蛋白质定量分析的研究进展
蛋白质分析技术的发展趋势
BCA 法是 20 世纪 80 年代发展起来的一种新的 吸光光度法 。1985 年 , Smith 等[4] 对劳里法进行了 改良 , 用 4 - 喹啉甲酸代替了 Folin - Ciocalten 试剂 。 4 - 喹啉甲酸的钠盐是稳定的水溶性化合物 ,它在碱 性环境中能与一价铜离子生成紫色复合物 ,因此可 以利用此性质来定量蛋白质 。碱性条件下 ,蛋白质 与两价铜离子反应 (双缩脲反应) 中生成的 Cu+ ,可 用 BCA 试剂检测 ,读取 A562nm ,以测定蛋白质的量 。 与 Lowry 法相比 ,BCA 法的常规测定程序与 Lowry 法 相近 ,但 BCA 法抗试剂干扰的能力和工作试剂的稳 定性均优于后者 。此法测定不同蛋白质时 ,测量值 变化差别较小 ,除还原糖的干扰较大外 ,其它干扰试 剂 ,特别是去污剂以及 3 mol·L - 1 的脲这样的变性剂 均对测定无影响 。
在金属作探针的蛋白质测定法中除双缩脲法 (Biuret assay) 、劳 里 法 (Lowry) 、4 - 喹 啉 甲 酸 法 (BCA) 外 , 还有银染色法 ( Sliver staining) 和胶体金 (Colloidal gold) 、银 、钯染色法 。Krystal 等[5] 于 1985 年发展了银染色法 ,该法的线性范围为 15～2 000 ng , 要比 Bradford 法灵敏 10 倍 。蛋白质 - 银复合物形 成速度快 ,显色稳定 ,且碳水化合物 、非离子表面活 性剂等物质几乎不干扰测定 。随后 ,胶体金属 ,如 金[6] 也被用于测定微量蛋白质 。 2. 5 染料结合法
蛋白质测定方法比较与研究进展
蛋白质测定方法比较与研究进展一、本文概述蛋白质作为生命活动的重要承担者，其准确测定对于理解生物体的生理功能和疾病机制具有重要意义。
随着科学技术的不断发展，蛋白质测定方法也在不断演进和改进。
本文旨在对现有的蛋白质测定方法进行全面的比较，分析各自的优缺点，并探讨最新的研究进展，以期为推动蛋白质科学的发展提供参考和借鉴。
文章将首先简要介绍蛋白质测定的基本概念和重要性，然后重点比较各种常用的蛋白质测定方法，包括比色法、紫外吸收法、荧光法、电泳法、质谱法等。
接着，文章将对这些方法的准确性、灵敏度、可重复性等方面进行评价，并分析其在实际应用中的限制和挑战。
文章将探讨蛋白质测定方法的最新研究进展，包括新型检测技术的开发和应用，以及蛋白质组学在疾病诊断和治疗中的潜力。
通过本文的阐述，我们希望能够为蛋白质测定方法的研究和应用提供有益的参考和启示。
二、蛋白质测定方法概述蛋白质测定方法在生物学、医学、食品科学等多个领域具有广泛的应用。
随着科学技术的不断发展，蛋白质测定的方法也在不断改进和优化。
这些方法大致可以分为两类：化学法和物理法。
化学法主要依赖于蛋白质与特定化学试剂的反应来测定蛋白质的含量。
其中，比色法、双缩脲法和凯氏定氮法是常用的化学方法。
比色法通过蛋白质与染料结合产生的颜色变化来测定蛋白质含量，操作简单，但精度相对较低。
双缩脲法则利用蛋白质与双缩脲试剂的反应产生紫色化合物，通过比色测定蛋白质含量，此方法相对准确，但操作较复杂。
凯氏定氮法则是通过测定蛋白质中的氮含量来推算蛋白质含量，准确性较高，但操作繁琐，耗时较长。
物理法则主要依赖于蛋白质的物理性质进行测定，包括光谱法、电泳法和色谱法等。
光谱法通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度来推算蛋白质含量，具有快速、准确的特点。
电泳法则是利用蛋白质在电场作用下的迁移速度差异进行分离和测定，对于蛋白质的定性和定量分析具有重要价值。
色谱法包括高效液相色谱法和毛细管电泳色谱法等，通过色谱柱对蛋白质的分离和检测，具有极高的灵敏度和分辨率。
生物医学中的蛋白质组学研究进展
生物医学中的蛋白质组学研究进展近年来，生物医学研究中的蛋白质组学已受到广泛关注。
