枸杞多糖对人外周血巨噬细胞活性的影响
枸杞多糖的结构与生物活性研究
枸杞多糖的结构与生物活性研究随着人们生活水平的提高，人们的健康意识也逐渐增强。
枸杞作为一种具有多种保健功效的传统中药材，因其含有丰富的多糖而备受关注。
枸杞中的多糖以枸杞多糖为主要成分，其结构和生物活性成为当前热门的研究方向之一。
本文将从结构和生物活性两个方面介绍枸杞多糖的研究现状。
一、枸杞多糖的结构1.1 枸杞多糖的萃取方法枸杞多糖主要以酸、碱或酶解法进行萃取，其中，以酸法萃取得到的多糖含量最高。
萃取得到的多糖成分主要有枸杞多糖1、枸杞多糖2和枸杞多糖3三种类型，其中，枸杞多糖1为主要组分。
1.2 枸杞多糖的化学组成枸杞多糖的主要化学组成为多糖类物质，其中以多糖为主要成分。
多糖类物质是由单糖分子通过葡聚糖、木聚糖、半乳糖等多个分支链连接而成的高分子多糖，萃取得到的枸杞多糖中 mainly 以葡萄糖和甘露糖为主要单糖组成，同时还含有一定量的半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖等。
1.3 枸杞多糖的结构枸杞多糖的分子结构呈线性或分枝状，且其分子结构复杂，含有不同的糖链长度和不同的共价连接方式。
据文献报道，枸杞多糖含有α-葡萄糖-1，5-α-木糖、α-鼠李糖-1、4-α-半乳糖、或α-阿拉伯糖-1、3连接等不同的单糖顺序。
二、枸杞多糖的生物活性枸杞多糖具有多种生物活性，其中最为突出的有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血压等功效。
下面将从这几个方面简单介绍。
2.1 免疫调节研究发现，枸杞多糖能够增强机体免疫功能，提高T淋巴细胞的免疫活性。
同时，它还能够调节巨噬细胞的吞噬功能，促进巨噬细胞释放多种免疫因子，从而起到免疫调节作用。
2.2 抗肿瘤枸杞多糖在肝癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中均具有一定的抗肿瘤作用。
研究表明，枸杞多糖能够抑制癌细胞的生长和分裂，促进癌细胞的凋亡。
此外，它还能够调节人体免疫系统，增强机体对癌症的抵抗能力。
2.3 抗氧化枸杞多糖还具有较强的抗氧化能力，能够清除自由基及其产生的氧化物质，保护人体细胞免受氧化伤害。
枸杞多糖的提取和人体免疫调控研究
枸杞多糖的提取和人体免疫调控研究枸杞是一种传统的中药材，而枸杞多糖则是其主要成分之一，被广泛应用于中药制剂中。
近年来，随着免疫疗法的逐渐普及，枸杞多糖被认为是一种重要的免疫调节剂。
在此背景下，如何有效地提取枸杞多糖，并探索枸杞多糖对人体免疫调节的作用，成为了当前枸杞多糖研究的重要课题之一。
一、枸杞多糖的提取方法枸杞多糖是枸杞中的一种天然高分子化合物，其提取方法主要分为水提法、超声波提取法、微波提取法、酶解提取法、真空提取法等。
不同的提取方法对枸杞多糖的提取效率、产量、糖类组分等有着不同的影响。
因此，在提取枸杞多糖时，需要根据实验的具体目的和要求选择合适的提取方法。
水提法是常见的提取方法之一，其主要过程为将枸杞粉末与水混合，并进行适当的加热和搅拌，使枸杞多糖在水中溶解，并最终得到多糖粗提物。
这种提取方法简单易行，操作方便，但是相对于其他方法，其提取效率较低。
超声波提取法是利用超声波的物理效应进行提取的一种方法，其主要原理为利用超声波的震荡作用和旋转流体效应，使枸杞多糖从植物材料中脱离并汇集在液体中。
这种方法能够提高多糖的提取效率和产量，但是操作较为复杂。
微波提取法是一种利用微波的物理效应进行提取的方法，其主要原理为利用微波的电磁波能量对物质的温度进行提高，使多糖迅速溶解在液体中。
这种方法具有操作简单、提取效率高等优点，但是其技术要求较高，需要仔细控制微波功率、时间等参数。
酶解提取法是利用酶对纤维素等难以降解的物质进行分解，并将枸杞多糖提取出来的一种方法。
这种方法提取的多糖成分较为纯净，但是操作成本较高。
真空提取法是将枸杞粉末置于真空下，利用低压下的温度和压力变化，将多糖迅速从材料中挥发出来的一种方式。
这种方法能够提取多糖的同时保持原料的营养成分，但是提取效率较低。
二、枸杞多糖对人体免疫调节的作用枸杞多糖在免疫调节方面具有重要的作用。
研究表明，枸杞多糖能够诱导巨噬细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的活化，增强机体的免疫功能，提高机体抗病能力。
枸杞多糖功效与作用
枸杞多糖功效与作用枸杞多糖，又称枸杞多糖醣鎖，是从枸杞子中提取出来的一种多糖类物质，具有丰富的营养与药用价值。
