瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用_王敏
关于抗癌中草药有效成分的研究
福建警察学院学生毕业论文（设计）关于抗癌中草药有效成分的研究学生姓名：钟标平学号：10125194系部：法律系专业：法学指导教师：摘要：癌症已成为仅次于心血管疾病的人类第二类杀手，目前抗癌常用化疗与放疗的方法可造成对人体不利的严重毒副反应。
从化学合成药物寻找抗癌药的难度远远超过从传统中药寻找新药。
因此，使用中草药来抗癌，寻找抗癌中草药的有效成分，并对其进行化学、药理及临床研究，成为国内外药物化学工作者的研究重点之一。
本文将通过探讨了中草药及其有效成分在抗癌中的研究现状, 为进一步从中草药中发掘高效低毒的抗癌创新药物提供参考。
关键词：抗癌；中草药；有效成分；研究目录1.抗癌中草药 (3)1.1莪术 (3)1.2白花蛇舌草 (3)1.3姜黄 (3)1.4陈皮 (3)1.5丹参 (3)1.6半枝莲 (3)2.目前发现的具有抗癌症作用的活性成分主要有下列几类···············3-62.1生物碱······················································3-42.2黄酮类 (4)2.3萜类（terpenoids） (5)2.4脂肪油类 (5)2.5皂苷类 (5)2.6多糖 (6)2.7 其他抗癌成分 (6)3.传统中药存在许多抗癌有效成分···································6-74.加强中药抗癌活性成分研究方法 (7)5.结束语 (7)近年来, 国内外对中草药抗癌有效成分的研究高度重视,利用高通量快速筛选、组合化学及基因工程等新的手段, 加快新药的研究步伐, 随着分子生物学、分子药理学对癌症本质和作用机制方面的阐明, 抗癌中草药有效成分的研究水平有了明显提高。
喘香狼毒总黄酮3种提取方法的比较-【用】
摘要：通过对不同提取法中瑞香狼毒总黄酮含量的比较．确定瑞香狼毒总黄酮的最佳提取方法，试验采用索氏提取法、
超声提取法、聚酰胺树脂柱层析法采提取瑞香狼毒总黄酮．并用分光光度计测定各总黄酮提取物中黄酮含量，，结果表
明．索氏提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为１９．２０％：超声提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为
４６８． 『３］杨挺，阜甫伟国，下立君．蔬策巾氨摹甲酸酯类农残的
Ｈｔ＇ＬＣ测定方法『Ｊ］．现代科学仪器．２００５（５）：７４—７５． ｆ４］陈晓红，李小平，会米聪．蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的
ＨＰＩ．Ｃ／ＭＳ测定研究［Ｊ］．中围卫生检验杂志，２００６，１６（９）： ｌ（）４ｌ—１０４３． ［５］李艳清，付大友，袁东．ｎ洒中氨基甲酸甲酯农药残留餐的 ＧＣ／ＭＳ测定方法研究［Ｊ］．酿酒科技，２００８（６）：１０６一１０８．口
毒病。 通讯作者：韩敏（１９５４一），男，教授。主要研究方向为动物营养
代谢病和中毒病．Ｅ—ｍａｉｌ：ｎｍｈａｎｍｉｎ＠１２６．ｃｏｍ。
名断肠草、红狼毒．有逐水、祛痰、破积、杀虫之功效ｈ。近几 年的研究发现，狼毒提取物对肿瘤细胞有较强的抑制作用。 此外还有抗菌和抗病毒作用．是理想的天然药物开发品种’２］。 狼毒中的主要化学成分有黄酮类、香豆素类、二萜类、三萜 类、木质素类、苯丙烯酸醇仔类等。从瑞香狼毒提取的黄酮
方法ｌ：三氯化铝反应。分别取３种提取方法的样晶液 滴于滤纸上，冉滴加ｌ％ｔ氯化铝乙醇溶液，待十燥后置于 紫外灯下观察，有黄绿色荧光斑点即为有黄酮存在。
方法２：盐酸镁粉反应。分别取３种提取方法的样品液 置于试管中，各加适量镁粉。再逐滴加入盐酸数滴，在沸水 浴中加热３ ｍｉｎ，有桃红色反应即为有黄酮存在。
