血清碱性磷酸酶ALP测定
碱性磷酸酶(ALP)测定(速率法)标准化操作程序文件
碱性磷酸酶（ALP）测定（速率法）标准化操作程序文件1：概述碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP，是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。
它不是单一的酶，而是一组同功酶。
目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。
碱性磷酸酶（ALP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。
从大肠杆菌提取的AP分子量为80kD，酶作用的最适pH为8.0；用小牛肠黏膜提取的AP分子量为l00kD，最适pH为9.6.一般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。
它可制成片状试剂，使用方便。
产物为黄色的对硝基酚，在405nm有吸收峰。
用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。
2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3：方法原理样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。
4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量4 u/l 试剂量：第一试剂200 u/l（R1）；第二试剂50 u/l测光点23—38 测定模式：速率法正反应分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)6计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv=总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径（cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0----850U/L8 参考范围：男性：1---12岁《500 U/L12—15岁《750 U/L》25岁40--150 U/L女性：1---12岁《500 U/L》15岁40--150 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
血清碱性磷酸酶磷酸对硝基苯酚法测定
血清碱性磷酸酶（ALP）磷酸对硝基苯酚法测定1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 6×64 ml ＋试剂2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液0.90mol/L（pH:10.4）醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
ALP测定
三、实验用品
半自动生化分析仪
ALP测定试剂盒；
刻度吸管
微量加样器
人血清
目录
四、实验过程 按 表 加 量
试剂 工作液 蒸馏水 样品 空白管 样品管 1.00mL 1.00 mL 0.02 mL — — 0.02 mL
混匀，在反应温度37°C保温60秒，入=405nm处使用半自动生 化分析仪测定和读取ALP值（U/L） 。 正常参考值 37℃下，20-50岁男性：53-128；60岁以上男性：56-119 20-50岁女性：42-98； 60岁以上女性：53-141
目录
六、实验注意事项
1.血清标本新鲜，避免溶血；
2.正确操作半自动生化分析仪；
3.注意试剂安全，避免直接接触皮肤和 眼睛，切勿吞咽。
目录
半自动生化分析仪的使用
目录
目录
半自动生化分析仪的使用
吸液键 吸液管
目录
ห้องสมุดไป่ตู้录
目录
目录
目录
目录
目录
目录
目录
目录
目录
ALP
对硝基苯酚(4-NP)
＋磷酸盐
4-NPP在碱性溶液中为无色，在ALP催化下， 4-NPP水解产生游离的4-NP。 4-NP在碱性溶液中 转变为黄色，在405nm下有最大吸收峰。 4-NP 形成的速率与血清中ALP的活性成正比，测定 405nm处吸光度增加速率（△A/min），即可计 算ALP的活性。
目录
五、实验结果与分析
1、实验结果 2、实验分析 3、临床意义 正常人血清中ALP主要来自肝脏和骨骼，所 以ALP常作为作为肝胆疾病和骨骼疾病的辅助 诊断指标。 血清ALP活性病理性增高可见于： （1）肝胆疾病 阻塞性黄疸、胆道梗阻等； （2）骨骼疾病 佝偻病、骨质软化病等。 血清ALP活性生理性增高见于妊娠期与儿童 生长发育期。
血清碱性磷酸酶ALP测定
血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
血清碱性磷酸酶的活性测定
思考
结合参考值范围、临床意义分析本小组 的实验结果
12
1.生理性增加：如儿童、妊娠期、进食 高糖高脂肪食物等使ALP活性升高
2.病理性改变 A.升高：肝胆疾病（主要见于阻塞性黄
疸，急或慢性黄疸型肝炎，肝硬化，肝 癌） 骨骼疾病（纤维性骨炎、变型 性骨炎、成骨不全症、骨质软化病、佝 偻病、肿瘤骨转移等） B.降低:主要见于呆小症、磷酸酶过少症 等
8
计算公式
9
注意事项
1.铁氰化钾应避光保存，如出现蓝绿色 即作废。铁氰化钾 的水溶液受到光线 的作用，就会分解成黄血盐钾 K4[Fe(CN)6]
2.底物液中不应含有酚，如含有酚时空 白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解， 不宜继续使用
3.加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则 显色不充分
