RNA干扰抑制MyD88表达对小鼠骨髓树突状细胞生物学活性的影响(一)
DEN2感染对MyD88沉默的小鼠树突状细胞相关膜分子表达及炎症因子分泌的影响
型笠
Ｎ ２ 壁
ｙ Ｄ ８ 默的， Ｊ 、 虽树突状细胞相关膜分子表达及炎症因子分泌的影响 第５ 期
４５ １・
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ － ４ ８ ４ Ｘ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ０ １
・
基础 免 疫 学 ・
Ｂ ＭＤ Ｃ 。与对照组 比较 ， Ｄ Ｅ Ｎ ２感染组 Ｄ Ｃ膜表 面分子 Ｃ Ｄ ８ ６表达 降低 ， ＭＨ Ｃ Ｉ １ 增高， 感染 Ｒ Ｎ Ａ ｉ 组的 ＭＨ ＣⅡ、 Ｃ Ｄ ８ ６表达无 明显 变化 ； 与对 照组 比较 ， Ｄ Ｅ Ｎ ２感 染组分泌 Ｔ Ｎ Ｆ — ｏ ｔ 、 Ｉ Ｆ Ｎ 及Ｉ Ｐ ． １ ０的水平均增高 ， 而感染 Ｒ Ｎ Ａ ｉ 组分泌 的 Ｉ Ｐ ． １ ０ 、 Ｉ Ｆ Ｎ ． ｏ ｔ 、 Ｔ Ｎ Ｆ 一 则无 明显变化 。结论 ： Ｄ Ｅ Ｎ ２可吸附 Ｂ ＭＤ Ｃ， 并促使其成熟及细胞 因子分 泌 ； ｓ ｉ Ｒ Ｎ Ａ可沉默 Ｍｙ Ｄ ８ ８ ， 有效阻断 Ｄ Ｅ Ｎ ２感染 Ｂ Ｍ Ｄ Ｃ的胞 内信 号传导及其所引起的成熟及炎症 因子分泌 。
【国家自然科学基金】_淋巴细胞培养试验,混合_期刊发文热词逐年推荐_20140730
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 8
2011年 科研热词 推荐指数 树突状细胞 3 免疫调节 2 间质干细胞 1 间充质干细胞 1 诱导 1 细胞因子 1 白血病,髓样,慢性 1 白细胞介素18 1 树突细胞 1 哮喘/病理学 1 哮喘/治疗 1 前列腺癌 1 免疫原性 1 人脐带 1 丁酸钠 1 th1 1 cpg寡聚脱氧核苷酸 1 cd4 cd25 foxp3 调节性t细胞 1
推荐指数 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
科研热词 推荐指数 骨髓 1 霍奇金病 1 间质干细胞 1 细胞培养技术 1 细胞因子类 1 淋巴细胞培养试验,混合 1 淋巴瘤,非霍奇金 1 流式细胞术 1 树突细胞 1 免疫耐受 1
科研热词 间质干细胞 补体调节蛋白 细胞因子类 树突状细胞 多发性骨髓瘤 同种移植 免疫调节 crry
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
科研热词 细胞因子 树突细胞 树突状细胞 重组融合蛋白质类 补体系统蛋白质类 脂多糖 移植,同种 牙龈卟啉单胞菌 混合 淋巴细胞培养试验,混合 淋巴细胞培养试验 流产习惯性 抗原,cd28 创伤 免疫耐受 免疫球蛋白g 免疫抑制法 丁酸钠 t细胞应答 t淋巴细胞调节性 t淋巴细胞 foxp3 cd40配体 cd4+cd25+调节性t细胞
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
MyD88抑制乙型肝炎病毒复制依赖活化NF-κB信号通路
万方数据 万方数据 万方数据丝篁塑量壁鎏！Ｑ堕堡ｉ旦箜！鲞箜！塑』坐虫坐垡丛堡！虫望塑ｉ！些！鱼塑：也堡！塑！！ｙ堂！：盟！：；到显著抑制，而共转染ＲｃＣＭＶ．１ｎＢａ．ＳＲ细胞内ＨＢＶ复制中间体ＤＮＡ的水平得到上调（图２Ａ），检测细胞上清液中的ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ也得到了相同的结果（结果未在本文显示）。
免疫荧光结果也显示，单独表达ＭｙＤ８８可明显抑制ＨＢＶｃｏｒｅ蛋白的合成；而ｋＢａ—ＳＲ与ＭｙＤ８８共表达后ｃｏｒｅ蛋白在细胞中的表达量可显著增加（图２Ｂ）。
以上结果说明，ＮＦ．ｓ：Ｂ活化被阻断后ＭｙＤ８８抑制ＨＢＶ复制的效应也得到抑制，进一步提示ＭｙＤ８８抑制ＨＢＶ复制中的作用依赖于ＮＦ—ｘＢ信号通路的活化。
Ａ畿∞￡确Ｓ《蠢６。
螂㈨ｊ．芒羞４．００Ｅ＋０３￡８蚕２．００Ｅ＋０３ｐｅｍｖ３Ｊ（ｏａｔｏＭ归∞（ｏ．４ｔ，Ｏ脑轴Ｒ蝴髑堆哼ｗ蝌稍《卜Ｄ螃Ｅ乒毛吐（０．憾ｌｑＯ＋Ｂｏ－０２图２阻断ＮＦ－ｒ。
Ｂ信号通路对ｎｙＩ粥８抑制ＨＢＶ效应的影响ｒｉｇ２．ＢｌｏｃｋａｇｅｏｆＮＦ－ｒ。
ＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｂｏｌｉｓｈｅｓＭｙＤ６８ｍｅｄｉａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＢＶＡ：ＢｌｏｃｋａｇｅｏｆＮＦ—ＫＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｂｏｌｉｓｈｅｓＭｙＤ８８ｍｅｄｉａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐａｒｔｉｃｌｅ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＨＢＶｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅＤＮＡ．Ｂ：ＢｌｏｃｋａｇｅｏｆＮＦ－·ｃＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｂｏｌｉｓｈｅｓＭｙＤ８８ｍｅｄｉａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎ．３．活化ＮＦ．ｓ：Ｂ信号通路可抑制ＨＢＶ的复制和表达为进一步探讨单独活化ＮＦ．ｔｃＢ信号通路对ＨＢＶ复制的影响，将ＨＢＶ的复制型质粒ｐＨＢＶ３．８与空载或不同剂量的ＮＦ．ｆｃＢ激活剂ｐＲｃ—Ｇ．ａｃｔｉｎ．３ＨＡ．ＩⅪ血／ＩＫ邸共转染Ｈｕｈ７细胞，检测上清液中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的表达水平以及细胞内ＨＢＶ复制中问体ＤＮＡ的水平。
慢病毒载体介导的RNA干扰抑制PC12细胞MyD88基因的表达
解剖科学进展 Progress of Anatomical Sciences 2010 Mar,16(2):131~134慢病毒载体介导的RNA干扰抑制PC12细胞MyD88基因的表达*崔万鹏，刘晓湘，方秀斌（中国医科大学 基础医学院神经生物学教研室， 辽宁 沈阳 110001） 【摘要】 目的 研究慢病毒介导的RNA干扰对PC12细胞的转染效率和对MyD88基因的抑制效率。
方法 构建针对大鼠MyD88基因3个靶点的ShRNA慢病毒载体，PC12细胞按照不同的转染条件分为 正常组（DMEM完全培养液）、DMEM加入polybrene组、EN.iS（Enhance infection solution）组、EN.iS加入polybrene组。
荧光显微镜下观察不同组的转染效率，采用Real-time PCR和Western blot检测不同的靶点对MyD88的不同沉默效率。
结果 病8毒滴度为1 × 10 TU/ml，MOI为100时，PC12细胞在EN.iS组的转染效率最高，转染试剂polybrene对转染效率无明显影响，沉默效率最高的靶点是5'-CATAC GCAACCAGCAGAAA-3'。
结论 慢病毒介导的RNA干扰是一种高效的基因沉默手段，可以对PC12细胞中MyD88的功能进行长期的研究。