根据文献报道．有关总黄酮测定的方法有Ｄａｖｉｓ法、薄 层扫描法、ＰＲ—ＨＰＩ。Ｃ法、重鲢法、荧光法，分光光度法、极谱 法、毛细管电泳法等，，目前对于总黄酮含繁测定尚无统一的 标准方法“，该研究采用比较常用的分光光度法．其机理是 黄酮类化合物的Ｃ３和Ｃ５位羟基或邻二酚羟基可与金属离 子（ＡＩｈ）形成黄绿色络合物．通过氧氧化钠娩色后在５１０ ｎｍ 处有一吸收峰。因此能够进行比色测定．在所测试浓度范嗣 内线性关系良好．准确度和精密度均能满足分析要求。该研 究旨在通过比较不同提取方法中瑞香狼毒总黄酮含量，确 定一种最高效的提取方法．为进一步分离总黄酬成分提供 指导。 ｌ材料和方法 １．１材料 １．１．１药材：将采集的瑞香狼毒在干燥箱中于６０℃十燥至 恒重，粉碎，过１２０目筛，装入塑料袋密封于冰箱中备用。 １．１．２主要药晶与试剂：芦丁标准品（中罔药品生物制晶检 定所）；聚酰胺树脂；硅胶板ＧＦ一２５４；其余试剂均为市售分 析纯。 １．１．３主要仪器：索氏提取器、减，矗旋转蒸发仪、超声清洗 机、ＴＵ一１９０１双光束紫外分光光度计。 １．２方法 １．２．１总黄酮成分的提取 １．２．１．１索氏提取法：称取１００ ｇ狼毒粉末（分为２份，每份 ５０ ｇ），用滤纸包好后装入索氏提取器。依次加入２００ ｍｌ。石 油醚及９５％乙醇，各同流２４ ｈ，在减压旋转蒸发仪内减压 浓缩，使提取物至浸膏，取９５％乙醇提取物的浸膏．装入试 剂瓶密封于冰箱中备用。取９５％乙醇提取物５ ｇ，放入烧杯 中，加入蒸馏水５０ｍＬ。６０℃水浴加热２ ｈ，静置到窜温，过 滤，弃去滤液，重复３次，挥十溶剂后得到的成分即为总黄 酮成分，将其装入试剂瓶密封于冰箱中备用。 １．２．１．２超声波提取法：精确称取狼毒粉末３００９，首先用９５％ 的乙醇浸泡１２ｈ，超声波提取３次，每次超声波提取３０ｒａｉｎ，料 液比为１：３０，提取温度为５００ｃｃ。取９５％乙醇提取液减压浓 缩，将减限后的９５％乙醇提取物放入分液漏斗中，加入石 油醚５０ｍＬ萃取，弃去石油醚层，重复３次。在减压旋转蒸 发仪内减压浓缩９５％乙醇提取液．使提取物至浸膏，挥十 溶剂后放入烧杯中。加入蒸馏水５０ ｍＬ，６０℃水浴加热２ ｈ， 静置到室温，过滤．弃去滤液，重复３次，挥十溶剂后得到的 成分即为总黄酮成分，将其装入试剂瓶密封于冰箱中备用。 １．２．１．３聚酰胺柱层析法：取９５％乙醇提取物与硅藻土拌 样挥干后，装入玻璃管柱中，用白．油醚流洗，去除其巾的叶 绿索和极性较小的成分。流洗结束后倒ｊＩｊ硅藻土化合物。挥
喘香狼毒总黄酮3种提取方法的比较
喘香狼毒总黄酮3种提取方法的比较吴晓亮;韩敏;刘晓松;张如刚;王宇【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2009(030)001【摘要】通过对不同提取法中瑞香狼毒总黄酮含量的比较,确定瑞香狼毒总黄酮的最佳提取方法,试验采用索氏提取法、超声提取法、聚酰胺树脂柱层析法采提取瑞香狼毒总黄酮,并用分光光度计测定各总黄酮提取物中黄酮含量.结果表明,索氏提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为19.20%;超声提取法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为23.39%:聚酰胺树脂柱层析法中瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量为24.18%.超声波提取法为瑞香狼毒总黄酮最佳提取法,聚酰胺树脂柱层析法中瑞香狼毒总黄酮含量最高.【总页数】3页(P39-41)【作者】吴晓亮;韩敏;刘晓松;张如刚;王宇【作者单位】内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018;内蒙古农牧业科学院动物医学研究所,内蒙古,呼和浩特,010030;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018【正文语种】中文【中图分类】Q949.761.1【相关文献】1.