γ-干扰素释放试验(IGRA)在儿童结核病诊断中的应用
γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的价值研究
γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的价值研究摘要：目的：探究γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的研究价值为结核病的诊断提供更多依据。
方法：收集乐山市人民医院2020年1月到2022年12月的IGRA检测结果。
结果：在6697份IGRA检测样本中，阳性率为53.7%。
其中，2020年阳性率为55.4%；2021年阳性率为55.1%；2022年阳性率为50.8%。
2020年男性就诊患者阳性率为61.4%；女性就诊患者阳性率为48.4%。
2021年男性就诊患者阳性率为58.5%；女性就诊患者阳性率为50.8%。
2022年男性就诊患者阳性率为58.7%；女性就诊患者阳性率为39.7%。
结论：乐山地区IGRA检出率相对较高，IGRA可以作为辅助诊断活动性结核的手段，敏感度较好，阴性预测值高，对于结核的排除有较高的价值。
但其特异性不理想，需要注意鉴别诊断。
关键词：结核；IGRAAbstract:Objective:To explore the research value ofγ-interferon release test in tuberculosis diagnosis and provide more evidence for tuberculosis diagnosis.Methods: The results of IGRA detection in Leshan People's Hospital from January 2020 to December 2022 were collected.Results: Among the 6697 IGRA test samples, the positive rate was 53.7%. Among them, the positive rate in 2020 was 55.4%; The positivity rate in 2021 was 55.1%; The positivity rate in2022 was 50.8%. In 2020, the positive rate of male patients was 61.4%; The positive rate of female patients was 48.4%.In 2021, the positive rate of male patients was 58.5%; The positive rate among women presenting to the clinic was 50.8%. In 2022, the positive rate of male patients was 58.7%; The positive rate of female patients was 39.7%.Conclusion:The detection rate of IGRA in Leshan area is relatively high,and IGRA can be used as an auxiliary means to diagnoseactive tuberculosis, with good sensitivity and high negative predictive value, which has high value for the exclusion of tuberculosis. However, its specificity is not ideal, and differential diagnosis is required.Keywords:Tuberculosis;IGRA结核病（Tuberculosis，TB）是严重威胁人类健康的疾病，每年有数百万人死于结核病，据世界卫生组织2019年发布的全球结核病报告指出，2018年全球新增约1000万结核病例，约150万人死于结核病。
r干扰素释放试验在结核病诊断中的价值
试验结果解释
阳性结果
提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在 结核感染。但是否是活动性结核病，需结合临床症状和其它 检测指标综合判断。
假阳性： 4种环境分枝杆菌感染时：M.kansasii、M.szulgai、 M.marinum、M.gordonae
γ-干扰素释放分析技术 （Interferon-gamma Release Assay,IGRA）
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γ-干扰素释放试验
结核分枝杆菌感染机体后，释放出大量的特异性抗原 抗原被加工呈递给特异性T 淋巴细胞 特异的记忆性T 细胞再次遇到结核抗原刺激时, 释放γ-干扰素
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γ-干扰素释放试验——试验流程
全血IGRA
结核特异性抗 原+全血
提取血浆，ELISA定量 检测干扰素水平
如A.TB, TB Gold
γ-干扰素释放试验 在结核病诊断中的价值
四川大学华西医院 陈雪融
结核病疫情
(WHO Global Tuberculosis Report 2009-2013)
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结核病疫情
2013年WHO发布的2012年结核病在全球范围内的分布情况 1/3在东南亚地区，1/4在非洲，1/5的病例在西太平洋地区 2012年中国的结核发病率为300-499/十万
for
the
diagnosis
of
active
tuberculosis:
a
systematic
review
and
meta-analysis.E1u8r
敏感性——免疫功能不全的患者
HIV/AIDS 器官移植 抗肿瘤坏死因子或糖皮质激素的治疗 恶性肿瘤 慢性肾功不全/血液透析 对于免疫缺陷的患者，IGRA的敏感性降低
3种检测方法在儿童活动性结核病诊断中的应用