自古以来，枸杞多糖就被广泛应用于中医药领域，被人们誉为“长寿圣果”。
它不仅在保健养生方面有很高的价值，同时也在疾病预防和治疗中发挥着重要的作用。
下面我们就来详细了解一下枸杞多糖的功效与作用。
首先，枸杞多糖具有补益肝肾的作用。
枸杞多糖中富含的多种氨基酸和微量元素，可以加强肝脏和肾脏的功能，促进血液循环，增强人体的免疫力。
常饮用枸杞多糖可以有效地减少肝脏和肾脏的负担，预防和治疗肝肾疾病。
其次，枸杞多糖对于眼睛的保护作用也是相当显著的。
枸杞多糖中富含的抗氧化物质和维生素C等成分，可以有效地阻止眼睛老化，预防和治疗眼睛疾病。
常饮用枸杞多糖可以明显改善眼睛疲劳、视力模糊等问题，保护和提高视力。
再次，枸杞多糖具有抗氧化和抗衰老的功效。
枸杞多糖中含有丰富的多酚类化合物和抗氧化物质，可以中和体内自由基，减缓细胞和组织的氧化损伤，从而延缓衰老过程。
常饮用枸杞多糖可以提高皮肤的弹性和光泽，减少皱纹和斑点的出现，保持年轻健康的外貌。
此外，枸杞多糖还具有提高性功能和促进生殖健康的作用。
枸杞多糖中含有丰富的锌元素，可以提高性腺机能，增强性欲和性能力。
同时，枸杞多糖还对男性前列腺功能的改善、女性月经调节等方面都有一定的益处。
所以，常饮用枸杞多糖能够维护人体的生殖健康，增强生育力。
此外，枸杞多糖还具有调节血压、降低血糖和改善睡眠质量的作用。
枸杞多糖中的多种成分可以有效地调节人体血压和血糖，预防和治疗高血压、糖尿病等疾病。
同时，枸杞多糖还可以促进睡眠，改善人们的睡眠质量，缓解失眠和多梦等问题。
最后，枸杞多糖还具有抗肿瘤和抗癌的作用。
枸杞多糖中的多种活性成分可以抑制癌细胞的生长和分裂，促进机体对癌细胞的免疫反应。
常饮用枸杞多糖可以降低癌症发生的风险，辅助癌症的治疗，提高生存质量和生存时间。
总而言之，枸杞多糖具有非常丰富和广泛的功效与作用。
枸杞多糖治疗功效
免疫调节LBP通过多种方式影响免疫调节功能。
通过分离和纯化枸杞多糖含有一种蛋白多糖复合物LBP3p，具有免疫刺激作用。
LBP 3p能增加人类外周血单核细胞中IL 2和TNF α的表达，mRNA和蛋白水平都与LBP呈剂量相关，表明其具有增强免疫和潜在抗肿瘤作用。
LBP 3p可以抑制移植性S180肉瘤的生长，增加巨噬细胞的噬菌能力、脾巨噬细胞的增殖和脾细胞的抗体分泌、受损T巨噬细胞的活力、IL 2 mRNA的表达和降低脂质过氧化。
有一项研究证明，LBP能调节小鼠骨髓树突细胞的表型和功能成熟，树突细胞是体内重要抗原呈递细胞,在启动初次免疫应答中具有重要的作用。
抗肿瘤LBP能抑制多种肿瘤的生长，LBP可以通过激活机体的免疫系统来达到抗肿瘤目的。
LBP 3p通过增加免疫和降低脂质过氧化显著抑制S180肉瘤的生长，研究表明LBP的抗肿瘤作用与调节钙离子浓度有关，对人类肝癌QGY7703细胞株的研究表明，LBP能在分裂循环的S期抑制QGY7703细胞的增殖并能诱导其凋亡，细胞内RNA的量和钙离子浓度上升，还能使细胞内钙离子的分布改变。
LBP可以抑制前列腺癌细胞的生长，引起癌细胞DNA断裂，破坏DNA 蛋白表，体内实验表明LBP可以抑制肿瘤的生长。
也有研究发现枸杞提取物可促进肝癌细胞的死亡。
调节血脂和降血糖作用众多研究发现，枸杞多糖可降低非胰岛素依赖型糖尿病患者的血糖和血清中的丙二醛及一氧化氮的含量，并显著提高血清中的超氧化物歧化酶含量，减少外围淋巴细胞的DNA 损伤。
枸杞多糖能降低四氧嘧啶诱导的糖尿病兔血糖和血脂的水平，降低血脂和血糖水平。
研究表明含量20～50mg的枸杞多糖在诱发性糖尿病中有保护肝脏和肾脏组织的作用，显示枸杞多糖是良好的降血糖物质。
枸杞多糖在诱发性糖尿病中能有效减轻胰岛素抵抗，降低血液中甘油三酯、胆固醇的含量，增加和激活骨骼肌细胞表面的葡萄糖转运体4(GLUT4)活性和含量，有效提高细胞内GLUT4的转运葡萄糖和胰岛素水平。
枸杞多糖对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响
胞 增 殖的影响 ； Ｔ Ｐ Ｒ法检 测 Ｌ Ｐ对 一 Ｒ —Ｃ Ｂ 干扰 素（Ｉ Ｆ￣ ｍ Ｎ Ｎ ． ） Ｒ Ａ表 达 的影响 ； ＬＳ ／ Ｅ ＩＡ法检 测 Ｌ Ｐ 作 用后淋 巴细胞 Ｂｓ
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枸杞多糖通过诱导巨噬细胞极化抗胰腺癌的研究
