人教版高中生物选修一2-2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt同步课件
存。
2．结果分析与评价 内容 现象 对照的培养皿中无菌 落生长 培养物中菌落数偏高 菌落形态多样，菌落 数偏高 结论 未被杂菌污染 被杂菌污染 培养物中混入其他杂菌
有无杂菌污 染的判断
选择培养基 的筛选作用
牛肉膏培养基上的菌 落数目大于选择培养 选择培养基具有筛选作用 基上的数目
得到三个或三个以上 菌落数目在30～300 操作成功 的平板 重复组的结果 若选取同一种土样，统计结果应接近 样品的稀释 操作
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课程标准 测定某种微生物的数量。
课标解读
1.利用选择培养基分离细菌。 2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。
微生物的分离与计数
1．筛选菌株 (1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对 到相应的环境中去寻找。 (2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 目的菌株生长 的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 抑制 或 阻止 其他微生 生存环境 的要求，
(3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在 30～300 的平板，计
数公式为 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 。
3．设置对照 (1)对照实验：是指除了 被测试因素 的实验。 (2)主要目的：排除实验组中 非测试因素 对实验结果的影响， 以外，其他条件都相同
提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，
作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源
板划线
以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作
土壤中分解尿素的细菌的分离计数实 验操作与评价
1．实验设计
(1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 细菌 。 ②细菌适宜在酸碱度接近中性 的 潮湿 土壤中生长，绝大多 数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
如果要测定②中活细菌数量，常采用______法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基 的主要区别在于 ____________________ ；使用 ____________ 法可 以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的 原因是________________________________________________
(2)样品处理 样品的 稀释程度 直接影响平板上生长的 菌落数目，选用一定稀释 范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察
需以 牛肉膏蛋白胨 培养基培养作为空白对照。
[思维激活1] 上述的对照组培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)是否也需
接种？如何确认所制备的选择培养基的确起到了选择作用？ 提示 为确认培养基是否被杂菌污染时，对照组的牛肉膏蛋白胨
培养基不需接种。欲确认所制备的选择培养基是否起到了选择作 用，应同时对对照组的牛肉膏蛋白胨培养基进行接种 ——若对照组
培养基中菌落种类明显复杂于实验组，则可确认选择培养基的确
起到了选择作用。
1．选择培养基的制作方法 (1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些 微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制 不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入 高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球
(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一
碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油 的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。
(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌， 其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得
到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生
【巩固1】 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在 着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了 降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解
利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤
样品。请回答下列问题。
(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入 ______作为碳源，② 中不同浓度碳源的培养基______(A.影响；B.不影响)细菌的数量，
物生长。
(3)选择培养基：在微生物学中，将允许 同时 养基。 抑制 和
特定 种类的微生物生长，
阻止 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培
2．统计菌落数目
(1)常用方法： 稀释涂布平板 法。 (2)统计依据：当样品的 稀释度 足够高时，培养基表面生长的 一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 活菌 。通过统计平板 上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。
质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然
后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，
再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的 水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计 实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌 操作。 答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 稀释涂布平板法或平
________________________________________________。
(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？ ___________________________________________________。
解析
根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物
特别提示
(1)不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬
度、透明度等方面的特征不同，可以作为菌种鉴定的重要依据。 (2)进行活菌计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这 是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌
落。
(3)选择培养基一般只生长具有特定代谢特性的微生物，鉴别培养 基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。