【关键词】 PC12细胞；慢病毒；RNA干扰；髓样分化因子初次应答基因88 【中图分类号】 Q189 【文献标识码】 A 【文章编号】 1006-2947（2010）02-0131-04Lentivirus mediated RNA interference knockdowns the expression of MyD88 in PC12 cells【Abstract】 Objective To investigate the transfection efficiency of lentivirus and silencing efficiency of MyD88 by lentivirus mediated RNA interference in PC12 cell line. Methods Recombinant lentivirus vectors with shRNA targeting rat myeloid differentiation primary response gene 88(MyD88) were constructed and transfected into pheochromocytoma cells (PC12) in vitro, the tranfection efficiency was observed under fluorescence microscope and the expression of MyD88 was 8determined by Real-time PCR and Western Blot respectively. Results The viral titer of lentivirus was 1×10 TU/ml and the MOI(multiplicity of infection) was 100, PC12 cells exhibited the highest transfection efficiency in enhanced infection solution(EN.iS), with no remarkable effect on the transfection efficiency in the presence of the transfection reagent polybrene. According to the result of Real-time PCR and Western Blot, the most efficient targeting sequence was 5'-CATAC GCAACCAGCAGAAA-3'. Conclusion Lentivirus mediated RNA interference is an effective means to silence gene expression in PC12 cells，which can generate stable transfected PC12 cell line with MyD88 expression knocking down.【Key words 】 Pc12 cell line; lentivirus; RNA interference; myeloid differentiation primary response gene88*CUI Wan-peng，LIU Xiao-xiang，FANG Xiu-bin （Department of Neurobiology, China Medical University, Liaoning Shenyang 110001 China）[1]Lentivirus 是逆转录病毒的一种，可将自身携带作用。
CDCA8在肿瘤发生发展及耐药中的研究进展
㊃综述㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.03.028C D C A8在肿瘤发生发展及耐药中的研究进展*顾汇权,张涵强,王芳玉,姚龙宇,周小天综述,刘嫱ә审校海南医学院药理教研室,海南海口571199摘要:细胞分裂周期相关基因(C D C A)8是C D C A家族中的一个成员,早期在胚胎干细胞中被发现,用于调控有丝分裂期间着丝粒的定位及纺锤体的稳定性㊂近年越来越多的研究发现C D C A8在肺癌㊁肝癌㊁黑色素瘤和胰腺癌等多种肿瘤组织中呈高表达,并与肿瘤的分级㊁不良预后密切相关㊂干扰C D C A8的表达会显著抑制肿瘤的生长以及转移,诱导细胞周期的阻滞及细胞凋亡,同时提高肿瘤细胞对顺铂和他莫昔芬的灵敏度,而对正常细胞影响较小㊂故认为C D C A8是治疗恶性肿瘤的一个潜在干预靶点㊂本文从预后情况㊁作用机制以及耐药关系出发,对C D C A8在肿瘤中的功能和作用的机制通路进行讨论,旨在为临床上肿瘤生物标志物的筛选及靶向药物研发提供新思路㊂关键词:细胞分裂周期相关基因8;肿瘤;治疗靶点;耐药中图法分类号:R730.2文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)03-0405-05R e s e a r c h p r o g r e s s o f C D C A8i n t u m o r d e v e l o p m e n t a n d d r u g r e s i s t a n c e*G U H u i q u a n,Z HA N G H a n q i a n g,WA N G F a n g y u,Y A O L o n g y u,Z H O U X i a o t i a n,L I U Q i a n gәD e p a r t m e n t o f P h a r m a c o l o g y,H a i n a n M e d i c a l U n i v e r s i t y,H a i k o u,H a i n a n571199,C h i n aA b s t r a c t:C e l l d i v i s i o n c y c l e-a s s o c i a t e d g e n e(C D C A)8i s a m e m b e r o f t h e C D C A f a m i l y,w h i c h i s d i s-c o v e r e d e a r l y i n e m b r y o n i c s t e m c e l l s a n d u s e d t o r e g u l a t e t h e l o c a l i z a t i o n o f t h e m i t o t i c g r a n u l e a n d t h e s t a-b i l i t y o f t h e s p i n d l e d u r i n g m i t o s i s.I n r e c e n t y e a r s,m o r e a n d m o r e s t u d i e s h a v e f o u n d t h a t C D C A8i s h i g h l y e x p r e s s e d i n a v a r i e t y o f t u m o r t i s s u e s,i n c l u d i n g l u n g c a n c e r,h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a,m e l a n o m a a n d p a n c r e-a t i c c a n c e r,a n d i t i s c l o s e l y a s s o c i a t e d w i t h t u m o r g r a d e a n d p o o r p r o g n o s i s.I n t e r f e r i n g w i t h C D C A8e x p r e s-s i o n c a n s i g n i f i c a n t l y i n h i b i t t u m o r g r o w t h a n d m e t a s t a s i s,i n d u c e c e l l c y c l e a r r e s t a n d a p o p t o s i s,a n d i n c r e a s e t h e s e n s i t i v i t y o f t u m o r c e l l s t o c i s p l a t i n a n d t a m o x i f e n,w i t h l i t t l e e f f e c t o n n o r m a l c e l l s.T h e r e f o r e,i t i s c o n-s i d e r e d t h a t C D C A8i s a p o t e n t i a l i n t e r v e n t i o n t a r g e t f o r t h e t r e