口蹄疫采样简单流程
手足口病样本采集运送
还需备齐其它采样必须设备，如血液
采样包、标识登记用品等。
标本采集
咽拭子标本：采集病人发病3日内的咽拭子标本；
专用病毒采样拭子采集；
适度用力涂抹咽后壁和两侧扁桃体部位。 疱疹液标本：75%酒精对疱疹机周围皮肤消毒； 无菌针头挑破疱疹； 专用病毒采样拭子蘸取疱疹液。
粪便标本： 采集病人发病7日内的粪便标本，5-8g/份
标本采集
样本采集
血清标本：采集急性期（发病三天内）、恢 复期（发病14-30天）双份血清。 脑脊液标本：采集出现神经系统症状后的3天 内的脑脊液，1-2ml。 其它标本：下呼吸道标本、死检组织标本的 采集等。
样本运输
安全运输样本
按照国务院”病原微生物实验室生物安全管理条 例”和国际传染病物质航空运输标准,进行三层 包装; 样本送检单,与样本分开,不能混放.
手足口病标本的采集及运送
采样准备
病毒采样管：配制Hank’s液（有商品化的出售）和普通
营养肉汤；分装于无菌的5ml螺旋管，
每管3ml；管壁贴好胶布供采样时标记。 病毒采样拭子：该采样拭子需专用的不可折病毒采样 拭子，不能才用普通棉签代替。 其他采样材料：血清管、粪便盒、压舌板均需无菌；
送检单信息完整清晰
样本数量、类型、检测目的 基本信息（采集时间、标识、个案调查表） 保存条件（温度、污染）
样本运输样本运输 样本 Nhomakorabea输条件各类标本均应2-8℃尽快运送到检测实验室,不 能及时送检的-20℃或-70℃保存，并避免反复 冻融。
手足口病标本采集方法(1)
手足口病标本采集方法
4.1 咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
4.2 鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。
上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
4.3 鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。
将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。
4.4 咽漱液：用10ml不含抗菌素的采样液漱口。
漱口时让患者头部微后仰，发“噢”声，让洗液在咽部转动。
然后将咽漱液收集于50ml无菌的螺口塑料管中。
无条件的可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中。
口蹄疫实验室检验样品采集注意事项
口蹄疫实验室检验样品采集注意事项作者：王宇翔来源：《当代畜禽养殖业》 2019年第4期王宇翔(抚顺市现代农业及扶贫开发促进中心，辽宁抚顺 113006)摘要：口蹄疫对畜牧业危害严重，需要及时确诊，科学防控。
实验室诊断是否顺利与采集样品质量密切相关。
本文详细阐述了口蹄疫样品种类及各种样品采样的注意事项，以期为采样技术人员提供参考。
关键词：口蹄疫；样品采集；注意事项中图分类号：S851.34+7文献标识码：B文章顺序编号：1005-5959（2019）04-052-02口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病。
该病对畜牧业危害严重，需要及时诊断，科学防控。
而实验室诊断是否顺利与采集的样品质量密切相关，所以采样人员必须全面掌握采样技术及注意事项，确保所采样品质量符合实验室检验要求。
1 样品种类口蹄疫实验室检验所采集的样品包括水泡皮或水泡液、O~P液（食道~咽部分泌物）、血液、组织、脏器、分泌物、排泄物、肉制品、奶制品和皮革制品等。
检验目标为病毒、病毒抗体和病毒核酸等。
2 各种样品采集注意事项2.1 水泡样品水泡样品是指病畜的水泡液和水泡皮，该类样品病毒含量高，易于诊断。