论㊀㊀著３种检测方法在儿童活动性结核病诊断中的应用∗杨㊀硕１,李贵霞２,李文辉３,郭映辉２,黄㊀慧２,张文超２,王㊀乐１ә河北医科大学附属河北省儿童医院:１．儿科研究所;２．检验科;３．感染科,河北石家庄０５００３１㊀㊀摘㊀要:目的㊀评价γＧ干扰素释放试验(I G R A )㊁结核菌素皮肤试验(T S T )及结核抗体(T B ＧA b )检测对儿童活动性结核病的临床诊断价值,并分析I G R A 及T S T 在不同年龄患儿中的应用价值.方法㊀收集该院就诊的疑似结核患儿３６７例资料,其中临床诊断结核病患儿１１３例,非结核病患儿２５４例.分析３种方法的灵敏度㊁特异度㊁一致性及受试者工作特征曲线下面积(A U C )等.根据年龄将患儿分为不同亚组(０~＜２岁组㊁２~＜６岁组㊁６~＜１０岁组㊁１０~１５岁组),分析I G R A 及T S T 在各组中的参数.结果㊀I G R A 的灵敏度(９０．１％)高于T S T (７７．９％)及T B ＧA b 检测(７．９％);T B ＧA b 检测的特异度(９８．６％)高于I G R A (９１．７％)及T S T (８３．５％).I G R A 与临床诊断结果具有较高的一致性,其次为T S T ㊁T B ＧA b 检测(K a p p a 值分别为０．８００㊁０．５９８㊁０．０８７).I G R A 准确度最高,其次为T S T ㊁T B ＧA b 检测,A U C 分别为０．９１０㊁０．８０７及０．５３３.４个年龄组间I G R A (K a pＧp a 值分别为０．７８４㊁０．８６７㊁０．７４４㊁０．７７０)与临床诊断结果一致性均高于T S T (K a p p a 值分别为０．４５９㊁０．５４８㊁０．７３６㊁０．５６７).６~＜１０岁组I G R A 结果与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(P ＜０．０５);０~＜２岁组T S T 结果与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(P ＜０．０５).结论㊀I G R A 对儿童活动性结核病的检测价值较高,T B ＧA b 检测诊断价值较低;联合使用I G R A 及T S T 可以更好地提高各年龄段儿童结核病的诊断效率.关键词:儿童;㊀结核病;㊀γＧ干扰素释放试验;㊀结核菌素皮肤试验;㊀结核抗体D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１６７３Ｇ４１３０．２０２１．０６．０１７中图法分类号:R ５２１文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０２１)０６Ｇ０７１１Ｇ０５文献标志码:A A p p l i c a t i o no f t h r e e d e t e c t i o nm e t h o d s i nd i a gn o s i s o f a c t i v e t u b e r c u l o s i s i n c h i l d r e n ∗Y A N GS h u o １,L IG u i x i a ２,L IW e n h u i ３,G U OY i n g h u i ２,HU A N G H u i ２,Z HA N G W e n c h a o ２,WA N GL e １ә１．I n s t i t u t e o f P e d i a t r i cR e s e a r c h ;２．D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y ;３．D e p a r t m e n t o f I n fe c t i o n D i s e a s e s ,C h i l d r e n H o s p i t a l of H e b e iP r o v e n c eA f f i l i a t e d t oH e B e iM e d i c a lU n i v e r s i t y ,S h i j i a z h u a n g ,H e b e i ０５００３１,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e ㊀T o e v a l u a t e t h e c l i n i c a l d i a g n o s i s v a l u e of γＧi n t e r f e r o n r e l e a s e a s s a y (I G R A ),t u b e r Ｇc u l i ns k i n t e s t (T S T )a n d t u b e r c u l o s i s a n t i b o d y (T B ＧA b )t e s t i n c h i l d r e nw i t h a c t i v e t u b e r c u l o s i s ,a n d t o a n a Ｇl y z e t h e p e r f o r m a n c e o f I G R Aa n dT S Ti nc h i l d r e n i nd i f f e r e n t a ge s ．M e t h o d s ㊀At o t a l of ３６７c h i l d r e nw i t h s u s p e c t e d t u b e r c u l o s i sw h ow e r ea d m i t t e dt ot h eh o s p i t a lw e r er e t r o s p e c t i v e l y a n a l y z e d ．O f t h e s e ,１１３c a s e s w e r e d i ag n o s e d a s t u b e r c u l o s i s ,２５４w e r en o n Ｇt u b e r c u l o s i s ．S e n s i t i v i t y ,s p e c i f i c i t y ,c o n s i s t e n c y,a n da r e au n d e r t h e c u r v e (A U C )o f t h e t h r e em e t h o d sw e r es t a t i s t i c a l l y a n a l y z e d ．C h i l d r e nw e r ed i v i d e d i n t od i f f e r e n t s u b Ｇg r o u p s (０ ＜２y ,２ ＜６y ,６ ＜１０y ,１０ ＜１５y )a c c o r d i n g t o a ge ,t h e n t h e p a r a m e t e r s of I G R Aa n dT S T i ne a c hg r o u p w e r e a n a l y z e d ．R e s u l t s ㊀Th e s e n si t i v i t y o f I G R A (９０．１％)w a s h i gh e r t h a n７７．９％o fT S Ta n d ７．９％o fT B ＧA b ．T h e s p e c i f i c i t y o fT B ＧA b (９８．６％)w a sh i gh e r t h a n９１．７％o f I G R Aa n d８３．５％o fT S T．I G R Ah a d a h i g h c o n s i s t e n c y c o m p a r e dw i t h c l i n i c a l d i a g n o s i s ,f o l l o w e d b y T S Ta n d t h eT B ＧA b (K a p p a v a l u e s w e r e ０．