核酸提取和注意事项
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。
2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。
3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。
4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。
二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。
核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。
DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。
酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。
盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。
RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。
Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。
核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。
紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。
A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。
琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。
大肠杆菌菌液。
2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。
酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。
无水乙醇、75%乙醇。
3M 醋酸钠（pH 52）。
Trizol 试剂。
异丙醇。
RNA 酶抑制剂。
琼脂糖。
50×TAE 电泳缓冲液。
核酸染料（如 EB 或 GelRed）。
核酸采集保存知识点总结
核酸采集保存知识点总结一、核酸采集的操作流程核酸采集的操作流程包括样本采集、核酸提取和保存三个主要步骤。
下面将对这三个步骤分别进行介绍。
1. 样本采集在进行核酸采集时，首先需要采集样本，常见的样本包括血液、唾液、鼻拭子、咽拭子、组织等。
在采集样本时，需要注意以下几点：(1) 样本采集前，需要严格遵循无菌操作，使用无菌手套，并保持工作区域的清洁。
(2) 样本采集时，要选择合适的采集器具，不同样本可选择不同的采集器具，比如血液可以选择采血管、鼻拭子可以选择鼻拭子采集器等。
(3) 样本采集后，应尽快进行保护性包装，避免样本受到外界污染。
(4) 不同样本的采集方法有所不同，比如采集血液时要用无菌注射器采集，采集鼻拭子时要注意插入深度和旋转操作等。
2. 核酸提取核酸提取是指从采集的样本中分离出核酸的过程。
常见的核酸提取方法包括化学法、机械法和离心法等。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：(1) 核酸提取试剂的选择要根据样本类型和需要的核酸纯度进行选择，比如采集全血样本时可选择通用的核酸提取试剂盒，采集唾液时可选择适用于唾液样本的提取试剂等。
(2) 核酸提取过程中，需要严格按照试剂盒说明书中的操作方法进行，不同的试剂盒可能有不同的提取步骤和操作要点。
(3) 核酸提取后，需要对提取得到的核酸进行保存，以便后续的分子生物学实验或临床诊断检测。
3. 样本保存样本保存是核酸采集过程中的关键环节，它直接关系到后续实验结果的准确性和稳定性。