化香树果序中总黄酮不同提取方法对比研究 [J], 高蓉;李稳宏;刘明霞;李冬;廖昌建;张园2.瑞香狼毒根和叶总黄酮含量测定比较 [J], 杨树平;温爱平;吴冬梅;高乌恩;杨俊平3.响应面优化黄精根茎总皂苷、总黄酮提取方法及其在不同产地黄精成分含量比较中的应用 [J], 黄金月;崔芙岩;郑时嘉;姜佳欣;杨佳颖;王志刚;于纯淼;杨波4.金银花叶总黄酮不同提取方法比较及其抗氧化活性研究 [J], 田存章;贺新平;曹乐乐;谢一鸣;姬国杰;万嘉欣5.不同提取方法对瑞香狼毒总黄酮含量的影响 [J], 张如刚;刘晓松;哈斯苏荣;赵建荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蒙药材瑞香狼毒体外细胞毒性的研究
蒙药材瑞香狼毒体外细胞毒性的研究王玉华;杨夏;孙丽君;杨丽敏【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2012(007)001【摘要】目的研究蒙药瑞香狼毒炮制前后的体外细胞毒性和抗肿瘤活性.方法利用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇分别萃取获得瑞香狼毒药材生品、奶制品、煎膏制品的各溶剂提取物,再通过萃取、分离纯化方法分别获得瑞香狼毒的9个单体化合物、总蛋白质和6个相对分子质量不同的蛋白质组分(Pr.1～Pr.6).将各溶剂提取物及单体化合物制成浓度为2.0 mg/ml的溶液,总蛋白质制成浓度分别为0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mg/ml的系列溶液,各蛋白质组分制备成浓度均为10mg/ml的溶液,分别作为样品溶液,采用MTT法分别测定各样品对人肝癌SMMC-7721细胞、狗肾MDCK细胞的生长抑制作用.结果瑞香狼毒总蛋白质抗肿瘤活性和细胞毒性作用随其浓度增加而增强,其中4个蛋白质组分呈现较强的抗肿瘤活性,其活性由强至弱依次为Pr.4≥Pr.6≥Pr.3=Pr.2,3个蛋白质组分具有细胞毒性,其毒性由强至弱依次为Pr.4≥Pr.3≥Pr.1.瑞香狼毒单体化合物中,西瑞香素、狼毒色原酮、异狼毒素呈现不同程度的抗肿瘤活性,而狼毒色原酮、异狼毒素同时具有较弱的细胞毒性.除石油醚和多糖提取物外,瑞香狼毒药材生品各溶剂提取物均呈现不同程度的抗肿瘤活性和细胞毒性,并呈药物剂量依赖性；而炮制后,在保留一定程度抗肿瘤活性的基础上,其相应各溶剂提取物的细胞毒性均降低.结论瑞香狼毒的细胞毒性主要源自多成分的协同作用,其蛋白质可能是瑞香狼毒的主要毒性位点之一,而炮制方法可降低瑞香狼毒药材的毒性且保留其生物活性.【总页数】5页(P9-13)【作者】王玉华;杨夏;孙丽君;杨丽敏【作者单位】010110 呼和浩特,内蒙古医学院药学院自治区中蒙药重点实验室;010110 呼和浩特,内蒙古医学院药学院自治区中蒙药重点实验室;010110 呼和浩特,内蒙古医学院药学院自治区中蒙药重点实验室;010110 呼和浩特,内蒙古医学院药学院自治区中蒙药重点实验室【正文语种】中文【相关文献】1.不同炮制品瑞香狼毒药材急性毒性试验研究 [J], 胡爽;刘峰;陈美言2.蒙药瑞香狼毒及其奶制品中新狼毒素甲、瑞香素乙、新狼毒素乙的比较研究 [J], 吴七十三;王青虎;刘瑛;代那音台3.蒙药材瑞香狼毒炮制前后的体外抑菌活性研究 [J], 孙丽君;王秋桐;王玉华4.瑞香狼毒提取液对大鼠肺成纤维细胞增殖的抑制与其细胞毒性作用 [J], 杨珺;王世岭;吴坤;付桂英5.瑞香狼毒药材中蛋白质部位的体外活性研究 [J], 薄彧坤;周燕;王伟;王玉华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种制备瑞香狼毒中抗肿瘤成分的方法[发明专利]