பைடு நூலகம்
菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素
时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。
(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中 缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏 氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生 存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。
2．结果分析与评价 内容 现象 对照的培养皿中无菌 落生长 培养物中菌落数偏高 菌落形态多样，菌落 数偏高 结论 未被杂菌污染 被杂菌污染 培养物中混入其他杂菌
有无杂菌污 染的判断
选择培养基 的筛选作用
牛肉膏培养基上的菌 落数目大于选择培养 选择培养基具有筛选作用 基上的数目
得到三个或三个以上 菌落数目在30～300 操作成功 的平板 重复组的结果 若选取同一种土样，统计结果应接近 样品的稀释 操作
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课程标准 测定某种微生物的数量。
课标解读
1.利用选择培养基分离细菌。 2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。
微生物的分离与计数
1．筛选菌株 (1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对 到相应的环境中去寻找。 (2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 目的菌株生长 的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 抑制 或 阻止 其他微生 生存环境 的要求，
(3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在 30～300 的平板，计
数公式为 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 。
3．设置对照 (1)对照实验：是指除了 被测试因素 的实验。 (2)主要目的：排除实验组中 非测试因素 对实验结果的影响， 以外，其他条件都相同
提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，
作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源
板划线
以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作
土壤中分解尿素的细菌的分离计数实 验操作与评价
1．实验设计
(1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 细菌 。 ②细菌适宜在酸碱度接近中性 的 潮湿 土壤中生长，绝大多 数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
如果要测定②中活细菌数量，常采用______法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基 的主要区别在于 ____________________ ；使用 ____________ 法可 以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的 原因是________________________________________________
(2)样品处理 样品的 稀释程度 直接影响平板上生长的 菌落数目，选用一定稀释 范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察
需以 牛肉膏蛋白胨 培养基培养作为空白对照。
[思维激活1] 上述的对照组培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)是否也需
接种？如何确认所制备的选择培养基的确起到了选择作用？ 提示 为确认培养基是否被杂菌污染时，对照组的牛肉膏蛋白胨
培养基不需接种。欲确认所制备的选择培养基是否起到了选择作 用，应同时对对照组的牛肉膏蛋白胨培养基进行接种 ——若对照组
培养基中菌落种类明显复杂于实验组，则可确认选择培养基的确
起到了选择作用。
1．选择培养基的制作方法 (1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些 微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制 不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入 高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球
(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一
碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油 的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。
(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌， 其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得
到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生
【巩固1】 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在 着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了 降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解
利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤
样品。请回答下列问题。
(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入 ______作为碳源，② 中不同浓度碳源的培养基______(A.影响；B.不影响)细菌的数量，
物生长。
(3)选择培养基：在微生物学中，将允许 同时 养基。 抑制 和
特定 种类的微生物生长，
阻止 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培
2．统计菌落数目
(1)常用方法： 稀释涂布平板 法。 (2)统计依据：当样品的 稀释度 足够高时，培养基表面生长的 一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 活菌 。通过统计平板 上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。
质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然
后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，
再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的 水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计 实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌 操作。 答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 稀释涂布平板法或平
________________________________________________。
(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？ ___________________________________________________。
解析