常见的样本保存方法有干冰保存、-80°C冷冻保存和室温保存等。
以下是几种常见的样本保存方法及其注意事项：(1) 干冰保存干冰保存是一种常见的样本保存方法，它可以在短时间内将样本冷冻到极低温度，有利于核酸的保存。
在进行样本保存时，需要注意以下几点：- 样本保存前，应将核酸溶液均匀混合，并分装到干冰盒中。
- 样本保存后，需将干冰盒放置在干冰箱中，并保持在-70°C～-80°C的温度范围内。
核酸提取步骤及注意事项
核酸提取步骤及注意事项---摘要核酸提取是生物学实验中常见的重要步骤，用于从样本中纯化和获得核酸。
本文将介绍核酸提取的基本步骤，并指出一些需要注意的事项。
---1. 核酸提取的基本步骤1. 样品准备：选择合适的样品进行核酸提取，如细胞、组织、血液等。
样品应保存在适当的条件下，以保持其完整性和稳定性。
在提取过程中，应保持样品的纯净度，避免污染和降解。
2. 细胞破碎：使用适当的方法破碎细胞膜，如机械破碎、化学溶解、超声波破碎等。
破碎时应注意温度控制、避免核酸降解，以及避免悬浮液的污染。
3. 溶解和脱脂：加入适量的溶解缓冲液和脱脂试剂，使核酸从其他杂质中分离。
溶解和脱脂过程应遵循规定的条件和比例，确保高效分离和纯化。
4. 酶解和消化：添加酶解缓冲液和酶解试剂，以去除蛋白质、RNA等杂质。
在酶解和消化过程中，应注意适当的时间和温度，以避免核酸的降解和损失。
5. 提取和纯化：通过离心、过滤、凝胶电泳等方法，将核酸从溶液中分离出来。
提取和纯化过程中，应注意操作的规范和准确性，以确保获得高质量的核酸。
6. 纯化和检测：使用柱层析、电泳、分光光度计等方法，对提取的核酸进行纯化和检测。
纯化和检测过程中，应遵循操作规程，进行准确的数据记录和结果分析。
---2. 注意事项1. 工作区域：核酸提取应在干净的实验室环境中进行，避免外界污染和其他干扰因素的干扰。
实验室应定期进行消毒和清洁，并保持适当的温度和湿度。
2. 工具和试剂：使用高质量的工具和试剂，避免因质量差的材料而导致实验出现问题。
试剂的保存条件和有效期限应按照说明书要求进行，避免使用已过期或变质的试剂。
3. 操作规范：在核酸提取过程中，应根据标准操作规程进行操作，严格遵守实验室安全和操作规范。
严禁接触裸露的皮肤、吸入有害气体，必要时应佩戴个人防护装备。
4. 试剂交叉污染：为避免试剂交叉污染，应使用干净的工具，确保每个步骤使用新的试剂和材料。
严禁在不同实验或样品中混用相同的工具，以避免导致污染和误差。
核酸提取的原则和流程
核酸提取的原则和流程嘿，朋友！今天咱们来聊聊核酸提取这个超有趣又超级重要的事儿。
一、核酸提取的原则1. 保证核酸的完整性这就像是保护一件精美的艺术品一样。
你想啊，如果核酸断成了一节一节的，那它就像一幅被撕得七零八落的画，可就没法好好发挥作用了。
我们得小心翼翼地处理样本，避免那些物理因素，像过度的震荡、剪切力，就好比你不能拿着那幅画胡乱摇晃，不然画就毁了。
还有化学因素，不合适的酸碱度就像给这幅画泼上了腐蚀性的液体，会把核酸给弄坏的。
温度也很关键呢，太热或者太冷都可能让核酸像脆弱的花朵在恶劣天气里一样受到伤害。
2. 纯度要高这纯度啊，就像是你做饭时用的原料得特别干净一样。
如果核酸提取出来混着好多杂质，就像你煮的粥里混着沙子，那怎么能行呢？杂质会干扰后续对核酸的各种研究和检测。
比如说那些蛋白质杂质，就像不速之客，它们可能会和核酸“抢地盘”，影响核酸在实验中的表现。
还有其他的小分子杂质，就像捣乱的小虫子，在我们想要精准研究核酸的时候，它们在旁边搅和得一团糟。
3. 得率要高想象一下你在果园里摘果子，你肯定希望把树上的果子尽可能多地摘下来呀。
核酸提取的得率高，就意味着我们能从样本里拿到更多可用的核酸。
要是得率低，就像你去果园忙活了半天，只摘到寥寥几个果子，那多不划算啊。
这得率和我们最初选择的样本量、提取的方法以及操作的精细程度都有关系呢。
二、核酸提取的流程1. 样本采集这是核酸提取的第一步，就像盖房子打地基一样重要。
不同的样本来源可有不同的采集方法哦。