蛋白质组学是一种高通量技术，可以对大量的蛋白质进行分析，从而为研究生物学、生物化学、医学、药学等领域提供更深入的了解和新的解决方案。
蛋白质组学研究是一种把人体中的所有蛋白质进行系统分析的科学方法。
通过蛋白质组学研究，可以加深人们对蛋白质的认识，探讨蛋白质在复杂生物学基础上的功能以及与疾病的关系。
这一方法已经极大地推动了生物学、生命科学和生物医学的发展。
近年来，许多科学家已经把研究重心转向蛋白质组学，在这一领域里取得了许多进展。
现在，蛋白质组学已经成为医学诊疗和新药研发的重要方法。
一、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是指将蛋白质从生物样品中提取出来，并通过分离和鉴定来确定其种类、数量、结构和功能等的技术。
具体包括质谱技术、二维凝胶电泳、蛋白质芯片、蛋白质相互作用技术等。
1.质谱技术质谱技术最为成熟，在蛋白质组学中得到广泛应用。
分析前，蛋白质需要经过某些步骤，如消化、分离、富集，最后才能进入质谱仪。
2.二维凝胶电泳二维凝胶电泳分离、定量、鉴定和分析蛋白质是蛋白质组学中最经典和传统的方法之一。
这种技术可以将复杂的蛋白质混合物分离成数千个不同的蛋白质，对于大量蛋白质的鉴定具有非常大的优势。
3.蛋白质芯片蛋白质芯片被认为是蛋白质组学领域中非常有前途的技术之一，即将大量不同的蛋白质在几张平凡玻片或其他基材上通过特殊的技术进行分析。
蛋白质芯片具有高通量、高精度、高效性和可重复性，对于筛选药物靶点、发现新的蛋白质以及蛋白质相互作用等方面都具有很强的优势。
4.蛋白质相互作用技术蛋白质相互作用技术通过探测不同蛋白质之间的相互作用，能够解决许多疾病发生的分子机制问题。
蛋白质相互作用技术已经成为细胞生物学、医学等领域的研究重点。
二、蛋白质组学在疾病的研究中的应用蛋白质组学关注蛋白质的表达、定量、亚细胞位点定位、翻译后修饰等，在生物医学研究中，已经广泛地应用于疾病的诊断、治疗和预防等方面。
蛋白质定量分析及其生物学意义研究
蛋白质定量分析及其生物学意义研究蛋白质是构成生物体的一种复杂有机化合物，它在细胞内发挥着重要的作用。
在许多生物学研究领域，蛋白质定量分析是必不可少的技术之一。
本文将简要介绍蛋白质定量分析的原理和方法，并探讨其在生物学研究中的意义。
一、蛋白质定量分析原理和方法蛋白质定量分析是一种测定样品中蛋白质含量的方法。
蛋白质含量的确定对于许多研究都非常重要，如蛋白质质量分析、蛋白质结构研究、生物学功能研究等。
蛋白质定量分析的原理基于蛋白质与某些化合物之间的化学反应，例如凝集反应、酵素反应和光学反应等。
其中最常用的方法是比色法和荧光法。
比色法是测定蛋白质含量的常用方法之一。
这种方法基于蛋白质与特定化学试剂的化学反应，该试剂可以与蛋白质中的氨基酸结合，产生一个明显的吸收峰。
在试剂浓度和蛋白质浓度相同的情况下，吸收的强度和蛋白质的浓度成正比。
一般情况下，用尿素、酸、盐等使蛋白质与试剂发生反应，并通过紫外线分光光度计来测定吸收强度，计算蛋白质的浓度。
荧光法是一种灵敏的、分辨力强的蛋白质定量方法。
该方法是利用荧光染料与蛋白质结合后的荧光强度来测定蛋白质的含量。
在荧光法中，利用荧光染料在特定的波长下与蛋白质结合，形成荧光复合物，通过荧光光度计测定所形成的荧光强度，计算蛋白质的浓度。
二、蛋白质定量分析在生物学研究中的意义蛋白质定量分析在许多生物学研究中都有重要的应用。
一方面，它可以帮助研究人员确定蛋白质的浓度和量，从而在测定蛋白质活性、构象、交互作用、酶反应速率等方面提供有用的信息。
例如，在研究肿瘤发生和发展过程中，蛋白质的定量可以用来判断肿瘤细胞内的代谢状态和生长状态，并且可以发现与癌症有关的特定蛋白质。
另一方面，蛋白质定量分析是许多生物学实验的必要步骤之一。
例如，用于制备体外培养细胞所需的培养基，需要确保其含有足够高的蛋白质量。
此外，在免疫学研究中，通过测定蛋白质的浓度，可以确定抗体和病原体之间的亲和力。
总之，蛋白质定量分析在生物学研究中具有重要的应用价值。
蛋白质定量生化实验报告