８００,０．５９８,０．０８７r e s p e c t i v e l y )．I G R A h a dt h eh i g h e s ta c c u r a c y ,f o l l o w e db y T S Ta n dT B ＧA b ,w i t h A U Co f０．９１０,０．８０７,０．５３３,r e s p e c t i v e l y ．T h ec o n s i s t e n c y o f I G R A w i t hc l i n i c a ld i a g n o s i s (K a p pav a l u e s w e r e０．７８４,０．８６７,０．７４４,０．７７０)w e r eh i g h e r t h a nt h a to fT S T (K a p pav a l u e sw e r e０．４５９,０．５４８,０．７３６,０．５６７)a m o n g t h e f o u r a g e g r o u p s ．T h e r ew a s a s t a t i s t i c a l d i f f e r e n c eb e t w e e n I G R Aa n dc l i n i c a l d i a g n o s i s i n t h e ６ ＜１０y s u b g r o u p (P ＜０．０５)．T S T h a ds t a t i s t i c a ld i f f e r e n c ec o m p a r e d w i t hc l i n i c a ld i a gn o s i s i nt h e１１７ 国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d ,M a r c h ２０２１,V o l ．４２,N o ．６∗基金项目:河北省医学科学研究重点课题(２０１７０４０４).㊀㊀作者简介:杨硕,女,主管技师,主要从事病原微生物学方向研究.㊀ә㊀通信作者,E Ｇm a i l :l u k a _w l ＠１６３．c o m .㊀㊀本文引用格式:杨硕,李贵霞,李文辉,等．３种检测方法在儿童活动性结核病诊断中的应用[J ]．国际检验医学杂志,２０２１,４２(６):７１１Ｇ７１５．０ ＜２y s u b g r o u p(P＜０．０５)．C o n c l u s i o n㊀I G R Ah a s ah i g hv a l u e f o r t h ed e t e c t i o no f a c t i v e t u b e r c u l o s i s i n c h i l d r e n,T BＧA bh a s a l o wv a l u e．Ac o m b i n a t i o nu s e o f I G R Aa n dT S Ts h o u l db eu s e f u l t o i n c r e a s e t h ed i a gＧn o s t i c e f f i c i e n c y o f t u b e r c u l o s i s i n c h i l d r e no f a l l a g e s．K e y w o r d s:c h i l d;㊀t u b e r c u l o s i s;㊀i n t e r f e r o nＧg a mm ar e l e a s e t e s t;㊀t u b e r c u l i ns k i nt e s t;㊀t u b e r c u l o s i s a n t i b o d y㊀㊀据世界卫生组织(WHO)报告,２０１８年新增结核病患者约１０００万,其中＜１５岁的患儿占新发患者的１１％[１].中国作为结核病高负担国家,病例数占全球总数的９％.儿童作为家庭密切接触者存在较高的感染风险[２],且感染后发病率高㊁预后差,易对患儿健康造成严重危害,因此早期快速诊断是防控儿童结核病疫情的关键.γＧ干扰素释放试验(I G R A)㊁结核菌素皮肤试验(T S T)及结核抗体(T BＧA b)检测是目前用于临床检测结核分枝杆菌感染的常见免疫学方法[３].儿童处于不断生长发育的过程中,免疫功能发育状态与成人存在差别,不应以成人的标准判断各试验效能.T BＧA b检测在儿童应用中的研究数据较少,而关于I G R A在低龄儿童中的应用价值亦存在不同意见[４Ｇ６].因此,本研究围绕河北地区患儿展开,探讨３种检测方法对儿童结核病及不同年龄患儿的临床诊断价值.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀收集２０１４年７月至２０１９年３月于本院就诊的疑似结核病患儿病例资料并筛选.本研究获得本院医学伦理委员会批准.活动性结核病组(结核病组)纳入标准:细菌学确诊患儿体液标本抗酸染色阳性或血液结核菌培养阳性;临床诊断的活动性结核病患儿存在疑似活动性结核病症状,影像学检查提示存在活动性结核病,抗结核治疗有效[７].非结核病组为经临床诊断排除结核感染的其他疾病患儿.排除标准:(１)入院前已接受抗结核治疗;(２)使用免疫抑制剂或糖皮质激素治疗＞１周[８];(３)人类免疫缺陷病毒(H I V)感染;(４)未同时采用I G R A㊁T S T两种方法检测;(５)临床信息不全或诊断不明确.符合以上任一项即可排除.最终纳入患儿３６７例,年龄０~１５岁,结核病组１１３例,非结核病组２５４例.结核病组中,男７３例,女４０例;年龄１个月至＜１６岁,０~＜２岁１５例,２~＜６岁３７例,６~＜１０岁３２例,１０~１５岁２９例;肺结核１００例(８８．５％),肺结核合并肺外结核５例(４．４％),肺外结核８例(７．１％).非结核病组中,男１５９例,女９５例;年龄１个月至＜１６岁,０~＜２岁５７例,２~＜６岁８５例,６~＜１０岁６７例,１０~１５岁４５例.１．２㊀检测方法１．２．１㊀I G R A㊀入院或就诊当天以肝素抗凝管采集患儿静脉外周血２~４m L,室温６h内分离单个核细胞,采用英国O x f o r dI mm u n o t e c公司生产的结核感染T细胞免疫斑点试验(TＧS P O T．T B)试剂盒检测,具体操作参照试剂盒说明书.结果判断:当阴性对照孔斑点数为０~５时,C F PＧ１０和E S A TＧ６抗原检测孔任一孔计数－阴性孔计数ȡ６判为阳性;当阴性对照孔斑点数为ȡ６时,检测孔计数＞２倍阴性孔斑点数方可判断为阳性;阳性对照孔斑点数ȡ２０,检测孔计数均达不到阳性标准时则判断为阴性.１．２．２㊀T S T㊀入院或就诊当天于患儿前臂１/３皮肤无瘢痕部位皮下注射０．１m L结核菌素纯蛋白衍化物(５I U),４８~７２h后观察反应情况并测量硬结平均直径(mm).结果判断:硬结平均直径＜５mm或无反应为阴性(－);５~＜１０mm为阳性(＋);１０~＜２０mm为中度阳性(＋＋);ȡ２０mm为强阳性(＋＋＋);除硬结外有水疱㊁破溃及双圈反应为极强阳性(＋＋＋＋).