超高效液相串联质谱测定鸡蛋17种兽药残留的方法
超高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织和鸡蛋中残留的11种甾体激素类药物
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中图分 类 号
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0 658
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：1 0 0 0 8 7 1 3 ( 2 0 0 8 ) 0 6 0 7 1 4 0 6
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栏 目 类 别 ：研 究 论 文
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超高效液相色谱-串联质谱法同时测定调味料中的17种防腐剂和抗氧化剂
１ ０、 ｏ ７ ａ ｌ ｔ ｓ ｒ ｎｇ ｄ ｒ ｆ １ ｎａ ｙ ｅ ａ ｅ ｆｏｍ ． ５ ０ ０ ｍ ｇ ／ｋｇ ｔ ｇ ｇ． Ｔｈｅ ｒ ｃ ｅ ｉ ｓ ｒ ｎ ｄ ｆ ｏ ７９ ７ ｏ ５ ｍ ／ｋ ｅ ｏｖ ｒｅ ａ ｇｅ ｍ ． ％ ｒ
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ｔｒ ｕ ｔ ｏＰ ｅ ｅ Ｅ，Ｕ Ａ） 配 有 电 喷 雾 离 子 ｅｓＱ ａｔ ｒ ｍｉｒＸ ｒ Ｓ ，
源 （ Ｓ ） 超 纯 水 器 （ ｌｐ ｒ ｌ— ＵＳ 。 Ｅ Ｉ； Ｍｉｉｏ ｅＭｉｉ ｌ ｌ Ｑ， Ａ）
用 的 用 于调和 滋 味 和 气 味并 具 有 去 腥 、 除膻 、 腻 、 解 增 香 、 鲜等 作用 的产 品 。 国家 标 准 把调 味 品总 增 共分为 ｌ ７大类 。食 品添 加 剂 使 用 卫 生 标 准 规 定
对监 测食 品 中添加 剂 的使用 情况 具有 重要 意义 。
１ 实 验 部 分
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
超 高效 液 相 色 谱 仪 （ ｔｒ Ｃ Ｕ Ｔ ｌ ａ ＷａｅｓＡ Ｑ Ｉ Ｙ 。 Ｕ ｔ Ｍ ｒ Ｐ ｒ ｒ ｎ ｅＬ ｅｆ ｍａ ｃ Ｃ，ＵＳ ； ｏ Ａ） 串联 四极 杆 质 谱 仪 （ — Ｗａ
ｍａ ｓｓ ｅ ｔ ｍｅｒ （ Ｐ Ｃ ＭＳ ＭＳ ； ｒｓ ｒａｉｅ ； ｎ ｉｘｄ ｎｓ ｃ ｎ ｉ ｎｓ ｓ ｐ ｃｒ ｏ ｔ ｙ Ｕ Ｌ — ／ ） ｐ ｅ ｅｖ ｔ ｓ ａ ｔ ｉａ ｔ ； ｏ ｄｍｅ ｔ ｖ ｏ
液相色谱串联质谱法检测鸡蛋中磺胺类药物
液相色谱串联质谱法检测鸡蛋中磺胺类药物作者：伦丽丽来源：《食品安全导刊》2019年第07期磺胺类药物（SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类化学药物的总称，被广泛用于畜禽生产中以防治细菌感染。
在养殖密度较大的家禽行业中，使用磺胺类药物防治细菌感染的做法尤为普遍，因此禽蛋中存在着磺胺类药物残留的风险。
目前，我国相关的动物源性食品中磺胺类药物的检测方法已有相关标准，但对鸡蛋中仪器检测的报道文献较少。
本文建立了鸡蛋中16种磺胺类药物的超高效液相色谱串联质谱检测方法，其灵敏度高、稳定性好，能够满足对鸡蛋中磺胺类药物残留的检测要求。
1 实验部分1.1 试剂与耗材磺胺乙酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺地索辛、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二甲基异噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺喹恶啉、磺胺邻苯甲氧嘧啶，德国DR.E公司。
乙腈、甲醇、甲酸等，均为色谱纯（国药）。
将标准品用甲醇配制成单标母液，并配制10μg/mL混合储备液于-20℃保存，使用时现配为系列标准工作液。
鸡蛋购于超市，经液质分析确认均为阴性样本。
1.2 仪器设备ACQUITYTM型超高效液相色谱仪、Waters Xevo TQS四极杆质谱仪（配电喷雾离子源）、ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm），美国Waters公司；离心机；纯水仪；氮吹仪。
1.3 试验1.3.1 前处理方法优化本实验比较了乙腈、1%甲酸乙腈作为提取溶剂，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行提取，并进行提取溶剂优化试验；比较了涡旋振荡提取、涡旋振荡+超声配合提取，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行萃取，同时进行提取方法优化试验；比较了10g无水硫酸钠加入与否对结果的影响；最终确定最优的前处理条件。