枸杞多糖通过诱导巨噬细胞极化抗胰腺癌的研究杨青;白光;王巍;包翠芬;翟振华【摘要】Objective To explore the effects of lycium barbarum polysaccharide (LBP) on restraining the mouse pancre⁃atic cancer cells LTPA by the polarization of macrophages to type 1 macrophages (M1). Methods LTPA tumor model of the subcutaneous CB-17SCID mice was constructed. Model mice were randomly divided into tumor-bearing model group (n=10) and LBP treatment group (n=10). The LBP treatment group was fed 10mg/kg LBP every day, and the tumor-bearing model group was fed the same dose of normal saline. The same amount of macrophages Raw264.7 was randomly divided into the control group and experimental groups (different concentrations of LBP). MTT assay was used to detect the optical density (OD) of Raw264.7 in experimental groups and control group. ELISA was used to detect the levels of the interleukin (IL)-12 and IL-10 in experimental group (LBP was 100 mg/L) and the control group. Flow cytometry was used to test the levels of the membrane proteinCD16/32 and CD206 in experimental group (LBP was 100 mg/L) and the control group. The tumor mass was weighted and the volume was calculated after three weeks. The effects of LBP on the growth of subcutaneous tumor were detected. HE staining and KI-67 staining were used to detect the microscopic changes of tumor and the proliferation of the LTPA. Results The dose of 100 mg/L LBP can promote the growth of the macrophages Raw264.7 (P<0.01), and induced the high expression ofCD16/32 and low expression of CD206, high secretion of IL-12 and low secretion of IL-10. The weight, volume of the tumor and the expression of KI-67 were significantly lower in experimental group than those in the con⁃trol group (P<0.01). The microscopic necrosis area range of tumor was larger than that of control group. Conclusion The LBP has the effect of restraining LTPA by the polarization of macrophages to M1.%目的：探讨枸杞多糖（LBP）通过诱导巨噬细胞极化成一型巨噬细胞（M1）抗小鼠胰腺癌细胞LTPA的功效。
枸杞多糖生物活性的研究进展