１．２．３㊀T BＧA b检测㊀入院或就诊当天以分离胶促凝管采集患儿静脉外周血２m L,４８h内分离血清,使用南京大渊生物技术工程有限公司生产的结核分枝杆菌I g G抗体检测试剂盒(蛋白芯片法)及P B TＧX４型生物芯片识别仪检测,具体操作参照试剂盒说明书.结果判断:脂阿拉伯甘露聚糖(L AM)㊁结核菌重组蛋白抗原１６ˑ１０３和３８ˑ１０３I g G抗体,若其中任何一种抗体为阳性,则判断该标本结核分枝杆菌抗体阳性;若３种抗体检测均为阴性,则结果判定为阴性.１．３㊀评价指标㊀临床最终诊断为 金标准 ,分析参数包括灵敏度㊁特异度㊁阳性预测值㊁阴性预测值㊁阳性似然比㊁阴性似然比㊁约登指数㊁一致性及受试者工作特征曲线下面积(A U C)等.１．４㊀统计学处理㊀采用S P S S２４．０软件进行数据处理及统计分析,计数资料以频数或百分率表示,采用M c N e m a r检验,以P＜０．０５为差异有统计学意义.一致性采用一致性检验,以K a p p a值表示,K a p p a＞０．７５表示一致性高;K a p p a＝０．４０~０．７５表示一致性中等;K a p p a＜０．４０表示一致性差.２㊀结㊀㊀果２．１㊀３种检测方法的参数分析㊀３种方法中I G R A 灵敏度(９０．１％)最高,T BＧA b检测最低(７．９％);T BＧA b检测特异度(９８．６％)最高,T S T最低(８３．５％).２１７ 国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６I G R A 的阳性预测值㊁阴性预测值㊁阳性似然比㊁约登指数和A U C 均高于T S T 及T B ＧA b 检测;I G R A 的阴性似然比均低于T S T 和T B ＧA b 检测.I G R A 与临床诊断结果比较,差异无统计学意义(P ＞０．０５),T S T 和T B ＧA b 检测与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(P ＜０．０５).I G R A 在三者中具有较高的临床诊断一致性(K a p p a＝０．８００).见表１.２．２㊀I G R A 与T S T 在各年龄组的参数分析㊀I G R A 在４个年龄组患儿中,６~＜１０岁组灵敏度(９６．９％)最高,０~＜２岁组特异度(９６．５％)最高.与临床诊断比较,２~＜６岁组一致性最高;６~＜１０岁组一致性中等,与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(P ＜０．０５).T S T 在４个年龄组患儿中,６~＜１０岁组灵敏度(９０．６％)最高,１０~１５岁组特异度(８６．７％)最高.与临床诊断结果比较,４个组一致性中等;０~＜２岁组T S T 结果与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(P ＜０．０５).在４个年龄组患儿中,０~＜２岁组I G R A 的灵敏度与T S T 相等,其他年龄组I G R A 灵敏度均高于T S T ;６~＜１０岁组I G R A 特异度及阳性预测值均低于T S T ,其他３组I G R A 特异度及阳性预测值均高于T S T .I G R A 在各年龄组的阳性似然比㊁阴性预测值㊁约登指数㊁A U C 和K a p pa 值均高于T S T ,阴性似然比均低于T S T ,见表２.表１㊀㊀３种检测方法的参数分析分析参数I G R A T S T T B ＧA b 检测a结核病组㊀阳性(n )１０２７７５㊀阴性(n )１１３６５８非结核病组㊀阳性(n )２１４２２㊀阴性(n )２３３２１２１４１灵敏度(％)９０．１７７．９７．９特异度(％)９１．７８３．５９８．６阳性预测值(％)８２．９６７．７７１．４阴性预测值(％)９５．５８９．５７０．８阳性似然比１０．９２４．７１５．６７阴性似然比０．１００．２６０．９３约登指数０．８２００．６１３０．０６５K a p pa ０．８０００．５９８０．０８７A U C０．９１００．８０７０．５３３χ２２３５．９８７１２８．６４２５．６９５P０．１１００．０４９８＜０．００１㊀㊀注:aT B ＧA b 检测共检测２０６例,其中结核病组６３例,非结核病组１４３例.表２㊀㊀各年龄组I G R A 和T S T 的参数分析分析参数I G R A０~＜２岁２~＜６岁６~＜１０岁１０~１５岁T S T０~＜２岁２~＜６岁６~＜１０岁１０~１５岁结核病组㊀阳性(n )１２３５３１２４１２２７２９２０㊀阴性(n )３２１５３１０３９非结核病组㊀阳性(n )２５１１３１３１４９６㊀阴性(n )５５８０５６４２４４７１５８３９灵敏度(％)８０．０９４．６９６．９８２．８８０．０７３．０９０．６６９．０特异度(％)９６．５９４．１８３．６９３．３７７．２８３．５８６．６８６．７阳性预测值(％)８５．７８７．５７３．８８８．９４８．０６５．９７６．３７６．９阴性预测值(％)９４．８９７．６９８．２８９．４９３．６８７．７９５．１８１．３阳性似然比２２．８０１６．０８５．９０１２．４１３．５１４．４３６．７５５．１７阴性似然比０．２１０．０６０．０４０．１８０．２６０．３２０．１１０．３６约登指数０．７６５０．８８７０．８０４０．７６１０．５７２０．５６５０．７７２０．５５６K a p pa ０．７８４０．８６７０．７４４０．７７００．４５９０．５４８０．７３６０．５６７A U C０．８８２０．９４４０．９０２０．８８００．７８６０．７８３０．８８６０．７７８χ２４４．３５７９２．０６１５７．３９４４４．０６１１７．１３７３６．８８５５４．５６２２３．９４９P１．００００．４５３０．００６０．７２７０．０２１０．５４１０．１４６０．６０７３１７ 国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d ,M a r c h ２０２１,V o l ．４２,N o ．６２．３㊀联合检测㊀当I G R A与T S T联合检测时,结核病组中共有１０９份标本结果为阳性,联合检测的灵敏度为９６．４６％.３㊀讨㊀㊀论㊀㊀２０１８年,全球接受结核病预防性治疗的５岁以下患儿占估计符合纳入治疗条件的１３０万例的２７％[１],加强儿童结核病和潜伏结核感染(L T B I)诊断是控制结核病传播的重要手段.细菌学检查是结核病诊断的 金标准 ,但患儿的涂片阳性率一般为０％~１５％,培养阳性率低于３０％~４０％,这与患儿排菌量低且标本留取困难㊁结核菌培养条件苛刻等因素有关[９Ｇ１０].因此,传统的病原菌检测方法并非儿童结核病诊断的首选.本研究针对结核病患儿评价３种常用免疫学方法的诊断价值,并评估不同年龄阶段患儿中I G R A 与T S T的应用价值.T BＧA b检测在本研究第一阶段中与临床诊断结果一致性低,故不在亚组中进一步分析.TＧS P O T．T B是通过检测结核特异的效应T细胞所分泌的γＧ干扰素来判断受试者是否存在结核菌感染.机体感染结核菌后,可形成结核特异性记忆型T细胞在体内长期存在,当免疫细胞再次受到抗原刺激时,记忆T细胞迅速活化增殖释放γＧ干扰素.