2.1.1 水泡液采集。
用消毒过的注射器从未破溃水泡中吸出水泡液，水泡液应清亮透明，装入灭菌瓶中（可加入适量的抗生素），加盖后用胶带封口，贴上标签，冷藏保存。
2.1.2 水泡皮采集。
选采新鲜、成熟、未破裂或刚刚破裂不久的水泡皮，不采取陈旧、结痂或腐败变质的残破水泡皮。
牛样品应采取舌表面的水泡皮，在水泡尚未破溃或刚破溃时，牛的口中有少量流涎，这是采样的最佳时机。
在采不到舌面水泡皮的情况下，可采取蹄叉及蹄冠部的水泡皮。
猪样品应采集蹄叉部、蹄冠部或鼻镜部的水泡皮，不要采取蹄踵部角质化表皮。
羊的水泡样品较难采集，水泡通常小而分散，需要仔细寻找。
采取水泡皮时应尽量保持无菌，用消毒剪子剪下水泡皮后置入无菌小瓶中，加入由等量甘油和0.04 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2~7.6)配制成的保存液中，可加入适量抗生素。
核酸口咽拭子采样方法
01
02
03
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采样后，将拭子放入密 封袋中，标明被采样者 姓名、采样时间等信息。
将密封袋放入专用运输 箱中，加入冰袋保持低 温环境。
运输过程中要确保运输 箱密封完好，避免剧烈 震动和温度变化。
尽快将样本送至实验室 进行检测，确保样本的 新鲜度和准确性。
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采样后处理
消毒处理
采样后应立即对采样部位和周围环境进行消毒，以降低交叉感染的风险。 使用含氯消毒剂或75%酒精对采样区域进行擦拭消毒，确保消毒效果。
消毒时应遵循消毒剂使用说明，注意使用安全。
废弃物处置
采样过程中产生的废弃物，如棉签、手套等，应按照医疗废物进行处理。 将废弃物放入专用的医疗废物袋中，并确保袋口扎紧，防止泄漏。
医疗废物应定期交由专业机构进行处置，不得随意丢弃。
记录与报告
01
详细记录采样时间、地点、被采样人员信息、采样 结果等关键信息程 • 采样后处理 • 注意事项
01
采样前准备
了解采样对象
询问采样对象是否有 发热、咳嗽、乏力等 症状。
了解采样对象的旅行 史和居住史。
确认采样对象是否接 触过疑似或确诊患者。
选择合适拭子
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根据采样对象年龄和配合程度选择 合适的拭子，如成人可选择长柄植 绒拭子，儿童可选择短柄棉拭子。
位。
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采样过程
核对信息
核对被采样者姓名、年龄、性 别等基本信息，确保无误。
确认被采样者是否已签署知情 同意书，了解其健康状况及相 关病史。
检查采样拭子、病毒保存液等 耗材是否齐全、合格，确保在 有效期内。
指导被采样者配合
向被采样者解释采样过程及注意 事项，消除其紧张情绪。
家畜传染病学实验指导：口蹄疫的实验室诊断
实验十六口蹄疫的实验室诊断目的初步掌握口蹄疫的反向间接红细胞凝集试验，补体结合试验，琼脂扩散试验等血清学诊断技术。
内容及方法当根据临诊和流行病学诊断为口蹄疫后，应进一步确定病毒的型，因为疫苗及血清的正确使用有赖于定型。
病毒型鉴定的方法有以下几种。
一、口蹄疫病毒感染相关抗原琼脂免疫扩散试验本方法用于检测被检动物血清中是否含有口蹄疫病毒感染相关(VIA)抗体(口蹄疫多型抗体)，以证实被检动物是否感染过口蹄疫病毒。
本试验适用于易感动物的检疫、疫情监测和流行病学调查。
(一)材料准备1．Tris一盐酸缓冲液Tris 2.42gNacl 3.8 gNaN3 0.2g无离子水加至100ml，用HCl调pH至7.6。
