马铃薯茎尖组织培养
马铃薯茎尖培养部分因子对黄化苗发生的影响
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｔ ｅ ｅ ｅ ｔｏ Ｈ ，ｓ ｇ ｒａ ｄ ａ ａ ｎ ｏ ｃ ｒｅ ｃ ｆｅ ｉｌｔ ｄ ｓ ｅ ｌｎ ｓｉ ｈ ｏ ｔ ｕ ｔ ｒ ｆｐ ｔ ｔ ｓｒ ｃ ： ｈ ｆｃ ｆｐ ｕ ａ ｎ ｇ ｒ ｏ ｃ ｕ ｒ ｎ ｅ ｏ ｔｏａ ｅ ｅ ｄ ｉ ｇ ｎ ｓ ｏ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｏ ｏａ ｏｗａ ｔ ｉｄｔ ｍｐ ｏ ｅｔ ｅ ｓ ｅ — ｐ ｕ ｓｓ ｕｄ ｅ ｏｉ ｒ ｖ ｈ ｅ ｄ
究， 以期 提高 马铃 薯 茎 尖 剥离 脱 毒 培养 过 程 中的成
收 稿 日期 ：００— ５—１ ２１ ０ ３
１ ２ １ 薯 块的 筛选 ．． １ ２ ２ 外植 体 的 筛选 ．． １ ２ ３ 消毒 ．．
在 田间筛 选无病 虫 害感染 、 无 薯 块在 室 内催 芽 ， 待芽 长 至
损伤 、 健壮 的薯块 用于室 内 自然催芽 。
苗率 。
了茎尖 诱导 培养 过 程 中抑 制 黄化 苗 发 生 的研 究 ， 报
道 了培养基 中部 分无 机盐浓 度 的改 变会 直接影 响黄
１ 材料 与方 法
１ １ 试 验材 料 ．
化苗 的形 成 ， 并证 明 培养 基 中 氮 、 、 的浓 度分 别 镁 铁
在 １０ 、０ ６ ０ ４ ０和 ８ ． ／ ３ ４ｍｇ Ｌ时 ， 黄化 苗发生 率能达 到 最低 … ， 但其 他 因子 ， ｐ 如 Ｈ值 、 、 脂 等 的作用 如 糖 琼
马 铃 薯 茎 尖 培 养 部 分 因子 对 黄 化 苗 发 生 的 影 响
黄 萍 马朝宏 颜 ， ，
（． １ 贵州省生物技术研究所 ， 贵州 贵阳
马铃薯脱毒种薯生产技术
马铃薯脱毒种薯生产技术0引言马铃薯在营养繁殖时易受病毒浸染，并且在植株内增殖、转运和积累于所结块茎中，随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可减产50％以上。
研究发现，大约有30多种病毒感染马铃薯，并引起品种退化。
通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLKV、PVY、PV A、PAF、PVG、PVM、PSV等病毒，因此采用组培技术，通过良种繁殖体系，能够生产出优质脱毒种薯，保证马铃薯优质、高产、稳产。
1.脱毒种薯生产程序采取微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用酶联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种(或称脱毒小薯)。
用原原种在一定隔离条件下生产原种1代，以后逐级称为原种2代良种1代、良种2代。
2.茎尖培养脱毒2.1.取材和培养在选定的马铃薯品种田中，选取株型标准且长势较好的植株，直接取其茎尖或取其成熟后的薯块在室内发芽。
芽经热处理(38℃)2周，然后取顶芽或侧芽的1cm的茎尖，在自来水下冲洗1h左右，无菌条件下先用95％酒精迅速浸润组织，再用5％漂白粉溶液浸泡5～10min，然后用无菌水冲洗2～3次。
为了减少污染机会，可将块茎彻底消毒后，放在无菌容器培养，然后再去茎尖。
分离茎尖时，把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留2个叶原基(约0.1mm)，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mg IAA、0.1mg GA3、PH5.8。
