临床检验技师临床免疫学和免疫检验放射免疫分析讲义
第七章放射免疫分析
第一节放射免疫技术
一、基本类型及原理
（一）放射免疫分析（RIA）以放射性核素标记抗原与未标记抗原竞争结合特异性抗体，测定样品中抗原量的一种分析法。
（二）免疫放射分析（IRMA）用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
二、常用的放射性核素
125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。
三、放射性标记物制备及鉴定
（一）原理：以放射性碘原子置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
蛋白质、肽类等含有上述基团，可用125Ⅰ直接标记，不含上述基团的甾体激素或药物分子，须连接相应基团才能用于放射性碘标记。
（二）标记及类型
1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记。
常用的方法为：①氯胺 T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法：也称连接标记法，是最常用的间接碘标记方法。
该法主用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
（三）放射标记物的纯化
1.凝胶过滤法：分子筛机制。
2.离子交换层析法：游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）：按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同。
4.高效液相色谱法。
（四）放射标记的鉴定
1.放射化学纯度：单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，要求＞95%。
该参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
2.免疫活性：制备的标记物与抗体结合的能力。
3.比放射活性：单位化学量标记物中所含的放射性强度，即每分子被标记物平均所结合放射性原子数目。
四、方法学评价
除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标：
（一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同。
借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断。
平行性好者可靠。
（二）剂量-反应曲线：通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。
（三）高剂量钩状效应：标本中被测物浓度超过线性范围上限时，所得结果反而降低或呈阴性的现象。
可以通过选用髙亲和力抗体或对此类标本进行稀释后测定以改善或消除。
第二节放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是以放射性核素作示踪剂的标记免疫分析方法，特别适用于激素、多肽等的超微
量分析。
一、基本原理
经典RIA是采用标记抗原和非标记抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应。
二、实验方法及测定
（一）抗原抗体反应：将未标记抗原（标准品和待测样品）、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中，在一定条件（温度、时间及介质pH）下进行竞争抑制反应。
先加待测样品（或标准品）和抗血清，使非标记抗原与抗体达到结合平衡，然后再加入标记抗原竞争与抗体结合。
（二）分离结合与游离标记物：RIA反应平衡后，标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物（B）。
由于其含量极少，不能自行沉淀，需加入适当的沉淀剂将其彻底沉淀，然后经离心使其与游离的标记抗原（F）分离。
某些小分子抗原，也可采用吸附法分离B与F。
理想的分离方法应分离彻底、迅速；分离试剂和过程不影响反应平衡，而且效果不受反应介质因素的影响；操作应简单、重复性好以及经济。
方法：
1.第二抗体沉淀法：反应完成后加入二抗形成复合沉淀。
为增强效果可加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，或是将二抗与某些颗粒固相物连接。
2.聚乙二醇（PEG）沉淀法：能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分子蛋白质，而不沉淀小分子抗原。
当温度髙于30℃时，沉淀物易复溶。
3.PR试剂法先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。
此法保留了二者的优点，节省了二者的用量，且分离迅速，简便。
4.活性炭吸附法：活性炭可吸附小分子游离抗原或半抗原，而大分子蛋白（如抗体和免疫复合物）则留在溶液中。
（三）放射性测量及数据处理
分离B、F后，可分别对二者进行测定。
绘制标准曲线（剂量-反应曲线），样品管以其测量或计算的反应参数，通过标准曲线即可查出相应的待检抗原浓度。
第三节免疫放射分析
免疫放射分析（IRMA）是以过量125I标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，用固相免疫吸附剂对B或F进行分离，其灵敏度和可测范围均优于RIA，操作程序较RIA简单。
一、基本原理
1.单位点IRMA：利用过量标记抗体与待测抗原进行反应，形成抗原-抗体复合物，反应平衡后，再用固相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离，测定上清液的放射量。
2.双位点IRMA：先用固相抗体与抗原反应结合，然后再用过量的标记抗体与已结合于固相的抗原的另一抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物，洗弃反应液中剩余的标记抗体，测定固相上的放射性。
两种IRMA最后测得的放射性均与样品中待测抗原的含量呈正相关。
第四节放射免疫分析技术的应用
常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。
但具有放射污染和危害，常用放射性核素半衰期短，试剂盒有效期不长，无法自动化分析等诸多不足。