10
临床意义
6
试剂
碳酸盐缓冲液（0.1mol/L PH10.0) 无水碳 酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替 比林1.5g溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。 棕色瓶贮存。
磷酸苯二钠底物液（20mmol/L) 先将 500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠 2.18g，冷却后加氯仿2ml，4℃冰箱保存。
血清碱性磷酸酶活力的测定
磷酸苯二钠法
1
实验目的
1.熟悉酶活力测定方法的一般原理 2.掌握血清碱性磷酸酶(ALP)的测定原理
与临床意义。 3.酶活力测定的目的是了解组织提取液、
体液中酶的存在于含量。
2
实验原理
一.基本概念 1.酶活力测定 酶的催化功能可以用在一定条件下
酶所催化的某一特定化学反应的速度来表示。反 应速度越快，酶活力越高;反之，活力越低。测定 酶活力实际上是测定酶促反应速率。 2.酶的活力单位 a.国际 在特定的条件下，1min内将1μmol底物转 化为产物所需的酶量为1个国际单位(IU)。 1IU=16.67×10-9Katal b.临床上采用金氏（Kings）的定义：每100ml血清 在37℃与底物作用15min，产生苯酚1mg的酶量为1 个金氏单位。 c.Kat单位 在特定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量。1Kat=6×107 IU
alp参考值
alp参考值
ALP参考值是指血清碱性磷酸酶的正常范围，它是一种酶类蛋白质，主要存在于肝脏、骨骼、肠道和胆道等组织中。
ALP参考值的测定可以帮助医生判断患者的肝功能、骨代谢和胆道疾病等情况。
在正常情况下，成人的ALP参考值一般在40-150 U/L之间，但是不同的实验室可能会有略微不同的参考值范围。
如果ALP参考值超出正常范围，可能意味着患者存在某些疾病或病理情况。
高于正常范围的ALP参考值可能是肝功能异常的表现。
肝脏是人体内最重要的代谢器官之一，如果肝脏受到损伤或疾病的影响，就会导致肝功能异常，从而使ALP参考值升高。
常见的肝脏疾病包括肝炎、肝硬化、肝癌等。
高于正常范围的ALP参考值也可能是骨代谢异常的表现。
骨骼是人体内最重要的支撑结构之一，如果骨骼受到损伤或疾病的影响，就会导致骨代谢异常，从而使ALP参考值升高。
常见的骨骼疾病包括骨质疏松、骨折等。
高于正常范围的ALP参考值还可能是胆道疾病的表现。
胆道是人体内最重要的消化器官之一，如果胆道受到损伤或疾病的影响，就会导致胆道疾病，从而使ALP参考值升高。
常见的胆道疾病包括胆囊炎、胆管炎等。
ALP参考值是衡量人体内肝功能、骨代谢和胆道疾病等情况的重要
指标之一。
如果ALP参考值超出正常范围，需要及时就医，进行进一步的检查和治疗。
同时，我们也应该注意保持健康的生活方式，预防肝脏疾病、骨骼疾病和胆道疾病的发生。
血清碱性磷酸酶(ALP)
血清碱性磷酸酶（ALP）血清碱性磷酸酶（ALP）介绍：血清碱性磷酸酶正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自肝和骨骼，碱性磷酸酶测定主要用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，是反映肝外胆道梗阻、肝内占位性病变和佝偻病的重要指标。
血清碱性磷酸酶（ALP）正常值：(1)酶速率法(37℃)：成人：40～160U/L；儿童：<350U/L；(2)磷酸苯二钠法：成人：3～13Kat单位；儿童：5～30kat单位；(3)动态法：成人：20~110U/L；青少年：1.男性：<750U/L；2.女性：<500U/L；儿童：<500U/L；婴儿：50~240U/L。
(注：具体参考值请根据各实验室而定。
)血清碱性磷酸酶（ALP）临床意义：(1)升高：①无黄疸：肝硬化、肝细胞癌、胆管疾病(胆管癌，肝内结石)、局限性肝损害(转移性肝癌、肝脓疡、肉芽肿性肝损伤)、其他肝疾病(慢性肝炎、脂肪肝)、骨疾病(佝偻病骨软化症、或骨肉瘤)、转移性骨癌、甲状腺功能亢进症，甲状旁腺功能亢进症，慢性肾功能健康搜索不全，恶性肿瘤(骨、肝转移)等。
②有黄疸：病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损害、肝炎病毒以外的病毒引起的肝损害、原发性胆汁性肝硬化、其他肝内胆汁瘀滞、阻塞性黄疸(胆管癌、胆管细胞癌、胰头癌，总胆管结石火罐网，硬化性胆管炎)。
(2)降低：牛奶-碱综合征、坏血病、甲状腺功能减退症、维生素D 摄入过多、恶性贫血、重症慢性肾炎、呆小病、恶病质等。
血清碱性磷酸酶（ALP）注意事项：1、空腹抽血，抽血前禁食10小时。
2、使用某些药物如避孕药等可引起ALP结果升高。
血清碱性磷酸酶（ALP）检查过程：暂无相关信息。
血清碱性磷酸酶(ALP)—生化检测项目
血清碱性磷酸酶（ALP）
一、检测原理
ALP水解磷酸对硝基苯酯（PNPP）形成硝基苯酚，硝基苯酚吸光度与ALP的活性成正比，加入2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液维持反应的PH值10.3—10.4，AMP中镁离子及锌离子起激活、维持酶反应。
二、参考区间
血清：男性46—125U/L 女性35—135U/L
三、临床意义
1、各种肝内外胆管阻塞性疾病如胰头癌、胆道结石引起的胆管阻塞，原发性胆汁性肝硬化，肝内胆汁淤积等，碱性磷酸酶明显升高，并且与血清胆红素升高相平行。
2、用于鉴别黄疸的鉴别诊断，碱性磷酸酶转氨酶血清胆红素同时测定有助于黄疸的鉴别诊断。
3、骨骼疾病，纤维性骨炎，佝偻病，骨软化症，成骨细胞瘤及骨折愈合期，碱性磷酸酶升高，主要用于变形性骨炎，