根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物
特别提示
(1)不同细菌的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬
度、透明度等方面的特征不同，可以作为菌种鉴定的重要依据。 (2)进行活菌计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这 是因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌
落。
(3)选择培养基一般只生长具有特定代谢特性的微生物，鉴别培养 基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。
பைடு நூலகம்
菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素
时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。
(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中 缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏 氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生 存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。
合集下载
人教版高中生物选修一专题二课题《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》-ppt精品课件
在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可
能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混 入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也 能在该培养基上生长。
但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与
其他同学其的他结果同之学所用以A同不学相一同，样是的因土为壤自进己行所实选验用的
6、牛等牲畜的瘤胃中生活着许多以尿素作唯一氮 人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共19张PPT) 源的微生物。某同学从刚宰杀的牛的瘤胃中取样 获得菌液，并对能分解尿素的细菌进行分离、计 数和鉴定。回答下列问题： （1）从“菌液”中分离出能分解尿素的菌：
培养基中的唯一氮源应是__尿__素___，这样的培 养基通常叫做__选__择___培养基。为了能在培养基上 形成菌落，培养基中应加入_凝__固__剂__（__琼__脂__）__，可 用_平__板__划__线__法__(_稀__释__涂__布__平__板__法__)方法进行接种。 （2）对“菌液”中能分解尿素的菌进行计数：
土壤样品不同。但又拿不出令同学们信服的证据。 你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可
能影响实验结果的因素吗？
人教版高中生物选修一专题二课题2《 土壤中 分解尿 素的细 菌的分 离与计 数》 课件(共19张PPT)
（三）设置对照、设置重复
1、对照实验（P23）： 指除了被测试的条件以外，其他条件都相
(4）为了鉴定该菌种，在以尿素为唯一氮源的 培养基需添加__酚__红__作指示剂，目的菌在生长过 程中产生_脲____酶能催化尿素分解并产生__氨____， 使pH升高，指示剂变红。
人教版高中生物选修一专题二课题2《 土壤中 分解尿 素的细 菌的分 离与计 数》 课件(共19张PPT)
能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混 入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也 能在该培养基上生长。
但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与
其他同学其的他结果同之学所用以A同不学相一同，样是的因土为壤自进己行所实选验用的
6、牛等牲畜的瘤胃中生活着许多以尿素作唯一氮 人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共19张PPT) 源的微生物。某同学从刚宰杀的牛的瘤胃中取样 获得菌液，并对能分解尿素的细菌进行分离、计 数和鉴定。回答下列问题： （1）从“菌液”中分离出能分解尿素的菌：
培养基中的唯一氮源应是__尿__素___，这样的培 养基通常叫做__选__择___培养基。为了能在培养基上 形成菌落，培养基中应加入_凝__固__剂__（__琼__脂__）__，可 用_平__板__划__线__法__(_稀__释__涂__布__平__板__法__)方法进行接种。 （2）对“菌液”中能分解尿素的菌进行计数：
土壤样品不同。但又拿不出令同学们信服的证据。 你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可
能影响实验结果的因素吗？
人教版高中生物选修一专题二课题2《 土壤中 分解尿 素的细 菌的分 离与计 数》 课件(共19张PPT)
（三）设置对照、设置重复
1、对照实验（P23）： 指除了被测试的条件以外，其他条件都相
(4）为了鉴定该菌种，在以尿素为唯一氮源的 培养基需添加__酚__红__作指示剂，目的菌在生长过 程中产生_脲____酶能催化尿素分解并产生__氨____， 使pH升高，指示剂变红。
人教版高中生物选修一专题二课题2《 土壤中 分解尿 素的细 菌的分 离与计 数》 课件(共19张PPT)
人教版高中生物 选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离(共19张PPT)
•
16、提出 一个问 题往往 比解决 一个更 重要。 因为解 决问题 也许仅 是一个 数学上 或实验 上的技 能而已 ，而提 出新的 问题， 却需要 有创造 性的想 像力， 而且标 志着科 学的真 正进步 。2021/ 8/1120 21/8/1 1Augus t 11, 2021
•
17、儿童 是中心 ，教育 的措施 便围绕 他们而 组织起 来。202 1/8/11 2021/8 /11202 1/8/11 2021/8 /11
D. 23.4
每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
(三)设置对照实验
设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提 高实验结果的可信度。
阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出 的问题。
(1)A同学出现此结果的可能原因？
⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质)
巩固练习
1.使用选择培养基的目的是（
A.培养细菌
）C
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分
别是( )
A.CO2和N2 C.CO2和尿素
B.葡萄糖和NH3
D
D.葡萄糖和尿素
3.下列说法不正确的是（ B ）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
人教版高中生物选修一2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt课件
操作提示
• 无菌操作
1. 取土样的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2. 应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称 好的土样倒入烧瓶中，塞好棉塞。 3. 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。
做好标记
• 本实验使用的平板和试管比较多。为 避免混淆，最好在使用前就做好标记。
例如：
在标记培养皿时，应注明培养基种类、 培养日期以及平板上培养样品的稀释 度。
实验室微生物的筛选原理
应用筛选 Taq 细菌的原理，人为提 供有利于目的菌株生长的条件（包 括营养、温度、pH等），同时抑制 或阻止其他微生物生长。
统计菌落数目