下列有关放射免疫分析的叙述中，错误的是
A.以放射性核素作为标记物
B.是一种定量检测技术
C.主要用于抗原检测
D.形成的免疫复合物中的放射强度与待测抗原含量成正比
E.定量分析时需同时作标准管
『正确答案』D
『答案解析』放射免疫分析中免疫复合物中的放射强度与待测抗原含量呈反比。
在放射免疫分析检测中，B/（B+F）表示（注：B为结合态的标记抗原，F为游离态的标记抗原）
A.结合态的标记抗原与总的标记抗原之比
B.结合态的标记抗原与游离的标记抗原之比
C.总标记抗原与抗原抗体复合物之比
D.结合态的抗原与总抗体之比
E.结合态的抗原与总抗原之比
『正确答案』A
『答案解析』放射免疫分析法（RIA）测定方法分三个步骤：①待测标本中未标记抗原，标记抗原和抗体进行竞争抑制反应。
②将标记抗原和抗体相结合的复合物（B）和未结合的标记抗原（F）的分离。
③对B进行放射性强度的测定。
根据标准曲线查得待测抗原浓度。
由上可知，B/（B+F）意义是结合态
的标记抗原与总的标记抗原之比。
在RIA反应系统中，参与反应的有标记抗原、已知抗体和待测抗原，对这三种成分的要求是
A.只需固定标记抗原量
B.待测抗原要先标记
C.标记抗原和已知抗体的量都是固定量的
D.只需要固定已知抗体的量
E.三者的量均需固定
『正确答案』C
『答案解析』在RIA反应系统中，标记抗原和已知抗体的量都是固定量的，待测抗原和标记抗原竞争结合已知抗体，待测抗原的量和标记抗原的量成反比。
临床上通常不利用放射免疫分析技术检测的是
A.微量蛋白质
B.激素
C.小分子药物
D.肿瘤标记物
E.免疫球蛋白
『正确答案』E
『答案解析』放射免疫分析技术常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。
临床上放射免疫分析最常用的放射性核素是
A.125I
B.131I
C.3H
D.14C
E.51Gr
『正确答案』A
『答案解析』常用的放射性核素：125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。
用RIA检测某种激素时，结合物中的放射性强度越大，表明
A.该激素在血清中的含量越高
B.该激素在血清中的含量越低
C.游离的标记激素的浓度越高
D.与激素结合的特异性抗体浓度越高
E.结合的标记激素越少
『正确答案』B
『答案解析』在RIA反应系统中，标记抗原和已知抗体的量都是固定量的，待测抗原和标记抗原竞争结合已知抗体，待测抗原的量和标记抗原的量成反比。
所以结合物中的放射性强度越大，该激素在血清中的含量越低。
主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第七章放射免疫分析
第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术一、优点灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点。
用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析。
二、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
（二）免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
三、常用的放射性核素125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。
四、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子通过取代反应置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
因此，凡蛋白质、肽类等化合物在结构中含有上述基团者，均可用125Ⅰ直接标记，而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子，则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记。
（二）标记及类型1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其特点是标记方法操作简便，易得到比放射性较高的标记物。
常用方法为：①氯胺T(ch-T)法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法：也称联接标记法，是最常用的间接碘标记方法。
该法主要用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
（三）标记物的纯化：125Ⅰ标记物反应后，标记物需进行分离纯化以去除游离125Ⅰ和其他杂质。
纯化标记物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。
（四）标记物的鉴定1.放射化学纯度：是指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95%。
该项参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
2017年主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第七章放射免疫分析
第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术一、优点灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点。
用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析。
二、基本类型及原理（一）放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
（二）免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
三、常用的放射性核素125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。
四、放射性标记物制备及鉴定（一）原理：以放射性碘原子通过取代反应置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