也可White培养基，附加0.1～1mg／L的NAA和0.05 mg ／L的BA(培养基在培养器皿底部的厚度约1cm左右)。
培养器皿必须进行高温灭菌后在无菌状态下将适量的培养基加入以供接种使用，接种必须在无菌培养室中无菌状态下进行。
培养条件：21-25℃、3000Lx、16h／d。
马铃薯茎尖培养部分无机盐浓度对黄化苗发生的影响
关键词：马铃薯 ；茎尖培养 ；黄化苗
Ｉ ｆ ｅ ｃ ｆＩｏｒ ａ ｉ ｌＣｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｏ ｔ ｌｔ ｎ ｌ ｎ ｅ ｏ ｎｕ ｇ ｎ ｃ Ｓａｔ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｎ Ｅ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｏ ｉ ｔ ｔ ｏ ｔ ｐ Ｃｕｔ ｒ ｎ Ｐｏ ａ ｏ Ｓｈ ｏ ｌ ｅ Ｔｉ ｕ
马铃薯茎尖培养部分无机盐浓度对黄化苗发生的影 响——黄
萍 ，马朝宏 ，颜
谦
・０ ２ ９・
中 图分 类 号 ：￥ ３ ５２
文 献 标 识码 ：Ａ
文 章 编 号 ： １７ — ６ ５ ２ １）４ ０ ０ — ６ ２ ３ ３ （０ ０ ０ — ２９ ０ ４
马铃 薯 茎 尖 培 养 部 分 无机 盐 浓 度 对 黄 化 苗 发 生 的影 响
２ Ｄ ｐ ｒ ｎ ｆ ｅ ｅ ｒｈａ ｄＤ ｖ ｌｐ ｎ， ｉ ｏ ａ ｄ ｍｙｏ ｒ ｕｔｒ ｃｅ ｃ ｓ Ｇｕ ａ ｇ Ｇｕｚ ｏ ５ ０ ６ Ｃｈｎ ． ｅ ａｔ ｔ ｓ ａｃ ｎ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔＧｕｚ ｕＡｃ ｅ ｆ ｉ ｌ ｅＳ ｉｎ ｅ ， ｉ ｎ ， ｉ ｕ５ ０ ０ ， ｉａ） ｍｅ ｏ Ｒ ｈ Ａｇ ｃ ｕ ｙ ｈ
黄 萍 ， 贵阳 ． ５ ００ ；２ 贵州省农业科学院科技开发处，贵州 贵 阳 ５０ ６ ． ５００ ５ ０ ６）
摘
要 ：为解决马铃薯茎尖脱毒培养过程 中黄化 苗形成 的问题 ，以马铃薯 品种 Ｂ １ ３ 一 ０ — ｌ ９为试验材料 ，研 究
了茎尖诱导培养基 中 Ｎ Ｏ ，Ｍ Ｓ ４７ ： Ｈ Ｎ ， ｇ ０ ＂ＨＯ，Ｃ Ｃ２２ ａ Ｉ Ｈ０和铁 盐浓度改变对茎尖培 养过程 中黄化苗发生及成苗率的 ＂
影响 。结 果 证 明 ：培 养 基 中 氮 、镁 、铁 浓 度 的 改 变对 黄 化 苗 的预 防 有 显 著 作 用 ， ３ Ｎ ４ Ｏ ，ＭｇＯ ・ＨＯ 和铁 盐 － ＂ ＨＮ ３ Ｓ ７ ２ 的浓 度 分 别 在 １ ０ ｇＬ 、４ ０ｍｇＬ 、８ ． ｍｇＬ ，黄 化 苗 发 生率 最 低 ；但 以上 各 因 素 处 理 对 茎 尖诱 导 分 化 ０ｍ ・～ ０ ・～ ３ ・一时 ６ ４ 成 苗 的 影 响 差异 并 不 显 著 。
组织培养技术及其在脱毒马铃薯种薯生产中的应用
Ｋｅ ｒ ｓ ｐ ｔｏｓ ｓ ｍ ｔ ｕｔ ｉｇ ｖ ｓｒｅｓｅ ｉ ； ｒｌｅａ ｏ ｙ ｗｏ ｄ ：ｏ ｔ ； ｔ ｉ ｃ ｕ ｎ ； ｉ － ｅ ｅｄ ｎ ｐｏｉｒｔｎ ａ ｅ ｅ ｐｌ ｒ ｕ ｒ ｆ ｌ ｇ ｆ ｉ
１ 组培技术与马铃薯脱毒机理
植 物组织 培养 （ ｉ ｕ ｕｔｒ ｏ ｌｎ） Ｔｓ ｅｃｌ ｅ ｆ ａｔ 技术 是 利 ｓ ｕ ｐ 用 细胞 的全 能 性 ， 用 无 菌 操 作 培 养 植 物 的 离 体 器 应
关 键词 ： 马铃薯； 茎尖培养； 脱毒苗； 繁育
中图分类 号 ：５２０５３ 文献标识 码 ： ￥３．３． Ａ
