肝炎病毒抗原抗体检测的PPT课件
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肝炎病毒及其检验ppt课件 (2)
特异细胞免疫应答。
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三、微生物学检查法
(一) 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪便 用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA) 法检测HAV 的抗原。
(二) 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。 检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗HAV IgG有助于 流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。
37
乙肝防治
38
临床特点
1. 潜伏期：2～6个月
2. 临床类型：
痊愈
痊愈
静止性肝硬化
急性感染 慢性乙型肝炎 肝硬化
肝癌
死亡
慢性携带者
肝硬化
死亡
39
• 抵抗力： • HBV对外界环境的抵抗力较强，对低温、
干燥、紫外线均有耐受性。 • 自然条件下，可以停留在一些物体表面一周
而不失去感染性。 • 60℃ 10小时、100℃ 10分钟：感染性消失 • 不被70%乙醇灭活 • 煮沸30分钟、121℃高压20分钟，可灭活
-
-
+
+
- 既往感染恢复期
-
-
-
-
+ 既往感染
-
-
+
-
- 既往感染或接种过疫苗
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➢4、血清HBV DNA检测
核酸分子杂交及PCR技术检测HBV DNA可用于 乙型肝炎的诊断及流行病学调查。
常用斑点杂交法将特异的HBV DNA探针与患者 血清进行杂交检测血清中HBV DNA，方法敏感、特 异，能测出0.1-1pg核酸。
用PCR技术检测患者血清中HBV DNA,在临床上 也已用于辅助诊断，特别是定量PCR能测出DNA拷 贝数量，可做为药物疗效的考核指标。
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三、微生物学检查法
(一) 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪便 用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (EIA) 法检测HAV 的抗原。
(二) 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。 检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗HAV IgG有助于 流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。
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乙肝防治
38
临床特点
1. 潜伏期：2～6个月
2. 临床类型：
痊愈
痊愈
静止性肝硬化
急性感染 慢性乙型肝炎 肝硬化
肝癌
死亡
慢性携带者
肝硬化
死亡
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• 抵抗力： • HBV对外界环境的抵抗力较强，对低温、
干燥、紫外线均有耐受性。 • 自然条件下，可以停留在一些物体表面一周
而不失去感染性。 • 60℃ 10小时、100℃ 10分钟：感染性消失 • 不被70%乙醇灭活 • 煮沸30分钟、121℃高压20分钟，可灭活
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- 既往感染恢复期
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+ 既往感染
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- 既往感染或接种过疫苗
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➢4、血清HBV DNA检测
核酸分子杂交及PCR技术检测HBV DNA可用于 乙型肝炎的诊断及流行病学调查。
常用斑点杂交法将特异的HBV DNA探针与患者 血清进行杂交检测血清中HBV DNA，方法敏感、特 异，能测出0.1-1pg核酸。
用PCR技术检测患者血清中HBV DNA,在临床上 也已用于辅助诊断，特别是定量PCR能测出DNA拷 贝数量，可做为药物疗效的考核指标。
肝炎病毒的检测及其意义ppt课件
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丙型肝炎病毒
传播途径 检测方法
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传播途径
丙型肝炎病毒主要经血液或血液制品传播，也 可以通过皮下、黏膜或母婴传播。潜伏期为226周。
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检测方法
抗体检测：丙型肝炎IgM型抗体主要用于预示HCV 感染病情的 严重化和慢性化，不用于早期诊断。
丙型肝炎IgG型抗体一般于9-22周开始出现阳性， 可持续数年。但也可见于一过性感染，抗-IgG始终阴 性。
2.急性HBV感染趋向恢复
3+
-
+-
-
早期HBV感染或慢性携带者，传染力强
4+
-
+++
1.急性HBV感染，趋向恢复 2.慢性携带者
5+
+
-
-
-
1.亚临床型HBV感染早期 2.不同亚型HBV二次感染
乙肝五项结果分析少见模式
模 表面 表面 E E 核心 式 抗原 抗体 抗原 抗体 抗体
临床意义
6-
+
+-
6-
789-
表面 抗体 +
-
+ +
E 抗原-ຫໍສະໝຸດ E 抗体-核心 抗体
+
-
+
+
-
-
+
-
-
-
-
+
+