因此，凡蛋白质、肽类等化合物在结构中含有上述基团者，均可用125Ⅰ直接标记，而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子，则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记。
（二）标记及类型1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其特点是标记方法操作简便，易得到比放射性较高的标记物。
常用方法为：①氯胺T(ch-T)法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法：也称联接标记法，是最常用的间接碘标记方法。
该法主要用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
（三）标记物的纯化：125Ⅰ标记物反应后，标记物需进行分离纯化以去除游离125Ⅰ和其他杂质。
纯化标记物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。
（四）标记物的鉴定1.放射化学纯度：是指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95%。
该项参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。
临床检验免疫主管 (7)
临床检验免疫主管 (7)临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性.精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析（RIA），稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析（IRMA）。
一.基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
2.免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
二.常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ.131Ⅰ.3H.14C等。
使用最广泛的是125Ⅰ。
三.标志物制备及鉴定采用放射性碘（如125Ⅰ）制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
1.直接标记法最常用于肽类.蛋白质和酶的碘化标记，其原理是采用化学或酶促氧化反应直接将125Ⅰ结合于被标志物分子中酪氨酸残基或组胺残基上。
（一）标记及类型其特点是标记方法操作简便，容易将较多的125Ⅰ结合到被标记蛋白分子上，易得到比放射性较高的标志物。
常用的方法为：①氯胺T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法也称连接标记法（Bolton-Hunter法），是最常用的间接碘标记方法。
该法主要用于甾体类化合物.环核苷酸.前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
（二）标志物的纯化纯化标志物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法.利用游离125Ⅰ与标志物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法.按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。
（三）标志物的鉴定1.放射化学纯度是指单位标志物中结合于被标志物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95%。
临床检验技师-临床免疫学和免疫检验(2019)讲义第三章免疫原和抗血清的制备
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1组.织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2细.胞的破碎（）反复冻融法：℃冷冻，〜7融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3免.疫球蛋白片段的制备（）非共价键解离法：改变环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（）G凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5亲.和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
电泳法：蛋白质在同一环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定和的吸光度（）值。
初级检验士考试(临床免疫学和免疫检验)讲义第七章放射免疫分析
第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术第二节放射免疫分析第三节免疫放射分析第四节放射免疫分析技术的应用第一节放射免疫技术放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析（RIA），稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析（IRMA）。
一、基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
2.免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
二、常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。
使用最广泛的是125Ⅰ。
三、标志物制备及鉴定采用放射性碘（如125Ⅰ）制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
（一）标记及类型1.直接标记法最常用于肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其原理是采用化学或酶促氧化反应直接将125Ⅰ结合于被标志物分子中酪氨酸残基或组胺残基上。
其特点是标记方法操作简便，容易将较多的125Ⅰ结合到被标记蛋白分子上，易得到比放射性较高的标志物。