文章编 号 ：０ ８４ １ （００ ０ －１８０ １０ －９６ ２ １ ）１ １－２ ０
Ｔ ｅｔｓｅｃｌ ｒ ｃｎ ｌｇ ｎ ｓａ ｐｉ ｔ ｎｉ ｅｐｏｕｔ ｎｏ ｅＶｒｓ ｒｅｐ ｔｔ ｅｄ ｈ ｓｕ ｕｔ ｅｔ ｈ ｏｏｙａ ｄｉ ｐ ｌａ ｏ ｔ ｒｄ ｃ ｏ ｆｔ ｉ － ｅ ｏａｏｓｅｓ ｉ ｕ ｅ ｔ ｃｉ ｎ ｈ ｉ ｈ ｕｆ
ｖｒ ｓ ｆ ｅ ｓ ｅ ｌ ｇ ａ ｅ ｔ ｅ ｓｅ ｔ ｕｔ ｒ ｇ ｖｒ ｓｃ ｅ ｋｎ ，ｎ ｅ ｐ ｏ ｉ ｒ ｔ ｇ ｏ ｅ ｖｒ ｓｆｅ ｅ ｄｉ ｇ ｉ － ｅ ｅ ｄｉ ｌ ｔｍ ｉ ｃ ｌ ｉ ， ｉ ｈ ｃ ｉ ｇ ａ ｄ ｔ ｒｌ ｅ ａｉ ｆ ｉｕ —ｒｅ ｓ ｅ ｎ ． ｕ ｒ ｎ ｈ ｐ ｕｎ ｕ ｈ ｆ ｎ ｈ ｔ ｌ
第２ ０卷
２１ ０ ０年
第 １期
３月
信阳农业高等专科学校学报
Ｊｕ ａ ｆＸ ｎ ａ ｇＡｇｉｕｔｒｌ ｌ ｇ ｏ ｒ ｌ ｏ ｉｙ ｎ ｒ ｌ ａ ｌ ｅ ｎ ｃ ｕ Ｃｏ ｅ
Ｖｏ ． ０ Ｎｏ． １２ １ Ｍａ ． ０１ ｒ２ ０
马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程
目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。
茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。
这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。
目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。
经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。
马铃薯茎尖脱毒培养关键因子探析
Ｔｈｅ Ｋｅ ｙ Ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｏ ｆ Ｐｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｓ ｈｏ ｏ ｔ －ｔ ｉ ｐ Ｃห้องสมุดไป่ตู้ ｌ ｔ ｕｒ ｅ
（ Ｐ ｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ Ｃ ｏ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ａ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ ０ １ ２ ０ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
题， 提 出 了结 合 化 学 处理 提 高脱 毒 率 的 有 效措 施 ， 指 出 茎尖 脱 毒 培 养 中 尚存 在 的 一 些 问题 以及 相 应 对 策 。 关键 词 ： 马铃薯 ； 茎 尖 脱毒 ； 组 织培 养
中 图分 类 号 ： Ｓ ５ ３ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｊ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ４ ． ０ １ ９ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ｛ ２ ０ １ ３ ） ４－ ０ ０ ０ ３ ６ — ０ ２
操 作 流 程 如下 ：
国第 一 ２ ０ １ ２年 种 植 面 积 有 所 下 降 ． 但 仍 然 保 持 在 ６ ６ ． ７ ９万