原发性甲旁亢，骨质软化和佝偻病的诊断。
4、生长中的儿童，妊娠中晚期碱性磷酸酶生理性增高。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血清碱性磷酸酶ALP测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP
对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸
在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：
3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输
3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
乙酸
镁
3.0mmol/
L
硫酸锌 1.5mmol/L
HEDTA 3.0mmol/
L
AMP缓冲液420mmol/L
试剂2（R2）：对-硝基
苯磷酸盐
81.5mmol
/L
AMP缓冲液420mmol/L
HEDTA
5.0mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以ALP复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值范围
成年人
男性 20～50岁 53～128U/L
男性 60岁以上 56～119U/L
女性 20～50岁 42～ 98U/L
女性 60岁以上 53～141U/L
儿童
男性女性
1～30天 75～319U/L 48～406U/L
1个月～1岁 82～383U/L 124～341U/L
1岁～3岁 104～345U/L 108～317U/L
4岁～6岁 93～309U/L 96～297U/L
7岁～9岁 86～315U/L 69～325U/L
10岁～12岁 42～362U/L 51～332U/L
13岁～15岁 74～390U/L 50～162U/L
16岁～18岁 52～171U/L 47～119U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值 35-125 U/L
10 临床意义
碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。
在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP 生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。
在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。
在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。
在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增高。
11 操作性能
11.1 试剂空白：
a) 试剂空白吸光度应不大于0.800。
b）试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）：应不大于0.0015。
11.2 分析灵敏度：10U/L样本的吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.003。
11.3 线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖[10～1000]U/L。
a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) [≤50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±6.0U/L，[＞50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±10％。
11.4 准确度：相对偏差（B）应不大于±10%。
11.5 精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。
11.6 稳定性：试剂（盒）在2～8℃避光、密封的环境中贮存至12个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。
12 超出范围结果处理
本试剂的线性范围为[10～1000]U/L。
当样本中碱性磷酸酶活性高于1000U/L时当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。
13 病危报警值的处理
无警告/危急值
14 方法局限性
14.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。
14.2 样本中血红蛋白的浓度≤500mg/dL、胆红素浓度≤340μmol/L、甘油三酯浓度≤4mmo1/L对测定无干扰。
14.3 有关可能干扰本测定的药物或物质，请参阅参考文献16.3。
14.4 若试剂混浊或以水为空白在波长405nm处的吸光度值大于0.8时，则不能使用。
15 补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
16 参考文献
16.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
16.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版
16.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
16.4 试剂说明书。