常用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数 目。样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就 能推测出样品中大约含有多少活菌。为保 证结果准确，一般选择菌落数30—300的
■高中生物课件（人教课标版）
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题背景
尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并 不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的 细菌将尿素分解成氮之后，才能被植物利 用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是 因为它们能合成脲酶。
尿素最初是从人的尿液中ຫໍສະໝຸດ 现的。• 指示剂也可以帮助我们准确地鉴定该 种细菌能否分解尿素。
相关链接
• 活菌计数技术广泛应用于土壤含菌亮的测 定、食品卫生和水源污染度的检验等方面。 如果你赶兴趣，可以从下列项目中选做一 个。 空气中微生物总数的检测 水中细菌总数的检测 牛奶中细菌的分离与计数 土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
规划时间
• 对于耗时较长的生物实验，我们需要 实现规划时间，以便提高工作效率， 在操作时更加有条不紊。
高中生物 人教版 选修1 专题2 微生物的培养与应用 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件 (36张PPT)
B 体积为0.1 mL）（ ） A.2.34×108 .2.34×109 C.234 D.23.4
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每 毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
2020/6/12
13
一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。 （3）公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂 布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。
获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去寻找。
2020/6/Байду номын сангаас2
5
一、研究思路
（一）筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度 、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法：
（1）提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、
缺点
✓不能区分死菌与活菌；
✓不适于对运动细菌的计数；
✓ 2020/6/12 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
11
一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。
2020/6/12
12
一、研究思路
（二）统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每 毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
2020/6/12
13
一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。 （3）公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂 布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。
获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去寻找。
2020/6/Байду номын сангаас2
5
一、研究思路
（一）筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度 、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法：
（1）提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、
缺点
✓不能区分死菌与活菌；
✓不适于对运动细菌的计数；
✓ 2020/6/12 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
11
一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。
2020/6/12
12
一、研究思路
（二）统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数人教版选修PPT课件
课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
关于菌种的筛选和计数 1．菌株的筛选 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①根据它对___生__存__环__境___的要求到相应的环境中去寻找。 ②从土壤中分离出目的菌株。 (2)实验室目的菌株的筛选 原理：人为提供有利于___目__的___菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
测定真菌：选用稀释 102、103、104倍
细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察 放线菌：25～28 ℃；5～7 d
真菌：25～28 ℃；3～4 d
计数
每克样品中的菌株数＝(C/V)×M， C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；
V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数
5
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．关于选择培养基 (1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养 基。 (2)举例：以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离 到分解纤维素的微生物；缺氮培养基可以分离到固氮微生物等。
答案：A
12
分离能分解尿素的细菌
【例 2】选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为( )
A．硝酸
B．氨
C．尿素
D．蛋白胨
【名师点拨】：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺
乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，从而受到抑制，所以，以尿素为唯一氮源的培养基能够
选择出分解尿素的微生物。
1
2．统计菌落数目的方法 (1)____直__接______计数法 ①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_显__微__镜___ 下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点：不能区分死菌和活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个 ___单__细__胞_____繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培 养，统计___菌__落___的数目。
关于菌种的筛选和计数 1．菌株的筛选 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①根据它对___生__存__环__境___的要求到相应的环境中去寻找。 ②从土壤中分离出目的菌株。 (2)实验室目的菌株的筛选 原理：人为提供有利于___目__的___菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
