碱性磷酸酶(ALP) SFBC速率法
血清碱性磷酸酶磷酸对硝基苯酚法测定
血清碱性磷酸酶（ALP）磷酸对硝基苯酚法测定1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 6×64 ml ＋试剂2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液0.90mol/L（pH:10.4）醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
碱性磷酸酶km值测定实验报告
碱性磷酸酶km值测定实验报告碱性磷酸酶 Km 值测定实验报告一、实验目的1、掌握测定碱性磷酸酶（ALP）Km 值的原理和方法。
2、了解底物浓度对酶促反应速度的影响。
3、熟悉分光光度计的使用。
二、实验原理碱性磷酸酶是一种广泛分布于人体各脏器器官中的酶，在骨、肝、肠、胎盘等组织中含量较高。
它能催化磷酸酯的水解反应，产生无机磷酸和醇、酚等物质。
在酶促反应中，反应速度（v）与底物浓度S之间的关系可用米氏方程表示：v ＝ VmaxS ／（Km ＋ S) ，其中 Vmax 为最大反应速度，Km 为米氏常数。
Km 值是酶的一个重要特征常数，它表示酶与底物的亲和力。
Km 值越小，酶与底物的亲和力越大；反之，Km 值越大，酶与底物的亲和力越小。
本实验通过测定不同底物浓度下的酶促反应速度，以反应速度 v 对底物浓度S作图，通过双倒数作图法（LineweaverBurk 作图法），即1/v 对 1/S作图，可求得碱性磷酸酶的 Km 值。
三、实验材料与仪器1、材料碱性磷酸酶提取液磷酸苯二钠溶液（不同浓度）01mol/L 氢氧化钠溶液004mol/L 碳酸钠溶液05mol/L 三氯乙酸溶液2、仪器分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、准备试剂配制不同浓度的磷酸苯二钠溶液：0005mol/L、001mol/L、002mol/L、003mol/L、004mol/L。
配制显色剂：将 01mol/L 氢氧化钠溶液和 004mol/L 碳酸钠溶液按4:1 的体积比混合。
2、反应体系设置取 7 支干净的试管，按下表加入试剂：｜试管编号|1|2|3|4|5|6|7|｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜磷酸苯二钠溶液（mL）｜000|020|040|060|080|100|＿____|｜蒸馏水（mL）｜100|080|060|040|020|000|＿____|｜37℃预温5min 后，各加入05mL 碱性磷酸酶提取液，立即混匀，37℃水浴准确反应 15min|｜反应结束后，各加入 05mL 05mol/L 三氯乙酸溶液终止反应|3、显色与比色各管加入 45mL 显色剂，充分摇匀。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。
产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
血清碱性磷酸酶(ALP)
血清碱性磷酸酶（ALP）血清碱性磷酸酶（ALP）介绍：血清碱性磷酸酶正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自肝和骨骼，碱性磷酸酶测定主要用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，是反映肝外胆道梗阻、肝内占位性病变和佝偻病的重要指标。
血清碱性磷酸酶（ALP）正常值：(1)酶速率法(37℃)：成人：40～160U/L；儿童：<350U/L；(2)磷酸苯二钠法：成人：3～13Kat单位；儿童：5～30kat单位；(3)动态法：成人：20~110U/L；青少年：1.男性：<750U/L；2.女性：<500U/L；儿童：<500U/L；婴儿：50~240U/L。
(注：具体参考值请根据各实验室而定。
)血清碱性磷酸酶（ALP）临床意义：(1)升高：①无黄疸：肝硬化、肝细胞癌、胆管疾病(胆管癌，肝内结石)、局限性肝损害(转移性肝癌、肝脓疡、肉芽肿性肝损伤)、其他肝疾病(慢性肝炎、脂肪肝)、骨疾病(佝偻病骨软化症、或骨肉瘤)、转移性骨癌、甲状腺功能亢进症，甲状旁腺功能亢进症，慢性肾功能健康搜索不全，恶性肿瘤(骨、肝转移)等。
②有黄疸：病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损害、肝炎病毒以外的病毒引起的肝损害、原发性胆汁性肝硬化、其他肝内胆汁瘀滞、阻塞性黄疸(胆管癌、胆管细胞癌、胰头癌，总胆管结石火罐网，硬化性胆管炎)。
(2)降低：牛奶-碱综合征、坏血病、甲状腺功能减退症、维生素D 摄入过多、恶性贫血、重症慢性肾炎、呆小病、恶病质等。
血清碱性磷酸酶（ALP）注意事项：1、空腹抽血，抽血前禁食10小时。
2、使用某些药物如避孕药等可引起ALP结果升高。
血清碱性磷酸酶（ALP）检查过程：暂无相关信息。
血清酶学改变诊断详述
血清酶学改变诊断详述
*导读：血清酶学改变症状的临床表现和初步诊断?如何缓解和预防？
血清酶学检查：
1、丙氨酸转氨酶(ALT)
[正常参考值]
速率法(酶法)：5-35IU/L。
2、天门冬氨酸转氨酶(AST)
[正常参考值]
速率法(酶法)：10-36IU/L。
3、碱性磷酸酶(ALP)
[正常参考值]
速率法：50-170IU/L。
4、乳酸脱氢酶(LDH)
[正常参考值]
速率法：55-135U/L。
急性一氧化碳中毒和急性脑出血急性期都会引起血清酶学的改变。
急性一氧化碳中毒(ACMr)导致低氧血症可造成脑、心脏、肝等
系统的缺氧,不但引起心电图特异改变,血清醉学变化也很明显。
脑出血是临床常见病和多发病,急性期有许多应激性改变,如血
清胃泌素增高,应激性血糖增高，血清酶学的改变。
迅速将病人转移到空气新鲜的地方，卧床休息，保暖，保持呼吸道通畅。