![一种制备瑞香狼毒中抗肿瘤成分的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d37fca3d28ea81c759f578e6.png)
专利名称：一种制备瑞香狼毒中抗肿瘤成分的方法专利类型：发明专利
发明人：不公告发明人
申请号：CN201810772475.0
申请日：20180713
公开号：CN108904577A
公开日：
20181130
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种制备瑞香狼毒中抗肿瘤成分的方法，步骤如下：将瑞香狼毒干燥药材粉末用体积分数为65‑75%乙醇浸泡3‑5h，然后回流提取2‑4次，每次2.5‑3.5h，提取液用布氏漏斗抽滤，减压回收乙醇，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取物用大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、乙醇梯度洗脱，收集75%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比50:1、35:1、15:1、5:1、1:1的氯仿‑甲醇洗脱，收集5:1洗脱部分，浓缩即得。
该制备方法操作简单，得到的提取物具有抗肿瘤、抗菌活性，可以作为瑞香狼毒的有效部位应用于药品制备。
申请人：启东祥瑞建设有限公司
地址：226299 江苏省南通市启东市经济开发区人民西路2009号
国籍：CN
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瑞香狼毒的功能主治
瑞香狼毒的功能主治1. 介绍瑞香狼毒（学名：Daphne genkwa）是桃金娘科瑞香属的植物，主要分布于中国的陕西、甘肃、四川等地。
瑞香狼毒是一种有毒的草本植物，其鲜花和根茎含有毒性成分，所以在使用时需要谨慎。
瑞香狼毒在中医药学中被广泛应用，并具有多种功能和主治。
2. 主要功能和主治瑞香狼毒具有以下功能和主治：2.1. 清热解毒瑞香狼毒具有清热解毒的功效，可以用于治疗因热毒引起的疾病。
它可以清热解毒、凉血止血，对于热毒引起的咽喉肿痛、口腔溃疡、痈肿疮疡等症状有一定的疗效。
2.2. 利尿通淋瑞香狼毒还具有利尿通淋的作用，可促进尿液的排出，从而缓解水肿问题。
它常用于治疗由于湿热引起的浮肿、水肿等症状。
2.3. 支气管舒张瑞香狼毒对于本身具有支气管收缩作用的支气管疾病也有一定的治疗作用。
它可以舒张支气管，减轻支气管痉挛，增加肺部气体交换功能。
2.4. 抗菌消炎瑞香狼毒还具有一定的抗菌消炎作用，可以有效抑制细菌和病毒的生长，减轻炎症反应。
它在中医药中常用于治疗肺炎、支气管炎等疾病。
3. 用法和注意事项瑞香狼毒的用法和注意事项如下：1.鲜花：可将鲜花制成药酒或者煎剂，内服。
但是鲜花含有毒性成分，应遵医嘱使用，并注意剂量。
2.根茎：根茎可以制成药酒或者煎剂，也可以用于外敷。
使用时应遵医嘱，并注意剂量和使用方法。
3.注意事项：瑞香狼毒具有一定的毒性，使用时需要注意剂量，严禁过量使用。
孕妇、哺乳期妇女、儿童和老年人等特殊人群，以及体弱者不宜使用。
对于过敏体质者慎用，如出现过敏反应应立即停用，并就医处理。
4. 瑞香狼毒的研究和发展瑞香狼毒作为一种草本药材，在医学研究领域有着广泛的应用和开发。
研究发现，瑞香狼毒中的活性成分具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理作用，对于多种疾病有一定的治疗潜力。
但是由于其毒性，使用时需要注意剂量和使用方法，以免引起不良反应。
5. 总结瑞香狼毒作为一种有毒的植物，具有清热解毒、利尿通淋、支气管舒张和抗菌消炎等功能和主治。
瑞香狼毒总黄酮的提取及体外抗氧化作用研究