机率 临床意义
5-15 1既往感染，仍有免疫力（IgG） 2非典型恢复型，急性HBV感染 （IgM）
2-10 1.既往感染过 2.急性感染恢复 3.少数标本仍有传染性
5-10 1.既往感染过 2.急性感染窗口期
肝炎病毒的常见检测手段PPT课件
2019/11/27
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ELSA
• ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手 段，反映机体HBV感染的免疫状态。
• 化学发光是基于ELISA基础上通过改变检测 系统建立的新方法。
2019/11/27
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乙肝五项指标临床监测意义
• HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗HBe 抗-HBc
• 1、- -
• 乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA 病毒科 (hepadnaviridae)，基因组长约3.2kb ，为部分双链环 状DNA。HBV 的抵抗力较强，但65℃10 小时 、煮沸 10 分钟 或高压蒸气均可灭活HBV。含氯制剂、环氧 乙烷、戊二醛、过氧乙酸和碘伏等也有较好的灭活 效果
2019/11/27
灵敏度 特异性 操作 成本 反应时间
2019/11/27
方法学比较
RT-PCR 好 好
相关人员 高 长
酶免 较好 较好 简单 低 长
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层析 较好 较好 简单 低 短
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谢谢
2019/11/27
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2019/11/27
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聚合酶链式反应（PCR）
• 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性， 引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序 列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的 扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为 检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过 20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙 锭染色的凝胶上观察到
标准曲线以及标准荧光等各不相同，得出
的数值左右漂浮，偏差很大，得出的检测 值范围也不相同。
2019/11/27
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• HBV-DNA检测则是采用聚合酶链式反应 （PCR）技术，特异性扩增乙肝病毒基因组 保守的C基因区上270bp基因片段，以近于 2n的指数（n为循环次数），在数小时内可 将极微量的HBV-DNA特定的分子片断扩增至 1x107～1x108倍，大大提高了HBV的检出率， 为临床诊断是否为HBV感染提供了一种强有 力的手段。
病毒抗原和抗体检测技术PPT讲稿
抗体复合物，酸性增强
液下，Eu3+解离， 340nm激发光下发 射613nm荧光。
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四、时间分辩免疫荧光技术
（二）方法类型
•固相抗体竞争法
待检抗原和Eu3+标记抗原与固相抗体竞争结合,温育洗涤后在固相中 加入荧光增强液,测定荧光强度，荧光强度与待检抗原含量成反比。
+
+
B/B+F
6/8=0.75
+
+
4/8=0.5
+
+
2/8=0.25
Ag
+
+
1/8=0.125
Ab
Bound
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Free
第三节 放射免疫技术
• 放射免疫
以未结合的Ag*为F， Ag*Ab复合物为B， 则B/F或B/(B＋F)
与Ag的量变存在着 函数关系－剂量反应
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间接法
检测抗体
+ 固相抗原 标本
+ 酶标抗体
+ 底物 显色
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双抗体夹心法
检测抗原
+
固相抗体 标本
+
+
酶标抗体
底物
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显色
竞争法
可检测抗原、抗体
病毒抗原和抗体检测技术课件
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一、抗原—抗体反应
特异性高
液下，Eu3+解离， 340nm激发光下发 射613nm荧光。
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四、时间分辩免疫荧光技术
（二）方法类型
•固相抗体竞争法
待检抗原和Eu3+标记抗原与固相抗体竞争结合,温育洗涤后在固相中 加入荧光增强液,测定荧光强度，荧光强度与待检抗原含量成反比。
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B/B+F
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Ag
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Bound
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Free