测定真菌：选用稀释 102、103、104倍
细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察 放线菌：25～28 ℃；5～7 d
真菌：25～28 ℃；3～4 d
计数
每克样品中的菌株数＝(C/V)×M， C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；
V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数
5
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．关于选择培养基 (1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养 基。 (2)举例：以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离 到分解纤维素的微生物；缺氮培养基可以分离到固氮微生物等。
答案：A
12
分离能分解尿素的细菌
【例 2】选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为( )
A．硝酸
B．氨
C．尿素
D．蛋白胨
【名师点拨】：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺
乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，从而受到抑制，所以，以尿素为唯一氮源的培养基能够
选择出分解尿素的微生物。
1
2．统计菌落数目的方法 (1)____直__接______计数法 ①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_显__微__镜___ 下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点：不能区分死菌和活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个 ___单__细__胞_____繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培 养，统计___菌__落___的数目。
2020-2021学年人教版生物选修1课件：2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
3．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是( A ) A．在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落 B．在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒 C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌 D．在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后， 可以用于制取土壤稀释液
解析：要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，①正确、 ②错误；分离土壤中分解尿素的细菌用固体培养基需加入琼脂， ③正确，④错误；培养基中需要加碳源即葡萄糖，⑤正确，⑥错 误；不需要氮源，故不加硝酸盐，⑦错误，⑧正确，因此 B 正确。
2．下列关于微生物计数的实验分析中，说法错误的是( C ) A．取样不同，会导致实验结果不同 B．微生物不同，需要稀释的倍数一般不同 C．实验过程中需要对样品、培养基进行灭菌 D．实验需要空白对照，以确保培养基和操作过程未被污染
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课
课
堂
后
巩
检
固测课基堂础Fra bibliotek训练固一、选择题(每小题 4 分，共 20 分) 1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( B ) ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦ B．①③⑤⑧ C．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
(4)在实验中，当菌落数目稳定时，应选取平板计数方法计数；在 实验中，研究者每隔 24 小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定 时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏细菌数目。
4．在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在 培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入 10%酚 可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体 中分离出( C )
人教版高中生物选修1专题二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(课件 共29张PPT)
实例：Taq DNA聚合酶的发现
DNA多聚酶链式反应是一种在 体外将少量DNA大量复制的技术。 此项技术的自动化，要求使用耐高 温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？
科学家是从水生耐热细菌 Taq 中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶 的。
2、选择培养基
定义 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。
如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果 结果相差太远，教师需要引导学生一起分析产生差异的原因。
CO(NH2)2+H2O
脲酶
CO2+2NH3
课堂小结
土壤 中分 解尿 素的 细菌 的分 离与 计数
筛选原则 筛选菌株 选择培养 定义 选择培养基 研究 配方 统计菌落数目 思路 目的 设置对照 定义 土壤取样 实验设计 配制培养基 微生物培养与观察 细菌的计数 无菌操作 操作提示 做好标记 制定计划 结果分析与评价
缺点
不能区分死菌与活菌； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2、稀释涂布平板法（活菌计数法）
原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品 稀释液中的一个活菌。 恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。
①选 30∼300 个菌落的平板统计。 ②每个稀释度取3个平板取其平均值。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
样品稀释培养示意图
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表
涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
（三）设置对照： （1）设置对照的目的： 是排除实验组中非测试因素对 实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 指除了被测试的条件外，其他条件都 （2）对照实验： 相同的实验。
专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数-高二生物同步课件讲解(人教版选修1 )
注意事项 （一）无菌操作 小铁铲、信封灭菌、称取、倒入锥形瓶中、 稀释土壤在火焰附近操作 （二）做好标记
试管多，做好数字标记
（三）制定计划 制定计划，有条不紊
结果分析与评价
分解尿素的细菌的鉴定 鉴定原理：
细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果变 为红色，初步鉴定该细菌能分解尿素
脲
实验设计
土壤中某样品细菌的分离与计数