ｈ ｍ０ ． 总产可达 １ ０ ０ ０万 ｔ 左右
１ ． ２ ． １ 选材
于 马 铃薯 生 长 季 在 田间选 取 生 长 健 壮 、品 种 特性
马铃 薯 产 业 对 我 国农 村经 济 发 展 、国家 粮 食 安 全 起 到 了 非 常 重 要 的作 用 由于 马 铃薯 栽 培 属 于 无 性 繁殖 ， 导致 马 铃 薯 如 果 自身 携 带有 病 毒 的话 ． 多代 无 性 繁 殖可 以导 致病 毒 的积 累 ． 造 成 产 量 以 及 品 质 的逐 年 下 降 ， 也 就 是 品种 退 化 。 目前 ． 病 毒 病 是 制 约 马 铃 薯 产 业发 展 的 主 要 因素 。马 铃 薯 茎尖 脱 毒 培 养 手 段 是 解 决 马 铃 薯 病 毒病 最 常 使 用 的方 法 之 一 。通 过分 离 茎 尖 分 生 组 织
榆林市马铃薯茎尖脱毒培养探究
着 的培养 基 ， 短 较长 的根 系 ， 剪 去掉 太 多 的 叶 片 ，
然后用 多菌 灵溶 液 蘸 根 ， 刚 移栽 的试 管 苗 最 主 刚 要 的就是保 湿 、 光 。一般 下午 ４ 遮 —５点移 栽 ，— ７ １ ０ｄ可 以缓 苗 ， 周 后可 以去 掉 遮 阳 网及塑 料 膜 ， ２
植物 茎尖脱 毒培 养 的成 败不 仅 与培养 基 的组
分有 关 ， 且与 块茎 的选择 、 化 、 芽处 理 、 尖 而 钝 催 茎 剥离、 接种 也有 直接 关系 。 ３ １ 培 养基 的配置 ． 培养 基 的成份 有 ６大类 ， 包括无 机 养分 （ 大量
２ 可 行 性
首先 ， 榆林位 于 陕西省 最 北部 ， 地处 毛 乌素 沙
薯病毒 病最有效 的方法 就是培育 和推广脱 毒种薯 ，
就是通 过对马铃 薯块 茎进 行 病毒 钝 化 、 芽处 理 ， 催 通过茎 尖 剥 离 、 生 组 织 培养 而脱 去 Ｐ Ｓ Ｐ 分 Ｖ 、 ＶＹ、
Ｐ 、 Ｌ Ｖ 和 Ｐ Ｔ 等 病 毒 、 病 毒后 培 育 试 管 ＶＳ Ｐ Ｒ ＳＶ 类
附加 Ｃ Ｐ ０ １ ／） 明显提 高茎 尖脱 毒 Ｐ Ｕ（ ． —１ｍｇ １可
（ 下转 第 １ ０页 ） ０
收 稿 日期 ： ０ １ １ １ｌ ２ １ － ４
作 者 简 介 ： 成 文 （ ９ ５ ） 男 ， 西 横 山人 ， 学 本 科 学历 ， 师 。 汪 １ ７ 一， 陕 大 讲
陕
西
农
业
科
学
榆 林 市 马铃 薯 茎 尖 脱 毒 培 养 探 究
汪 成 文
（ 林农 业学校 ， 西 榆 林 榆 陕
７ ９０ １ ０ ０）
马铃薯微茎尖培养脱毒快繁技术
５１ 瓶 苗污 染 与 环 境 污 染 。① 培 养 基 及 使 用 器械 ．
灭 菌不 彻底 。② 外植 体 消毒不 彻底 或封 口不严 。③
操 作人 员不遵 操 作规程 。④ 无 菌操 作 和培 养环 境 不 清 洁 。⑤ 超净 工 作 台过滤 装置 失 效或 培养 容器 破损
以及 盖 子 口径 过大 。 ５２ 污染 的预 防措施 ．
关 键词 ：马铃 薯 ：组 织培养 ：脱毒 ；快繁
１ 脱毒前 的 准备
１１ 工 具 准 备 。７ ％ ～７ ％酒 精 、２ ． ０ ５ ％次 氯 酸 钠 溶 液 或 ０１ ～１ ． ％ ％升 汞 溶 液 、无 菌 水 、 手 表 、玻 璃
棒 、废 液缸 、解刨 刀 、镊 子 。
１ 培养 基准 备 。培 养基 ＭＳ＋ Ｎ ００ ／ ． ２ ＡＡ ．ｌ Ｌ＋ ｍｇ ６Ｂ Ｏ１ － Ａ ． ｍ Ｌ＋蔗 糖 ３ Ｌ＋琼 脂 ５ ／ （Ｈ 值 Ｏ ．５ｇ ｐ Ｌ
消毒 的无 菌纸 上吸干 水分 。
３ 茎 尖剥 离及诱 导培 养
在超 净工 作 台上 ，在 带 有适 当 光源 的解 剖镜 （ ８