第三节 放射免疫技术
• 放射免疫
以未结合的Ag*为F， Ag*Ab复合物为B， 则B/F或B/(B＋F)
与Ag的量变存在着 函数关系－剂量反应
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间接法
检测抗体
+ 固相抗原 标本
+ 酶标抗体
+ 底物 显色
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双抗体夹心法
检测抗原
+
固相抗体 标本
+
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酶标抗体
底物
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显色
竞争法
可检测抗原、抗体
病毒抗原和抗体检测技术课件
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一、抗原—抗体反应
特异性高
医学检验·检查项目：乙型肝炎抗原抗体检测(HBcAb)_课件模板
医学检验·各论：乙型肝炎抗原抗体检测（HBcAb） >>>
临床意义：
能抑制HBV的增殖，多见于HBeAg转阴的病 人，意味着传染性降低的一种表现。在 HBsAg和抗-HBS阴性时，如能检出抗-HBe 和抗-HBc，也能确认为乙型肝炎近期感染。
医学检验·各论：乙型肝炎抗原抗体检测（HBcAb） >>>
医学检验·各论：乙型肝炎抗原抗体检测（HBcAb） >>>
临床意义：
慢性肝炎、肝硬变和肝癌患者血清中，但 慢性肝炎活动期阳性率高于慢性迁延性肝 炎。抗-HBCIgG低滴度者表示既往感染， 而高滴度者提示正在感染HBV。 （4） HBeAg阳性，是HBV急性感染的早期标志， 表示肝细胞有进行性损害和高度传染性。 乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有 助于预测
医学检验·各论：乙型肝炎抗原抗体检测（HBcAb） >>>
临床意义：
产生效果，又是乙型肝炎处于恢复期的表 现。抗-HBS、抗-HBC、HBsAg均为乙型肝 炎感染率指标，任一项阳性，表示受过 HBV感染。 （3）抗-HBc阳性，它不是保 护性抗体，而是反映肝细胞受到HBV侵害 的一种指标，为急性感染的早期标志性抗 体，持续时间长甚至终生保留，高滴度存 在常表示
相关疾病： 原发性肝癌、乙肝、乙型肝炎病毒相关性 肾炎、肝硬化、小儿乙型肝炎病毒相关肾 炎、乙型病毒性肝炎、病毒性肝炎。
谢谢！
医学检验·各论：乙型肝炎抗原抗体检测（HBcAb） >>>
临床意义：
肝炎病情。在慢性迁延性乙型肝炎和 HBsAg携带者中，HBsAg、HBeAg和抗-HBc 三项均阳性，这种“大三阳”者，具有高 度传染性，较难阴转；仅HBeAg阳性转阴， 而见抗-HBe阳性，这种“小三阳”者，一 般提示病情在恢复，传染性弱。 （5）抗 -HBe阳性，并非一保护性抗体，它不
肝炎病毒抗原抗体检测的ppt课件
6
双抗原夹心法测抗体
1.反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行 包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 2. 此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因 此其敏感度相对高于间接法。 3.乙肝标志物中抗 HBs的检测常采用本法。 4.本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的 不同，寻找合适的标记方法。
2.在122例ELISA阳性样本中,其中国产试剂检出88例，检出率为72.1%，进 口试剂全部检出，两者差异有显著性（X 2 =17.1，P<0.05）。在进口试剂 单阳性结果40例中，经确认34例为阳性，国产试剂未检出，国产试剂存在 一定的漏检率。主要由于0.5～0.1ng/ml的HBV不能检出的原因。在33例 ELISA阳性确证实验阴性样本中，进口试剂占6例，为18.2%，国产试剂27 例，占71.8%，进口试剂假阳性率明显比国产试剂低。
1）为试剂检出被检物质的最低量的能力； 2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性
越少越好） ，取决于包被物的全面性。 3) 每一批新试剂应作实验对照
2019/12/24
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血液检测HBsAg ELISA阳性结果确证分析 中华医学实践杂志 > 2004年第3卷第5期 >
1.以卫生部临床检验中心的1ng/ml HBsAg质控血清，用正常血清稀释随标 本检测，国产试剂检测灵敏度为0.5ng/ml，进口试剂为0.10ng/ml。
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两对半与美国Abbott试剂的比较
河北医学杂志（新） >> 2005年 第10期 总第10期(月刊) >> 论著
乙型肝炎病毒（HBV）标志物是国内实验室经常检测的项 目。两对半试剂生产厂家较多，试剂质量良莠不齐。五家 试剂公司分别为英科新创（厦门）科技有限公司、上海荣 盛生物技术有限公司、北京万泰生物药业有限公司、珠海 丽珠试剂有限公司、深圳月亮湾生物工程有限公司。各厂 家质量有较大差异,为了提高乙肝两对半的检验质量，避免 误诊、漏诊，以美国Abbott试剂作为参比试剂，对五家公司 的两对半试剂的质量进行了对比、评价［4］。
2章抗原抗体 Microsoft PowerPoint 演示文稿 (1)
Fab片段与抗原表位的结合能力。用结合常数K反应出亲和
力的大小。越大亲和力越高。
抗体
抗体
抗原 高亲和力
抗原 低亲和力
抗原抗体的亲和力示意图
多价抗体与抗原分子间的结合能力称为亲合力(avidity)。
Ag
Ig-Fab 亲和力
Ag
IgG 亲合力
Ag
IgM
亲合力
抗原抗体的亲和力和亲合力示意图
第二节 抗原抗体反应的特点
位
抗A抗体
特异反应与交叉反应示意图
交叉反应 特异反应 交叉反应