1.3.2 优化后的前处理方法称取样品2g，加入混合内标工作液100ng、无水硫酸钠10g、12mL1%甲酸乙腈，涡旋振荡2min，超声提取10min；7000rpm离心5min，取上清，60℃水浴氮吹至干。
高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋中多西环素药物残留的分析
高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋中多西环素药物残留的分析摘要：采用高效液相色谱-串联质谱法能够快速、灵敏的检测鸡蛋中多西环素药物残留情况，具有较高的应用价值。
在本次研究中，选用高效液相色谱-串联质谱法进行鸡蛋中多西环素药物残留检测，结果显示，样品检出限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg，平均回收率为85.7—92.6%，RSD小于15%，检测准确率较高。
由此可知，高效液相色谱-串联质谱法具有简单、高效、灵敏的特点，其在鸡蛋中多西环素药物残留检测中发挥着良好的效果，适用于进行此类药物残留检测。
关键词：高效液相色谱-串联质谱法；鸡蛋；多西环素药物残留多西环素是一类半合成的四环素类抗生素，具有价格低廉、抗菌活性高的特点，属于常用的广谱抗菌素[1]。
多西环素用于蛋鸡养殖中可以防治大肠杆菌病、慢性呼吸道疾病，但其作为兽药在家禽肝肾、皮肤、肌肉等方面的残留也有明确限制。
鸡蛋是家禽养殖中比较重要的产物，有效测得鸡蛋中多西环素药物残留是否超标，能够确保鸡蛋的品质与安全性，对食品安全健康具有重要意义[2]。
现阶段应用高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋中药物残留的应用较多，分析其在鸡蛋中多西环素药物残留中检测效果，可为鸡蛋安全质量检测提供良好条件。
1 材料和方法1.1 试剂和仪器本次试验使用化学试剂包括，色谱纯甲醇、色谱纯乙腈、色谱纯甲酸、柠檬酸、草酸、乙二胺四乙酸二钠、氢氧化钠、磷酸二氢钠；多西环素标准品为中国兽医药品监察所；市售鸡蛋。
试验使用仪器包括，高效液相色谱仪、恒温水浴锅、高速离心机、分析天平、质谱仪、旋涡混合器等[3]。
1.2 仪器条件试验选用色谱柱为Waters Acquity Uplc BEH C18（2.1mm×50mm，2.5μm）；流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈；流速：0.2mL/min；进样量：10μL；溶剂梯度（时间min/A/B）：2/90/10，3/30/70,5/30/70,7/90/10,8/90/10；离子源：正离子电离模式；扫描方式：多离子反应监测模式；雾化气：氮气，流速3.0L/min；碰撞气：氩气，17.0kPa；源温度：250℃。
超高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡蛋中甲硝唑与地美硝唑及其代谢物残留
摘要建立了鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留的UPLC-MS/MS 检测方法。
样品经乙酸乙酯提取、液液分配和MCX 固相萃取柱净化富集后UPLC-MS/MS 检测,以乙腈和水(0.1%甲酸)为流动相,经C 18(2.1×50mm ,1.8μm )色谱柱分离后,在正离子模式下采用多反应监测模式进行测定。
结果表明,甲硝唑、甲硝唑代谢物产物羟基甲硝唑、地美硝唑、地美硝唑代谢产物羟甲基甲硝咪唑在1.0~100ng/mL 范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9975,在1.0、5.0、20.0μg/kg 3个浓度水平下进行加标回收试验,平均回收率为68.1%~92.3%,RSD 为3.4%~9.0%,方法检出限为0.1μg/kg 。
该方法灵敏性、准确性、稳定性好,适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留的定性和定量分析,为鸡蛋中硝基咪唑类药物检测提供一定的技术参考。
关键词甲硝唑;地美硝唑;代谢物;鸡蛋;超高效液相色谱-串联质谱中图分类号O657.63;TS251.55文献标识码A 文章编号1007-5739(2020)22-0191-03开放科学(资源服务)标识码(OSID )超高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡蛋中甲硝唑与地美硝唑及其代谢物残留王艳王淼刘菊才吴艳云徐艺芮罗培林(成都市农业质量监测中心,四川成都610045)甲硝唑、地美硝唑是人工合成硝基咪唑类药物,对肠道和组织的厌氧菌感染、家禽的滴虫病感染、鸡生殖系统疾病等疗效好[1],因而常被添加于饲料中,用于改善饲料转化率[2]。