常用的方法为：①氯胺T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法也称连接标记法（Bolton-Hunter法），是最常用的间接碘标记方法。
该法主要用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
纯化标志物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标志物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。
（二）标志物的纯化125Ⅰ标志物反应后，标志物需进行分离纯化以去除游离125Ⅰ和其他杂质。
临床检验技师临床免疫学和免疫检验荧光免疫技术讲义
第八章荧光免疫技术第一节概述荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。
一、荧光的基本知识1.荧光：某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。
2.发射光谱：固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光强度谱图。
激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。
3.激发光谱：固定检测发射光荧光波长，用不同波长的激发光照射样品所记录到的相应的荧光发射强度谱图。
4.荧光效率：荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率称为荧光效率。
在一定范围内，荧光强度与激发光强度呈正相关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。
5.荧光寿命：荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。
6.荧光淬灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、酚、I-、硝基苯等）作用下，发射荧光减弱甚至消退，称为荧光淬灭，这是由于激发态分子的电子不能回复到基态，所吸收的能量无法以荧光的形式发射。
7.荧光偏振。
二、荧光物质（一）荧光色素1.异硫氰酸荧光素（FITC）：呈现明亮的黄绿色荧光。
2.四乙基罗丹明（RB200）：呈橘红色荧光。
3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：呈橙红色荧光。
4.藻红蛋白（R-RE）：呈明亮的橙色荧光。
（二）其他荧光物质1.镧系螯合物：其中以Eu3＋应用最广。
Eu3＋螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。
2.酶作用后产生荧光的物质：4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷本身无荧光，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光。
其他如碱性磷酸酶的底物是4-甲基伞酮磷酸盐，辣根过氧化物酶的底物是对羟基苯乙酸等。
第二节荧光抗体技术一、荧光抗体的制备（一）抗体要求将荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成。
一般需经纯化提取IgG后再作标记。
（二）荧光素要求异硫氰酸荧光素最常用要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除；②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
2021临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》讲义精讲
第一章概述考试科目：1.基础知识2.相关专业知识3.专业知识4.专业实践能力考试题型：1.A1型题（最佳选择题）2.A2型题（病历摘要型最佳选择题）3.A3型题（病历组摘要型最佳选择题）4.B型题（配伍题）辅导重点1.找出重点即考点2.360度掌握考点3.结合题型攻破考点花最少的时间，收获最多的知识和能力通过考试是硬道理第一章概述第一节免疫学简介第二节临床免疫学第三节临床免疫学与临床检验第一节免疫学简介一、免疫学概念与免疫应答二、免疫组织与器官三、免疫细胞四、免疫分子一、免疫学概念与免疫应答的基本概念（一）免疫是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能（二）免疫应答是指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程1.识别阶段是巨噬细胞等抗原递呈细胞对外来抗原或自身变性抗原进行识别、摄取、降解和递呈抗原信息给T辅助细胞（THc）及相关淋巴细胞的阶段。
2.活化阶段是T、B淋巴细胞在接受抗原信号后，在一系列免疫分子的参与下，发生活化、增殖、分化的阶段。
由于T细胞和B细胞表面表达的细胞膜受体不同，所以对抗原的识别具有严格的特异性。
B细胞接受抗原刺激后活化、增殖、分化为浆细胞，T细胞在接受抗原刺激和协同刺激双信号后活化、增殖、分化为效应细胞。
3.效应阶段是浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能。
T细胞中的Th细胞分泌细胞因子等效应分子，T杀伤细胞执行细胞毒效应功能。
另有少量T细胞和B细胞在增殖分化后，不直接执行效应功能，而作为记忆细胞。
当其再次遇到相同抗原时，迅速活化、增殖、分化为效应细胞，执行高效而持久的特异性免疫效应功能。
（三）免疫系统的三大功能1.免疫防御2.免疫自稳3.免疫监视二、免疫组织与器官（一）中枢免疫器官1.骨髓骨髓是重要的造血器官，是成年人和动物所有血细胞及淋巴细胞的发源地，多能造血干细胞（HSC）在骨髓中增殖，生成更多的HSC。
HSC分化、发育、成熟为各种血细胞，骨髓是从HSC分化发育为功能性B细胞的唯一器官。
临床检验技士-临床免疫学和免疫检验 讲义 25
第二十五章免疫增殖性疾病及其免疫检测免疫增殖性疾病是指由于淋巴细胞异常增殖所引起的疾病。
浆细胞功能异常导致免疫球蛋白异常增殖性疾病分为良性增殖病和恶性增殖病两大类疾病。
第一节免疫球蛋白异常增殖性疾病的概念及分类免疫球蛋白异常增殖性疾病是指由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白的异常增加，引起机体病理损伤的一组疾病。
