γ干扰素释放试验指南
γ干扰素释放试验在中国应用的建议γ- 干扰素释放试验（interferon-γ release assays，IGRAs）是检测结核分枝杆菌(MTB) 特异性抗原刺激T 细胞产生的γ- 干扰素，以判断是否存在MTB 的感染。
IGRAs 可弥补PPD 试验的不足，目前多个国家已将其用于诊断MTB 潜伏感染(latent tuberculosis infection，LTBI)，我国部分医院也已常规开展此项检测，且多家IGRAs 试剂已经或即将进入临床应用。
LTBI 是宿主感染MTB 后的一种特殊状态，感染者体内的MTB 处于持留状态，不能诊断为活动性结核病，但具有发展为活动性结核病的风险。
对LTBI 的高危人群进行早期诊断和适当干预，在结核病控制中具有积极意义。
PPD 试验作为诊断MTB 感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPD 抗原成分复杂，易受卡介苗接种和非结核分枝杆菌(nontuberculosismycobacterium，NTM) 的影响，特异度较低，且对人免疫缺陷病毒(HIV) 感染及重症疾病患者等免疫功能受损人群的敏感度不足。
研究结果提示，IGRAs 诊断MTB 感染的特异度高于PPD 试验，但也有文献报道，特别是在中、低收入国家，IGRAs 与PPD 试验相比并没有足够的优势。
IGRAs 技术要求高，操作程序复杂，样本检测时限短，难以实现高通量，价格昂贵。
由于缺乏严谨、大规模和前瞻性的人群研究数据，故IGRAs 的应用范围及结果解读存在较大争议。
为了指导IGRAs 在我国的合理应用，中华医学会结核病学分会与《中华结核和呼吸杂志》编辑委员会组织有关专家经过长时间的反复研讨，在借鉴世界卫生组织(WHO) 关于中低收入国家IGRAs 应用说明的基础上，结合我国IGRAs 应用现状，提出以下建议。
一、IGRAs 简介1．IGRAs 的原理和主要方法：受到MTB 抗原刺激致敏的T 细胞再次遇到同类抗原时可产生γ- 干扰素，IGRAs 通过检测全血或分离自全血的单核细胞在MTB 特异性抗原刺激下产生的γ- 干扰素，判断受试者是否感染MTB。
目前国际上较成熟的IGRAs 有2 种：(1)采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测全血中致敏T 细胞再次受到MTB 特异性抗原刺激后释放的γ- 干扰素水平，称之为全血检测或结核感染T 细胞免疫检测；(2)采用酶联免疫斑点技术(enzyme-linkedimmunospot assay，ELISPOT) 测定在MTB 特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能够释放γ- 干扰素的效应T 细胞数量，称之为细胞检测或结核感染T 细胞检测。
上述 2 种检测方法的原理类似，检测技术和操作程序略有不同，均采用MTB 的RD1 区基因编码抗原多肽作为特异性抗原，主要有相对分子质量为 6 000 的早期分泌抗原靶（FSAT-6）和相对分子质量为10 000 的培养滤液蛋白（CFP-10）抗原或抗原多肽。
有些产品在此基础上增加了TB7.7 抗原多肽。
我国目前生产或代理ICRAs 试剂盒的多个厂家完成或正在进行注册审评，其中部分产品已获准上市。
2．IGRAs 的适应证和优缺点：经国家食品药品监督管理总局批准，目前IGRAs 的使用范围是检测血液样本中效应T 细胞产生γ- 干扰素的能力，多数NTM 中缺失，因此IGRAs 的特异度较好。
海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆菌和胃分枝杆菌，故IGRAs 阳性不能排除上述几种NTM 感染的可能。
由于ELISPOT 技术是从单细胞水平进行检测，可及时捕获细胞周围分泌的细胞因子，故敏感度更高。
但在实际使用中发现，IGRAs 在不同地区、不同人群中的特异度和敏感度且IGRAs 对实验技术和实验条件要求较高，价格昂贵，样本检测时限短，难以实现高通量，因而限制了在中低收入国家的推广应用。
此外，不同IGRAs 产品使用的抗原、检测试剂、检测参数和界值设定等可能存在差异，对最终检测结果及其判读有一定影响。
3．IGRAs 国际应用指南：截至2011 年，共有来自25 个国家和2 个国际组织编制的33 个关于IGRAs 应用的指南，其中部分指南可通过基于循证医学的结核病诊断网站（http：//www．tbevidence．org）获得。