试剂采用两种结核特异抗原(E S A TＧ６㊁C F P１０),其与卡介苗(B C G)和多数非结核分枝杆菌(N T M)不发生交叉反应[１１],所以特异度高,适合用于B C G接种率较高的地区[１２].此外,由于可同时检测C D４＋及C D８＋T细胞,所以其灵敏度受免疫力情况影响小.P L A N A 等[１３]研究发现,即使在患有血液病的免疫抑制结核病患者中,I G R A可达到４４．２％的阳性率,明显高于T S T(１７．４％).本研究结果显示,I G R A结果与临床诊断结果一致性高,提示该方法对诊断儿童活动性结核病的应用价值较高,与孙琳等[５]和鲍磊等[１４]研究结果一致.L T B I是人体受到结核分枝杆菌刺激后出现持续免疫反应但没有活动性结核病临床证据的一种状态,其隐匿性强,早期难被发现.A HM E D等[１５]认为,L T B I儿童１年内约有１５％~４３％可发展为结核病,I G R A对于＜１５岁L T B I患儿具有较高的特异度和阳性预测值.因此,临床诊疗时对于此类I G R A检测阳性而无临床症状病例应当高度重视,评估是否为L T B I患儿,并进行及早干预.T S T是临床常用的检测结核菌感染的技术手段之一,利用结核菌素蛋白衍生物可刺激机体产生免疫反应.T S T阳性结果不能排除B C G接种反应与N T M感染,而阴性结果亦不能排除结核病的可能[７].我国新生儿B C G接种率较高,在一定程度上影响了试验的准确度.本研究中T S T灵敏度７７．９％,特异度８３．５％,与临床诊断结果比较,差异均有统计学意义(P＜０．０５).临床应用中常通过提高T S T的阳性标准以提高其特异度,但相应会使其灵敏度降低,增加了漏诊的可能性.国家结核病规划指南推荐对免疫抑制儿童或５岁以下的结核病密切接触儿童以T S T结果＞５mm作为阳性诊断标准,其他儿童以＞１０mm作为阳性诊断标准,以此来提高试验的准确性[１６].T BＧA b检测的结核蛋白芯片技术是利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(L AM)㊁蛋白１６ˑ１０３及蛋白３８ˑ１０３３种抗原固相于同一微孔滤膜上,与血清中抗体进行快速凝集反应,并利用免疫金作为标记物直接在膜上显色.而结核分枝杆菌为胞内寄生菌,机体的抗结核免疫主要依赖于特异性的细胞免疫.本研究结果显示,T BＧA b检测的A U C仅为０．５３３,远远低于成人的数据[１７],不能满足临床诊断需要.分析认为儿童免疫系统尚不成熟,血清中未产生足够抗体,从而直接影响了检测结果.有研究认为血清结核抗体反应差异较大可能还与地理环境㊁结核菌基因型及抗原特异性等多种因素相关[１８Ｇ１９],因此该方法诊断价值还需进一步研究验证.本研究发现,I G R A在６~＜１０岁组中特异度较低,分析认为可能是由于I G R A阳性结果不能排除L T B I,而目前对诊断L T B I没有明确的 金标准 ,临床诊断不能准确鉴别患儿是否为L T B I而造成的.有M e t a分析结果发现,I G R A对结核病患儿检测的灵敏度可高于临床诊断结果[２０].T S T在０~＜２岁组中特异度低,分析认为低龄儿童B C G接种时间间隔短,机体记忆性保护作用仍较强,对T S T产生了较多的交叉反应,从而影响试验结果.既往研究发现,B C G 保护作用可持续１０年左右,且随着年龄增长其保护作用逐渐减弱[２１Ｇ２２],这与本研究中１０~１５岁组T S T 的灵敏度下降而特异度升高的结果相符.I G R A结果在４个年龄组中约登指数及K a p p a 值均高于T S T,表明其在各年龄组的诊断价值均优于T S T.而０~＜２岁组和２~＜６岁组中I G R A结果与临床诊断结果比较,差异无统计学意义(P＞０．０５),显示其在低年龄段组患儿中也具有良好的应用价值.由于结核病患儿细菌学检查结果阳性率低,本研究主要以临床诊断为 金标准 评估３种检测方法的诊断价值,且不能排除L T B I的情况,研究结果可能存在一定的偏倚,因此采用较严格的入组筛选标准.本研究结果发现,相比T S T与T BＧA b检测, I G R A可以更有效地辅助临床对儿童结核病进行早期诊断,具有较高的应用价值.而T S T因操作简便快速,作为临床广泛应用的筛查手段仍具有重要的检测４１７ 国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６价值.联合使用I G R A及T S T可以更好地提高各年龄段儿童结核病的诊断灵敏度,有助于对结核病患儿的及早发现,及早干预,减少其严重并发症及后遗症发生.参考文献[１]W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n．G l o b a lt u b e r c u l o s i sr e p o r t ２０１９[R]．G e n e v a:W o r l dH e a l t hO r g a n i z a t i o n,２０１９．[２]L U I ES A,MAWA P A,N K U R U N U N G IG,e t a l．F a cＧt o r s a s s o c i a t e dw i t ht u b e r c u l o s i s i n f e c t i o n,a n dw i t ha n t iＧm y c o b a c t e r i a l i mm u n er e s p o n s e s,a m o n g f i v e y e a ro l d s B C GＧi mm u n i s e da tb i r t hi n E n t e b b e,U g a n d a[J]．V a cＧc i n e,２０１５,３３(６):７９６Ｇ８０４．[３]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会．肺结核诊断标准(W S２８８ 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s[J]．JL a bP h y s i c i a n s,２０１３,５(１):１１Ｇ１６．[１９]V A L E N T I N ID,R A O M,F E R R A R A G,e ta l．I mm u n e r e c o g n i t i o n s u r f a c e c o n s t r u c t i o no fM y c o b a c t e r i u mt u b e rＧc u l o s i s e p i t o p eＧs p e c i f i c a n t i b od y re s p o n s e s i n t u b e r c u l o s i sp a t i e n t s i d e n t i f i e db yp e p t i d em i c r o a r r a y s[J]．I n t J I n f e c tD i s,２０１７,５６(１１):１５５Ｇ１６６．