硝基杂环类化合物是引起细胞诱变的物质,硝基咪唑类药物及其代谢产物具有潜在的动物致癌、致畸、诱变和遗传毒性作用[3],其残留对动物性食品构成了威胁。
《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(GB 31650—2019)中规定甲硝唑、地美硝唑允许作治疗用兽药,但不得在动物性食品中检出[4]。
日本规定甲硝唑、地美硝唑在食品中不得检出,欧盟和美国均规定了甲硝唑、地美硝唑为禁用兽药[5-6]。
鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施
鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施
鸡蛋是人们日常生活中常见的食品，在生产和加工过程中，为了保证鸡蛋的质量和产量，鸡蛋生产过程中往往使用了一些药物和兽药。
但是，这些药物和兽药残留在鸡蛋中，
若达到一定的含量，可能会对人体健康带来危害。
在鸡蛋中检测兽药残留的方法主要有化学法和生物法两种方式。
化学法通过使用高效液相色谱法（HPLC）或气相色谱-质谱法（GC-MS）等技术，对鸡
蛋中的兽药残留进行检测。
这种方法可以检测出大部分兽药成分的残留情况，但需要专业
的检测设备和技术，且不同的兽药成分检测方法略有差异。
生物法采用酶联免疫法（ELISA）或生物传感技术等方法，对鸡蛋中的兽药残留进行检测。
这种方法操作简单，检测时间短，且检测结果比较准确，但同时也存在一定的误差和
局限性。
为了保障鸡蛋的质量和消费者的健康，应采取下列防治措施：
首要措施是鼓励养殖场采用良好的养殖管理技术，控制家禽疾病的传播与流行，不滥
用或乱用疫苗和药品。
其次，加强监管，对兽药使用进行规范和管理。
加大对市场上兽药的监管力度，加强
病害的防控力度，从源头上降低药品残留的概率。
第三，推广和应用绿色有机饲料，这有利于减少兽药的使用，在保障鸡蛋生产的同时，保障鸡蛋的质量和安全。
总之, 为了保障鸡蛋的质量和消费者的健康, 需要养殖场采取良好的养殖管理技术,
加强监管, 推广和应用有机饲料,以及对生产流程进行规范和管理, 以保障鸡蛋的质量和
安全。
QuEChERS-_超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量
QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定 鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量王 易（广东省惠州市质量计量监督检测所，广东惠州 516000）摘 要：建立了QuEChERS结合超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑残留量的方法。
样品经乙腈提取，QuEChERS净化后，使用Agilent Eclipse Plus C18柱分离，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行洗脱，多反应监测模式下检测，外标法定量。
结果表明，甲硝唑和地美硝唑的质量浓度在0～50 ng·mL-1时线性关系良好（r2＞0.999），检出限分别为0.002 μg·kg-1、0.007 μg·kg-1；在低、中、高3个添加水平下甲硝唑和地美硝唑的加标回收率分别为95.79%～97.80%、95.66%～100.10%。
该方法前处理简单、重现性好、灵敏度高，适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑的测定。
关键词：鸡蛋；甲硝唑；地美硝唑；QuEChERS；超高效液相色谱串联质谱法Determination of Metronidazole and Dimetridazole Residues in Eggs by QuEChERS Combined with Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem-Mass SpectrometryWANG Yi(Guangdong Huizhou Quality and Measuring Supervision Testing Institute, Huizhou 516000, China) Abstract: A QuEChERS combined with ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method was established to determine the residues of metronidazole and dimetridazole in eggs. The sample was extracted with acetonitrile, purified with QuEChERS, and