性世代在块茎中堆积，导致马铃薯病毒性退化，失去原有种薯的技术讨论，此项技术已在国内举行了推广。
脱毒种薯在国内生产上已大面积应用。
但在无性繁种过程中，还会受到病毒的再侵染，因此要在繁种过程中实行措施举行预防。
下面将马铃薯茎尖脱毒组培技术及马铃薯良种繁育技术作一介绍。
寄生在马铃薯块茎中的病毒，随着块茎芽眼萌发长成植株的生长过程，也在马铃薯植株体内举行病毒粒子的复制繁殖，但病毒在马铃薯植株内的分布是不匀称的。
据讨论，在代谢活跃的茎尖分生组织中没有病毒。
可能是因为茎尖分生组织中的细胞分裂速度很快。
超过病毒粒子的复制速度，使病毒粒子在复制过程中得不到养分而受到抑制。
也可能是因为分生组织中某些高浓度的激素抑制了病毒。
以上缘由的机理尚未搞清，但利用对茎尖(带有l～2个叶原基，小于0.2毫米)组培苗举行病毒检测末发觉带有病毒，而大于0.2毫米的茎尖却常能检测出病毒。
这点便成为茎尖脱毒组培繁殖无病毒株的重要依据。
马铃薯脱毒技术就是通过茎尖部分没有病毒的特性、利用延续切茎尖，在无菌环境条件下，通过人工配置的培养基，哺育出无毒试管苗，然后通过试管苗在防虫温室或网室内繁殖微型薯原原种。
在人工隔离或自然隔离条件下，通过原原种繁殖一级原种和二级原种。
二级原种在自然隔离条件(高纬度或高海拔冷凉地区、风速大的海岛等地)繁殖一级良种供生产中使用。
马铃薯微茎尖培养脱毒快繁技术
５１ 瓶 苗污 染 与 环 境 污 染 。① 培 养 基 及 使 用 器械 ．
灭 菌不 彻底 。② 外植 体 消毒不 彻底 或封 口不严 。③
操 作人 员不遵 操 作规程 。④ 无 菌操 作 和培 养环 境 不 清 洁 。⑤ 超净 工 作 台过滤 装置 失 效或 培养 容器 破损
以及 盖 子 口径 过大 。 ５２ 污染 的预 防措施 ．
关 键词 ：马铃 薯 ：组 织培养 ：脱毒 ；快繁
１ 脱毒前 的 准备
１１ 工 具 准 备 。７ ％ ～７ ％酒 精 、２ ． ０ ５ ％次 氯 酸 钠 溶 液 或 ０１ ～１ ． ％ ％升 汞 溶 液 、无 菌 水 、 手 表 、玻 璃
棒 、废 液缸 、解刨 刀 、镊 子 。
１ 培养 基准 备 。培 养基 ＭＳ＋ Ｎ ００ ／ ． ２ ＡＡ ．ｌ Ｌ＋ ｍｇ ６Ｂ Ｏ１ － Ａ ． ｍ Ｌ＋蔗 糖 ３ Ｌ＋琼 脂 ５ ／ （Ｈ 值 Ｏ ．５ｇ ｐ Ｌ
消毒 的无 菌纸 上吸干 水分 。
３ 茎 尖剥 离及诱 导培 养
在超 净工 作 台上 ，在 带 有适 当 光源 的解 剖镜 （ ８
～
５２１ 灭菌 。培养 基 以及 接种 过程 中使 用 的所 有 器 ．． 械 必须 在高压 灭菌 锅 里进 行灭 菌 。需注 意 ： 火菌 要 彻 底 。锅 内需 灭 菌 的培 养 基不 能堆 放 过满 。升 温和
马 铃 暮 徵 茎 尖 培 养 脱 毒 快 繁 技 术
摘 要 ：马铃 薯 生 产 中 多采 用 块 茎进 行 无性 繁
苗 ，用 清 水 洗 去 附着 于根 部 的 培养 基 ，动 作 要轻 ， 应避 免造 成伤 根 ，然后 栽入 准备 好 的基 质 中 。尽 量 不要 弄伤 植株 ，然 后把 苗周 围的基质 压 实浇透 水 。 ４３ 移栽 后 的管理 －
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实践技能练习
马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点
1.马铃薯茎尖组织培养脱毒技术
1.1脱毒方法
1.1.1选择优质健康的材料所选的植株必须是表现典型品种特性的植株,符合脱毒品种的特征包括株型、叶形、花色等植物学性状及成熟期等农艺性状;植株生长健壮,无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状;单株产量和大薯率高;适时早收,选择符合品种特性,无病斑、虫蛀和机械创伤的大薯块。