绝大部分指南来自结核病低负担的发达国家，结核病中、高负担国家中仅有巴西、保加利亚、韩国和沙特阿拉伯发表了相应的指南。
欧美等发达国家通常推荐将ICRAs 用于辅助诊断MTB 感染。
由于ICRAs 的检测效率受结核病流行情况等影响，若直接将结核病低负担国家制定的指南推广到结核病高负担国家显然不合适。
即便都是低负担、高收入的国家，各国指南对IGRAs 应用的意见也明显不同。
归纳不同指南的观点，主要有以下相对一致或相近的建议：(1) IGRAs 不能有效区分活动性结核病和LTBI，因此IGRAs 对活动性结核病的诊断价值有限，尤其在结核病高负担国家；(2) 无论是特异度还是敏感度，ICRAs 均优于或至少不差于PPD 试验，因此，在诊断LTBI 方面，发达国家多推荐单独或联合应用ICRAs。
WHO 对IGRAs 在中低收入国家的使用情况进行了系统评估，在此基础上，WHO 于2011 年颁布了中低收入国家／结核病高负担国家ICRAs 应用说明，并指出，尽管数据尚不充分。
但现有研究结果显示，在结核病高负担国家，IGRAs 的敏感度和特异度与PPD 试验比较，并未显示出明显的优势，加之IGRAs 的方法复杂且成本高，故WHO 认为：(1)目前尚无充分事实依据支持IGRAs 在中低收入国家中广泛使用，特别是在结核病和（或）人免疫缺陷病毒(HIV) 感染高负担的国家；(2)ICRAs 和PPD 试验均不能准确预测MTB 感染者发生结核病的风险；(3)IGRAs 和PPD 试验均不能用于活动性结核病的诊断；(4) 在中、低收入国家中不应推荐用IGRAs 替代PPD 试验作为大规模健康人群中筛查结核病的公共卫生手段。
二、IGRAs 在我国应用的建议我国一方面是结核病高负担国家，但又与低收入国家在结核病控制经费投入、结核病流行特点、卡介苗接种以及NTM 感染等方面存在显着不同，制定我国IGRAs 应用指南时应综合考虑。
中华医学会结核病学分会和《中华结核和呼吸杂志》编辑委员会组织结核病临床专家、实验室研究人员及结核病流行病学专家，在对我国有限的IGRAs应用报道进行荟萃分析的基础上，参照现有的IGRAs 国际应用指南，讨论并提出以下关于IGRAs 在我国应用的建议。
（一）IGRAs 在活动性结核病辅助诊断中的应用1．IGRAs 对活动性结核病的辅助诊断：PPD 试验和IGRAs 均无法区分LTBI 和活动性结核病患者。
国内IGRAs 的研究数据显示其敏感度和特异度差别较大，敏感度为53%～98%，特异度为60%~ 90%（或以上），但多数文献报道的敏感度和特异度>70%，提示IGRAs 的特异度优于PPD 试验。
考虑到我国肺结核患者中菌阴肺结核所占比例较高，在诊断这类患者缺乏细菌学依据时，IGRAs 可发挥其辅助作用。
近几年来国内有IGRAs（仅限于ELISPOT 方法）辅助诊断结核性胸膜炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，其中采用胸腔积液和腹水等体液或组织标本检测的IGRAs 的敏感度和特异度高达90% 以上，采用血液标本检测时IGRAs 则并未显示出优势。
此类研究报道数量不多，病例数也不足，且国家食品药品监督管理总局批准的IGRAs 仅限于血液样本的检测，即IGRAs 对体液或组织标本的研究尚未经过充分验证，不能得出可靠的结论。
不同试剂的研究存在人群人组标准、所用IGRAs 检测试剂和判断标准等不一致的问题，难以获得IGRAs 在我国应用的充分数据。
建议：(1)IGRAs 不能用于确诊或排除活动性结核病，但对缺少细菌学诊断依据的活动性结核病（如菌阴肺结核等），IGRAs 可在常规诊断依据的基础上，起到补充或辅助诊断的作用；(2)IGRAs 检测胸腔积液和腹水等非血液标本的检测程序、判断标准和诊断效能有待进一步研究。
2．IGRAs 对儿童结核病的辅助诊断：儿童结核病的临床症状不典型，重症及肺外结核病比例较高，且结核病患儿的细菌载量低，咳嗽反射和气管纤毛运动能力差，病原学检查阳性率很低，PPD 试验和ICRAs 联合诊断有一定的辅助作用。
为数不多的文献报道，在儿童结核病的辅助诊断研究中，细胞检测的特异度与全血检测类似，但敏感度优于全血检测。
国内外IGRAs 检测儿童结核病的荟萃分析数据表明，其敏感度和特异度差别较大，多数研究结果显示，IGRAs 的敏感度与PPD 试验相当，而特异度优于PPD 试验。