1.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样，绝大多数细菌分布在距地表约 3-8cm的土壤层，因此，取样时应先铲去表层的土壤。 2.样品的稀释 稀释原因：样品中的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目 稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得
的菌落30-300之间，便于计数。 3稀.微释生倍物数土释的：壤度培中。养不与同观微察生培观物养察的：：每 取不 培数隔菌同 养量2落种温4不数h类度统同目微和计稳，生时一定需物间次的，要菌记往采落录往用数作需不量为要同，结不最的果同后稀的选
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 研究思路 一、筛选菌株
（1）自然界中目的细菌的筛选
依实据例：：根P从C据热R它泉技对中术生筛用存选到环出的境的耐的T高a要p温细求的菌，Ta中到p提D相N取应A出聚的来合环酶境，中是去寻找
（2）实验室中目的细菌的筛选
人为提供有利于目的菌株生长的条件（营养、温度、
原理：PH等）同时抑制或阻止其他微生物的生长。 方法：利用选择培养基分离 实例：选择分解尿素的细菌培养基，以尿素作为唯一
氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
二.统计菌落Βιβλιοθήκη 目 稀释涂布平板法 显微镜技术法三.设置对照
人教版选修1 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课件(17张)
研究思路
统计菌落菌数目
设置对照 土壤取样
土壤中分解 尿素的分离 与计数
样品稀释 实验设计 涂布平板
培养观察 操作提示 结果分析与评价 课外延伸
1.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在 事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均 与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温 培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不 正确的是( D )
土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数——步骤一
KH2PO4 NaHPO4 MgSO4 H2O 葡萄糖 尿素 琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
将上述物质溶解后 ，用蒸馏水定容 到1000mL。
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 脲酶 NH + CO CO(NH ) + H O
A．链霉素能阻止结核菌的生长 B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D．链霉素可以用于治疗伤寒病人
2.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对 应稀释倍数为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果， 正确的是( D ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B ．涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260 ，取平均 值238 C ．涂布了三个平板，统计的菌落数是 21 、 212 和 256 ，取 平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取 平均值233
不同类型的微生物形成的菌落往往有差别---微生物 分类依据
（五）微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时 间不足而导致遗漏菌落的数目。
统计菌落菌数目
设置对照 土壤取样
土壤中分解 尿素的分离 与计数
样品稀释 实验设计 涂布平板
培养观察 操作提示 结果分析与评价 课外延伸
1.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在 事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均 与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温 培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不 正确的是( D )
土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数——步骤一
KH2PO4 NaHPO4 MgSO4 H2O 葡萄糖 尿素 琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
将上述物质溶解后 ，用蒸馏水定容 到1000mL。
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 脲酶 NH + CO CO(NH ) + H O
A．链霉素能阻止结核菌的生长 B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D．链霉素可以用于治疗伤寒病人
2.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对 应稀释倍数为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果， 正确的是( D ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B ．涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260 ，取平均 值238 C ．涂布了三个平板，统计的菌落数是 21 、 212 和 256 ，取 平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取 平均值233
不同类型的微生物形成的菌落往往有差别---微生物 分类依据
（五）微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时 间不足而导致遗漏菌落的数目。
人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(共24张PPT)
需培养基：
①从物理性质看 此培养基属于哪
KH2PO4 NaH2PO4
1.4g 2.1g
类？ 固体培养基
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
②在此培养基中 哪些作为碳源、 氮源？
尿素 琼脂
1.0g 15.0g
碳源：葡萄糖
氮源：尿素
③此培养基对微生物是否具有选择作用？ 具有。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，才 能在此培养基上生长
灭菌的试管和1个灭菌的移液管。
③ 应在火焰旁称取土壤 10 g。在火焰附近将称好的土样倒入
盛有90mL 无菌水 的锥形瓶中，塞好 棉塞 。在稀释土壤溶液的
过程中，每一步都要在 火焰旁 进行（无菌操作）。
④ 为避免试管相互混淆，可以将已经进行过稀释的试管，按
稀释度递增的顺序
依次放在试管架的另一行。
① 按照浓度 从低到高的顺序 涂布平板，不 必更换移液管（无菌操作）。
② 实验时要对培养皿作好标记，注 明 培养基类型、、培养时间、、稀释度 等。
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：结果误差过大，不应用于计算平均值
计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得
平板上菌落数的平均数为234，那么每克样
品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液
的体积为0.1ml） A. 2.34×108
( B)
B. 2.34×109
C. 234
D. 23.4
去①表从层富土含，有在机距物地、表潮约湿3、-8pHc≈m的7的土土壤壤层中取取样样，。再先将铲 样品装入事先准备好的 信封 中。（原因：土壤微生
物3主-8要分cm布的在近距中地性表土壤中，约70％-90％为