a t m e n t o f m a l i g n a n t t u m o r s.I n t h i s p a p e r,t h e f u n c t i o n o f C D C A8i n t u m o r s a n d t h e m e c h a n i s t i c p a t h w a y o f i t s a c t i o n a r e d i s c u s s e d i n t e r m s o f p r o g n o s i s, m e c h a n i s m o f a c t i o n,a n d d r u g r e s i s t a n c e r e l a t i o n s h i p,a i m i n g t o p r o v i d e n e w i d e a s f o r t h e s c r e e n i n g o f t u m o r b i o m a r k e r s i n t h e c l i n i c a s w e l l a s t h e d e v e l o p m e n t o f t a r g e t e d d r u g s.K e y w o r d s:c e l l d i v i s i o n c y c l e a s s o c i a t e d8;t u m o r;t r e a t m e n t t a r g e t s;d r u g r e s i s t a n c e细胞周期相关蛋白的异常引起的细胞增殖不受控制,使肿瘤细胞具有更强的侵袭㊁转移及耐药能力,因此,细胞周期进程失调被认为是癌症的一个共同特征[1-2]㊂近年来,越来越多的细胞周期相关蛋白成为恶性肿瘤早期诊断的生物标志物和治疗的潜在靶点㊂细胞分裂周期相关基因(C D C A)和蛋白家族共有8名成员组成,即C D C A1~8㊂C D C A家族成员的异常表达与多种肿瘤的发生和发展密切相关,例如C D C A2作为一种核蛋白,负责调控蛋白磷酸酶1在染色质中的靶向定位,过表达可通过加速细胞周期进程,促进肿瘤细胞增殖[3];C D C A7是一种D N A结合蛋白,异常表达时可激活转录相关因子,促进肿瘤的迁移及血管的生成[4]㊂C D C A8也称为B o r e a l i n/D a s r a B,位于人染色体1p34.2,含11个外显子和10个内显子,c D-N A总长2139b p,编码280个氨基酸[5]㊂既往研究发现C D C A8在胚胎干细胞和多种癌细胞中的转录活性显著增加,且相较于C D C A其他成员,C D C A8在肿瘤和正常组织中的表达差异更显著[6-7]㊂上调的C D-C A8是促进癌症恶性进展的关键,在癌症发生及恶性病变中发挥着重要作用㊂本文对C D C A8在肿瘤中的功能及可能的作用机制进行综述,以期为靶向C D-C A8的治疗提供新思路㊂1 C D C A8的结构和功能C D C A8与有丝分裂激酶B(A u r o r a B)㊁内部着丝㊃504㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第3期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.3*基金项目:国家自然科学基金资助项目(82060851);海南医学院创新实验项目(H Y Y S2021A35)㊂ә通信作者,E-m a i l:470048098@ q q.c o m㊂网络首发h t t p s://l i n k.c n k i.n e t/u r l i d/50.1167.R.20240105.0830.002(2024-01-05)粒蛋白(I N C E N P)㊁生存素(S u r v i v i n)共同组成染色体载客复合体(C P C)的重要部分[8]㊂在结构上,B o r e-a l i n直接与S u r v i v i n和I N C E N P结合,在体外展现出类似三重螺旋结构[9]㊂B o r e a l i n可通过N末端141个残基与S u r v i v i n的相互作用定位到中央纺锤体和中间体㊂B o r e a l i n虽然不与A u r o r a B直接连接,但可以通过前58个氨基酸与I N C E N P结合,并通过I N-C E N P的C端区域与A u r o r a B连接使其激活,用于着丝粒的靶向定位[10]㊂根据其结构特征,B o r e a l i n在动物和真菌中处于保守状态[9]㊂并且有研究发现B o r e a l i n可受多个位点的磷酸化调控,例如,单极纺锤体蛋白激酶1 (M P S1)在T h r230上的磷酸化,提高了A u r o r a B酶的活性[11]㊂细胞周期蛋白依赖性激酶1(C D K1)的磷酸化,促进C P C靶向着丝粒定位[12]㊂在有丝分裂间期,B o r e a l i n见于异染色质上;而前中期转移进入着丝粒内高度聚集;在中后期,B o r e a l i n离开着丝粒内,转移到中心纺锤体微管,随后定位于细胞皮层;最终,在末期和细胞质分裂期,B o r e a l i n定位于皮层中部[13]㊂B o r e a l i n缺失将减慢有丝分裂进程,导致着丝粒-纺锤体失连和异位纺锤极形成,还导致细胞增殖缺陷㊁p53积累和小鼠早期胚胎死亡[14-15]㊂一般来说,在人类有丝分裂细胞中,B o r e a l i n纠正着丝粒-纺锤体失连,稳定双极纺锤体,同时其二聚体结构域调控着丝粒的动态交换,以实现最佳的C P C功能[16]㊂除此之外,B o-r e a l i n还在有丝分裂过程中参与了染色体排列的调节㊁纺锤体信号传导和胞质分裂及细胞动态定位等功能[16-17]㊂2 C D C A8与肿瘤发生和发展之间的关系C D C A8是有丝分裂中的关键调控基因,作为一种细胞周期调节剂,C D C A8的表达受致癌相关转录因子的调控㊂D A I等[18]发现,核因子Y A(N F-Y A)可在肝癌细胞中激活C D C A8依赖的启动子区,促进C D C A8的转录及核内聚集㊂同源物N F-Y B会介导N F-Y C核靶向作用,形成二聚体[19],进一步增加N F-Y亚基与C D C A8启动子区结合的活性,促进肝癌的恶性进展㊂X I A N G等[20]和C H E N等[21]研究表明,在肺腺癌细胞中,C D C A8可以通过正反馈的形式作用于p53,p53的缺失会进一步诱导有丝分裂缺陷,诱导肿瘤恶性进展㊂除此之外,信号通路的激活也是C D C A8的调控模式之一㊂有研究证实,在黑色素瘤中,C D C A8的过表达可激活R O C K通路,降低c a s p a s e-3水平,诱导肌球蛋白M L C磷酸化,促进肿瘤的淋巴结转移及转移灶的形成[22-24]㊂综上所述, C D C A8可通过调控转录因子㊁凋亡蛋白及激活信号通路等方式促进肿瘤细胞的发展及转移㊂2.1 C D C A8与肺癌基于癌症基因组图谱(T C-G A)和基因表达综合数据库(G E O)筛选发现,在肺癌患者中包括C D C A8在内的9个关键基因表达水平明显上调,并且其表达水平与肿瘤大小㊁病理分级㊁T NM分期呈正相关,C D C A8水平越高,肺癌患者生存率越低[25]㊂H A Y AMA等[26]利用小R N A敲低L C319和S B C-5细胞中C D C A8的表达,发现可以显著抑制细胞的增殖和集落形成,并诱导细胞周期G1期的滞留,提示C D C A8可通过调控细胞周期,影响肺癌的发展和转化㊂更多的研究结果也证明了这个观点,肺癌细胞中C D C A8水平的降低会上调p53的水平,抑制周期检查点蛋白C D C2和C y c l i n B1的水平,干扰拓扑异构酶Ⅱ的水平,阻止细胞进入有丝分裂阶段并加强细胞周期的停滞,从而引起肺癌细胞的凋亡[27-29]㊂除此之外,HU等[30]通过分析肺腺癌患者的m i R N A表达谱,发现m i R N A-133b对C D C A8存在靶向负相关作用,m i R N A-133b可以与C D C A8的3'-U T R端结合,靶向诱导C D C A8的m R N A序列降解,进而调控m i R-133b水平,逆转因C D C A8缺失而引起的细胞活力下降㊂综上所述,C D C