如果是采集血液样本，护士就像专业的探险家一样，用针管精准地抽取适量的血液。
那动作必须熟练又小心，要是抽多了，病人可能会不舒服，抽少了又可能不够用。
要是采集的是组织样本，医生就像是技艺精湛的工匠，用特殊的工具精准地切取需要的组织部分。
这时候啊，旁边的助手就会在旁边提醒，“这个部位取的量要合适哦，不然会影响核酸的量呢。
”采集的样本要尽快处理，就像刚摘下来的新鲜水果得赶紧吃或者做成罐头保存一样，不然核酸可能会开始降解啦。
核酸采集流程及注意事项
核酸采集流程及注意事项核酸采集是指通过采集患者的呼吸道或其他部位的细胞样本，分离出其中的核酸，并进行检测以确定是否感染病原体。
在新冠疫情中，核酸采集被广泛用于COVID-19的诊断。
1.采集准备：首先需要准备好所需的采集工具和消毒用品。
常用的工具包括采样棉签、采样管或试管、采样盒等。
消毒用品包括酒精、消毒纸巾等。
2.患者准备：患者需要进行相关的准备工作，如洗手、服从医生的指导等。
在采集前，患者应尽量清除口腔、鼻腔等采集部位附近的分泌物。
3.采集过程：核酸采集可以包括口腔、鼻咽、咽拭子、鼻拭子、气管吸引等多种方式。
-口腔采集：患者张开嘴巴，用棉签在舌根或颊黏膜上擦拭数圈，并放入采样管中，同时尽量避免采集到唾液。
-鼻咽采集：将棉签插入患者的鼻腔，直至接触到咽喉部位，然后旋转几次以采集细胞样本，并放入采样管中。
-喉拭子采集：要求患者打开嘴巴，用棉签或刷子从扁桃体及咽壁上划拭，然后放入采样管中。
-鼻拭子采集：将棉签插入患者的鼻孔中，旋转几次以采集细胞样本，并放入采样管中。
-气管吸引：需要通过呼吸道吸引方法采集患者的痰液或其他呼吸道分泌物，一般需在医疗机构进行，由专业人员操作。
4.采集结束：采集完成后，要进行适当的消毒处理。
如使用含酒精的消毒剂对采样器具进行消毒，避免交叉感染。
核酸采集的注意事项有以下几点：1.采集环境：采样环境应保持干净，避免尘埃和其他污染物进入样品中，以免影响检测结果。
2.采集工具：采集棉签或刷子应为一次性使用，并使用无菌的采样管或试管进行样本收集。
3.操作规范：操作人员需要严格遵守操作规范，如佩戴防护服、戴手套、戴口罩等，以防止交叉感染。
4.采集部位：核酸采集部位应根据病情和检测要求进行选择，不同病原体可能需要不同的采样部位。
5.采集时间：核酸采集应在患者症状出现后一定时间内进行，以尽可能提高检测的准确性。
6.交通运输：采集完样本后，要注意样本的储存和运输条件，避免温度过高或过低导致样本失效。
核酸提取流程及注意事项
核酸提取流程及注意事项本文档将介绍核酸提取的基本流程以及需要注意的事项。
1. 核酸提取流程1. 准备样本：使用适当的方法采集样本，并将其放入离心管或样本收集器中。
2. 细胞破碎：使用细胞破碎缓冲液将样本离心管/样本收集器中的细胞破碎。
3. 核酸溶解：将细胞破碎液转移到离心管中，并加入核酸溶解液。
充分混合并孵育一定时间。
4. 蛋白质沉淀：加入蛋白质沉淀剂，使蛋白质沉淀形成。
离心样本以去除蛋白质沉淀。
5. 取出上清液：小心地将上清液完全转移到新的离心管中，并避免带入任何沉淀。
6. 酒精沉淀：加入适量冷酒精，使核酸沉淀形成。
离心样本以沉淀核酸。
7. 洗涤：去除酒精，使用70％乙醇洗涤核酸沉淀，以去除杂质。
8. 干燥：离心样本以去除乙醇，并将核酸沉淀在室温下干燥。
9. 溶解：使用核酸溶液溶解核酸沉淀，以获得最终的核酸提取物。
2. 注意事项- 操作前确保实验室中的工作区域及设备已经彻底清洁，并且消毒所需器材。
- 严格按照实验室的安全操作规程进行操作，佩戴个人防护装备，如手套和口罩。
- 确保使用的试剂及其浓度、质量得到了验证，并按照提取试剂的指导书进行操作。
- 注意避免样本污染，避免核酸降解和污染的情况发生。
在操作过程中尽量避免直接接触皮肤，使用滤液器等器具进行操作。
- 样本处理过程中，尽量减少离心速度和时间，以避免影响核酸的质量。
- 核酸提取中的步骤应在恒温的环境下进行，避免温度变化对结果的影响。
- 在每个步骤结束后，及时标记和记录样本信息，减少错误。