通常多克隆增殖的免疫球蛋白多为良性反应性增殖或继发某一疾病，如肝病、结缔组织病及急性感染等。
单克隆免疫球蛋白增殖多呈恶性发展趋势，故免疫球蛋白异常增殖性疾病多专指单克隆免疫球蛋白异常增殖的疾病。
第二节免疫球蛋白异常增殖性疾病的免疫损伤机制异常的免疫细胞增殖，不具有免疫活性，其本身将造成免疫系统的直接损害或通过分泌有关物质进一步损害正常的免疫细胞和其他组织，最终导致疾病。
一、浆细胞异常增殖是指单克隆浆细胞异常增殖并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。
如骨髓瘤。
二、正常体液免疫抑制正常的体液免疫中，IL-4启动B细胞进入DNA合成期；IL-5促进B细胞继续增殖；IL-6促使B细胞分化成浆细胞，及反馈抑制IL-4控制B细胞的增殖分化过程。
另外，大量的浆细胞瘤分泌无活性的Ig，其Fc段与正常B细胞等有Fc受体的细胞结合，将Fc受体封闭，影响对其他生物信息的接收，并可阻断B细胞的增殖、发育和影响抗原提呈。
三、异常免疫球蛋白增殖所造成的病理损伤单克隆的浆细胞异常增殖产生大量的单克隆异常免疫球蛋白或免疫球蛋白片段，这些异常免疫球蛋白或片段不具有正常抗体功能，但其在组织的沉淀可造成组织变性和淋巴细胞浸润，进而导致相应器官的功能障碍。
单克隆免疫球蛋白浓度过高，甚至可以导致血液黏稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。
四、溶骨性病变浆细胞瘤大多伴有溶骨性破坏。
患者体内高水平IL-6是使破骨细胞数量增多的重要因子，溶骨性破坏与浆细胞的恶性增殖有非常密切的关系，是骨髓瘤患者疾病恶化的重要原因之一。
临床检验技士-临床免疫学和免疫检验 讲义 20
第二十章免疫检验自动化仪器分析第一节自动化免疫浊度分析系统免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（＜19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（＞19S），使反应液出现浊度。
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
一、免疫透射比浊法（一）原理可溶性抗原抗体反应后形成的免疫复合物，使介质浊度发生改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度（A值）与免疫复合物量呈正相关。
与已知浓度的抗原标准品相比较，可确定标本中抗原的含量。
仪器工作过程1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。
2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。
3.按方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。
（二）方法评价1.优点：灵敏度比单扩法高，操作简便，结果准确，且能用全自动或半全自动生化分析仪进行检测。
2.不足：①抗体用量较大；②溶液中IC分子若过小则阻挡不了光线的通过；若数量太少则对光通量影响不大；灵敏度较散射比浊法低；③透射比浊测定在抗原-抗体反应的第二阶段，检测需在抗原-抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
二、免疫胶乳比浊法（一）原理用抗体致敏胶乳颗粒，在遇到相应抗原时，形成IC，引起胶乳颗粒凝聚。
抗原-抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与待测抗原浓度呈正相关。
采用透射比浊法或散射比浊法测定。
（二）方法评价本法敏感度高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子（RF）可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F（ab′）2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
临床检验技士-临床免疫学和免疫检验 讲义 05
第五章凝集反应细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。
第一节凝集反应的特点凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性；也可进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。
凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。
第二节直接凝集反应一、原理细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。
参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。
二、方法有玻片法和试管法两类。
（一）玻片凝集试验主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果。
一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类ABO血型的测定。
（二）试管凝集试验是用定量抗原悬液与一系列梯度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价。
可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。
例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。
第三节间接凝集反应间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象。
一、间接凝集反应的类型（一）正向间接凝集反应可溶性抗原致敏载体，用以检测标本中待测抗体的凝集反应，称为正向间接凝集反应。
（二）反向间接凝集反应特异性抗体致敏载体，用以检测标本中待测抗原的凝集反应，称为反向间接凝集反应。
（三）间接凝集抑制反应先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗体）致敏的载体颗粒，若出现凝集现象，则说明标本中不存在相同抗原，抗体试剂未被结合。
若存在相同抗原，抗体与之结合，凝集反应被抑制，称为正向（或反向）间接凝集抑制试验。
间接血凝抑制试验可用于检测抗体也可测定抗原。