separated using an Agilent Eclipse Plus C18 column. The mobile phase was eluted with acetonitrile and 0.1% formic acid aqueous solution, and detected under multiple reaction monitoring mode. The external standard method was used for quantification. The results showed that the mass concentrations of metronidazole and dimetridazole were linear in the range of 0～50 ng·mL-1 (r2＞0.999), and the detection limits were 0.002 μg·kg-1 and 0.007 μg·kg-1; under low, medium and high addition levels, the recoveries were 95.79%～97.80%, 95.66%～100.10% respectively. The method is simple, reproducible and sensitive, and is suitable for the determination of metronidazole and dimetridazole in eggs.Keywords: eggs; metronidazole; dimetridazole; QuEChERS; ultra-high performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry鸡蛋含有非常丰富的卵磷脂、脂肪、蛋白质、微生物、矿物质、微量元素等营养成分，被誉为“全营养”食品[1]，现已成为日常饮食中的重要组成部分。
高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量
高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量摘要：建立以QuECHERS技术为基础，高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量的检测方法。
鸡蛋样品经过乙酸乙酯提取、QuECHERS净化后，电喷雾正离子多反应监测，内标法定量。
结果表明，在0.5-100ng/mL范围内，甲硝唑的线性相关系数在0.99以上，方法检出限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg；在3个浓度添加水平下，甲硝唑的回收率在80.5%-98.8%，相对标准偏差在0.9%-1.9%。
该方法操作简便，结果准确，适用于批量化检测鸡蛋中甲硝唑残留量。
关键词：高效液相色谱；串联质谱法；测定；甲硝唑残留量甲硝唑是硝基咪唑衍生物，具有强大的杀菌作用，可以杀灭滴虫和厌氧微生物，因为被广泛应用于畜禽养殖中[1]。
如果在养殖过程中使用不规范，甲硝唑残留进入人体会产生致癌、致突变作用，危及人体健康[2]。
目前，国民食用的禽蛋种类以鸡蛋为主，鸡蛋中甲硝唑残留量的检测主要是高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法[3]。
目前的检测标准前处理过程繁琐，回收率偏低，无法满足大批量检验检测任务的需求。
本研究旨在建立一种以乙酸乙酯为提取溶剂，QuECHERS净化，高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑残留量的检测方法，为大批量检测鸡蛋中的甲硝唑残留量提供科学支持。
一、材料与方法1.仪器与设备Qtrap 6500液相色谱质谱联用仪，美国AB SCIEX公司；氮吹仪，广州三研科技；高速冷冻离心机，凯达科学仪器有限公司2.试剂和材料甲硝唑、甲硝唑-D4（100mg/L，坛墨质检科技股份有限公司）；甲醇、乙腈、乙酸乙酯（色谱纯，阿拉丁）；C18、PSA（上海宸乔生物科技有限公司）。
3.实验方法称取试样5g于50mL聚丙烯离心管中，加入250µL内标溶液，加入10mL乙酸乙酯，涡旋混合1min，6000r/min离心5min，转移上清液，残渣用10mL乙酸乙酯重复提取一次。
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国畜禽业中种2019.01项目来源:济源市2018年度第二批科技发展计划项目资助,项目编号:18021009。
作者简介:李明(1968-),男,河南省济源市人,大学本科,高级畜牧师,主要从事畜产品监测技术研究工作。