- 技术操作前后，仔细清洗所有的设备和工作台，避免交叉污染。
以上是核酸提取的基本流程及注意事项，希望对您有所帮助。
如有问题，请随时咨询。
核酸提取流程及注意事项
核酸提取流程及注意事项1. 简介核酸提取是从生物样本中分离纯化核酸的过程，是进行分子生物学和基因组学研究的重要步骤之一。
本文档将介绍核酸提取的基本流程，并提供一些注意事项，以确保提取过程的准确性和可靠性。
2. 核酸提取流程核酸提取的基本流程如下：步骤一：样本处理- 将样本收集至离心管中，并确保样本来源明确和标识清楚。
- 根据实验需要，进行样本预处理步骤，如组织粉碎、细胞裂解等。
步骤二：细胞裂解- 使用适当的细胞裂解缓冲液对样本进行裂解。
- 考虑使用机械破碎、化学裂解或酶裂解等方法根据样本类型进行处理。
步骤三：蛋白质去除- 加入适当的蛋白质沉淀剂，如氯仿、酚/氯仿等，将蛋白质沉淀下来并分离。
步骤四：核酸沉淀- 加入等体积的异丙醇或其他适当的溶剂，将核酸沉淀下来。
- 使用离心等方法将核酸沉淀回收。
步骤五：核酸洗涤- 使用洗涤缓冲液对核酸沉淀进行洗涤，以去除残留污染物。
- 使用离心等方法将洗涤后的核酸沉淀回收。
步骤六：核酸溶解- 加入适量的溶解缓冲液，使核酸完全溶解。
- 定量测定溶解后的核酸浓度，并保存在-20°C或更低温度下。
3. 注意事项- 样本处理过程中要保持样本的完整性和纯净性。
- 制备细胞裂解缓冲液时，要根据样本类型和研究目的作出合理选择。
- 注意在蛋白质去除步骤中避免蛋白质和核酸的干扰。
- 在核酸沉淀过程中，处理时要避免核酸的降解和损失。
- 核酸洗涤时，要严格控制洗涤时间、温度和离心速度，以提高洗涤效果。
- 核酸溶解过程中，要充分溶解，避免出现团块和有机溶剂残留。
以上是核酸提取流程及注意事项的基本内容，希望对您的核酸提取实验有所帮助。
核酸样本采集流程及注意事项
核酸样本采集流程及注意事项一、核酸样本采集流程1.采集器械准备：准备所需采集器具，包括呼吸道采样用的试管、棉签、采集管、采集袋等。
2.个人消毒：采集人员应严格按照个人防护要求进行消毒，戴上帽子、口罩、手套等，确保操作环境的洁净。
3.采样器械消毒：将采集用的器械浸泡于含有消毒液的容器中，保证完全消毒。
4.采集前准备：告知被采集者相关信息，包括采集的目的、过程、时间等，征得其同意，并填写相关采样表格。
5.采集样本：对于呼吸道采样，可以通过鼻咽拭子或者咽拭子进行采集。
采集者戴好手套后，轻轻插入拭子到被采集者的鼻腔或咽喉处，旋转几次后慢慢取出。
将拭子立即放入带有病毒保存液的管中。
6.采集完毕：将采集好的样本放入采集袋，并严密封口，确保不发生泄露，将相关信息填写在采样袋上。
7.处理废弃物：将采集器具集中在一起，进行高温高压处置，或者进行焚烧处理。
8.存储与运输：将采集好的样本放入专用的冷藏盒中，确保样本处于适宜的温度，避免样本在运输过程中的降解或可能的感染。
二、注意事项1.个人防护：采集人员应严格按照卫生部门和相关规定的个人防护要求进行操作，包括正确佩戴口罩、帽子、手套等，避免交叉感染。
2.采集时间：对于不同采样方法，有不同的采样时间要求，一般来说，拭子应在采样后立即放入保存液中，避免样本的降解和污染。
3.采样技术：采集者应具备专业技能，避免伤害被采集者，并确保采样的准确性和完整性。
4.采样部位：针对新型冠状病毒，一般采用鼻咽拭子和咽拭子的方法进行采样，各个机构可以根据需要选择合适的采样部位。
5.采集管选择：采集管应选用无菌封闭的试管，带有病毒保存液，能够保证样本质量和安全性。
7.样本保存：采集好的样本应及时放入冷藏盒中，并严密封口，将温度控制在适宜范围内，避免样本的降解和污染。
8.废弃物处理：采集器具应进行严格消毒和高温高压处理，避免采集过程中的交叉感染。
9.运输要求：采集好的样本应保持冷链运输，避免样本在运输过程中的降解或可能的感染。
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➢ 沉淀不完全 ——低温、延长沉淀时间
➢ 洗涤使得丢失DNA .