2．器材平皿(直径5.5 cm)、吸管、金属打孔器外径4mm、模板，在有机玻璃板上按以下规格打孔，一个中心孔和6个外周孔，所有孔的直径为4mm，中心孔边缘到外周孔的距离均为4mm。
3．VIA抗原见使用说明书。
4．标准阳性血清．用A或O型口蹄疫病毒高免兔血清。
5．微量流射器或盐水接头若干及乳胶头。
6．印相暗盒或台灯(供观察沉淀线用)。
(二)操作方法1．被检血清和阳性血清均以56℃灭能30min。
2．琼脂糖平板的制备取琼脂糖1g，Tris—盐酸缓冲液100ml，装入三角瓶中，于沸水中加热或高压，将琼脂糖彻底融化。
然后吸取7ml琼脂液加到平皿里，制成3mm厚的琼脂板。
待琼脂完全凝固后，加盖置于湿盒中，贮藏在4℃冰箱中备用。
3．打孔将模板放在琼脂板上，用打孔器通过模板的孔在琼脂板上打孔，并挑出孔中的琼脂块。
4．加样按图9方式加样，即中心孔加VIA抗原，1和4孔加FMD阳性高免兔血清，2、3、5、6孔加被检血清。
5．扩散将加样的琼脂平皿置于湿盒里于室温(20～22℃)任其自然扩散。
6．观察于24h进行第一次观察，72h作第二次观察，168h作最后观察。
观察时，可借助灯光或自然光源，特别是弱反应须借助于强光源才能看清沉淀线。
高埗门诊部体制猪口蹄疫高免血清制作方法
高埗门诊部
一、采集血清用猪的选择。
1.自然感染、经流行病学调查、临床症状观察确诊为口蹄疫的猪群中临床症状明显，然后痊愈35天以上的猪。
或多次注射过口蹄疫疫苗的肥育猪作为采血用猪。
2.采血前体况较好，体温、食欲、大小便正常，无其他疾病。
二、器械。
剃刀、剪刀，细胶管（采血胶管），消毒纱布，消毒棉球，消毒液（5％碘酒、75％酒精），消毒过的盛血器皿，塑料布，１００毫升玻璃瓶，玻璃注射器，胶盖和低温冰箱等。
三、血清采集程序、分装与保存。
1.在经过消毒的无菌室内，首先将已经消毒好的猪保定好。
2.用湿热消毒水纱布再次清洁颈部（手术部位）的污物并将毛剃光。
涂擦５％碘酒后，用７５％酒精消毒并脱碘。
3.切开皮肤与脂肪，分离组织充分暴露颈静脉、颈动脉，用多根采血针刺入颈静脉与动脉，用输血胶管导流接血于盛血器皿。
4.盛满血的器皿用塑料布封盖后，迅速拿到光线较暗的无菌室内（室内温度以２０℃左右为宜），斜放静置６~８小时。
5.待血清彻底析出后，用消毒好的玻璃注射器将血清吸出，分装入无菌的１００毫升玻璃瓶内加入10万单位的青霉素与链霉素，蜡封胶盖用于保存。
口蹄疫液相ELISA抗体检测试剂盒加样操作说明
口蹄疫新液相抗体检测试剂盒加样操作说明一、检测10份样本1、如图所示，A1-A10加175ul的洗涤液（1×PBST），A11、A12、B12加100ul的洗涤液（1×PBST），B1-B11、C1-C11、D1-D11、E1-E11、F1-F11、G1-G11、H1-H11加100ul的洗涤液（1×PBST）。
2、A1-A10加25ul的待检血清，A11加100ul的阳性对照，A12加100ul的阴性对照，用排枪吹打混匀（每孔吹打6-7次），待检血清1-10列以100ul的量从A到H连续2倍稀释；阳性对照第11列以100ul的量从A到H连续2倍稀释；阴性对照第12列以100ul的量从A到B连续2倍稀释。
3、各孔稀释比例为，如图所示：4、转板，从血清稀释板转到包被板的对应孔，每孔50ul。
再加稀释后的病毒抗原，1-11列各加入50ul，A12、B12各加入50ul，E12、F12、G12、H12各加入100ul。
5、加样完毕后，每孔的最终量均为100ul，待检血清、阳性对照、阴性对照的稀释度翻倍，如图所示：二、检测20份样本1、如图所示，A1-A10、E1-E10加175ul的洗涤液（1×PBST），A11、E11、A12、B12加100ul 的洗涤液（1×PBST），B1-B11、C1-C11、D1-D11、F1-F11、G1-G11、H1-H11加100ul的洗涤液（1×PBST）。