枸杞子为枸杞的干燥成熟果实，系茄科(Solanaceae )、茄族(Solanceae Reihb )、枸杞亚族(Lyciinae Wettst )、枸杞属(Lycium L.)，最负盛名的是宁夏枸杞(Lycium barbarum L .)。
枸杞子是我国的传统名贵中药材，它在我国传统医学中具有重要的地位，其药用价值备受历代医家的推崇。
枸杞子的药理和保健作用与其中含有的生物活性物质枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide ，LBP ）有很大关系。
根据检索的文献可见，从中医到西医，从国内到国外，枸杞多糖都是近年来研究枸杞药理和保健作用的主要点。
现代科学研究表明，枸杞多糖具有调节免疫、清除自由基、抑制肿瘤、延缓衰老、降血脂、降血糖、降血压和抗疲劳等作用[1,2]，笔者综述了枸杞多糖在生物活性方面新的研究进展，以期为枸杞多糖的进一步开发研究提供参考。
1 枸杞多糖的生物活性1.1 抗氧化及抗衰老作用LBP 的抗氧化功能已经在大量的动物实验中被证实。
纯化的枸杞多糖LBP 具有强力清除DPPH 自由基的活性，此外，老年动物口服30dLBP ，结果清楚地表明，LBP 具有抗氧化活性和对皮肤氧化损伤的保护作用[3]。
龚涛等[4]用高(400mg/kg ·d)、中(200mg/kg ·d)、低(100mg/kg ·d)3个剂量的枸杞粗多糖生理盐水溶液对D-半乳糖(100mg/kg ·d)致衰老模型小鼠和正常小鼠灌胃，连续灌胃30d ，测定结果表明，枸杞粗多糖能较显著(P<0. 01)提高小鼠血清、肝脏及脑组织中SOD 活性，降低MDA 含量，对小鼠具有显著的抗氧化、抗衰老作用。
邵鸿娥等[5]在枸杞多糖对小鼠体内抗氧化酶活性及耐力的影响枸杞多糖生物活性的研究进展燕宪涛，路新国（扬州大学旅游烹饪学院，江苏扬州 225127）的实验中也发现，LBP 可使小鼠血中SOD 活性明显升高、MDA 含量明显降低，认为LBP 具有良好的体内抗氧化作用，可以延缓衰老。
枸杞多糖的药理作用概况分析
枸杞多糖的药理作用概况分析枸杞多糖的生物活性主要有降血糖，止血，降血脂，抗菌，调节免疫，抗氧化，利尿等作用，其中对于降血脂的作用机制有了详细具体的研究。
通过对枸杞多糖的结构特征和降血脂作用的探索可知，枸杞多糖主要由以下多糖构成，D-木糖、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖等，枸杞多糖主要通过(1→6)和(1→3)键结合，各种单糖均匀分布在主链和侧链中。
而且，枸杞多糖既没有三螺旋结构，也没有分子聚集。
重要的是，枸杞多糖能有效地结合体外胆汁酸，可以显著降低胆固醇水平。
多糖类化合物在枸杞干重中占重要比例，枸杞多糖的组成种类有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、果糖和来苏糖，所有组分表现出不同的物理性质，如分子量、特性粘度、粒径和微观结构，此外，每种糖具有的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性也不同。
其中多糖中含量较高的为葡萄糖和半乳糖。
糖尿病的蔓延给社会和公共卫生部门带来了沉重负担。
查阅资料发现大约有800种植物可用作降糖药的有效成分。
例如，仙人掌的树皮提取物、鹅掌、枸杞优于抗链脲佐菌素诱导的糖尿病糖尿病对大鼠有影响。
玉米须是一种著名的传统草药，它可以用于制造保健食品和药品。
多糖是非常重要的生化成分，在生物体的生长发育中起着重要作用。
由于具有多种生物学功能，例如抑制肿瘤生长和抗糖尿病能力。
因此，研究玉米须的多糖活性具有重要意义。
众所周知，许多目前正在使用的降糖药物，大部分是通过抑制α-葡萄糖苷酶发挥其抗糖尿病作用，如阿卡波糖、脱氧诺吉霉素和福格列波糖。
然而，由于这些目前使用的抗糖尿病药物的潜在副作用，如胃肠道不适，寻找低或无毒副作用的替代品是可取的。
所以，从植物中提取天然多糖成为越来越多人的研究方向。
现有的可用于癌症治疗的化学治疗剂都有很多的副作用，例如脱发，贫血，免疫缺陷，疲劳，周围神经病，生育力问题和神经系统问题等，严重的甚至威胁生命而且病人也会异常痛苦。
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·临床研究·枸杞多糖对人外周血巨噬细胞活性的影响许忠新１，单铁英１，苏安英１，杨书良２（河北工程大学医学院：１．人体解剖学与组织胚胎学系；２．病理学系，邯郸０５６００２） 摘 要：目的 研究枸杞多糖（ＬＢＰ）对正常人外周血巨噬细胞功能的影响。