由于儿童的PPD 试验诊断标准尚未统一，难以客观比较IGRAs 和PPD 试验的差异，且低龄儿童采血可能带来伤害，其综合效益有待进一步评估。
建议：(1) IGRAs 的敏感度并不优于PPD 试验，且IGRAs 操作复杂、价格昂贵，不建议常规以IGRAs 替代PPD 试验对儿童活动性结核病进行辅助诊断；(2)PPD 试验易受年龄和疾病严重程度的影响而出现假阴性，建议联合应用IGRAs 和PPD 试验作为儿童结核病的辅助诊断方法，尤其适用于重症结核病和难以获得细菌学诊断依据的结核病。
（二）IGRAs 在LTBI 诊断中的应用1．活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI 的诊断：与一般人群相比，LTBI 发生结核病的风险相对较高，在条件允许的情况下，对活动性结核病患者的密切接触者、医务T 作者甚至结核病高发地区人群进行LTBI 筛查、追踪及干预具有积极意义。
与PPD 试验相比，理论上IGRAs 的特异度更好，文献报道，IGRAs 的阳性预测值显着高于PPD 试验，前者为14.6%（95% Cl 为6%~29%），后者为2.3%（95% CI 为0.7%~2.5%）。
然而，IGRAs 在预测活动性结核病发生风险的荟萃分析结果显示，ICRAs 与PPD 试验并无显着差别，前者略高于后者，分别为 2.1% 和 1.6%。
目前国内尚缺少严格设计的IGRAs 对预测活动性结核病发生风险的研究报道，有关医护工作者中LTBI 筛查的文献报道较多，荟萃分析结果显示，单次ICRAs 检测的特异度优于单次PPD 试验。
但对IGRAs 动态检测阳转的判定标准以及对IGRAs 阳转在预测结核病发生风险的认识并不一致。
目前对于是否开展IGRAs 的动态监测各国指南中均没有明确阐述，很多国家的相关指南中倾向于仅用PPD 试验进行动态监测，或在PPD 试验阳性时再进行IGRAs 确认。
igras检测指标
igras检测指标
IGRAs（Interferon-Gamma Release Assays）是一种用于检测结核分枝杆菌感染的检测方法。
IGRAs测量的是患者的免疫系统对结核分枝杆菌（TB）特异性抗原的反应，主要通过检测干扰素-γ（IFN-γ）的释放来判断。
在进行IGRAs 测试时，主要关注以下指标：
1.IFN-γ测量：IGRAs的核心是测量患者血样中的IFN-γ 分泌
水平。
这是通过将患者的血样与结核分枝杆菌特异性抗原（通常是
ESAT-6和CFP-10）接触，然后测量产生的IFN-γ 来完成的。
2.阈值设定：结果通常以IFN-γ 的浓度来报告，以确定一个
“正常”或“阳性”反应。
这个阈值的设定可能会因实验室和测试品牌
而异。
3.阴性控制：IGRAs测试通常还包括对阴性控制的考虑，以确保
结果的准确性。
阴性控制是指检测样本在没有暴露于结核分枝杆菌抗原
的情况下是否产生IFN-γ。
4.阳性判定：当IFN-γ 的浓度超过特定阈值时，测试结果被判
定为阳性，表示个体对结核分枝杆菌感染有免疫反应。
IGRAs是一种相对于传统的结核菌皮肤试验（TST）更现代的结核感染检测方法。
它们的优势包括结果的快速产生、不受BCG 疫苗的影响以及不需要多次访问进行测量。
然而，IGRAs也存在一些限制，包括高成本、技术要求和对样本处理的精确性要求。
因此，在选择结核感染检测方法时，医生通常会根据患者的具体情况和所在地区的流行病学考虑。
γ—干扰素释放试验、荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验联合检测对涂阴性肺结核的诊断价值
γ—干扰素释放试验、荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验联合检测对涂阴性肺结核的诊断价值目的：研究γ-干扰素释放试驗（IGRA）、荧光定量PCR（FQ-PCR）、结核菌素皮肤试验（TST）三种方法联合检测对涂阴性肺结核的诊断价值。
方法：选取确诊的33例涂阴性肺结核和30例非结核的肺部感染患者，分别使用酶联免疫法（ELISA法），测定患者全血干扰素的浓度，荧光定量PCR法检测患者肺泡灌洗液的结核杆菌DNA，卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）进行结核菌素皮肤试验。