A8可能通过细胞周期㊁转录调控等不同机制在肺癌的发生与发展中发挥重要作用㊂2.2 C D C A8与肝癌 S HU A I等[31]发现在人类肝细胞癌中C D C A8呈高表达,且表达水平与患者的T NM分类,临床分期,组织学分级相关㊂因此C D-C A8也可以作为鉴别肝癌的潜在生物标志物㊂敲低肝癌细胞中的C D C A8不仅可以上调抑癌基因C D K N2B的水平,抑制细胞周期蛋白依赖激酶的活性,还可下调C y c l i n A2㊁C y c l i n D1㊁C y c l i n B1㊁C D K4㊁C D K6㊁p-C D C2等细胞周期蛋白水平,干扰细胞检查点的进行,从而引起细胞周期停滞[32]㊂此外,下调C D C A8还可增加凋亡蛋白c a s p a s e-7以及肿瘤抑制性因子A T F3和G A D D34蛋白水平,引起致癌信号通路A K T/β-c a t e n i n失活,促进肝癌的凋亡[33]㊂另外有研究发现,在动物体内利用杂交技术靶向敲除小鼠肝细胞中的C D C A8后,这些小鼠在生长过程中并没有出现明显的不良反应;后续通过插入致癌基因ΔN90-β-C a t e n i n和c-M e t诱发肝癌后,可以观察到肝癌的恶性进展被显著抑制[32]㊂因此,筛选靶向C D C A8的小分子化合物不仅能很好地抑制肝癌的进展,且对于研究对象本身的损伤也更小㊂2.3 C D C A8与黑色素瘤 G U O等[34]发现C D C A8的转录水平在黑色素瘤患者中明显上调,低水平的患者预后更差,表明C D C A8可作为黑色素瘤预后的独立预测因子㊂另外,通过免疫细胞浸润分析发现C D-C A8的表达与B细胞㊁中性粒细胞㊁树突状细胞浸润呈正相关㊂因此,在黑色素瘤中C D C A8不仅能作为生物标志物用于早期诊断,还能用于术后的预后评估[35]㊂另一项研究表明,转运蛋白T M E D3水平的降低可以引起内源性C D C A8的水平耗竭,并引起下游p-㊃604㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第3期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.3A K T㊁C D K1/6和P I K3C A水平的降低,这和靶向敲除C D C A8的结果一致,而C D C A8的激活可以逆转这一现象,促进A k t和P I3K的磷酸化水平[36]㊂说明C D C A8可通过P I3K/A K T信号通路介导肿瘤细胞的凋亡,针对T M E D3/C D C A8轴的抑制剂可能是治疗黑色素瘤的新靶点㊂2.4 C D C A8与胰腺癌 G U等[37]发现在胰腺癌临床样本中C D C A8表达水平与患者的肿瘤分级以及糖尿病史呈正相关,且低表达的胰腺癌患者具有更长的生存期,但与年龄㊁性别并无显著性差异㊂敲减C D C A8会抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,此抑制作用是通过C D C A8/C D44轴产生的㊂C D44作为非激酶跨膜受体,可以与透明质酸结合激活肿瘤相关信号通路和并调整细胞骨架,使其利于侵袭和耐药㊂而C D C A8可与S N A I2形成复合物作用于C D44的启动子从而上调C D44水平,促进胰腺癌的恶性进展[37]㊂除此之外,有研究发现若敲低胰腺癌细胞中的驱动蛋白家族成员如K I F23和K I F18B水平,也会引起C D C A8的同步降低和细胞活力的抑制,从而抑制胰腺癌细胞的增殖及转移能力[38-39]㊂3 C D C A8与肿瘤耐药性之间的关系3.1 C D C A8与铂类药物顺铂在体内与D N A结合,阻止细胞分裂的正常进行,引起肿瘤细胞的氧化应激㊁调节钙信号㊁诱导凋亡蛋白等方式促进癌细胞的死亡[40-41]㊂在临床上广泛用于治疗肺癌㊁宫颈癌㊁卵巢癌等恶性肿瘤[42-44]㊂W E N等[45]利用G E O数据集对21例晚期宫颈鳞癌患者的样本进行分析,发现对比顺铂敏感的患者,顺铂耐药患者的C D C A8水平显著升高,说明C D C A8在宫颈癌耐药过程中存在潜在作用㊂Q I等[46]的结果同样证明了这一点,通过对比卵巢癌顺铂耐药患者中的差异发现T O P2A和C D-C A8是变化最显著的2个基因,且与T O P2A相比,在体外耐药细胞中C D C A8水平提高了约1.5倍,说明C D C A8在顺铂耐药过程中发挥了重要作用,通过慢病毒敲减了A2780和S K O V3细胞中的C D C A8后发现提高了顺铂对肿瘤细胞的损伤,且与顺铂水平成正相关㊂而C D C A8诱导细胞对顺铂的敏感性可能是通过p53介导,沉默C D C A8可引起p53的积累,过度积累的p53可以在顺铂的作用下激活死亡域蛋白(F A D D)中的白细胞介素1β转换酶(I C E),抑制蛋白泛素化,从而增加顺铂对肿瘤细胞的杀伤力[47-48]㊂因此,C D C A8可成为肿瘤细胞提高顺铂敏感性的目标基因㊂3.2 C D C A8与他莫昔芬他莫昔芬作为雌二醇的竞争性拮抗剂,可与雌激素受体竞争结合,抑制雌激素受体的转录活性,阻断乳腺癌细胞的G1期,抑制肿瘤增殖㊂有研究发现E R信号通路和细胞周期调节之间存在串扰作用,C D K7抑制剂的联合使用可使雌激素受体(E R)S e r118磷酸化,提高耐药细胞对他莫昔芬的敏感性[49]㊂N A B I E V A等[50]的研究也发现,使用C D K4/6的抑制剂可以显著改善激素受体阳性㊁人表皮生长因子受体-2(H E R2)阴性乳腺癌Ⅱ㊁Ⅲ和Ⅳ期患者中的疗效㊂因此,细胞周期调控蛋白可作为乳腺癌内分泌抵抗发展的研究方向㊂S U N等[51]发现C D C A8在他莫昔芬耐药细胞中高表达,而过表达敏感细胞C D C A8水平可降低他莫昔芬作用下细胞的凋亡率,促进细胞S期的富集,加速周期进程,C D C A8作为E2F相关通路的激活剂,有研究表明不仅可以通过E2F1介导染色体D N A复制和调节细胞周期的G1/S期,还能作用于转录抑制因子E2F3b影响C y c-l i n D1的水平,从而加快乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药[52]㊂C y c l i n D1作为检查点蛋白可促进G1/S期的进展,乳腺癌细胞中C y c l i n D1的激活促进了癌细胞的耐药水平[53]㊂而在敲降C D C A8后,C y c l i n D1水平显著降低,G1期滞留细胞量增加,细胞恢复对他莫昔芬的敏感性[54]㊂因此,靶向C D C A8抑制剂的联用能提高耐药细胞对他西莫芬的敏感性㊂4小结C D C A8作为细胞周期调节因子,在胚胎干细胞中作用于有丝分裂阶段稳定双极纺锤体,调控纺锤体信号传导维持细胞周期的顺利进行㊂在正常的组织中C D C A8表达水平较低,而在细胞周期异常的恶性肿瘤中C D C A8呈高表达,在一定程度上可以促进肺癌和胰腺癌的发生,促进黑色素瘤的转移及肝癌的恶性进展㊂C D C A8可调节胞内转录水平,促进细胞的增殖和耐药㊂在肺癌中,通过反馈调节p53促进细胞四倍体形成诱导肿瘤的发生㊂在肝癌中,受到转录因子N F-Y簇的调控,诱导细胞周期C D K-C y c l i n轴的异常转化,促进肝癌的进展㊂在黑色素瘤中,C D C A8与R O C K协同作用,激活下游靶点磷酸化促进黑色素瘤的转移㊂在胰腺癌中,C D C A8通过增加C D44转录活性促进胰腺癌的进展㊂在化疗耐药细胞中,C D-C A8通过周期相关蛋白C y c l i n D1及p53调控细胞周期进展,以及蛋白泛素化提高细胞耐药性㊂因此,笔者认为C D C A8可通过肿瘤微环境㊁转录因子㊁周期调控以及致癌通路的激活等多方面发挥促癌及耐药的作用㊂综上所述,C D C A8表达水平在肺癌㊁肝癌㊁胰腺癌等肿瘤中相较于正常组织有着数倍的升高,并且其表达水平与肿瘤分级㊁预后情况及耐药情况呈正相关㊂因此,C D C A8有望成为新型生物标志物,为临床上的肿瘤诊断㊁术后评估以及敏感药物筛选提供参考依据㊂除此之外,根据C D C A8在肿瘤细胞中过表达的特点,通过研发靶向抑制剂作为化疗药物的联合用药之一,可提高化疗药物的杀伤力以及耐药细胞的敏感性㊂同时基于动物实验结果的推测,C D C A8的靶向抑制剂在肿瘤治疗的同时,可以给患者带来更少的不良反应,在临床应用上有着巨大的潜力㊂总之,目㊃704㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第3期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.3前虽然对于C D C A8的研究取得了一定的进展,但大部分还是处于理论研究阶段,对于未来的应用效果还需要对其作用机制进行更深一步的研究㊂参考文献[1]L I U K,Z H E N G M,L U R,e t a l.T h e r o l e o f C D C25C i nc e l l c y c l e r e g u l a t i o n a nd c l i n i c a l c a n ce r t h e r a p y:a s y s t e m-a t i c r e v i e w[J].C a n c e r C e l l I n t,2020,20:213.