[２０]S O L L A I S,G A L L IL,D E MA R T I N O M,e t a l．S y s t e mＧa t i c r e v i e wa n dm e t aＧa n a l y s i s o n t h eu t i l i t y o f I n t e r f e r o nＧg a mm a r e l e a s e a s s a y s f o r t h e d i a g n o s i s o fM y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s i n f e c t i o n i n c h i l d r e n:a２０１３u p d a t e[J]．B M C I n f e c tD i s,２０１４,１４(１):１Ｇ６．[２１]A N D E R S E N P,S C R I B A TJ．M o v i n g t u b e r c u l o s i sv a cＧc i n e s f r o mt h e o r y t o p r a c t i c e[J]．N a t u r e r e v i e w s,I mm uＧn o l o g y,２０１９,１９(９):５５０Ｇ５６２．[２２]D E L A N YI,R A P P U O L IR,D EG R E G O R I O E．V a c c i n e s f o r t h e２１s tc e n t u r y[J]．E M B O M o l M e d,２０１４,６(６):７０８Ｇ７２０．(收稿日期:２０２０Ｇ０６Ｇ１６㊀修回日期:２０２０Ｇ１１Ｇ１３)５１７国际检验医学杂志２０２１年３月第４２卷第６期㊀I n t J L a bM e d,M a r c h２０２１,V o l．４２,N o．６。
γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的应用及进展
结核病（tuberculosis， TB）是结核分枝杆菌（mycoba-cterium tuberculosis，MTB）感染引起的呼吸道传染病，目前该病疫情依然严峻。
据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）估计，2017年全球结核病新发病例数为1 000万例，中国有88.9万例；全球有157万人死于结核病；全球23%的人口（约17亿）存在潜伏结核感染[1]。
结核分枝杆菌属胞内寄生菌，其免疫主要是以T细胞为主的细胞免疫，这也是结核病诊断的困难所在。
控制结核病的关键在于控制传染源，高特异度和高灵敏度的早期诊断技术及试剂对结核病的早期诊断，及时有效治疗，有效切断传染源，控制疾病流行至关重要。
当前结核病的众多诊断方法或多或少存在缺陷。
传统的痰涂片镜检灵敏度低，而分离培养法鉴定菌种及药敏结果所需时间较长（4~6周）[2]。
病理学检查取材不易、灵敏度低且鉴别诊断困难。
结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test，TST）虽简便廉价，但其使用的抗原——结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）与卡介苗（bacille Calmette-Guérin，BCG）和非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria，NTM）之间存在交叉反应，特异度较低；TST依赖人体的免疫反应，对免疫受损人群灵敏度不足[3]；且TST耗时较长（48~72 h），易受操作者主观因素影响。
γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assay，IGRA)作为一种新兴免疫学诊断方法，在控制结核感染及发病等方面得到迅速推广，且随着新的生物学标志物的寻找和IGRA方法学的改进，其在临床上具有广阔的发展前景。
1 IGRA原理和方法结核分枝杆菌中存在独有的“RD1”区域，医学界利用该基因区编码的抗原多肽作为特异性抗原，主要有早期分泌抗原靶分子6（early secreted antigenic target 6，ESAT-6）和培养滤液蛋白10（culture filtrate protein 10，CFP-10），有些产品在此基础上增加了TB7.7抗原多肽，体外刺激机体特异性效应T淋巴细胞，通过酶联免疫吸附试验或酶联免疫斑点试验（ELISA或ELISPOT）定量检测所释放的γ-干扰素水平，进而判定是否存在MTB，这便是IGRA的原理。
γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用
γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用1. 引言1.1 潜伏感染与结核病潜伏感染与结核病是结核分枝杆菌感染的两个重要阶段。
潜伏感染是指机体内结核分枝杆菌存在，但并未引起症状或临床表现的情况。
在潜伏感染期间，结核菌可长期潜伏在宿主内，随时可能激活引发结核病。
而结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，其临床症状多样，可侵及全身各器官，严重影响患者的生活质量。
早期诊断和治疗潜伏感染至关重要，可以有效预防结核病的发生和传播。
潜伏感染与结核病之间存在着复杂的关系，很多潜伏感染者最终并不会发展成为结核病患者，但也有一部分患者会在未来发展成为结核病。
准确地判断潜伏感染的存在及其风险程度对于结核病的控制和预防至关重要。
γ干扰素释放试验是一种用于检测结核分枝杆菌感染的方法，可以辅助医生进行早期诊断和干预，有助于控制结核病的传播。
在接下来的正文中，我们将更详细地探讨γ干扰素释放试验在检测结核分枝杆菌潜伏感染中的应用及其优势和局限性。
1.2 γ干扰素释放试验简介γ干扰素释放试验（IFN-γ release ass ay，IGRA）是一种用于检测结核分枝杆菌感染的新型诊断方法。
相比传统的结核菌素皮试（TST），γ干扰素释放试验具有更高的特异性和耐受性，且不会受到疫苗接种和疫苗学效应的影响。
γ干扰素释放试验基本原理是利用结核菌蛋白质特异性的抗原刺激患者的淋巴细胞产生γ干扰素，并通过检测γ干扰素的释放量来判断是否感染结核分枝杆菌。
相比TST需要24-72小时的等待时间，γ干扰素释放试验只需一次采血，几个小时内就可得出结果，大大缩短了等待时间。
γ干扰素释放试验目前主要有两种商业化的产品：T-SPOT.TB和Quantiferon-TB Gold。
它们的原理和操作流程基本相同，在临床应用中具有较高的准确性和可靠性。
2. 正文2.1 γ干扰素释放试验在结核分枝杆菌感染中的应用γ干扰素释放试验（IGRA）是一种用于检测结核分枝杆菌感染的技术，它通过检测机体对结核分枝杆菌特异性抗原的γ干扰素释放来判断是否感染了结核菌。
γ-干扰素释放试验(IGRA)对于诊断结核分枝杆菌感染的应用