3.免疫学检验中也利用交叉反应进行诊断 变形杆菌与立克次氏体有相同的抗原表位，用变形杆菌代
替立克次氏体作为抗原来检测怀疑斑疹伤寒病人血清进行凝 集实验，称为外-斐(Weil-Felix)实验。
交叉反应可影响血清学诊断的准确性。
二、可逆性 抗原抗体结合是分子表面的非共价结合，形成的复合 物在一定条件下可以解离，称之为可逆性。
单价抗原与抗体结合无网格形成
二.抗体 1.抗体的来源
家兔抗体，等价带较宽，适用于做诊断试剂。 马抗体等价带较窄（等价带较窄对抗原抗体的比例要求较 高）一般做免疫治疗。 单克隆抗体不用于凝集或沉淀反应。
2.浓度 抗体浓度适宜。 过大过小都会影响抗原抗体复合物的形成。
3.亲和性 抗体的亲和性又称之为亲和力。 再次应答所产生抗体(IgG)的平均亲和力高于初次免
几乎无游离的抗原或抗体。 ③抗原过量：后带现象(postzone)。
沉
淀
物
抗体过剩带
形 成
prezone
量
①
等价带
equivalence zone
②
抗原过剩带 postzone
乙肝病毒五项检测 ppt课件
乙型肝炎病毒表面抗原
乙型肝炎病毒表面抗原
注意事项
本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用，不同 批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。
避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液（如84消毒液）的环境下操作。 使用前请将试剂平稳至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀， 使用后立即回放2~8℃。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2~8℃保存。 过期试剂请勿使用。 加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组 份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。 洗涤时各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定 30~60秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。 避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能 有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。 所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意
乙型肝炎病毒e抗体
检验方法：
配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性 对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。
加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50µl。
加酶：每孔加人酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻振荡混匀。 温育：用封板膜封板后置37℃温育30min。 洗涤：小心撕掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 显色：每孔加人显色剂A、B液各50µl，轻轻振荡混匀，37℃避光 显色15min。 测定：每孔加终止液 50µl ，轻轻振荡混匀， 10min 内测定结果。
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21.09.2020
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 竞争法测抗体
1.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争 与固相抗原结合。
2.标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈 少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。
3. 抗HBc.抗 Hbe: ELISA一般采用此法。
21.09.2020
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试剂盒选择
◎卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂， 梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品 检定所检定合格，并贴有防伪标签的产 品，试剂 应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性， 安全性及经济性作出全面的评价。 ◎灵敏度：
1）为试剂检出被检物质的最低量的能力； 2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性
越少越好） ，取决于包被物的全面性。 3) 每一批新试剂应作实验对照
21.09.2020
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血液检测HBsAg ELISA阳性结果确证分析 中华医学实践杂志 > 2004年第3卷第5期 >
1.以卫生部临床检验中心的1ng/ml HBsAg质控血清，用正常血清稀释随标 本检测，国产试剂检测灵敏度为0.5ng/ml，进口试剂为0.10ng/ml。
3.其中进口试剂S/CO值分布以>3为大多数，占91.7%，表 明进口试剂灵敏 度高，不易漏检。国产试剂S/CO值分布以1～10之间为多数占65.5%，而 1～0.7区间有11例，占9%，表明试剂灵敏度欠佳。
21.09.2020
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两对半与美国Abbott试剂的比较