结果：γ-干扰素释放试验、荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验三种检测方法在肺结核组和非肺结核组的阳性率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；三种检测方法在肺结核组的阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
γ-干扰素释放试验方法的灵敏度为84.85%，特异度为86.67%，Youden指数为0.72；荧光定量PCR方法的灵敏度为60.61%，特异度为83.33%，Youden指数为0.44；结核菌素皮肤试验的灵敏度为81.82%，特异度为53.33%，Youden指数为0.35。
联合检测试验中以IGRA平行联合FQ-PCR（Youden指数为0.66）和IGRA系列联合TST（Youden指数为0.63）的诊断效能最好。
结论：γ-干扰素释放试验较荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验对涂阴性肺结核有更好的诊断价值，联合检测试验以IGRA平行联合FQ-PCR诊断价值最佳。
我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病发病人数居全球第二位，防治任务艰巨。
对于涂阳性肺结核的患者，很容易被诊断并能给予及时抗结核治疗，但是临床上往往存在大量涂阴性肺结核的患者，因无法及时诊断，导致患者病情延误，造成不良后果[1-3]。
过去使用结核菌素皮肤试验是临床辅助诊断肺结核的常用方法，但是它的假阳性率较高，导致过度治疗[4-7]。
近几年，文献[8-11]报道，γ-干扰素释放试验对诊断肺结核有较高的敏感性和特异性，但是其鉴别肺结核潜伏性感染和活动性感染有一定困难。
结核感染T细胞斑点试验
结核感染T细胞斑点试验
第9页
谢谢
结核感染T细胞斑点试验
第10页
▪ 萨斯分枝杆菌( My cobacter ium kans asii ) 、海
分枝杆菌(My cobacter ium mar inum ) 、斯氏分枝
杆菌( My cobacter ium sz ul gai ) 等少数分枝杆
菌中也存在完整RD1区，编码ESAT 6 和CFP 10,
可造成检测结果成假阳性。
白。在卡介苗菌株和大部分环境中分枝杆菌基因中则缺
乏次序列。
结核感染T细胞斑点试验
第4页
T-SPOT-TB—示意
阴性对照
阳性对照
A试验组
B试验组
结核感染T细胞斑点试验
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T-SPOT-TB—解释
▪ 非黄金标准
▪ 定性检测而不是定量检测
▪ 敏感性95.3%-98.8%
▪ 特异性94.1%-100%
T-SPOT-TB—几个概念
▪ ELISPOT（enzyme-linked immunospot assay,）是一个新
型免疫酶技术，它是从单细胞水平检测分泌抗体细胞或
分泌细胞因子细胞。（简单说：能够数出分泌特异因子
细胞个数）
▪ ESAT-6和CFP-10蛋白：存在结核分枝杆菌及少数致病非
结核分枝杆菌中名为“RD1”基因序列，编码产生两种蛋
2.效应T细胞随结核杆菌去除而消失，其阴性及阳性
结果可作为评定治疗效果伎俩之一 。
结核感染T细胞斑点试验
第8页
T-SPOT-TB—应用
▪ 在潜伏性结核杆菌感染者筛选中
1.敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗接种影响。
2.较少受到其它分支杆菌感染影响。
干扰素γ释放试验在潜伏性结核感染诊断中的价值研究
干扰素γ释放试验在潜伏性结核感染诊断中的价值研究[摘要]目的：探讨干扰素γ释放试验（IGRA）在潜伏性结核感染（LTBI）诊断中的价值，与结核菌素皮试（TST）进行比较。
方法：选择某医院接受结核病筛查的60例患者，根据胸部X线片和痰涂片结果分为结核病组（20例）、LTBI组（20例）和非结核组（20例）。
对所有患者同时进行IGRA和TST检测，比较两种方法在各组中的阳性率。
结果：IGRA在结核病组、LTBI组和非结核组中的阳性率分别为95.0%、80.0%和10.0%，TST在各组中的阳性率分别为85.0%、65.0%和25.0%。
结论：IGRA在LTBI诊断中具有较高的敏感性和特异性，优于TST，且不受卡介苗接种的影响。