一、实验背景蛋白质是生物体内的重要功能分子，具有多种生物学功能，如催化、结构、运输、信号传导等。
因此，蛋白质定量分析在生物科学研究中具有重要意义。
本实验旨在通过双缩脲法对蛋白质进行定量测定，并分析实验结果。
二、实验目的1. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；2. 学会操作双缩脲试剂，并观察蛋白质定量结果；3. 分析实验数据，探讨蛋白质定量结果的影响因素。
三、实验原理双缩脲法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理是：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子（Cu2+）发生反应，生成紫红色的络合物。
该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量呈线性关系，通过测定吸光度可以计算出蛋白质的浓度。
四、实验材料1. 实验试剂：- 双缩脲试剂A：0.1g/L硫酸铜溶液；- 双缩脲试剂B：0.01g/L酒石酸钾钠溶液；- 标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白）；- 未知蛋白质样品；- 蒸馏水；- 6mol/L氢氧化钠溶液；- 50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。
2. 实验仪器：- 分光光度计；- 移液器；- 试管；- 烧杯；- 玻璃棒。
五、实验步骤1. 准备标准曲线：- 取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准蛋白质溶液； - 加入1.8mL蒸馏水，使总体积为2.0mL；- 加入0.2mL双缩脲试剂A；- 混匀，静置10分钟；- 加入0.4mL双缩脲试剂B；- 混匀，静置10分钟；- 以蒸馏水为空白，在540nm处测定吸光度；- 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 测定未知蛋白质样品：- 取6个试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL未知蛋白质样品； - 加入1.8mL蒸馏水，使总体积为2.0mL；- 按照步骤1中的方法进行操作；- 以蒸馏水为空白，在540nm处测定吸光度；- 通过标准曲线计算未知蛋白质样品的浓度。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 标准曲线呈线性关系，相关系数R2=0.998。
蛋白质组分析技术与进展
“ 白质 组 （ ｒｔｏ ） 一 词 是 １ ９ 蛋 ｐｏｅ ｍｅ ” ９ ５年 由澳 大 利 亚 科 学 家 Ｍａｃ Ｗ ｉ ｉｓ 和 Ｋｅ ｈ ｒ ｌ ｎ ｋ ｉ Ｗｉ ｔ ｌ －
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维普资讯
山 东 农 业 科 学
Ｓ ａ ｄ ｎ ｇ ｉｕｔ ｒｌ ｃｅ ｃｓ ｈ ｎ ｏ ｇ Ａ ｒ ｌ ａ ｉ ｅ ｃ ｕ Ｓ ｎ
２０ ０ ７年 第 １期
蛋白质组学的研究方法和进展
蛋白质组学的研究方法和进展蛋白质组学的研究方法主要包括样品制备、质谱分析以及数据分析三个阶段。
在样品制备阶段，研究人员需要选择合适的方法来提取和纯化蛋白质。
常用的方法包括差凝蛋白法、电泳法、柱层析法等。
质谱分析是蛋白质组学的核心技术，主要有两种方法：质谱图谱分析和质谱定量分析。
质谱图谱分析可以通过比对已知蛋白质的质谱图数据库来鉴定未知蛋白质；质谱定量分析可以测定样品中各个蛋白质的数量变化。
数据分析是蛋白质组学研究的关键环节，用于解读大量的质谱数据。
近年来，蛋白质组学的研究取得了诸多重要进展。
首先，高通量质谱技术的发展使得大规模蛋白质组学研究成为可能。