方法 无菌分离人外周血单核细胞，加入植物血凝素（ＰＨＡ）和不同质量浓度的ＬＢＰ，用ＭＴＴ法检测巨噬细胞对肝癌细胞株Ｂｅｌ－７４０２生长的影响，ＥＬＩＳＡ法检测ＬＢＰ作用后巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）水平。
结果 用ＬＢＰ处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能增强，８０、１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ刺激后巨噬细胞吞噬作用明显增强（Ｐ＜０．０１）。
８０、１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ组肿瘤细胞与巨噬细胞培养上清液中ＴＮＦ－α水平明显增高（Ｐ＜０．０１），证实该作用可能与ＬＢＰ促进巨噬细胞分泌ＴＮＦ－α增多有关。
结论 ＬＢＰ能增强人外周血巨噬细胞免疫功能，发挥抗肿瘤作用。
关键词：枸杞多糖；外周血；巨噬细胞；功能ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０１０．１６．０４４中图分类号：Ｒ７３０．５１；Ｒ７３０．２３文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－８３４８（２０１０）１６－２１７７－０２Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒａｒｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓＸＵ Ｚｈｏｎｇ－ｘｉｎ１，ＳＨＡＮ Ｔｉｅ－ｙｉｎｇ１，ＳＵ Ａｎ－ｙｉｎｇ１，ｅｔ ａｌ．（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏ－Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｈａｔｈｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｂｅｉ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｄａｎ，Ｈｅｂｅｉ ０５６００２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒａｒｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＬＢＰ）ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍａｃｒｏｐｈａ－ｇｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｏｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ（ＰＨＡ）ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒ－ｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＢＰ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＬＢＰ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｔｏ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ Ｂｅｌ－７４０２ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ．ＴＮＦ－αｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｆｔｅｒ ＬＢＰ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈ ＥＬＩＳＡ ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＬＢＰ ｃｏｕｌｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ ｔｈｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ，Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆ－ｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｂｙ ８０，１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－αｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｆｔｅｒ ＬＢＰ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗａｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ８０，１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０１）．ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＮＦ－αｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＬＢＰ ｃｏｕｌｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｆｒｏｍ ｈｕ－ｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ，ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｋｉｌｌｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒａｒｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ；ｆｕｎｃｔｉｏｎ 枸杞多糖（ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒａｒｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＢＰ）是传统中药材枸杞的主要成分之一，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖等６种单糖组成。
有研究证明，多糖成分（如云菇多糖、灵芝多糖等）可通过激活机体免疫系统来达到抗肿瘤目的［１－５］。
对于ＬＢＰ抑制肿瘤的免疫调节作用及免疫机制尚不十分清楚。
本文主要以ＬＢＰ为材料研究其对人外周血巨噬细胞免疫调节作用，为进一步开发免疫增强剂的抗肿瘤药物提供参考。
１ 材料与方法１．１ 材料 健康人外周血采自２０～３０岁健康志愿者。
人肝癌细胞株Ｂｅｌ－７４０２由作者提供。
ＬＢＰ由本校实验中心从宁夏优质枸杞子中分离提取。
人重组白介素－２（ｒＩＬ－２）购自美国Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司。
ＲＰＭＩ－１６４０为Ｇｉｂｃｏ公司产品。
ＭＴＴ试剂均为Ｓｉｇｍａ公司产品。
肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、ＥＬＩＳＡ试剂盒购自晶美生物工程有限公司。
淋巴细胞分离液为上海生化试剂二厂产品。
胎牛血清（ＦＢＳ）为杭州四季青公司产品。
１．２ 分离人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ） 无菌采取健康人外周血约５ｍＬ，予肝素抗凝，加入等体积磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）混匀，用淋巴细胞分离液经密度梯度离心法分离外周血ＰＢ－ＭＣ［６］，取白细胞层用ＰＢＳ洗涤２次，加入含１０％ＦＢＳ的ＲＰ－ＭＩ－１６４０培养基，置于饱和湿度、３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养２ｈ，贴壁细胞作为巨噬细胞。
１．３ 分析巨噬细胞吞噬作用和测定细胞因子分泌 将培养的巨噬细胞用ＲＰＭＩ－１６４０培养基调整细胞浓度为２．５×１０６个／ｍＬ，接种于９６孔培养板中，每孔８０μＬ，实验孔分别加入２０μＬ对照剂（培养基及２０μｇ／ｍＬ ｒＩＬ－２）和不同浓度（５０、６０、８０、１００μｇ／ｍＬ）ＬＢＰ，培养２４ｈ后分别加入Ｂｅｌ－７４０２细胞悬液（１×１０５个／ｍＬ）１００μＬ，使效、靶比为２０∶１。