技术 提取 瑞 香狼 毒 中 的总黄 酮 ，并且 测定 瑞 香狼 毒 中 的总 黄酮 对 羟基 自由基 、 氧 阴离 子 自由基 的 清除作 用 ， 超 旨在 测 定瑞 香 狼毒 黄酮 提取 物 的抗 氧化 能 力 ．从 而 为瑞 香 狼毒 的 深度 开 发和 利用 提供 一 些有 益 的参 数 ，并 为 瑞香 狼 毒早 日 成为 天然 药物 奠定 理论 基础 。
Ｔ ｅ ｏ ｃ ｓ ｎｃ ｕｄ ｅｍ ｄ ａ ｉ ｉａｐｏ ｉ ｎ ａ ｒ ｔ ｘｄ ｎ ｒｈ ｘ ｌ ｔｔ ｎ ｎ ｅ ｅ ｐ ｅ ｔ ｈ ｎ ｌ ｉ ｏ ｌ ａ ｅ ｈ ｔｔｓ ｒｍ ｓ ｇ ｔ ａ ａ ｉ ｉａ ｌｏ ｅ ｐｏ ａ ｏ ｄ ｖ ｌ ｍ ｎ． ｃ ｕｏ ｂ ｔ ｉ ｎ ｕ ｌｎｏ ｆ ｔ ｅ ｉ ｉ ａ ｄ ｏ Ｋ ｙｗ ｒ ｓＳｅｌ ｕ ｈ ｍａ ａ ｍ ． ｏａ ｆ ｖ ｎ ｉ； ｌ ａｏ ｉ ｔｃ ｎ ｌ ｙ ａ ｔ ｏ ｉ ｔ ｎ ｅ ｏ ｄ ： ｔ ｅ ａ ｅ ｓ ｅＬ； ｔｌｌ ｏ ｏｄ ｕ ｒｓｎｃ ｅ ｈ ｏｏ ； ｎｉ ｘｄ ｉ ｌｒｃ ｊ ｔ —ａ ｔ ｇ － ａｏ
（ 蒙 古农 业 大 学 兽 医学 院 ， 内 内蒙 古 呼和 浩 特 ００ １） １０ ８
摘 要 ： 用超 声波技 术提 取 瑞香 狼毒 中的 总黄 酮 ， 运 用亚硝 酸钠 一 酸铝 比 色法测 定 总黄 酮含 量 ， 香狼毒 总黄 酮提 取 物 硝 瑞 中的 黄 酮含量 为 ２ ．０ 采 用抗 坏 血 酸 （ ） ４３ ％， ＶＣ 作为 对 照 ， 定 了瑞 香 狼毒 总 黄 酮对 超 氧 阴 离子 自由基 的清 除 能力 与 羟 测 基 自由基的 清除 能力 。结果表 明 ， 香狼 毒 总黄 酮具 有显 著的体 外 清除超 氧 阴离子 自由基 、 瑞 羟基 自由基 的作 用 ， 其作 用
瑞香狼毒提取物尼地吗啉的抗肿瘤研究概况
瑞香狼毒提取物尼地吗啉的抗肿瘤研究概况王园园;王鑫;王义善【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2011(29)5【摘要】本文就瑞香狼毒中抗肿瘤活性成分尼地吗啉的抗肿瘤机制、研究现状及其临床应用存在的问题进行了较完整的总结和介绍,进一步分析了尼地吗啉作为一种抗癌药物的可行性及临床应用减毒增效方案,籍此为尽可能的发挥祖国传统肿瘤中医中药巨大潜能,深入研究抗肿瘤有效单体成分提供参考.%A relatively complete summary on the anti-tumor component gnidimacrin was introduced, which was extracted from Stellera chamaejasma L. The research status of gnidimacrin's antitumor mechanism and its clinical application were reviewed. A further analysis on the feasibility and attenuated efficiency programs of the Gnidimacrin as an antitumor drug was made. The review could provide reference to exert the enormous potential of Chinese traditional medicine as much as possible and to deeply excavate the effective monomers.【总页数】4页(P328-330,335)【作者】王园园;王鑫;王义善【作者单位】解放军第107医院国家中西医结合肿瘤治疗重点专科,山东烟台264002;解放军第107医院国家中西医结合肿瘤治疗重点专科,山东烟台264002;解放军第107医院国家中西医结合肿瘤治疗重点专科,山东烟台264002【正文语种】中文【中图分类】R287【相关文献】1.