比如，液相色谱和质谱联用技术（LC-MS/MS）可以同时检测数千种蛋白质，大大提高了鉴定和定量蛋白质的效率和准确性。
其次，全蛋白质组学的研究范围不断拓展。
除了研究细胞蛋白质组，研究人员还开始探索组织蛋白质组和生物体蛋白质组等更高层次的组学研究。
通过研究这些复杂组织中蛋白质的种类和功能，可以深入了解细胞和生物体的复杂生理和病理过程。
此外，蛋白质组学也开始向单细胞水平的研究发展，可能为研究细胞发育、疾病药物靶点等方面提供新的突破口。
蛋白质组学在医学和生命科学领域有着广泛的应用前景。
通过深入了解蛋白质组的变化和相互作用，可以揭示细胞和生物体的生理和病理过程，为疾病的早期检测和诊断提供重要依据。
蛋白质组学也可以用于发现新的疾病标志物、筛选新药靶点以及评估药物的疗效和安全性。
此外，蛋白质组学还可以用于研究生命起源、进化以及各种生物学过程的分子机制。
总之，蛋白质组学的发展必将为生命科学研究带来更多的突破和进展。
定量蛋白质组学研究技术
定量蛋白质组学研究技术定量蛋白质组学研究技术是一种基于质谱技术，通过分析蛋白质组学中的定量变化，来研究细胞、组织或生物体内蛋白质表达的数量变化。
这种技术可以用于诊断疾病、评估治疗效果、揭示蛋白质功能等方面的研究。
本文将介绍定量蛋白质组学研究技术的原理、方法和应用。
定量蛋白质组学研究技术的原理是通过质谱仪来定量分析蛋白质样品中的各个蛋白质的相对或绝对数量。
常用的定量方法有定量蛋白谱法（QuantiSpectrum）、定量蛋白同位素标记法（SILAC）、定量蛋白肽标记法（iTRAQ）和定量蛋白质异位素标记法（TMT）等。
定量蛋白谱法是通过比较不同实验组样品中的质谱图峰强度来确定蛋白质的数量变化。
它可以分别应用于肿瘤细胞研究、生物标志物发现等方面。
SILAC是一种利用同位素标记技术来定量蛋白质的方法。
在该方法中，通过在不同实验组中添加不同重量比的同位素标记的氨基酸（通常是L-谷氨酰-[U-13C6，U-15N2]丙氨酸），然后进行蛋白质提取、消化、质谱分析。
通过比较同位素标记蛋白质和未标记蛋白质的质谱峰强度，就可以定量蛋白质的数量变化。
iTRAQ是一种通过修饰蛋白质消化产物来定量蛋白质的方法。
在iTRAQ实验中，将不同实验组的蛋白质消化产物用不同的寡肽修饰标记物标记，然后混合，并进行液相色谱-质谱分析。
通过比较同位素标记的寡肽的质谱峰强度，就可以定量蛋白质的数量变化。
TMT也是一种利用同位素标记技术来定量蛋白质的方法。
在TMT实验中，将不同实验组的蛋白质消化产物用不同的同位素标记物标记，然后混合，并进行液相色谱-质谱分析。
通过比较同位素标记的蛋白质肽段的质谱峰强度，就可以定量蛋白质的数量变化。
定量蛋白质组学研究技术在医学、生物学和蛋白质化学等领域有广泛的应用。
例如，在临床医学中，可以用定量蛋白质组学研究技术来寻找患者体内具有预后价值的蛋白质标志物，以辅助诊断、预测疾病进展和评估治疗效果。
在生物科学研究中，可以用定量蛋白质组学研究技术来揭示细胞信号转导通路、细胞功能调控机制等方面的问题。
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蛋白质定量分析的研究进展
作者：刘雅超刘旭白鸿源房泽海
来源：《中国民族民间医药杂志》2009年第08期
【关键词】蛋白质；定量分析；研究
【中图分类号】R【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0049-02
1蛋白质定量检测的生物化学方法
1.1凯氏定氮(Kjeldahl’s Method)及分光光度法利用蛋白质含氮量进行检测的经典方法，优点是定量准确，但操作烦琐，仅用于标定蛋白质标准品和校正其他测定方法。
凯氏定氮法有半微量法、微量法及全量法。
样品与H2SO4一同加热消化，分析有机物，释放出的NH3与结合，碱化蒸馏使氨游离，硼酸吸收，HCI或H2SO4标准溶液滴定，从而计算蛋白质的含量。
该方法是以Hantzsch反应为原理所建立的一种测试蛋白质含量的新的分光光度法。