IGRA可作为LTBI诊断的有效方法，有助于结核病的防治。
[关键词]干扰素γ释放试验；结核菌素皮试；潜伏性结核感染；诊断我国是结核病高负担国家之一，2019年有866000人发生结核病，其中37000人死亡[1]。
结核病的传播主要依赖于活动性肺结核患者通过呼吸道飞沫将结核杆菌排出体外，而接触者经呼吸道吸入后可能发展为潜伏性结核感染（LTBI）或活动性肺结核[2-3]。
LTBI是活动性肺结核的重要储备库，约有1/4的世界人口处于LTBI状态。
因此，及时识别和治疗LTBI是阻断结核病传播链条、降低发病率和死亡率、实现全球消除目标的重要措施。
目前，IGRA在国际上已被广泛应用于LTBI的诊断，但在我国尚未普及。
为了探讨IGRA在LTBI诊断中的价值，本研究选择某医院接受结核病筛查的60例患者，对其同时进行IGRA和TST检测，并与胸部X线片和痰涂片结果进行比较，旨在为LTBI诊断提供参考依据。
1.材料与方法1.1研究对象本研究为回顾性病例对照研究，选择2022年1月至2023年1月期间在某医院接受结核病筛查的60例患者作为研究对象，根据胸部X线片和痰涂片结果分为三组：结核病组（20例）、LTBI组（20例）和非结核组（20例）。
全血γ-干扰素释放试验QFT-GIT的不确定结果分析
全血γ-干扰素释放试验QFT-GIT的不确定结果分析陈振华;余艳艳;戴赛波;张小萍;万小洁;谭云洪【摘要】目的了解体检人群中QFT-GIT检测不确定结果(ITRs)的发生率,探讨该结果产生原因.方法回顾性分析我院5 452例筛查结核病的体检者的QFT-GIT结果,比较分析ITRs发生率及空白对照(Nil)管、结核抗原(TB Ag)管和促有丝分裂因子(Mitogen)管的IFN-γ浓度.对ITRs标本进行复查,分析产生该结果的主要原因.结果 5 452例体检者经QFT-GIT首次检测,共有215份(3.94％)为ITRs,其中女性ITRs发生率(5.06％)高于男性(2.71％) (x2 =19.86,P＜0.05),46岁以上人群ITRs 发生率(5.18％)高于5至45岁人群(1.87％) (x2=37.07,P＜0.05).215例ITRs结果标本中1例(0.47％)为过高Nil值、214例(99.53％)为低Mitogen值所造成.经过复查,201例(93.49％)仍为不确定,14例(6.51％)变为确定结果.复查为确定结果组首次检测的Mitogen-Nil的IFN-γ浓度(中位浓度0.40 IU/mL)大于ITRs组(中位浓度0.18 IU/mL)(Z=-4.56,P＜0.05).结论体检人群中QFT-GIT检测ITRs发生率低,女性高于男性,46岁以上人群高于5～45岁人群,主要原因是低Mitogen值.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)011【总页数】3页(P873-875)【关键词】QFT-GIT;结核分枝杆菌;不确定结果;感染【作者】陈振华;余艳艳;戴赛波;张小萍;万小洁;谭云洪【作者单位】湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013;湖南省胸科医院检验科,长沙410013【正文语种】中文QFT-GIT(QuantiFERON-TB Gold In-Tube)是用于诊断结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染的γ-干扰素释放试验(IFN-γ release assays，IGRAs)类方法之一。
结核病分子诊断
3、耐药基因检测
多重耐药结核杆菌、广泛耐药结核杆菌的流行， 是结核病防治中的重大问题
耐药的主要原因是药物主要靶点的基因发生了 突变
检测这些耐药基因相关突变，可为临床治疗提 供依据：例如异烟肼耐药菌存在KatG基因突变 或缺失，突变模式为S315T。利福平耐药菌发生 发生了点突变、插入或缺失，突变形式为S531L、 H526Y等。
尿液 清晨第一次全部尿量或24小时尿沉渣
胸腹腔积液 尽快送检、离心
谢谢聆听！
结果判读
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP10)、阳性对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果：空白对照孔没有或有很少的斑点而 PHA对照孔斑点数超过20个。 空白对照孔斑点数超 过10个时结果被认为是“不确定”。当PHA对照孔 斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确定”。