中药瑞香狼毒抗肿瘤作用研究概况 [J], 梁秀艳;吴琳华2.瑞香狼毒抗肿瘤作用及机制研究概况 [J], 樊俊杰3.瑞香狼毒石油醚提取物硅胶柱层析分离组分的体外抗肿瘤作用 [J], 王彬;王锐;贾正平;马骏;张汝学4.瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用 [J], 王敏;贾正平;马骏;王彬5.不同极性溶媒瑞香狼毒提取物的抗肿瘤活性比较 [J], 罗慧英;王爱勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用王 敏1*,贾正平2,马 骏2,王 彬2(11兰州医学院中西医结合研究所,甘肃兰州730000;21兰州军区兰州总医院全军临床药理基地,甘肃兰州730050)[摘要] 目的: 研究瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用。
方法:体外抗肿瘤活性研究采用MTT 比色法和集落形成法测定,靶细胞采用人胃癌细胞SGC -7901、人肝癌细胞BE L -7402和人白血病细胞HL -60;通过提取物对小鼠的移植性肿瘤S180和H22生长的影响来评价体内抗肿瘤作用。
结果:瑞香狼毒总黄酮提取物对体外培养的肿瘤细胞有较强的抑制作用,体外抗肿瘤活性高于长春新碱;瑞香狼毒总黄酮提取物急性毒性较小,对小鼠移植性肿瘤S180和H22的生长也有显著的抑制作用,并和剂量正相关,高剂量组对小鼠移植性肿瘤S180的抑制率为45164%,H22的为47159%,与阳性对照组环磷酰胺的抑制率接近。
结论:瑞香狼毒总黄酮提取物具有较强的体内和体外抗肿瘤作用。
[关键词] 瑞香狼毒;总黄酮提取物;MTT;抗肿瘤;体外;体内[中图分类号]R 28515 [文献标识码]A [文章编号]1001-5302(2005)08-0603-04[收稿日期] 2004-10-12[基金项目] 兰州军区医药卫生科研项目(LXH94-6)[通讯作者]*王敏,Tel:(0931)8761010瑞香狼毒为瑞香科狼毒属植物,为常用中药/狼毒03种原植物之一,具有显著的抗肿瘤活性,近年东北和河北地区民间用以治疗胃癌、肠癌、肺癌等取得较好效果。
有关瑞香狼毒抗肿瘤活性及其机制研究,本研究小组已做了10多年的基础研究工作,对瑞香狼毒水提物、醇提物的抗肿瘤作用、血清药理学及分子生物学机理做了较全面细致的工作[1-4]。
为了研究瑞香狼毒中的抗肿瘤活性成分,作者对瑞香狼毒中的总黄酮成分进行了提取和含量测定,通过体外细胞培养实验和小鼠移植性肿瘤评价瑞香狼毒中总黄酮提取物的抗肿瘤效果。
1 材料111 药材 瑞香狼毒由兰州市药材供应站提供,经西北师范大学植物所晏民生副教授鉴定为瑞香科植物瑞香狼毒。
112 动物 Balb/c 纯种小鼠,体重18~22g,雌雄兼有,SPF 级,由兰州军区总医院动物实验科提供并负责饲养。
113 主要药品与试剂 RPMI -1640培养基为Gibco 公司的产品;MTT 为Sigma 公司的产品;小牛血清为四季青公司的产品;试剂均为分析纯;环磷酰胺(C TX),上海华联制药有限公司生产,批号031015;长春新碱(VC R),上海华联制药有限公司生产,批号031102A 。
114 细胞系 人胃癌细胞SGC -7901、人肝癌细胞BE L -7402和人白血病细胞HL -60均引自中国科学院上海细胞生物研究所的细胞库;用RPMI -1640培养液(含10%的小牛血清,100kU #L -1青霉素,100mg #L -1链霉素),37e ,5%CO 2,相对湿度100%培养,0125%胰蛋白酶消化传代。
115 瘤株 S180实体瘤由甘肃省肿瘤所引进,本实验室冷冻保存,用Balb/c 小鼠接种传代;H22实体瘤由兰州大学生命科学学院引进,本实验室冷冻保存,用Balb/c 小鼠接种传代。