适用于各类食品中蛋白质的测定，且不需要特殊的凯氏定氮装置。
取样且少，消化时间短，精密度高准确度好，适用于大批样品同时测定，亦适用于微量蛋白质分析，是一种蛋白质快速、准确测定的新途径。
1.2双缩脲法(Biuret Assay)双缩脲法简便易行，但检测灵敏度相对较低，最低测定值
100μg。
必须在测定前先使蛋白完全沉淀，除去干扰物质，才能得到较准确的结果。
除三氯乙酸作沉淀剂外．还可用钨酸、磷钨酸和Tsuchiya试剂，双缩脲法优点是对白、红蛋白产生颜色反应相近、干扰物质少，不受温度的影响。
但灵敏度低，0.01吸光度相当于l66.7μg蛋白，且操作复杂，很难用于自动化仪器分析。
1.3Lowry法（Lowry Assay）结合双缩脲法中铜盐反应与Folin-ciocalteau试剂反应的特点，通过芳香族氨基酸残基Tyr和Try的迅速反应与肽链、极性侧链或两者的铜络合物较慢的反应．而把磷钼酸发色团还原成暗蓝色、在波长750nm处测定Amax。
1.4BCA法(Bicichoninic Acid Assay)BCA法的灵敏度为0．5～10μg/ml，其最低测定值与反应温度有关。
有37℃和60℃(增强法)2种反应温度：在37℃时，一般适用于浓度较高的样品(＞50μg/ml)，但是色氨酸、酪氨酸和肽键在此温度下得不到彻底的氧化(37℃时该方法检测的蛋白质浓度范围为20～2000μg/m l)；在60℃(增强法)时，一般适用于浓度较低的样品(＜50μg ／ml)，色氨酸、酪氨酸和肽键在此温度下能得到充分氧化，因此能大大提高检测灵敏度(60℃时该方法检测的蛋白质浓度最低可达5μg/ml)。
1.5丹宁酸法丹宁酸用来沉淀蛋白质，但沉淀结构松散。
可用Caiilne取代蛋白，蛋白游离出后用免疫法或空氮法测定，但此法操作麻烦、加FeCl3与丹宁酸蛋白沉淀反应显色，5min
后在510nm比色，0.1mol的丹宁酸可结合0.333μg白蛋白、灵敏度达5ml•L-1，线性范围为0.05～1.8g•L-1。
1.6浊度法(比浊法)利用沉淀剂与蛋白质反应所产生的浊度与标准溶液浊度比较而定量测得未知蛋白浓度的定量分析法。
磺基水杨酸和三氯化铁是常用的蛋白质沉淀剂。
30g•L-1磺基水杨酸作为沉淀剂可沉淀白蛋白、球蛋白及血红蛋白。
50g•L-1三氯乙酸蛋白作沉淀剂，可沉淀白蛋白和球蛋白。
1.7染料结合法(Dye Combination Assay)是利用蛋白质与染料结合的性质进行检测的方法。
常用的染料有：考马斯亮蓝(coomassie bril1iant blue，CBB)G-250或R-250、丽春红S(ponceau S)、氨基黑(amido black)、溴甲酚绿(bromcreso1 green，BCG)和溴甲酚紫(bromcreso1 purple，BCP)等。
1.8紫外分光光度法(ultravio1et Spectrophotometry)是利用蛋白质在紫外280nm处有最大吸收峰的现象，进行检测的方法，具有简便、快速且可回收样品的优点。
紫外分光光度法检测蛋白质的最低测定值为10Pg。
1.9荧光法这是近几年兴起的一种新的定量测定蛋白质的方法，观已报道的络天青S、次氯酸盐—硫胺素及白蛋白蓝670法测定蛋白质的方法，其灵敏度较低。
1.10金属离子-染料结合法借用金属离子－染料和蛋白质在适宜条件下反应进而检测蛋白的方法发展很快，钛-4，5-二溴基荧光酮(DBPF)-Tween-80与蛋白质的显色反应用来测定微量尿蛋白。
在pH2．9，血清蛋白能与钛-DBPF-Tween-80形成蓝色络合物．λmax＝605nm，加入少量乙醇能提高方法的灵敏度及稳定性。
2蛋白质定量检测的免疫法
2.1免疫扩散法所谓抗原是指引起机体产生抗体的物质，而抗体是指在抗原的刺激下机体产生的物质。
抗原与抗体结合生成沉淀以达到机体免疫的目的，抗原与抗体属于蛋白质化合物。