1.本次试验Abbott Axsym系统检测标本中HBsAg结 果最高至210 S/CO，HBsAb结果最高至6000 mIU/mL，HBeAg最高至11600 PEIU/mL，以Abbott 试剂测定标本的S/CO值为横坐标，五家试剂测定 相应标本的OD值为纵坐标，分别绘出了HBsAg、 HBsAb及HBeAg的浓度关系图，故在实际应用中的 许多一步法试剂仍有HOOK效应存在。对于 HBsAg,A、C、D三家试剂存在HOOK效应；对于 HBsAb,A试剂存在HOOK效应；对于HBeAg，D试 剂存在HOOK效应。此结果可供临床检验部门参考。
4.各家ELISA试剂的各个检测项目特异性均较好，灵敏度相 对较差，尤其是HBeAg，需要提高灵敏度［11］。结果表明 除对于HBcAb试剂D的相对灵敏度较差外；其它的各家试剂 的各个检测项目的相对灵敏度、相对特异性及总符合率均较 好，基本上能满足临床及实验室的要求，此结果可供参考。
21.09.2020
21.09.2020
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双抗原夹心法测抗体
1.反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行 包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 2. 此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因 此其敏感度相对高于间接法。 3.乙肝标志物中抗 HBs的检测常采用本法。 4.本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的 不同，寻找合适的标记方法。
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双抗体夹心法
7.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有R F，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶 标抗体结合，表现出假阳性反应。
8. 双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响， 已被列为这类试剂的一项考核指标。
9.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的 决定簇，应分别包被固相和制备酶结合物。例 如 HBsAg的a决定簇，HBsAg有adr、adw、 ayr、ayw4个亚型，
肝炎病毒抗原抗体检测的 原理及检测试剂的选择原则
21.09.2020
1
ELISA原理
HBsAg:双抗体夹心法 HBeAg :双抗体夹心法抗 HBs :双抗原夹心法 抗 Hbe:竞争 法 抗HBc: 竞争 法
21.09.2020
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●双抗体夹心法
1.在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量
很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，
6
●双抗体夹心法
4.因此在使用一步法试剂 测定标本中含量可异常增高的物 质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意 可测范围的最高值。
6.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（ RF） 的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物 IgG的Fc段结合。
21.09.2020
21.09.2020
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两对半与美国Abbott试剂的比较
1.五家试剂对于HBsAg,HBsAb,HBeAg项目的可检出检测下 线分别为5.0 S/CO、17 mIU/mL、8.5 PEIU/mL, 2而Abbott试剂的阳性检测下线分别是1.0 S/CO、10 mIU/mL、 0.28 PEIU/Ml,说明五家试剂在灵敏度上均低于Abbott试剂, 3.国外全自动分析仪系统检测灵敏度，速度，准确性均高于 国内试剂。
河北医学杂志（新） >> 2005年 第10期 总第10期(月刊) >> 论著
乙型肝炎病毒（HBV）标志物是国内实验室经常检测的项 目。两对半试剂生产厂家较多，试剂质量良莠不齐。五家 试剂公司分别为英科新创（厦门）科技有限公司、上海荣 盛生物技术有限公司、北京万泰生物药业有限公司、珠海 丽珠试剂有限公司、深圳月亮湾生物工程有限公司。各厂 家质量有较大差异,为了提高乙肝两对半的检验质量，避免 误诊、漏诊，以美国Abbott试剂作为参比试剂，对五家公司 的两对半试剂的质量进行了对比、评价［4］。
2.在122例ELISA阳性样本中,其中国产试剂检出88例，检出率为72.1%，进 口试剂全部检出，两者差异有显著性（X 2 =17.1，P<0.05）。在进口试剂 单阳性结果40例中，经确认34例为阳性，国产试剂未检出，国产试剂存在 一定的漏检率。主要由于0.5～0.1ng/ml的HBV不能检出的原因。在33例 ELISA阳性确证实验阴性样本中，进口试剂占6例，为18.2%，国产试剂27 例，占71.8%，进口试剂假阳性率明显比国产试剂低。
而不再形成 “夹心复合物”。
2.类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，如
按常法测定，所得结果将低于实际的含量，这种现 象被称为钩状效应（hook effect）
3.因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状
效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。
21.09.2020
3
两对半与美国Abbott试剂的比较