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取 五．琼脂糖凝胶电泳
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质粒DNA提取
质粒DNA提取的方法： ➢碱裂解法 ➢煮沸法
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质粒DNA提取——碱裂解法原理
➢ DNA中残留有金属离子 ——重新70%乙醇漂洗
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基因组DNA提取常见问题分析
DNA降解
– 材料不新鲜或反复冻融 – 未很好抑制内源核酸酶的活性 – 提取过程操作过于剧烈，DNA被机
械打断 – 外源核酸酶污染
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基因组DNA提取常见问题分析
DNA提取量少
➢ 实验材料不佳或量少 —— 选取新鲜（幼嫩）材料
小鼠gDNA电泳图
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基因组DNA提取常见问题
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR 反应
DNA降解
DNA量少
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基因组DNA提取常见问题分析
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应
➢ DNA中含有蛋白、多糖、多酚类物质 ——抽提纯化、高盐洗涤
➢ DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解法
CTAB提取缓冲液的经典配方
组份 终浓度
Tris-HCl （pH 8.0）
100 mM
EDTA （pH 8.0）
NaCl
20 mM
0.4 M
CTAB
β-巯基乙醇
2% (W/V)
0.1%（V/V） 使用前加入
Tris-HCl （pH 8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，
使酚容易去除。
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基因组DNA提取——CTAB法
• CTAB提取缓冲液的改进配方
组份 终浓度
Tris-HCl （pH 8.0）
EDTA （pH 8.0）
NaCl
CTAB
PVP40 β-巯基乙醇
100 mM
20 mM
0.4 M
3% (W/V)
5% (W/V)
2%（V/V） 使用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种 不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同 时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
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核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′- 磷酸 二酯键连接而成的一类生物大分子。包括核糖核 酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。
DNA主要储存遗传信息。 RNA主要传递遗传信息。
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如何分离RNA？
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核酸简介
质粒(Plasmid)是一种 染色体外的稳定遗传因子， 大小从1-200 kb不等，为 双链、闭环的DNA分子， 并以超螺旋状态存在于宿 主细胞中。
4.实验材料
对数期菌株（pEGFP-N1 in DH5α）
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质粒DNA提取——碱裂解法
碱裂解法试剂配方
Ⅰ液 Ⅱ液
组分1 25 mM Tris-HCl （pH 8.0）
0.2 M NaOH
组分2 10 mM EDTA（pH 8.0 ）
1% SDS
Ⅲ液
3 M KAc （pH 4.2）
RNase A
洗脱液 EB
学习汇报
核酸提取的原理及方法
汇报人:富贵 青海大学2010级研究生
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前言
• 核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物 信息分子，是分子生物学研究的主要对象， 因此，核酸的提取是分子生物学实验技术 中最重要、最基本的操作。
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一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取 五．琼脂糖凝胶电泳
质粒主要发现于细菌、 放线菌和真菌等细胞中， 它具有自主复制和转录能 力，能在子代细胞中保持 恒定的拷贝数，并表达所 携带的遗传信息。
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一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取
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基因组DNA提取的几种常用方法： CTAB法 SDS法 其他方法
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基因组DNA提取——CTAB法
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基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法实验流程
植物材料
抽提
离心洗涤
液氮研磨
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
核酸沉淀
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DNA溶液
基因组DNA提取——SDS法
SDS法原理
➢ SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能 裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
➢ 提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白 质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
1.实验器材
台式高速离心机、旋涡混合仪、移液器、定时器、 marker笔、 电子天平、电泳设备、凝胶成像系统、微波炉、量筒、试剂瓶、锥形瓶等。
2.实验耗材
无菌2 mL/1.5 mL EP管、各规格Tip、一次性手套等。
3.实验试剂
质粒小提试剂盒（离心柱型，YRBIO) 、LB培养基、抗生素、 琼脂糖、DNA Loading Buffer、 GoldView核酸染料、 TAE电泳缓冲液等。
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
➢ CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂， 可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。
➢ 该复合物在高盐溶液中（>0.7 mol/L NaCl）是可 溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚 类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
➢ 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀 水相中的DNA。 SDS法适用于大部分实验材料基因组DNA提取。如动物 组织、细胞、全血、细菌、酵母等。
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基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳检测
• 琼脂糖凝胶电泳：
• 以琼脂糖凝胶作为支持 物，利用DNA分子在泳 动时的电荷效应和分子 筛效应，达到分离混合 物的目的。
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离心柱型质粒DNA提取试剂盒工作原理
离心柱型质粒DNA提取试剂盒采用改进的 SDS-碱裂 解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液 将杂质和其它细菌成分去除，最后用低盐、高pH值的洗 脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
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质粒DNA提取及检测——实验准备