[2]Y A D A V P,S U B B A R A Y A L U P,M E D I N A D,e t a l.M6AR N A m e t h y l a t i o n r e g u l a t e s h i s t o n e u b i q u i t i n a t i o n t o s u p-p o r t c a n c e r g r o w t h a n d p r o g r e s 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Notch信号通路在肺组织的传导及哮喘中的作用
Notch信号通路在肺组织的传导及哮喘中的作用荣恒漠;陈毅斐;李淑华;杨炯【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P1129-1132)【作者】荣恒漠;陈毅斐;李淑华;杨炯【作者单位】430071 湖北武汉，武汉大学中南医院呼吸内科;430071 湖北武汉，武汉大学中南医院呼吸内科;430071 湖北武汉，武汉大学中南医院呼吸内科;430071 湖北武汉，武汉大学中南医院呼吸内科【正文语种】中文Notch是一种保守进化的，在胚胎和成熟组织中对细胞命运有决定性影响的信号通路。
肺组织被认为是包含Notch配体和mRNA受体最丰富的组织，Notch信号通路在精细地调控细胞间信息的传达中起到非常理想化的作用。
支气管哮喘是一种多种细胞参与的慢性气道炎症反应，包括肥大细胞，嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞等。
研究发现，哮喘患者的气道主要有以下特点：①气道平滑肌收缩；②气道壁的水肿与充血；③黏液和炎性分泌物阻塞气道；④气道重塑。
近年来，研究表明，Notch 信号通路从气道反应性增高、炎症反应、气道重塑的任一方面都能影响哮喘的发病。
本文通过综述Notch信号通路在肺组织中的传导及其支气管哮喘中的作用，进一步为今后支气管哮喘发病机制及治疗提供思路和策略。
一、Notch信号通路概述1.Notch信号通路的来源与结构Notch信号通路被发现存在于多种生物体，包括昆虫和人类等。
1917年，基因学家Thomas Morgan等在果蝇体内第一次检测到Notch基因[1]。
2006年，Bray证实哺乳动物体内存在四种Notch受体(N1-N4)，这四种受体结合Delta-like 1,3,4和Jagged 1和2 五种配体[2]。
近年来，针对Notch信号的分子和生化超微结构的研究取得了极大的进展。
目前，我们已知的五种传统Notch配体有共同的构型特点，即包含一种氨基末端区域DSL(Delta，Serrate和Lag-2)。
2018国自然-生命科学部及医学科学部名单
2018国自然-生命科学部及医学科学部名单三七自毒物质降解菌的特性和作用机制研究黄荣韶DEELA蛋白介导赤霉素调节山药块茎膨大的分子机理王爱勤广西巴马小型猪2型糖尿病易感性相关LncRNA的筛选及机制研究兰干球自我构念影响心理理论加工的ERP研究：基于中国-东盟国家的跨文化比较蒋钦广西长寿人群饮食、肠道菌群和代谢物特征凝练与数据平台初建李全阳卵形鲳鲹SIGIRR通过TLRs-MyD88信号通路对巨噬细胞炎症应答的影响与机制研究韦友传鸡传染性支气管炎病毒多表位嵌合病毒样颗粒的构建及其免疫应答机制研究磨美兰甘蔗尾青贮核心发酵菌群和代谢物演替规律及其对水牛瘤胃细菌多样性的影响邹彩霞基于定量磷酸化蛋白质组学在水牛精子发生过程的分子机制研究张明小分子化合物在水牛原始卵泡体外激活中的作用及其分子机制的研究杨素芳KDM6B和Xist双基因表达调控对牛体细胞核重编程中X 染色体重塑影响机理的研究韦精卫Nanos2维持水牛精原干细胞干性特征机制的研究杨小淦应用基因捕获高通量测序精准鉴定影响水牛产奶性状的关键基因研究刘庆友寄生蜂定位致瘿害虫的化学机制研究——以孟氏胯姬小蜂为例郑霞林过氧化氢与一氧化氮互作对桉树耐铝性的调控作用及其机理滕维超沿海纬度梯度分布红树科植物对温度变化的水力结构和功能响应蒋国凤短氟碳低聚物定向接枝纤维素的合成机理及其构效关系研究朱红祥具有生物活性的3-蒈烯衍生物的合成及光异构研究段文贵心材化过程中木质部薄壁细胞代谢活性与心材成分生成机制符韵林番茄抗细菌性髓部坏死病遗传规律的研究及分子标记筛选王先裕番茄伴生植物的筛选及混栽促生组合番茄根际及内生微生物群落解析杨尚东芒果FT基因在成花过程中的分子机制研究罗聪咪唑啉酮类除草剂在水生微宇宙系统中对映选择性环境行为和毒性效应谭辉华乙烯调控罗汉果性别的细胞学及分子遗传研究周琼甘蔗体细胞融合育种中杂合体细胞再生植株的分子机制李素丽microRNA调控铝诱导花生根尖细胞程序性死亡发生的分子机制何龙飞水稻可塑性基因RPL1调节水稻株高的分子机制研究张翠翠中国原始被子植物瘿螨总科区系与分布格局机制研究王国全珍贵乡土树种与桉树混交修复土壤质量的效应及机理研究温远光Landscape and population genomics of endangered&nb Kim Shan We 共生真菌对Euops属卷叶象甲幼虫发育的营养功能及分子机制研究李晓琼红树植物生物钟预测环境和潮汐变化能力对其光合的贡献及机制研究朱俊杰高巢被捕食压力下北热带石灰岩森林鸟类的繁殖行为与策略蒋爱伍bE2-bW1复合体调控甘蔗黑穗病菌丝状生长的机制陈保善十字花科黑腐病菌小RNA分子伴侣蛋白Hfq的作用机理研究唐东阶水稻条斑病菌III型效应子XopN致病机理研究黄胜一个新的双组份信号转导系统感受子基因抑制III型分泌系统的信号途径研究姜伟十字花科黑腐病菌全局性转录调控因子HpaR1与Clp共同调控致病生化因子表达之模式研陆光涛冯军功能化纳米复合材料hCEs SERS探针的构建及在血清与细胞中检测羧酸酯酶活性的越南槐根内生真菌生态功能及其与宿主药材品质相关性研究姚裕群基于甘蔗生产全程机械化的肥料氮利用与土壤氮迁移研究韦剑锋潘丽霞三联吡啶类金属配合物、靶点DNA与DNA拓扑异构酶结合方式及三元复合物结构基础的研松香基分子印迹膜的结构调控及定向分离三七活性成分三七素的研究黄钦基于表型性状和ISSR标记的苹婆遗传多样性分析及核心种质构建周婧用晶格Boltzmann方法研究功能性微气泡生成机制何冰一种双吡嗪基脲衍生物通过ERK/Slug/vimentin/BCRP信号轴逆转表阿霉素耐药的研究陈家念中国吟螽属修订（直翅目：螽斯科：蛩螽亚科）边迅猫儿山小鲵生活史不同阶段的生境选择研究黄华苑生境破碎化对白头叶猴肠道寄生虫的影响及其行为适应周岐海中亚热带石灰岩常绿落叶阔叶混交林植物功能性状分异及其对环境变化响应的研究姜勇两种青牛胆属植物中抑制小胶质细胞活化成分的发现及其初步作用机制研究廖海兵王任翔边缘鳞盖蕨复合体种 (Microlepia marginata complex) 的网状盐藻类胡萝卜素合成调控相关的转录因子基因的作用分析尚常花蛋白纳米疫苗 VP6-Ferritin 高效免疫的结构基础研究王丹喀斯特地貌生境隔离对洞穴鱼类物种形成和分布格局的作用机制杨剑不同施肥措施下甘蔗田土壤温室气体排放过程机理及其调控因素李卓亭火干扰对大兴安岭森林更新结构和地上生物量动态的影响蔡文华喀斯特不同生境类型树种水力特征及其权衡关系研究刘艳艳岩溶植物根系对水环境变化的形态可塑性响应及其水分再分配的生态效应研究黄玉清淡水刚毛藻目的系统分类学研究赵志娟海洋生物来源天然小分子生物碱抗HIV-1机制研究周波长链非编码RNA