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反 应性”，参照以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔 的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B 孔的斑点数）≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且 PHA对照孔正常。
还是死菌，也不能对疗效进行评价。
临床意义：
TB-DNA阳性主要见于：传统培养或涂 片阳性的患者，菌量多，有活力；涂片或培 养阴性的患者，患者菌量少，涂片或培养阳 性率低；经治疗后带有死菌或低活力菌的患 者；体内结核杆菌已死亡，但DNA尚未分 解。
TB-DNA阴性主要见于：非结核分枝 杆菌感染。非结核病患者；不排菌患者。
凡临床怀疑肺结核的患者，在送检痰涂片 和痰培养的同时，送检痰TB-DNA检查。
Elisa检测 人γ干扰素 IFN-γ原理步骤
用双抗体夹心ELISA法检测样本中IFN-γ的浓度IFN-γ简介：被称为II型干扰素的IFN-γ，是由143个残基构成的，有20和25kDa亚型的糖蛋白，以头尾相连的同型糖蛋白的形式存在。
IFN-γ由T淋巴细胞和NK细胞产生，用以抗病毒和干扰增殖，此外，IFN-γ还有与免疫调节相关的几种功能包括调节细胞的增殖和程序性死亡，刺激或抑制不同基因的表达。
IFN-γ能通过诱导产生吲哚胺2，3-双加氧酶来抗弓形虫和衣原体的感染。
IFN-γ是效应强烈的单核吞噬细胞增强剂，IFN-γ是通过增强单核吞噬细胞的的Mac-1的表达来达到增强胞饮作用和吞噬作用的。
IFN-γ通过增加巨噬细胞的氧自由基和TNF-α的释放来达到增强杀肿瘤细胞的作用。
IFN-γ选择性地提高包括因LPS刺激的B细胞的IgG2a和因2型T细胞呈递抗原而引起的B细胞的IgG3的释放量。
有报道称IFN-γ能引起细胞的自分泌IFN-γ作用的增强。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IFN-γ的浓度。
IFN-γ捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IFN-γ会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IFN-γ抗体后，抗人IFN-γ抗体与IFN-γ接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在IFN-γ将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IFN-γ浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IFN-γ浓度。
标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测；D.标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
结核感染T细胞TBIGRA检测及意义
80.3%（118/147)
γ-干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的临床意义
88.64%（39/45）
结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值
90.7%（243/268）
两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究
90.9%（290/319）
体外释放酶联免疫法检测结核杆菌γ-干扰素的实验研究
•Tuberculosis结核TB •Interferon（干扰素） •Gamma（ γ） •Release（释放） •Assay（测定）