～
５２１ 灭菌 。培养 基 以及 接种 过程 中使 用 的所 有 器 ．． 械 必须 在高压 灭菌 锅 里进 行灭 菌 。需注 意 ： 火菌 要 彻 底 。锅 内需 灭 菌 的培 养 基不 能堆 放 过满 。升 温和
马 铃 暮 徵 茎 尖 培 养 脱 毒 快 繁 技 术
摘 要 ：马铃 薯 生 产 中 多采 用 块 茎进 行 无性 繁
苗 ，用 清 水 洗 去 附着 于根 部 的 培养 基 ，动 作 要轻 ， 应避 免造 成伤 根 ，然后 栽入 准备 好 的基 质 中 。尽 量 不要 弄伤 植株 ，然 后把 苗周 围的基质 压 实浇透 水 。 ４３ 移栽 后 的管理 －
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马铃薯茎尖组织培养
催芽：
市售马铃薯，放入恒温培养箱于24℃下进行为期一周的催芽培养
芽尖的切取及接种：
从马铃薯上取生长健壮的芽，自来水冲洗5 min，置于5％的次氯酸钠溶液浸泡15 min，再于75％的酒精中浸泡20 s，然后用无菌水冲洗3-5次，迅速在40倍体视显微镜下切取合适长度的茎尖，接种于诱导分化培养基上。
(在现有培养条件下，茎尖切取控制长度在1.0-1.5mm，带有3～4个叶原基可以取得成活率与不带毒的相对平衡。
) 将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上，加几滴蒸馏水保持吸水纸湿润。
每次消毒的芽不要太多，以防放置时间过长，茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。
在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟，然后关闭紫外线灯，打开风机。
实验前换专用服装，双手用75％酒精擦拭消毒，取消毒处理过的芽，以无菌镊子固定，在30一40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。
用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织，暴露出顶端圆滑的生长点，用解剖针切取0．1～o．3mm，带有1～2个叶原基。
茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织，解剖镜光源要用冷光源照明。
切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上，切面接触琼脂，置于培养室进行离体培养。
外植体的培养：
将接种好的培养皿用封口膜封好，置于恒温光照箱中进行培养，培养条件为28℃，空气相对湿度70%，每天光照16h，光照强度>2000 Ix。
形成团状的愈伤组织后，继续培养至根、芽分化后，及时移植于三角瓶中培养。
基础培养基：
采用MS培养基。
植物激素使用的浓度很低．因此，预先配置成500 mg／L浓度的溶液，由于植物激素太多不溶于水，另外有些激素在水中不稳定，因此有着较特殊的配置方法，具体如下：IAA从和NAA先用少量95％乙醇溶解，再用蒸馏水定容至规定体积。
2，4-D先用2 mol ／L的NaOH溶液充分溶解，然后用蒸馏水缓慢定容。
KT及6-BA先用l mol／L的HCl溶解后再用蒸馏水定容。
GA3的水溶液稳定性较差，一般用95％乙醇溶解后备用。
诱导培养基组分：MS+ KT0.5mg／L+ NAA 0.1mg/L + GA3 0.2mg/L(多组比较选择得到)
参考文献：
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