LINC00857介导非小细胞肺癌耐药的机制研究王丽惠微环境CAFs源性外泌体调控非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药及其机制阳洁靶向耐药肺癌的高选择性共价Bmx抑制剂的设计、合成及其生物活性研究何林洪circRNA-miRNA-p38MAPK通路调控网络对缺血性脑卒中及其中医证候的影响与机制研究苏莉留兰香香蜂草苷对肝纤维化内质网应激--自噬通路的调控作用机制林兴基于NF-κB信号通路探索青蒿琥酯对伴糖尿病牙周炎炎症反应及成骨调控的效应和机制研究农晓琳氯化两面针碱基于miR-125b-2-3p/IER3调控轴抗HCC作用的机制研究党裔武多源信息下基于贝叶斯网络的综合性医院门诊量不确定性分析与预测黄代政miR-132-RB1/E2F1信号通路与肝癌发生发展的分子流行病学研究容敏华我国HIV-1肺储存库的准种遗传多样性和细胞嗜性研究宁传艺黄东萍基于壮族出生队列的孕早期环境雌激素污染物联合暴露与胎儿婴儿发育情况的关系研究TNFR-RIPK1/RIPK3信号通路介导铅致神经细胞程序性坏死的机制研究李少军PP2Ac甲基化调控脂质自噬在苯并芘促进非酒精性脂肪性肝病中的作用研究李习艺炎症小体信号通路诱导的细胞焦亡在锰致机体认知损害中的作用邹云锋自噬在职业锰暴露致心脏毒性中的作用及机制研究杨晓波慢性低水平镉暴露经由ICAM-1和VCAM-1糖基化修饰促进血管内皮炎症的研究钟秋安miR-3942-5p在结肠癌中的功能机制研究及其在泛癌中的诊断和预后评估戴盛明增强Ⅱ型光敏剂介导的光动力抗白色念珠菌作用与机制研究黄力毅ICOS/ICOSL通路调控Th9分化介导日本血吸虫病肝纤维化的分子机制战廷正环状RNAcirc_103595/miR-185-3p/PLK1信号轴对肝癌不全消融后残余癌增殖侵袭的调控杨红多模态MRI对2型糖尿病小型巴马猪胰腺病变的病理对照研究及临床应用龙莉玲miR-106b-5p启动子甲基化状态介导MAPK/ERK信号通路调控腰椎间盘退变机制的研究江华EB病毒编码潜伏膜蛋白LMP2A通过ITGα6β4/ACSL4路径抵抗鼻咽癌细胞铁死亡温文胜MiR-3162-5p通过激活Ras信号通路促进宫颈鳞癌细胞EMT 的作用及机制研究陈军莹潜在抑癌基因LAMC3和LAMA2调控细胞自噬参与卵巢癌耐药的机制研究尹富强新生抗原neoantigen介导溶瘤病毒治疗复发性卵巢癌的应用及机制研究王琪OY-TES-1/miR-326协同调控PD-L1促胶质瘤免疫逃逸的机制初探罗彬SPINK4调控结肠癌细胞铁死亡的作用机制研究胡榜利冯振博hsa_circRNA_104515竞争性结合miR-1303调控PLIN1在肝细胞癌发生发展中的作用及机制HMGA1介导lncRNA-LINC01615增强THBS2表达及其在肝癌转移中的作用与机制研究唐博刘博白介素24定点整合自体诱导多潜能干细胞来源的间充质干细胞对子宫内膜癌的生长抑制红桂木凝集素扩增移植诱导的记忆干性T细胞抗肝癌研究周素芳RBM38结合并促进LncRNA-GAS5稳定逆转肝癌索拉非尼耐药的机制研究叶甲舟何宝玉长链非编码RNALOC553103通过ROCK1-RhoA/ROCK 信号通路调控细胞骨架重构促进鼻咽癌转高糖诱导肝细胞外泌体中miR-132差异表达促进EMT介导的胰腺癌转移的分子机制秦雯陈洁CirR-387与let-7d-5p竞争性调节GALNT1经EGFR/E-cadherin通路调控肝细胞癌EMT的机制广西HBV/AFB1双暴露女性原发性肝细胞癌早期预警模型的建立及相关分子机制的研究韩创业RNF125通过泛素化修饰PD-L1促进肿瘤免疫的分子机制研究吴飞翔基于UPLC-MS/MS联合MRM的靶向与非靶向代谢组学方法研究蛇伤中毒标志物廖明王威线粒体ATP敏感性钾通道和与线粒体自噬对急性心肌梗死大鼠心肌细胞的影响与机制研究淫羊藿苷经Notch通路调控大鼠ASCs促进超长随意皮瓣存活的机制研究梁至洁抑制PD-L1+中性粒细胞对脓毒症治疗的价值探索张森ERK抑制剂经由线粒体动力学-自噬途径促进心肺复苏后神经细胞生存研究陈蒙华弱酸性富钙磷离子环境下单核细胞来源外泌体的miRNA表达变化及其靶细胞效应研究廖红兵周诺lncRNA和MicroRNA调控胚胎内皮祖细胞Notch、BMP、Wnt 信号通路参与牵张成骨血管发生Notch信号通路在树鼩耳蜗感觉前体细胞增殖和分化中的调控作用谢利红宋星慧基于mTOR通路探讨外泌体介导树突状细胞活化在系统性红斑狼疮中的作用机制研究&nbs雷玲系统性硬化症中IL-35诱导iTr35细胞分化导致Treg/ Th17细胞失衡及纤维化病变的孔德燕黑色素纳米颗粒通过上调Iduna的表达促进间充质干细胞在缺血条件下的存活并增强其治刘斯佳基于石墨相氮化碳纳米片的双基因协同输送系统用于小鼠胚胎神经干细胞定向诱导分化G蛋白偶联受体MC1R抑制α-Syn聚集及细胞间传递的分子机制研究肖友生秦超内皮细胞膜微粒通过LncRNA MIAT调控神经元Beclin-1和Caspase-3 加重脑缺认知相关遗传变异及其与环境的交互作用对长寿人群认知功能的影响彭均华LncRNA NR_120526结合转录因子ILF2/3调控血红蛋白F合成的机制研究何云燕血栓弹力图评估遗传性异常纤维蛋白原血症患者凝血功能的价值研究闫婕应燕萍抗阻运动下调miR-92a-3p介导内皮细胞HMOX1/MAPKs/NF-κB预防导管相关性血栓形成的机制研究GLP-1受体激动剂通过IRS-1/PI3K/Akt信号通路调节骨代谢何玉玲基于静息态功能磁共振的急性甲亢肌病大脑活动变化及其分子机制研究罗佐杰PDK1调控破骨细胞在骨质疏松症发病中的分子机制研究宗少晖lnc-XLOC作为ceRNA参与miR-155调控脊柱结核椎间盘破坏过程中的作用机制研究詹新立可控释CGRP的硼硅酸盐生物活性支架促进骨缺损修复的作用机制研究李兵新型一氧化氮响应型纳米缓释微粒对骨性关节炎作用的研究靳攀陆真慧PHLPP1调节TNF信号通路在眼镜蛇毒神经生长因子（NGF）成软骨诱导中的作用及其机制山楂叶总黄酮调控微环境促进脊髓损伤后神经再生的分子机制研究曾高峰氧化应激介导的Nrf2/mTOR/NF-κB通路对氯胺酮相关性膀胱炎的影响和机制以及褪黑素的保护作用研究米华NF-κB/miR-375/CTGF信号介导咖啡因所致子代骨发育异常的血管发生机制罗瀚文HOXA10通过上调E-cadherin改善子宫内膜容受性的作用及机制研究杨一华极化的巨噬细胞通过NLRP3炎症小体调控肝纤维化的机制罗薇膜联蛋白A1在抗肝纤维化中的作用机制范俊华粪菌移植对滤泡辅助性T细胞和滤泡调节性T细胞调控在炎症性肠病中的作用研究吕小平FGF21调控ATF6/eIF2α/CHOP信号通路介导内质网应激肝损伤的分子机制研究郭超黄荣杰miR-155通过SHIP-1/p53MAPK/STAT3介导Th17细胞分化在盐敏感性高血压左室肥厚中的作曾晓聪环状RNAmmu_circ_0000021介导miR-143-3p靶向调控NPY 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CRISPR-Cas9 技术的广西地方花生优良品种油酸含量改良研究贺梁琼小粒野生稻抗白背飞虱新基因WBPH9的克隆与抗虫机理分析郭嗣斌一个广谱持久抗稻瘟病基因pi-DY的克隆和功能分析高利军水稻东兰墨米种皮花青素合成关键基因BP3的图位克隆及功能研究杨行海伯克氏固氮菌GXS16与甘蔗根系高效联合固氮的生理和分子基础研究李长宁粉垄栽培木薯的肥料养分利用效率机制及其环境影响效应申章佑蔗叶与蔗叶生物炭还田下其C、N协同归还研究刘昔辉糖厂滤泥还田对广西红壤蔗区土壤有机碳库和温室气体排放的影响朱晓晖粉垄耕作对甘蔗土壤碳固定和温室气体排放的影响及机制黄金生霉变甘蔗病原菌节菱孢菌株产毒能力评价及产毒调节机理研究莫磊兴线粒体自噬NIX和Pink1信号交互作用对索拉非尼治疗肝癌的影响及干预研究张国染料木黄酮通过TTTY18/ miR-95/ SGK1环路干预结直肠癌细胞增殖凋亡的作秦俭Atg5介导树突状细胞自噬在烟草烟雾暴露下肺部炎症中的作用及机制的研究邝良鉴澳洲坚果种质资源的分子遗传多样性研究蔡元保基于miRNA和蛋白质组的桑寄生顽拗性种子脱水敏感性分子机制研究潘丽梅三倍体罗汉果种子败育分子机理研究韦荣昌草果种子休眠解除关键蛋白的挖掘及基因功能研究潘春柳南方石漠化区植被修复的微地形效应及其适应性管理策略研究吕仕洪东兴金花茶和同域分布的近缘广布种长尾毛蕊茶生殖生态学特性比较研究韦霄基于稳定同位素技术研究喀斯特季节性雨林代表性植物水分利用策略黄甫昭广义石山苣苔属（苦苣苔科）系统发育重建和分类学修订温放自然选择和遗传漂变对喀斯特特有铁甲秋海棠复合群物种分化的影响董莉娜中国冷水花属（荨麻科）分类修订和系统学研究韦毅刚苦苣苔科吊石苣苔属的分类学研究许为斌中国典型喀斯特天坑土壤微生物分布格局及其驱动机制蒲高忠RSK4靶向PI3K/AKT通路调控ACTN4在乳腺癌化疗耐药中的机制研究杨华伟应用时间系列代谢组学研究肝细胞肝癌患者手术前后血清代谢物变化及潜在标志物识别黎远冬缺氧条件下miR-210-5p调控SPON2介导肝癌TAM细胞M2型极化参与耐药的机制研究罗小玲用于肝癌早期诊断的多通道纸基微流控生物传感器的研究陈真诚西番莲酸性多糖改善2型糖尿病糖脂代谢紊乱的机制研究李霞基于miR-378b-p110α-PI3K/Akt通路甲基阿魏酸改善糖脂代谢抗ALD的机制研究李丽异槲皮苷介导miRNA-29调控靶基因改善胰岛素抵抗的作用机制黄桂红多靶点复合杯芳烃金纳米粒在阿尔茨海默症的诊断治疗作用及分子机制研究莫靖欣三株西沙软珊瑚共附生真菌抗肿瘤活性成分发现及其作用机制研究李云秋基于TLC和iTRAQ技术进行地蚕中抗金黄色葡萄球菌环肽的发现和其作用机制研究梁成钦李清初基于miR-21调控NF-κB信号通路介导肾缺血再灌注诱导的凋亡和炎症探讨桂枝去桂加茯苓白术汤的肾保护作用机制的研周燕园基于PPARγ/TGF-β1/Samds通路探讨鼠李柠檬素改善多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢纤维化的分子机制麝香酮和适配体级联修饰多烯紫杉醇脑靶向递送系统抗胶质瘤作用及机制的研究齐娜抑癌基因CMTM4在肝细胞癌中的作用及机制研究谭盛葵PP2A介导MYC相关锌指蛋白在肝细胞恶性转化中的作用机制研究朱小年发育相关印记基因表观遗传学改变介导孕期PEs暴露与妊娠结局吕元明IL-33/ST2通路调控CD8+T和免疫抑制相关细胞的功能抗软组织肉瘤的作用和机制陈火英阻断VEGF/VEGFR-2信号通路逆转TAMs极化在乳腺癌T细胞免疫中的作用及机制研究何少忠lncRNA Loc554202通过调控染色质状态促进脊索瘤发生和进展的机制研究夏学巍张学梅m6A甲基转移酶METTL3调控TXNIP对结直肠癌生物学特征的影响和机制研究KDM5B促进胃癌侵袭、转移的作用及机制研究王振冉PAIP1-mTOR正反馈环路促进肝癌发生郑剑锋卵巢癌产生的IgG在维持卵巢癌干细胞生物学行为中的作用及其机制研究廖沁园表观遗传介导IRF7相关lncRNA FTX抑制非小细胞肺癌发展的作用及机制研究杜振宗长链非编码RNA XLOC_012366在表观遗传学介导的肺癌转移抑制中的机制研究宋剑非Nrf2基因修饰的脂肪间充质干细胞对硬皮病的治疗作用及机制研究罗婧莹闫建国帕金森病中CDK5磷酸化依赖的C9orf72泛素化降解介导alpha-synuclein清除障碍和神经贺亮米诺环素通过Notch信号通路调控小胶质细胞极化在脊髓缺血后延迟性瘫痪中作用的研究王勇基于HMGB1-TLR4介导的NF-κB信号通路探讨毛蕊异黄酮在脑缺血再灌注损伤中的保护机制不同人胰淀素聚集程度通过TLR4/MyD88介导调节性T细胞免疫机制张晓溪细胞焦亡在糖尿病肾病足细胞损伤中的机制研究周素娴姚军无抗冻剂超快速冷冻兔睾丸/附睾精子对ICSI胚胎及子代印记基因。
Zwilch-siRNA抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖
胶质瘤是中枢神经系统最为常见的原发性肿瘤，具有发病率高、复发率高、死亡率高以及治愈率低等特点[1]。
尽管近年来不断探索和革新手术切除以及化疗、放疗方案，但传统治疗措施在改善预后、延长患者生存期方面仍收效甚微。
据统计，恶性胶质瘤患者的中位生存期仅为12~15个月，而复发胶质瘤患者仅能生存3~9个月[2]，其中的主要原因是瘤细胞的异常增殖得不到有效抑制。
Zwilch 基因是后生动物有丝分裂检查点的基本组分，通过RZZ （ZW10/Rod/Zwilch ）复合体发挥作用，能防止细胞过早退出有丝分裂，对于有丝分裂过程中动粒-微管连接装置的建立发挥着不可或缺的作用[3]。
该基因依赖细胞周期表达，在细胞的有丝分裂中发挥着重要的生理作用[4-5]。
本课题用Zwilch-siRNA 慢病毒感染人脑胶质瘤细胞U87MG ，观察其细胞增殖、克隆形成能力的变化，以探讨Zwilch 在胶质瘤发生、发展中的作用。
1材料与方法1.1细胞、动物与主要试剂人脑胶质瘤细胞株U87MG 购自上海市吉凯基因化学技术有限公司；DMEM 高糖型培养基和PBS 购自美国Hyclone 公司；胎牛血清、0.25%+EDTA 胰酶和青-链霉素购自美国Thermo Fisher 公司；慢病毒介导的靶向Zwilch 的siRNA 由上海吉凯生物科技有限公司设计并合成；SDS -PAGE 凝胶配制试剂盒、全蛋白提取试剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒均购自江苏凯基生物技术股份有限公司；Zwilch 单克隆抗体（ab202898）、二抗均购自英国Abcam 公司；CCK-8试剂盒购自上海贝博生物公司。
1.2实验方法1.2.1胶质瘤细胞培养人脑胶质瘤细胞系U87MG 采用含有10%FBS 的DMED 高糖型培养基培养，培养条件为37℃、5%CO 2。
1.2.2慢病毒感染选取生长状态良好的U87MG 细胞接种于六孔板，分为四组进行干预：空白对照组，进行常规培养；阴性对照组，以对照的阴性慢病毒感染；两个实验组分别用Zwilch-siRNA（59456-1）及Zwilch-siRNA （59460-1）慢病毒感染。
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RNA干扰抑制MyD88表达对小鼠骨髓树突状细胞生物学活性的影响(一)作者：陈家军,孙宗全,董念国,苏刚,刘超,刘金平,邓勇志【关键词】树突状细胞;,MyD88;,RNA干扰;,脂多糖InhibitoryeffectsofRNAinterferenceonMyD88expressionandbiologicalactivi tyinmurinemyeloiddendriticcellsAbstract]AIM:ToinvestigateinhibitoryeffectsofRNAinterferenceonMyD88ex pressioninmurinemyeloiddendriticcells(DCs)anddetectthebiologicalactivity ofDCs.METHODS:Threepairsofmyeloiddifferentiationfactor88(MyD88)siRN AweresynthesizedandtransfectedintoDCsbyRNAimate.ThemRNAandprotei nexpressionofMyD88wereanalyzedbysemiquantifiedRTPCRandWesternblo t.MouseDCsweredividedintocontrolgroupandRNAinterferencegroup.Oneof thehighesteffectivesiRNAwastransfectedintoRNAinterferencegroup.12hour slater,LPSofthefinalconcentrationsof10mg/Lwasaddedintwogroupsandcont inuedtoculturefor3days.ThephenotypeandfunctionalpropertiesofDCswere detectedbyflowcytometryandmixedlymphocytereaction(MLR).Theconcentr ationofTNFα,IFNγandIL12inthesupernatantwasdetectedbyELISA,andthecon centrationofNFκBwasdetectedbyimmunochemistry.RESULTS:mRNAandprot