•原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞; 在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大 量IFN γ细胞因子; 通过IFN- γ的检测，判断结核感染情况。
IGRAs
APC
IFNg release assay
细胞 因子
ELISA
细胞 因子
ELISPOT
活化/细 胞因子
流式细胞术
体外刺激： RD1抗原T cell
IFNg
TNFa
CK
活化标志物
细胞因子
两种TBIGRA比较
高孟秋,刘菲,纪滨英等 两种γ干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研 究.中华结核和呼吸杂志;2012，3510：762-765
原因
• HIV 感染和艾滋病破坏了机体的免疫
系统;加剧了结核的发病，
1/3HIV
病人死于结核
• 多菌耐药的结核菌感染率增加
• 贫困 移民等
• 细菌学涂片率低，2/3TB病人菌阴性
结核发病机理
结核分枝杆菌MTB
活动性结核： 发病状态 潜伏性结核感染LTBI：是宿主感染结核杆菌后尚未
γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
干扰素释放 法检 测 奶牛 结核 病 的 比较试 验
一
毛爱 民 ， 倪谷音 ， 范 锋
（ １ ． 江苏 省 无锡市 动物疫病 预 防控制 中心 ；２ ． 无锡市 动物 园管理 处 ，无锡 ２ １ ４ ０ ０ ０）
摘 要： 目的评价 ｒ 干扰素释放试验（ Ｉ ＧＲ Ａ） 牛 结核病检 疫过程 中的效果。在 牛结核病检疫过程 中对皮试初 筛为结核
”
＋
－＋
・
社， １ ９ ７ ９ ： ２ ０ — ６ ４ ．
［ ５ ］ 刘月英 ， 等． 淡水螺类 与人们的关系ｆ Ｊ １ ． 动物学杂志， １ ９ ７ ７ ， ３ ： ４ ６ — ４ ８ 【 ６ １ 周贵， 等． 东毕血 吸虫 中间宿主一 淡水螺 的研究［ Ｊ １ ． 吉林农业 大学
学报， １ ９ ９ ６ ， １ ８ （ １ ） ： ５ ９ — ６ ３ ．
数为６ ４头，阳性符合 率为 ７ １ ． ９ ％； 一干扰素释放试验与 比较皮试 变态反应 的阳性符合数 为 ５ ８头 ，阳性符合率为
７ ９ ． ５ ％。阴性符合数为 １ ６头 ， 阴性符合率为 ４ ８ ． ４％。 结论 一干扰素释放试验在保持 较高灵敏度的 同时， 具有比变态
反 应更 好 的 特 异性 。
我市春季奶牛两病 监测 中单纯牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ初 １ ． ４ 单 纯颈部皮试 变态反 应 试验参 照国家标准 《 动物结
１ ． ２ 试验 用牛
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IGRA在儿童结核病诊断中的应用【20页】
• Either TST or IGRA may be used without preference for other groups that are tested for LTBI.
检出率低：儿童结核病病灶菌负荷少，痰标本涂阳率为10% ~15%, 培养的阳性率只有 30% ~ 40%
卡介苗干扰：我国儿童普遍接种卡介苗，会干扰TST试验的检测 结果
γ干扰素释放试验（IGRAs）
原理：
➢ 感染结核分枝杆菌的患者体内会产生特异性T细胞 ➢ 受结核分枝杆菌特异性抗原（ESAT-6、CFP-10等）刺激，将释放IFN-γ ➢ 通过技术检测释放的IFN-γ，判断患者体内是否存在结核效应 T淋巴细胞，
是（18种）
否（除堪萨斯、海水、 苏加分枝杆菌）
γ-干扰素释放试验（IGRAs）是诊断卡介苗接种人群潜伏性结核感染的首选方法。 -----美国疾病预防与控制中心（CDC）
指南解读
IGRA越来越多的被推荐使用 使用范围：结核病的辅助诊断，结核感染的筛查 使用人群：儿童，免疫功能受损人群（HIV/接受生物制剂治疗的
指南推荐---HIV感染者结核筛查
指南推荐---密切接触者筛查
接种卡介苗的人优先选择IGRA，未接种则二选一；五岁以下儿童优先 选择TST，5岁以上则和成人选择相同。
指南推荐---移民筛查
对移民各国要求不同，美国要求卡介苗接种人群用IGRA，未接种则接受 IGRA或TST
一般人群筛查策略
González-Martín J. Arch Bronconeumol. 2010