2.1.1环状免疫单扩展法将一定量的抗体（一般常用单价抗血清)与含缓冲液的琼脂糖凝胶混匀铺成适当厚度的凝胶板，再把抗原滴进凝胶板的小孔个，在合适的浓度和湿度环境中、经过一定的时间，抗原由小孔向四周扩散(呈辐射状)，与已沉匀在琼脂糖凝胶中的抗体相互作用。
2.1.2双向扩展法一定浓度的琼脂糖(或琼脂)凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可自由通过，这种分子的扩散作用可使分别在两处的抗原和相应抗体相遇．形成抗原－抗体复合物．比例合适时出现沉淀，沉淀的特征与位置取决于抗原分子量的大小、分子结构、扩散系数和浓度。
如果抗体存在于多种有机大分子中出现多条沉淀线，即可定性抗原，诊断疾病。
此法操作简单且灵敏度高，是最常用的免疫法。
2.2琼脂糖免疫电泳法免疫化学与琼脂电泳相结合形成了免疫电泳技术，这是一种灵敏度很高的蛋白质分离及鉴定技术，可用于定性、定量测定抗原或抗体。
此技术是1953年由Grabar及wilillims提出，后来由Scheigger改进形成的一种微量蛋白质测定法。
可分为以下几种常用免疫电泳法：
2.2.1微量免疫电泳法在有离子的琼脂糖的玻璃中心各挖一长槽，槽的两侧各挖一个小圆孔，孔内加入待测样品，电泳时，由于样品中各蛋白质的等电点不同，其带电性不同，因而被分离成几个区带。
电泳后在长槽中加入相应的抗血清37℃时扩散，分离的蛋白质就与相应的抗体形成大小不同、深浅各异的沉淀弧。
一般情况下每一沉淀弧代表蛋白质混合物中一种成分，以此进行定性、定量。
2.2.2对流免疫电泳将抗原和抗体分别加入琼脂板样品孔内同时进行电泳，抗原由阴极向阳极移动，抗体向阴极倒退，两成分相遇，特效抗原与抗体结合，形成可见的白色沉淀物，即对流免疫电泳．这种方法是抗原与抗体在电场作用下定向移动，限制了抗原与抗体的自由式扩散，可提高灵敏度16倍。
2.2.3火箭电泳法取一定量单价血清，与一定量琼脂凝胶混匀，然后铺板，板上挖几个小孔，每孔中加不同浓度的相应抗原，将此板放在pH8.6的电泳槽中进行电泳，在电场作用下抗原向正极泳动，在泳动中与凝胶中的抗体反应，逐渐形成类似火箭的沉淀峰．其峰的高度与抗原的浓度成正比，以此可定量抗原。
国外有人用此法测定了全血清中的C-活性蛋白质。
如果被测抗原等电点与单价血清(抗体)的等电点相同，不仅需要用琼脂糖，而且需对抗原进行化学处理，使负电荷相对增加，这样处理后才能出现火箭峰。
处理时，一般用氰酸钾或甲醛。
2.2.4双向定量免疫电泳法双向定量免疫电泳法又称交叉电泳。
先将抗原进行电泳分离蛋白质的各组分；放在抗体琼脂板上，使各组分在垂直方向再电泳一次，根据各组分和沉淀峰便可定性、定量抗原。
2.2.5放射免疫电泳法RIA法是将放射性同位素测定法和免疫反应相互结合的一种技术，优点是特效、敏感、精确、简单。
一般不需要复杂的提纯步骤。
目前该法已用于细菌和病毒抗原的分析、抗体的测定，各种免疫球蛋白和血清蛋白的定量测定及肿瘤有关的抗原测定等。
2.3毛细管电泳免疫法在用琼脂糖免疫法定量分析抗原和抗体蛋白质时，抗原和抗体的纯化是非常麻烦的问题。
近年来发展较快的是毛细管免疫电泳，它的分离速度快、分辨率高且不
受染色时间、温度、染色剂浓度、显色时间等因素影响。
诸多优点使其广泛地应用于包括球蛋白在内的各种临床指标的检测。
蛋白质定量检测技术发展至今已经建立了许多成熟的方法，且衍生出了众多试剂盒。
但在实际工作中，无论是使用自配试剂还是商品试剂盒来进行蛋白定量，往往忽视了需根据待测定蛋白质的特性选择合适的方法和标准品，造成蛋白定量结果的不可靠。
随着蛋白质定量检测的日趋频繁和检测要求的日益提高，正确选择、应用蛋白质定量方法和标准品，应该引起有关人员的高度重视。
参考文献
[1]赵峰．脂蛋白(a)检测在临床诊断中的价值[J]．职业与健康，2002，18
[2]康建．一种简单快速的聚丙烯酰胺凝胶电泳染色法一铜染色法[J]．生物化学与生物物理进展，1990，17
[3]张滨．人体血液蛋白的毛细管电泳分析进展[J]．分析化学，1997，25(8)：973-977
(收稿日期：2009.01.26)。