超高效液相-串联质谱测定鸡蛋17种兽药残留的方法李明张振宇(河南省济源市畜产品质量监测检验中心459000)摘要:建立了Oasis PRiME HLB 固相萃取柱净化-超高效液相色谱-串联质谱法,同时测定鸡蛋中酰胺醇类、喹诺酮类、磺胺类17种兽药残留含量。
该法为样品经无水硫酸钠脱去鸡蛋中的水分、0.2%甲酸乙腈沉淀蛋白后,通过Oasis PRiME HLB 固相萃取柱一次性净化除去磷脂及非极性干扰物;用Waters UPLC C18色谱柱,流动相为0.2%甲酸水-乙腈梯度洗脱,电喷雾-正负离子多反应监测模式,内标法定量。
该方法在质量浓度为0.5~50ng/ml 、0.1~10ng/ml 范围内线性良好,17种兽残相关系数r 均大于0.993。
经添加1,5,10μg/kg 3个加标样品的测定,回收率61.8%~117%,RSD%1.2~9.7,方法的准确性和重复性良好。
关键词:鸡蛋;PRiME HLB 固相柱净化;无水硫酸钠;超高效液相-串联质谱;酰胺醇类;喹诺酮类;磺胺类;兽药残留为防治各类疾病、降低死亡率,兽药广泛应用于蛋鸡养殖,但由于兽药滥用、误用及不遵守休药期规定,导致鸡蛋中有药物残留,这些药物通过食物链在人体内蓄积,产生耐药性,还可致基因突变、致畸、致癌。
检测兽药残留的方法较多,常见的主要有液相色谱法[1-2]、气相色谱质谱法[3]、液相色谱-串联质谱法[4-5]、酶联免疫法[6]等。
根据鸡蛋市场流通快的特点,需建立短时间内、高通量、一次性准确测定鸡蛋中兽药多残留。
为此本项目开展鸡蛋兽药多残留检测技术的研究,通过对样品处理、色谱、柱谱条件的优化等建立了样品一次性处理、同时测定3大类17种兽药残留的超高效液相-串联质谱方法。
相比现有方法具有更高的效率、更简单的前处理过程,且各项性能满足残留分析要求。
1实验部分1.1仪器UPLC Xevo TQ MS 超高效液相色谱-质谱联用仪(Waters 公司);MS 3basic 漩涡混合器(IKA 公司);高速冷冻离心机(香港力康公司);TTL-DCII 型氮吹仪(北京同泰联科技发展有限公司)。
1.2试剂与材料乙腈、甲醇为色谱纯;甲酸为优级纯;17种抗生素标准品全部购于阿尔塔科技有限公司,标准液浓度为100μg/ml。
6个同位素内标分别为氯霉素-D 5、甲砜霉素-D 3、氟苯尼考-D 3;恩诺沙星-D 5、达氟沙星-D 3;磺胺间二甲氧嘧啶-D 6;OasisPRiME HLB 固相萃取柱(Waters 公司,60mg/3ml)。
1.3色谱条件色谱柱:CORTECS UPLC C18Column,(1.6μm,2.1mm X 100mm);流动相A 为乙腈;流动相B 为0.2%甲酸水梯度洗脱;流速为0.4ml/min;柱温为40℃;进样量为10μL。
1.4质谱条件电离方式:除酰胺醇类采用电喷雾负离子模式,其他均为电喷雾正离子模式;多反应监测模式(MRM)采集;毛细管电压2.7kV 离子源温度为150℃;脱溶剂气温度为500℃;脱溶剂气流量为1000L/h。
1.5样品处理称取样品2.00g,置于50ml 离心管内,加适量内标液,再加无水硫酸钠4g,最后加入0.2%甲酸乙腈10ml,涡旋0.5min 后震荡提取15min。
12000r/min 离心5min,取5ml 上清液,过Oasis PRiME HLB 柱,用3ml0.2%甲酸乙腈过柱,收集全部流出液,于50℃下用温和氮气吹至近干。
并用1ml 10%乙腈溶解,涡旋过0.22μm 滤头后供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。
2结果与讨论2.1样品前处理优化2.1.1样品提取试验采用0.2%甲酸、1%甲酸和2%甲酸3种不同比例酸化乙腈结合的方式沉淀蛋白并提取目标物,使用无水硫酸钠除去样品和提取液中的水分。
同时比较了乙腈和样品比例为3∶1、4∶1和5∶1分别提取。
试验表明,采取2%甲酸乙腈和样品比例为5∶1的蛋白质沉淀效果最好,但在此条件下对磺胺类回收率较低,这是由于在酸性较强时,磺胺类碱性化合物的离子化程度增大,导致在有机相中的溶解性减弱。
用0.2%甲酸乙腈、5∶1比提取并沉淀蛋白的条件,其回收率可大幅提高(回收率在60%以上)。
所以,本试验选用该条件进行样品提取。
2.1.2样品净化由于鸡蛋中存在大量磷脂、脂肪等亲脂性杂质,极大干扰目标化合物的分析,同时降低色谱柱寿命。
如果采用专一性较强的萃取小柱对测定某种或某类化合物效果较好,往往对其他组分回收率较差,不能满足3大类性质差异较大的17种兽药残留测定。
本研究采用Oasis MCX、Oasis HLB、Oasis PRiME HLB 3种固相萃取小柱进行样品净化处理比较。
Oasis MCX 和Oasis交流36国畜禽种业中2019.01HLB 萃取小柱要求大比例水相的上样才会使目标化合物在柱子上保留,这就要求把提取液中的乙腈置换成水相,而且各待测物在不同pH 下的固相萃取柱上保留差异较大。
而Oasis PRiME HLB 萃取小柱可以用乙腈的提取液直接过柱,将磷脂及非极性干扰物吸附于固相萃取柱中,对所有待测物无吸附,这样既能有效去除干扰物,又确保了所有待测组分无损失,同时在净化过程中也省去了溶剂的转换过程,简化操作步骤。