einexpressionwerereduced90%and85%insequence2siRNA,92%and88%inse quence3siRNArespectivelybutnochangewasfoundinothergroups.LPSstimul ationincreasedtheexpressionofCD80,CD86andMHCⅡinthecytomembraneofDCs,theconcentrationofTNFα,IFNγandIL12inthesupernatantincontrolgro up.Besides,LPSstimulationpromotedtheshiftofNFκBtokaryonandtheprolifer ationofallogeneicTcellsincontrolgroup.RNAinterferenceinhibitedtheseeffect sinducedbyLPS.CONCLUSION:RNAinterferencecanreduceMyD88expression inmurinemyeloiddendriticcellsandinhibitthematurationofDCs,whichmaypr ovideanewstrategyofgenetherapyforrelateddiseases.Keywords]dendriticcells;MyD88;RNAinterference;LPS摘要]目的:采用RNA干扰技术抑制小鼠骨髓树突状细胞（DC）髓样分化因子88（MyD88）的表达,并检测其对细胞生物学活性的影响,为DC 的临床应用奠定基础。
方法:针对MyD88基因,采用化学合成法合成3对MyD88siRNA（序列1、序列2及序列3）,并转染DC2.4细胞。
采用半定量RTPCR及Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测DCMyD88的表达情况,筛选其中一对高效RNA（序列3）转染DC2.4细胞（RNA 干扰组）,以未转染RNA的DC2.4细胞作为对照组,分别给予1mg/L的脂多糖（LPS）刺激。
流式细胞术（FCM）检测DC细胞表面CD80、CD86及MHCⅡ分子的变化,ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子α（TNFα）、干扰素γ(IFNγ)和白介素12（IL12）的浓度,免疫细胞化学检测DC核因子κB（NFκB）的表达,混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力,观察RNA 干扰对LPS促DC成熟的影响。
结果:与空白对照组相比,序列2组及序列3组DC的mRNA和蛋白质表达分别降低90%和85%、92%和88%,差异有统计学意义;脂质体对照组、无义siRNA对照组及序列1组DC的mRNA和蛋白质表达无显著差异。
经LPS刺激后,与对照组相比,RNA 干扰组CD80、CD86及MHCⅡ分子的表达,TNFα、IFNγ及IL12的浓度及T细胞增殖能力均显著下降,且未见明显NFκB核转位。
结论:RNA干扰技术能显著下调小鼠DCMyD88的表达,并显著抑制LPS促DC成熟的效应,为以DCMyD88为靶向、相关疾病的基因治疗提供了新思路和手段。
关键词]树突状细胞;MyD88;RNA干扰;脂多糖树突状细胞(dendriticcell,DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC),又是惟一能活化初始型T细胞的APC1]。
它活化初始T细胞的能力依赖其成熟状态。
最近研究表明,Toll样受体（TLR）及其信号途径在调控DC的成熟过程中起重要作用,是联结固有免疫和适应性免疫的桥梁2],参与了炎症、肿瘤、自身免疫性疾病及移植排斥反应等多种病理生理过程。
髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88,MyD88）是TLR信号传导过程中重要的转载分子,它的缺陷可导致TLR信号传导中断,以MyD88为靶向阻断TLR 信号通路可能为治疗上述疾病提供新方法。
RNA干扰（RNAinterference,RNAi）是新近发现的基因技术,可通过双链RNA(dsRNA)介导特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后的基因沉默,现今被广泛应用于基因功能研究3,4],同时在肿瘤、病毒性疾病、心脏病和糖尿病的基因治疗方面具有广阔的前景。
我们针对Toll样受体信号途径中的衔接分子MyD88,应用RNA干扰技术干预,观察其对DC 表达MyD88的影响,旨在设计并获得能够特异下调MyD88基因表达的小干扰RNA（smallinterferenceRNA,siRNA）,并进一步观察其对小鼠骨髓DC生物学活性的影响,以期获得耐受性DC,为DC的临床应用提供新思路和理论依据。
1材料和方法1.1材料近交系BALB/c小鼠,6～10周龄,购自华中科技大学同济医学院器官移植研究所。
DC2.4细胞系购于华中科技大学同济医学院细胞工程室,100mL/LFCS和RMPI1640培养液为GIBCO公司产品,辣根过氧化物酶偶联羊抗兔IgG抗体及羊抗小鼠IgG抗体(北京中山生物技术有限公司),ECL增强型化学发光显色试剂盒(美国Pierce公司),RTPCR试剂盒(晶美公司),BCA蛋白浓度测定试剂盒(江苏海门碧云天生物技术有限公司),FITC标记的抗小鼠CD80及CD86购自BioLegend公司,FITC标记的抗小鼠MHCⅡ类分子抗体（antimouseIAd）购自PharMingen公司,小鼠细胞因子定量检测ELISA试剂盒购自晶美公司,抗小鼠NFκB/P65抗体及MyD88抗体购于LABVISION公司。
其他试剂均为进口或国产分析纯。
1.2方法1.2.1siRNA的设计及合成由上海吉玛制药公司化学合成3对siRNA（序列1～3）及一段无义对照siRNA(错配siRNA),即序列1为sense:5＇GCCUAUCGCUGUUCUUGAA3＇,antisense:5＇UUCAAGAACAGCGAUAGGC3＇;序列2为sense:5＇CAGCGAGCUAAUUGAGAAA3＇,antisense:5＇UUUCUCAAUUAGCUCGCUG3＇;序列3为:sense:5＇GACUGAUUCCUAUUAAAUA3＇,antisense:5＇UAUUUAAUAGGAAUCAGUC3＇;无义对照为sense:5＇UUCUCCGAACGUGUCACGU3＇,antisense:5＇ACGUGACACGUUCGGAGAA3＇。
转染试剂RNAimate为上海吉玛制药公司产品,所有序列均带有荧光标记。
1.2.2DC2.4细胞培养及siRNA转染DC2.4细胞常规培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中,于37℃、50mL/LCO2培养箱中培养;每3d 用2.5g/L胰酶消化传代,将DC2.4细胞接种于6孔板,生长至50%～60%融合时分为6组:空白对照组、脂质体对照组、无义siRNA对照组、序列1组、序列2组及序列3组。
空白对照组不加任何干预措施,脂质体对照组中仅加入转染试剂RNAimate,后4组行基因转染。
转染方法:于500μL的无血清培养基中稀释5μgsiRNA,加入15μgRNAimate试剂,温育30min使复合物形成;将上述体系加入含DC2.4细胞的6孔板中,终体积为2mL,细胞继续培养48h,荧光显微镜检测转染效率,并收获细胞提取mRNA和蛋白质。
1.2.3细胞总RNA提取和半定量RTPCR分析MyD88mRNA的表达用TRIzol 试剂裂解细胞并提取细胞总RNA(按TRIzol说明书操作)5]。
每组取1μgmRNA用于逆转录反应。
MyD88引物正义链:5＇CCTTTATCTGCTACTGCCCCAACGA3＇,反义链:5＇GTGATGAACCGCAGGATACTGGGAAA3＇;内参照GAPDH引物正义链:5＇ACCACAGTCCATGCCATCAC3＇,反义链:5＇TCACCACCCTGTTGCTGTA3＇。
MyD88、GAPDH反应条件如下:94℃、30s,53℃、30s,72℃、1min,退火温度56℃,余条件相同,扩增25个循环,在PCR反应达到平台期之前中止以达到半定量作用。