*结语：以上就是对于血清酶学改变的诊断，血清酶学改变怎么处理的相关内容介绍，更多有关血清酶学改变方面的知识，请继续关注或者站内搜索了解更多。
血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书
血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 上海奥林巴斯ALP测定试剂盒试剂1 ＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
碱性磷酸酶(ALP)
碱性磷酸酶锁定医学容仅供参考，不能视作专业意见。
网上任何关于疾病的建议都不能替代执业医师的当面诊断。
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织，。
这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。
其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。
血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。
生长期儿童血清的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。
1化学特征2有何影响3偏高的危害4升高5来源▪人体情况▪研究应用6测定方法7正常围8临床意义9药物意义10异常原因11抑制作用12肝胆疾病化学特征碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)细菌ALP二级结构现多用ALP系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase;glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase;orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphataseCAS 号: 9001-78-9碱性磷酸酶(AKP或ALP)属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。
每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。
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目录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂、校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
无色的对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下，生成在405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。
通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。
碱性磷酸酶
对硝基苯磷酸二钠+ H2O ----------------- 对硝基苯酚+ H3PO4
2．本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALP试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
3.2 校准血清：
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂、校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
当应用试剂空白吸光度高于0.7时，试剂按照失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。
参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长405nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为SFBC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
ΔA/min×Vt×1000
ALP(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F
e×Vs×d
式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率； e ——18.5 摩尔吸光系数；
Vt——反应液总体积（ml）；d ——1 比色杯光径（cm）；
1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 0.22%，批间CV< 3.4%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
碱性磷酸酶浓度为：400U/L时，吸光度变化率ΔA405nm/min为0.108～0.132。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:60时，测定上限为800U/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
40～150U/L。
9．临床意义
碱性磷酸酶测定试剂用于定量测定人体血清中碱性磷酸酶的活性。
碱性磷酸酶(ALP)几乎存在于人体的各个组织中。
正常人血清中的ALP主要来自骨骼，由成骨细胞产生。
故骨骼疾病，特别是当有新骨质生成时和正在生长的儿童期，血液内的ALP活性增高。
因为酶由肝脏排泄，且有部分酶来自肝脏，故肝胆疾病特别是胆道堵塞时ALP活性增高。
附录A: 参数。