支气管肺泡灌洗液中的 Ｔ细胞反应以检测结核分枝杆菌感染
的试验也取得 了较好 的效 果 ， 为这类试验 的应用拓展 了新思
路。
一
呈细胞的主要组织相容性复合体 （ 白细胞抗 原 ） 人 相结 合 ， 表
达于巨噬细胞表面 ， 并递 呈给 Ｔ细 胞。特异性 Ｃ ４ Ｄ Ｔ细 胞 能产生特征性淋巴因子 ， 包括一种 能够刺激 Ｔ细胞增殖 的生 长 因子 白介素一 ２和一种 巨噬细胞反应 中介物 ＾ 干扰素 ， 一 ｙ 一 ＾干 ｙ 扰素 为巨噬细胞杀菌机制所必需 。
重要 的。 一 干扰素 释放试 验诞 生 的早期 曾使 用 Ｐ Ｄ作 为特 Ｐ 异性抗 原 ， 由于 Ｐ Ｄ成分不单一 ， 异性和敏感性 均不理想 。 Ｐ 特
后来研 究者开始使用 Ｅ Ａ ６ 和 Ｃ Ｐ１ ＳＴ Ｆ ．０作为抗原 ， 得到 了较 好的效果。Ｅ Ａ ￣（ Ｓ Ｔ 早期分泌抗原靶６０ ０ 白，ａｌ ｓｃ ｔ ０ 蛋 ｅｒ ｅｒ ｏ ｙ ｅ—
９３ ８８％ ．
Hale Waihona Puke 吸附／ 酶联免疫斑点 ） 方法定 量检测检 测全血／ 周血单核 细 外
胞在结核菌特异性抗原刺激 下释放 ＾干扰 素的水平 ， 于诊 ｙ 一 用 断潜伏性结核分枝 杆菌感 染 以及结 核病 。 目前这 类 一 扰 干 素释放试验中 ， 有两种较为成熟 的方法 ， Ｑ ａｔ Ｆ Ｒ Ｎ Ｔ 即 ｕｎｉ Ｅ Ｏ —Ｂ Ｇ Ｌ Ｏ Ｄ试验 （ Ｖ — Ｑ ｒＧ）（ ｅｅｔ ｎｏ ｏ ｔｄ Ｃ ｍｅ ｅ Ａ ｓａ— Ｃｌ ｓｓＩｃｒ ｒ ｅ ，ａ ￣ ， ｕｔ ｌ ｌ ｉ ｐａ ｒ
这个基 因片断不存在于大部分的非结核 分枝杆菌 以及所有的 牛型分枝杆菌（ 包括卡介苗 ） 因此 Ｅ Ａ ６ 和 Ｃ Ｐ１ 中， ＳＴ Ｆ． ０作为
结核感染T细胞 γ 干扰素释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用
结核感染T细胞γ 干扰素释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用王华;甄拴平;高涛【期刊名称】《临床医学研究与实践》【年(卷),期】2018(003)025【摘要】目的探讨结核感染T细胞γ 干扰素释放试验(TB-IGRA)诊断结核病的应用价值.方法对结核病患者86例、肺部其他疾病患者98例分别进行TB-IGRA试验、血清结核杆菌抗体及痰涂片抗酸染色检查,并对检测结果进行回顾性分析.结果结核病组、肺结核组及肺外结核组的TB-IGRA阳性率显著高于肺部其他疾病组,IFN-γ 浓度高于肺部其他疾病组,差异有统计学意义(P<0.05).涂阳肺结核和涂阴肺结核患者的TB-IGRA阳性率及IFN-γ 浓度无统计学差异(P>0.05).TB-IGRA试验诊断结核病的灵敏度显著高于结核抗体和涂片抗酸染色,特异度高于结核抗体(P<0.05).结论 TB-IGRA试验对结核病的诊断有较高的灵敏度和特异度,对宝鸡地区结核病的临床诊断价值较大.【总页数】2页(P97-98)【作者】王华;甄拴平;高涛【作者单位】宝鸡市中医医院检验科,陕西宝鸡,721001;宝鸡市中医医院检验科,陕西宝鸡,721001;宝鸡市疾病预防控制中心检验科,陕西宝鸡,721000【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值 [J], 艾君彦;胡克2.结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值 [J], 曹志亮3.干扰素γ释放试验在结核感染和活动性结核病诊断中的应用 [J], 孙琳4.结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用 [J], 邹丹凤;肖和平;尹洪云5.结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用价值 [J], 张景艳;荣幸;王守芹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
γ-干扰素释放试验在结核病诊断中应用价值探讨
World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2016 V o1.16 No.83108投稿邮箱：sjzxyx789@0 引言近年来γ-干扰素释放试验被广泛应用于快速诊断MTB 感染，美国、澳大利亚、日本和韩国等多个国家已制定出相关指南[1]，而在我国仍缺乏大样本的研究。
本研究回顾性分析我院452例可疑结核分枝杆菌感染患者特异性γ-干扰素检测，结核抗体检测、抗酸染色及血沉、C 反应蛋白试验检测结果分析。
1 资料与方法1.1 研究对象2014年8月至2016年7月本院住院及门诊可疑结核分枝杆菌感染患者452例。
1.2 试剂与仪器TB-IGRA 诊断产品试剂盒、MK3酶标仪、HF-1500二级生物安全柜、37℃恒温箱、LJ 型医用低速离心机、结核抗体胶体金诊断试剂盒等。
1.3 TB-IGRA 检测方法及判定标准采取外周静脉血3-5ml，肝素钠抗凝，2h 内依次分装1ml 全血到N、T、P 3个培养管中，分别为本底对照管、测试管、阳性对照管，N 管中未添加任何刺激源；T 管中添加了结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10；P 管中添加了非特异刺激原植物血凝素(PHA)。
然后将培养管轻轻颠倒混匀5次，直立放入37℃恒温水浴箱中，培养20-24h，4000rpm/min 离心10min，收集上清液，进行ELISA 检测。
当N ≥400，实验结果不能确定是否感染结核分枝杆菌；当N ≤400时，P-N ≥20，T-N＜14或＜1/4N 时结果为阴性，表明患者未感染结核分枝杆菌；当N ≤400时，T-N ≥14且≥1/4N，结果阳性，表明感染结核分枝杆菌；当N ≤400时，P-N ＜20，T-N ＜14或＜1/4N 时结果不确定是否感染结核分枝杆菌。
1.4 T-SPOT.TB 检测方法及判定标准使用肝素钠抗凝管采集外周静脉血5-8mL，4h 内用Ficoll 淋巴细胞分离液分离单核淋巴细胞，经RPMI1640培养液洗涤后，然后用培养液调整细胞数至2.5×109/L，各取100μL 分别加至4个微孔，依次用培养液、ESAT-6、CFP-10和植物血凝素刺激各孔细胞，在37℃5%CO 2培养箱中温育16-20h，用PBS 洗板，加入新鲜配制的碱性磷酸酶标记抗体，4℃反应1h，用PBS 洗板，每孔加入底物显色液BCIP/NBT，室温暗室反应6min，蒸馏水冲洗终止反应，放大镜观察记录每孔斑点数。
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– 先进行TST，再进行IGRA的两步法 – 只进行IGRA，代替TST
– IGRA或TST，但不同时进行 – IGRA和TST一起
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Denkinger et al. CMI 2011,17:806-814.