2、A1-A10、E1-E10加25ul的待检血清，A11加100ul的阳性对照，A12加100ul的阴性对照，用排枪吹打混匀（每孔吹打6-7次），待检血清1-10列以100ul的量从A到D、从E到H连续2倍稀释；阳性对照第11列以100ul的量从A到H连续2倍稀释；阴性对照第12列以100ul的量从A到B连续2倍稀释。
3、各孔稀释比例为，如图所示：4、转板，从血清稀释板转到包被板的对应孔，每孔50ul。
动物疫病检测样品采集、重大动物疫情报告及采样表填写注意事项
动物疫病检测样品送检要求1样品采集1.1春秋两防样品采集1.1.1畜禽血清样品采集用真空采血管或者注射器采集动物血液3—5mL，倾斜放置到血液凝固后方可装袋（冬天最好在温和环境下放置以便血清的析出），然后在2000—3000转/分，5—10分钟即可分离到血清，将血清用1.5mL离心管分装，每管血清样品：家畜1～1.5 mL，家禽0.5～1.0 mL。
每个场（户）的样品用一个单独的采样袋进行包装，需在采样袋上注明乡镇名称、养殖场名称、样品种类和数量、采样时间等。
例如老鹰山街道办、大丰养殖场、猪血清30份、2017年4月20日。
1.1.2禽双棉拭子采集取无菌棉签2颗，分别插入禽喉头内/泄殖腔内转动3圈，取出放入2mL的无菌离心管中，去掉高出管壁部分，盖紧管盖，做好标记。
放入低温样品保存箱。
1.2疑似重大动物疫病样品采集1.2.1高致病性禽流感样品采集1.2.1.1活禽病料应包括气管和泄殖腔拭子10份，采集方法同1.1.2。
1.2.1.2采集病死禽或发病症状明显禽（不得少于5只）的气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品。
1.2.1.3采集10份症状明显禽的血清样品，采集方法同1.1.1。
所有样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密封，防止渗漏。
样品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输。
否则，应冷冻运输。
1.2.2口蹄疫样品采集1.新鲜水泡皮或组织样品（淋巴结、肌肉等）用装有50%甘油-磷酸盐缓冲液（PH7.4）2mL离心管密封保存。
1.2.3小反刍兽疫样品采集1.2.3.1无菌采集病羊眼棉试子、口棉拭子、鼻棉拭子，放入2mL的无菌离心管中，去掉高出管壁部分，盖紧管盖，做好标记。
放入低温样品保存箱。
1.2.3.2采集被扑杀或刚死亡病畜的脾、肠系膜和支气管淋巴结、肠黏膜、肺等组织。
1.2.3.3无菌采集全血，用常规方法分离血清。
样品采集后，置冰上冷藏尽快送至实验室。
1.3注意事项1.3.1疑似炭疽的病例禁止解剖炭疽病常呈地方性散发性流行，干旱或多雨，洪水涝积，吸血昆虫多等都是炭疽爆发的因素。
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1、水疱皮上皮组织采集：从没有污染的舌头、口腔或蹄部等。
采取未破或刚破裂的水疱皮组织1-2g。
如果难以获得水疱皮，可采集蹄部刮下的水疱皮碎片（碎屑）。
放入小小瓶或离心管（加适量抗生素）。
水疱皮采集的部位可用清水冲洗，切忌使用酒精、碘酒等消
毒剂消毒、擦拭。
每份样品贴上标签，写明采样地点、动物种类、
标号、时间。
2、水疱液、未破裂的水疱中的水疱液用无菌注射器采集至少1ml，装入灭菌小瓶或小离心管(加适量抗生素)，加盖密封，并尽快冷冻
保存。
每份样品贴上标签，写明采样地点、动物种类、标号、时间。
也可同时水疱皮水疱液一起采集，装入灭菌小瓶或小离心管(加适量抗生素)，加盖密封，并尽快冷冻保存。
每份样品贴上标签，写明采样地点、动物种类、标号、时间。
3、运送样品密封冷冻，加冰袋运送。