2 方法211 瑞香狼毒总黄酮提取物的制备 瑞香狼毒95%乙醇提取物与硅藻土拌样挥干后,装入玻璃管柱中,用石油醚流洗,去除其中的叶绿素和极性较小的成分;流洗结束后倒出硅藻土化合物,挥干溶剂,重新装入玻璃管柱,用正丁醇流洗提取,用1%三氯化铝乙醇溶液与黄酮类化合物在滤纸上显色后在紫外灯下观察有无黄绿色荧光的方法检识监控,提取至流洗液无黄酮反应时结束;正丁醇提取液浓缩后挥干溶剂,用少量95%的乙醇溶解后上聚酰胺树脂柱,依次用水和95%的乙醇洗脱,收集95%的乙醇洗脱液,洗脱至检识无黄酮反应时结束;浓缩95%#603#的乙醇洗脱液,自然干燥,挥干溶剂后得到的成分即为总黄酮成分。
212瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量测定参考文献[5]的方法进行测定。
精密称取40mg总黄酮提取物样品,用60%乙醇溶解定容于100m L量瓶中,摇匀。
精密量取25mL置于50mL量瓶中,加水稀释至刻度(012mg#mL-1)。
精密量取上述溶液310,410,510mL置于10mL量瓶中,再分别稀释至相当样品浓度。
按照标准曲线的测定方法测定吸收度后,计算样品中总黄酮的含量。
213MTT比色法参考文献[6]的方法进行。
214集落形成法参考文献[7]的方法进行。
215急性毒性实验取60只Balb/c纯种小鼠,体重18~22g,雌雄各半,随机分成6组,腹腔注射给药,每只016mL,给药剂量分别为4100,3100,2125, 1169,1127,0195g#kg-1,给药后连续观察14d,记录小鼠死亡只数。
216小鼠的移植性肿瘤实验参考文献[8]的方法进行。
瑞香狼毒总黄酮提取物用山梨醇甲酯研磨配制成01025,0105,0110g#kg-13个给药剂量组,分别编号为ScL1F1,ScL1-F2,Sc L1F3;对照组腹腔注射等量的山梨醇甲酯,阳性对照组给C TX0102g#kg-1。
217统计学分析各组数据使用SPSS1010统计软件分析,组间样本比较采用t检验。
3结果311瑞香狼毒总黄酮提取物中黄酮含量测定以芦丁为标准对照品绘制标准曲线,得标准曲线方程: A=111669C-01007,r=019996。
A代表各含量样品吸收度,C代表不同芦丁提取物浓度。
测定结果见表1,瑞香狼毒原药材中黄酮含量为1113%,总黄酮提取物中黄酮含量为24137%。
表1瑞香狼毒和总黄酮提取物中黄酮的含量%样品3mL4mL5mL平均值瑞香狼毒药粉1116111211111113总黄酮提取物24114241212417724137 312瑞香狼毒总黄酮提取物对体外培养的肿瘤细胞增殖的抑制作用MTT法检测结果表明,瑞香狼毒总黄酮提取物与长春新碱对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞BEL-7402增殖都表现出较强的抑制作用,呈现较好的剂量依赖性抑制作用。
同时,瑞香狼毒总黄酮提取物的对以上2株细胞的抑制作用略强于长春新碱;对体外培养的人白血病细胞HL-60的增殖有一定的抑制作用,但略弱于长春新碱;线性回归法计算IC50值,结果见表2。
集落形成法检测结果表明:瑞香狼毒总黄酮提取物对以上3株细胞的克隆增殖均有抑制作用,但效果低于长春新碱;线性回归法计算IC50值,结果见表2。
表2MTT法测定瑞香狼毒总黄酮提取物和长春新碱的IC50值L g#m L-1肿瘤细胞总黄酮提取物MTT法集落形成法长春新碱M TT法集落形成法SGC-79012901459124397197010176BEL-740224516877154353127010065HL-604071944152328198010113 313瑞香狼毒总黄酮提取物急性毒性作用实验数据经由蓝宙药学专业软件系列之LD50数据处理程序计算得半数致死量LD50=119848g#kg-1,说明瑞香狼毒总黄酮提取物的急性毒性小。
314瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤H22生长及脾脏指数的影响瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤H22的生长有显著的抑制作用,并和剂量正相关。
Sc L1F2,ScL1F3组对肿瘤抑制率与对照组相比有显著性差异(P<0105),但低于阳性对照组CTX。
各剂量组小鼠的体重无明显的下降,说明在给药剂量范围内瑞香狼毒总黄酮提取物的毒性很小。
各组对荷瘤S180小鼠的脾脏指数的影响很小,无显著性差异(P>0105)。
315瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤S180生长及脾脏指数的影响瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤S180的生长有显著的抑制作用,并和剂量正相关。
Sc L1F2,ScL1F3组对肿瘤抑制率与对照组相比有极显著性差异(P<0101),而且Sc L1F3组的抑制率高于阳性对照组CTX。
ScL1F2组使荷瘤S180小鼠的脾脏指数降低,有显著性差异(P<0105)。
其余各组均对小鼠的脾脏指数的影响很小,无显著性差异(P>0105)。
4讨论寻找具有抗癌作用强、抗癌谱广、副作用小的天然活性化合物是抗癌药物研究的重要途径。
近年来对瑞香狼毒大量的药理研究表明,瑞香狼毒具有很强的抗肿瘤作用,并作为抗癌中药试用于临床。
冯威健等从瑞香狼毒中分离得到抗肿瘤活性很强的二萜类化合物尼地吗啉,并认为尼地吗啉是瑞香狼毒中的主要抗肿瘤活性成分,但其活性剂量与毒性剂# 604 #量接近,其很强的毒性作用降低了临床应用的价值[9,10]。
目前,对瑞香狼毒大量的化学成分研究表明,瑞香狼毒中还含有结构比较特殊的双二氢黄酮类、木脂素类、香豆素类等化合物,而这些成分对于抗肿瘤活性化合物的筛选具有广阔的研究开发前景。
表3瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤H22生长及脾脏指数的影响(x?s)组别剂量/g#kg-1#d-1n前/后体重/g前后瘤重/g抑制率/%脾脏指数/mg#g-1对照01008/101819231861153?014210110?3120 CTX01028/101910211250160?01212)6019110104?1178 Sc L1F1010258/101819221131146?0162413210152?3192 Sc L1F201058/101819211631104?01151)3116810189?5127 Sc L1F301109/101819211670183?01261)4516412123?3124注:与对照组比较1)P<0105,2)P<0101(表4同)表4瑞香狼毒总黄酮提取物对小鼠移植性肿瘤S180生长及脾脏指数的影响(x?s)组别剂量/g#kg-1#d-1n前/后体重/g前后瘤重/g抑制率/%脾脏指数/mg#g-1对照01009/1020150231221137?014213162?3140 CTX010210/1020167221560175?01242)4510811134?3100 Sc L1F1011010/1020170221301105?01622313313186?2154 Sc L1F201209/1020160221900178?01302)4313810148?11691) Sc L1F3014010/10201702218090172?01212)4715912155?2133本研究结果表明,通过MTT法检测瑞香狼毒总黄酮提取物的体外抗肿瘤作用,其活性高于临床常用的植物来源的抗肿瘤药物长春新碱;但集落形成法检测结果表明,其对肿瘤细胞的克隆增殖抑制活性远低于长春新碱。