应用1：活动性结核病—指南推荐
活动性结核病的辅助诊断
儿童肺外结核病的辅助诊断
发生于肺部以外全身其他脏器 的结核病
占全部结核病的 10%～20% 死亡人数占结核病全部死亡人
数的14.1%～17.6%
IGRA的敏感度和特异度都高于TST并能监测疗效,因此提倡在组织活检和外科等创伤 性检查之前进行IGRA。
Liao CH et al. J Infect 2009, 59:402-408.
---中国防痨协会临床专业委员会
应用2：潜伏性结核病筛查
指南推荐---潜伏性结核感染筛查
• IGRAs are the preferred method of testing for -
– Groups of people who have poor rates of return for TST reading and interpretation (e.g., homeless persons) – Persons who have received BCG vaccination（卡介苗接种人群）
γ-干扰素ห้องสมุดไป่ตู้放试验（IGRA）在儿童结核病 诊断中的应用
我国结核病疫情
WHO（2013） –我国结核病发病人数100万（发病率73/10万）
2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查 –我国每年新增病例100万
–肺结核全国患病人数499万 –耐多药率6.8%
2000年全国第四次结核病流行病学抽样调查 –我国潜伏性结核感染率44.5% –潜伏性结核感染人群约5.5亿人
检出率低：儿童结核病病灶菌负荷少，痰标本涂阳率为10% ~15%, 培养的阳性率只有 30% ~ 40%
卡介苗干扰：我国儿童普遍接种卡介苗，会干扰TST试验的检测 结果
γ干扰素释放试验（IGRAs）
原理：
感染结核分枝杆菌的患者体内会产生特异性T细胞 受结核分枝杆菌特异性抗原（ESAT-6、CFP-10等）刺激，将释放IFN-γ 通过技术检测释放的IFN-γ，判断患者体内是否存在结核效应 T淋巴细胞，
严重并发症
6
3
儿童结核病诊断目前存在问题
难以预防：BCG接种可减少儿童结核性脑膜炎及播散型结核病， 但不能预防潜伏性结核感染和其他结核病
临床症状鉴别困难：儿童结核病多为初次感染，早期往往无症状 或不易被察觉，缺乏典型临床表现，不易与其他疾病相鉴别 标本获取困难：年龄小于12岁的儿童几乎不会自发排痰
肺外结核病的辅助诊断 菌阴/涂阴肺结核的辅助诊断
儿童结核病的辅助诊断 非结核分枝杆菌病的鉴别诊断
6
European Centre for Disease Prevention and Control. Use of interferon-gamma release assays in support of TB diagnosis，2011
从而判断目前患者是否感染结核分枝杆菌
特点：特异性、敏感性高、快速的检测结核杆菌感染
5
γ干扰素释放试验（IGRAs）方法学
QFT-GIT、A.TB、TB.IGRA 酶联免疫吸附技术(ELISA)
T-SPOT、FS.SPOT 酶联免疫斑点计数(ELISPOT)
6
IGRA国外指南认证
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TST与IGRAs
指南推荐---HIV感染者结核筛查
指南推荐---密切接触者筛查
接种卡介苗的人优先选择IGRA，未接种则二选一；五岁以下儿童优先 选择TST，5岁以上则和成人选择相同。
In certain clinical situations，IGRAs could contribute supplementary information as part of the diagnostic work-up patients with extrapulmonary TB patients who test negative for acidfast bacilli in sputum and/or negative for M. tuberculosis on culture, TB diagnosis in children or in the differential diagnosis of infection with NTM
卡介苗（BCG）预防结核病
卡介苗可说是人类历史上使用最多的疫苗，但 效果在近三十年来倍受质疑。在欧洲，结核病 盛行率在卡介苗广泛应用之前己明显下降，从 没有广泛使用卡介苗的北美，结核病的盛行率
也自然下降。
目前比较肯定的是，卡介苗75%～86%有效 地预防婴幼儿的进行性原发性感染如结核性脑 膜炎和血行播散性结核（如栗粒性脑膜炎）等
项目
结核菌素试验 γ-干扰素释放试验
抗原组成
PPD，成分复杂 ESAT6,CFP-10，TB7.7
便捷度
2次（注射，读数）
1次（抽血）
时间
48-72h
16-24h
实验对象
体内
体外
结果诊断 主观（基于观察者） 客观（基于机器）
卡介苗（BCG） 影响
是，特异度56%
否，特异度96%
非结核分枝杆菌 （NTM）影响
是（18种）
否（除堪萨斯、海水、 苏加分枝杆菌）
γ-干扰素释放试验（IGRAs）是诊断卡介苗接种人群潜伏性结核感染的首选方法。 -----美国疾病预防与控制中心（CDC）
指南解读
IGRA越来越多的被推荐使用 使用范围：结核病的辅助诊断，结核感染的筛查 使用人群：儿童，免疫功能受损人群（HIV/接受生物制剂治疗的
• TST is the preferred method for testing for – – Children under the age of 5 years
• Either TST or IGRA may be used without preference for other groups that are tested for LTBI.