每孔液体终体积为２００μＬ，不足者用培养基补齐，每组均设４个复孔。
置于饱和湿度、３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养４８ｈ后进行如下处理：（１）取各组培养上清液１００μＬ，用ＥＬＩＳＡ测定ＴＮＦ－α水平；（２）各孔加ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍＬ）２０μＬ，培养过夜，离心弃去培养上清液，每孔加入ＤＭＳＯ １５０μＬ，混匀后以测定波长为４９２ｎｍ、参比波长为６２０ｎｍ检测各孔Ａ值，并计算对肿瘤细胞的抑制率。
抑制率＝［１－（肿瘤细胞与巨噬细胞混合孔Ａ值－巨噬细胞孔Ａ值）／肿瘤细胞孔Ａ值］×１００％。
１．４ 统计学方法 采用ＳＰＳＳ１１．５统计软件进行单因素方差分析和ＬＳＤ，实验结果以ｘ±ｓ表示。
２ 结 果２．１ ＬＢＰ对人外周血巨噬细胞吞噬作用的影响 经不同浓度ＬＢＰ作用７２ｈ后巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用明显增强（Ｐ＜０．０１），８０、１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ刺激后巨噬细胞的吞噬作用明显大于ｒＩＬ－２组（Ｐ＜０．０１），见表１。
７７１２重庆医学２０１０年８月第３９卷第１６期表１ ＬＢＰ对人外周血巨噬细胞吞噬作用的影响（ｎ＝４）组别Ａ值（ｘ±ｓ）巨噬细胞＋肿瘤细胞巨噬细胞肿瘤细胞肿瘤细胞抑制率（％）对照组０．８２６±０．０４５ ０．１６５±０．０１４ ０．７０３±０．０３８ ５．９７ｒＩＬ－２组０．５２１±０．００４＊０．２０１±０．００７ ０．５６８±０．００９ ４３．６６＊ＬＢＰ组（μｇ／ｍＬ） ５０ ０．７３１±０．０１４＊０．１５２±０．０１６ ０．６８８±０．０２７ １５．８４＊ ６０ ０．７０２±０．０３１＊０．１５８±０．００８ ０．６８５±０．０１０ ２０．５８＊ ８０ ０．５４０±０．０２１＊０．１８４±０．０１１ ０．６９４±０．００７ ４８．７０＊ １００ ０．５２７±０．０１２＊０．２０５±０．００５ ０．７００±０．０１４ ５４．００＊ ＊：与对照组比较，Ｐ＜０．０１。
２．２ ＬＢＰ对人外周血巨噬细胞ＴＮＦ－α的影响 经不同浓度ＬＢＰ作用７２ｈ后ＬＢＰ组肿瘤细胞与巨噬细胞培养上清液中ＴＮＦ－α水平明显增高（Ｐ＜０．０１），８０、１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ组肿瘤细胞与巨噬细胞培养上清液中ＴＮＦ－α量与对照组比较明显增高（Ｐ＜０．０１），但８０、１００μｇ／ｍＬ ＬＢＰ组与ｒＩＬ－２组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），见图１。
＊：与对照组比较，Ｐ＜０．０１。
图１ ＬＢＰ对人外周血巨噬细胞ＴＮＦ－α的影响（ｎ＝６）。
３ 讨 论肿瘤患者在接受放、化疗时射线和药物对机体的免疫系统有抑制作用，致使机体免疫功能进一步下降，影响了治疗效果并可导致一些不良反应，所以解决肿瘤患者免疫功能低下问题成为肿瘤治疗的非常关键的环节。
最近国内外学者提出生物反应调节剂（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｍｏｄｉｆｉｅｒ，ＢＲＭ）的概念，强调在肿瘤放、化疗及手术治疗同时应用ＢＲＭ，不但能提高患者免疫功能，还可减轻上述治疗对免疫系统及造血系统的损害，从而提高治疗效果。
在我国，中药取自天然，来源广泛，容易获得，不良反应小，因此从中药中提取有效成分作为ＢＲＭ显示出明显优势。
ＬＢＰ具有很好的免疫促进作用，为进一步研究其作用机制，本文研究了ＬＢＰ对外周血巨噬细胞增殖及功能的影响。
ＴＮＦ－α能够直接杀死病毒和肿瘤，最近文献指出，ＴＮＦ－α在ＣＤ８＋Ｔ细胞的成熟阶段发挥重要的信号作用，ＴＮＦ－α缺乏时会导致效应性ＣＤ８＋Ｔ细胞产生下降，影响其转化为记忆性Ｔ细胞［７］。
可见ＴＮＦ－α除了对肿瘤细胞具有直接毒性和生长抑制作用外，还可以通过增强ＣＤ８＋Ｔ细胞的细胞毒作用抵抗肿瘤生长。
本研究结果显示，在５０～１００μｇ／ｍＬ浓度下ＬＢＰ可明显提高巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能，并增强巨噬细胞ＴＮＦ－α的分泌。