1.1.2选择培养基MS培养基适用于大多数双子叶植物,B5和N6适合大多数单子叶植物,马铃薯茎尖培养基以MS+GA3 0.05mg/l +6-BA0.5～0.1mg/l +NAA0.1～0.2mg/l+2%蔗糖
+0.9%琼脂配方效果比较好。
1.1.3剥离和接种薯块休眠后进行室内催芽,待芽长至1～2cm还未展叶时,将芽剪下,然后放入烧杯,用纱布封口,在自来水下冲洗半个小时,取出放到操作台上进行消毒。
消毒方法是将芽在75%的酒精中过一遍(约20秒),然后用次氯酸钠溶液稀释为2%～3%,浸泡2分钟,然后用无菌水清洗3～5次。
将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上,每次消毒的芽不要太多,以防放置时间过长,茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。
在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟,然后关闭紫外线灯,打开风机。
实验前换专用服装,双手用75%酒精擦拭消毒,取消毒处理过的芽,以无菌镊子固定,在30～40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。
用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织,暴露出顶端圆滑的生长点,用解剖针切取0.1～
0.3mm,带有1～2个叶原基。
茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织,解剖镜光源要用冷光源照明。
切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上,切面接触琼脂,置于培养室进行离体培养。
1.1.4培养条件将已接种外植体的试管置温度23℃～25℃,光照3000lx、在光周期13～16小时/天的培养室中培养2～4周即可成苗。
2.茎尖培养的关键技术环节
2.1剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小,产生幼苗的无毒率越高,但成活率越低。
不同病毒种类取出的难易程度不同。
因此需针对不同的病毒种类,培养适当大小的茎尖。
如剥离培养一个叶原基的生长点产生的马铃薯植株,可去除全部马铃薯卷叶病毒,去除80%Y病毒和A病毒,去除0.2%X病毒。
马铃薯病毒去除难易顺序是:马铃薯纺锤块茎病毒>马铃薯S病毒>马铃薯X病毒>马铃薯M病毒>奥古巴病毒>马铃薯Y病毒>马铃薯A病毒>马铃薯卷叶病毒。
对于同一种病毒,剥离茎尖越小,脱毒率越高。
2.2茎尖接种后的生长及调节方法茎尖接种后的生长情况主要有4种:生长正常,生长点伸长,基本无愈伤组织形成,1～3周形成小芽,4～6周长成小植株;生长停止,接种物不扩大,渐变褐色,至枯死,此情况多因剥离操作过程中茎尖受伤;生长缓慢,接种物扩大缓慢,渐变绿,成一绿点,说明培养条件不适,要迅速转入高激素浓度的培养基,并适当提高温度;生长过速,生长点不伸长或略伸长,大量疏散愈伤组织形成,必须转入无激素培养基或采取降低培养温度措施。
玫瑰组织培养与快速繁殖
以MS或1／2MS为基本培养基，附加不同浓度的6-BA、IAA、IBA、NAA等，蔗糖3％(为了降低成本，蔗糖均用市售白砂糖代替)，琼脂0．35％，pH5．8，培养温度为25℃，光照时间每天12小时，光照强度约1500 lx。
将启动培养基上腋芽长出的无根苗剪成单芽茎段，转入不定芽诱导培养基上，诱导不定芽产生；不定芽继代周期为5周，增殖培养时将不定芽块切割成小芽块转至增殖培养基中，每100毫升培养瓶中接种3个芽块；生根前将较弱的无效苗转入壮苗培养基中促使苗健壮；生根培养时将高约3厘米左右的芽剪下插入生根培养基，生根苗移栽采用“二步法”。