本实验采用Oasis PRiME HLB 萃取小柱进行样品净化。
2.2仪器条件的优化2.2.1色谱柱及流动相的选择本方法选取CORTECS UPLC C18柱 2.1mm ×100mm, 1.6μm,Waters BEH C18柱2.1×100,1.7μm,和HSS T32.1×100,1.8μm 3种色谱柱进行分离实验。
本研究选择了3大类17种兽药。
本实验通过色谱柱的选择与流动相优化达到此目的。
根据各色谱柱的特点分别对流动相进行了优化试验。
经试验,上述3种化合物在CORTECS UPLC C18的分离优于HSS T3色谱柱、BEH C18色谱柱。
本试验采用该色谱柱进行测定,经优化其色谱梯度洗脱程序见表1(流动相A 为乙腈、流动相B 为0.2%甲酸水)。
2.2.2质谱条件的优化除酰胺醇类采用负离子模式,其他均为正离子模式,分别对锥孔电压、碰撞能量和选择离子进行充分优化,并确定其最佳锥孔电压和碰撞能量的电压值。
对上述质谱条件优化后,可满足测定鸡蛋中兽残各组分定性、定量的要求。
定性、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。
2.3方法学验证2.3.1基质标准曲线与检出限为降低基质效应影响,保证检测结果可靠准确,采用基质标准进行定量,采用不含待测物的鸡蛋空白基质溶液配制质量浓度,喹诺酮类、磺胺类为0.5,1,5,10,20,50ng/ml,酰胺醇类为0.1,0.2,0.5,2,5,10ng/ml 一系列标准溶液,以标样峰面积/内标峰面积比值与质量浓度做标准曲线,得到相应线性回归方程。
结果表1色谱梯度洗脱程序时间(min) 流速(ml/min)A％ B% 曲线类型初始 0.4 15 85 / 2.5 0.4 40 60 6 3.9 0.4 95 5 6 4.9 0.4 95 5 6 5 0.4 15 85 6 70.415856注:6为线性变化。
表2酰胺醇类、喹诺酮类、磺胺类及内标定性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞能量药物定性离子 （m/z） 定量离子 （m/z） 锥孔电压 （V） 碰撞能量 （eV） 氯霉素321.0>152.1 321.0>257.1 321.1>152.12518 12 甲砜霉素354.1>185.0 354.1>290.0 354.1>290.0 30 20 12 氟苯尼考 356.1>185.0 356.1>336.0 356.1>336.0 28 18 8 氯霉素-D 5 326.1>157.1 326.1>157.1 25 18 甲砜霉素-D 3 357.2>293.0 357.2>293.0 30 10 氟苯尼考-D 3 359.2>339.0 359.2>339.0 22 6 磺胺二甲嘧啶 279.1>124.0 279.1>186.0 279.1>186.0 13 18 17 磺胺间甲氧嘧啶 281.1>126.0 281.1>156.0 281.1>126.0 32 20 18 磺胺甲基异噁唑 254.1>108.0 254.1>156.0 254.1>156.0 25 24 15 磺胺邻二甲氧嘧啶 311.1>108.1 311.1>156.0 311.1>156.0 32 24 16 磺胺间二甲氧嘧啶 311.1>108.1 311.1>156.0 311.1>156.0 33 30 20 磺胺喹噁啉301.1>108.0 301.1>156.0 301.1>156.0 30 22 16 磺胺间二甲氧嘧啶-D 6 317.1>162.1 317.1>162.1 25 20 甲氧苄啶 291.2>123.1 291.2>230.2 291.2>123.0 40 22 20 环丙沙星 332.2>245.1 332.2>230.9 332.2>230.9 34 34 24 恩诺沙星 360.2>316.1 360.2>245.2 360.2>316.1 30 21 26 达氟沙星 358.2>82.1 358.2>340.2 358.2>340.2 38 21 24 沙拉沙星 386.2>299.1 386.2>322.1 386.2>322.1 34 24 26 培氟沙星 334.2>204.9 334.2>233.1 334.2>233.1 32 34 24 诺氟沙星 320.2>205.0 320.2>233.1 320.2>233.1 36 32 26 氧氟沙星 362.2>218.6 362.2>261.2 362.2>261.2 30 30 30 20 恩诺沙星-D 5 365.2>245.1 365.2>321.0 28 20 达氟沙星-D 3361.2>343.2361.2>343.22221交流37国畜禽业中种2019.01作者简介:马玉安(1966-),男,回族,陕西省安康市人,大学本科,兽医师,主要从事动物检疫工作。