第五章 植物检验检疫技术
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植物检疫技术
• 初步诊断――通过肉眼观察植株的症状、病原分 泌物以及镜检观察。
• 例如 水稻细菌性条斑病－取一小块病叶组织，低 倍镜下观察，微管束有喷菌现象。
进一步诊断
• 分离培养：选择新鲜的病斑或病键组织交界 处――表面消毒――清水洗净――碾碎稀释 ――划线培养――观察
• 致病性测定：目的是区分致病性细菌和腐生菌。
样品数量（容量）大小依据
• 有害生物的带有率; • 检验方法的灵敏度; • 检验所要求的精度; • 货物种类与特点; • 检验所允许的时间和花费等许多因素确定。 • 有害生物的带有率越低，检验方法的灵敏度越低，
检验精度要求越高，所需样品数量就越多。
第一节 植物病原真菌的检疫检疫技术
• 病原真菌的属、种主要依据其形态特征鉴定，有 时形态相似的近似种类需接种寄主，测定其致病 性。鉴定病原真菌专化型和小种，也需接种鉴别 寄主。
及时分离或4度低温保存。
植物寄生线虫的各种分离方法
直接解剖法-- 内 生线虫在体视显 微镜下用解剖针 直接解剖病组织
• 简易贝尔曼漏斗法:分离少量植物材料中有活 动能力的线虫。
影响洗涤检验的因素
• 种子或其他粮谷类产品表面所黏附的病菌孢子不 一定能完全洗涤下来;
• 离心管内容已形成一层极难沉降的孢子薄膜。管 壁也可能黏附孢子;
• 视野内孢子分布不均匀; • 操作不规范，不严格 。
保湿萌芽检验法
七、分离培养检验
• 主要应用于检验潜伏于种子、苗木或其他之物产 品内部，不易发现和鉴定的病原菌；
(ELISA)-- 酶联免疫吸 附测定(Enzyme linked immunology assay, ELISA)是把抗原、抗 体的免疫反应和酶的 高效催化反应有机结 合而发展起来的一种 综合技术。
• 例如 水稻细菌性条斑病－取一小块病叶组织，低 倍镜下观察，微管束有喷菌现象。
进一步诊断
• 分离培养：选择新鲜的病斑或病键组织交界 处――表面消毒――清水洗净――碾碎稀释 ――划线培养――观察
• 致病性测定：目的是区分致病性细菌和腐生菌。
样品数量（容量）大小依据
• 有害生物的带有率; • 检验方法的灵敏度; • 检验所要求的精度; • 货物种类与特点; • 检验所允许的时间和花费等许多因素确定。 • 有害生物的带有率越低，检验方法的灵敏度越低，
检验精度要求越高，所需样品数量就越多。
第一节 植物病原真菌的检疫检疫技术
• 病原真菌的属、种主要依据其形态特征鉴定，有 时形态相似的近似种类需接种寄主，测定其致病 性。鉴定病原真菌专化型和小种，也需接种鉴别 寄主。
及时分离或4度低温保存。
植物寄生线虫的各种分离方法
直接解剖法-- 内 生线虫在体视显 微镜下用解剖针 直接解剖病组织
• 简易贝尔曼漏斗法:分离少量植物材料中有活 动能力的线虫。
影响洗涤检验的因素
• 种子或其他粮谷类产品表面所黏附的病菌孢子不 一定能完全洗涤下来;
• 离心管内容已形成一层极难沉降的孢子薄膜。管 壁也可能黏附孢子;
• 视野内孢子分布不均匀; • 操作不规范，不严格 。
保湿萌芽检验法
七、分离培养检验
• 主要应用于检验潜伏于种子、苗木或其他之物产 品内部，不易发现和鉴定的病原菌；
(ELISA)-- 酶联免疫吸 附测定(Enzyme linked immunology assay, ELISA)是把抗原、抗 体的免疫反应和酶的 高效催化反应有机结 合而发展起来的一种 综合技术。
植物检疫
• 虫害、病害导致植物组织内产生特殊成分，可引起显著的染色反应。
• 3 比重检测
• 虫害、病害导致种子、籽粒重量降低。 间接
• 4 保湿萌芽检测
• 种子携带的病原物在种子萌发时显示症状。
• 5 分离培养检测
• 分离植物产品（种子苗木等）内部的病原物，人工培养。
• 6 血清学检测
• 利用抗原-抗体间的特异性反应，检测微生物。
四、染色检验法
• 某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原
菌本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上 特有颜色，利于检出和区分病虫种类
– 例如：马铃薯癌肿病（Synchytrium endobioticum）薯块上癌瘤
不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液，健康 组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。
以鉴别寄主反应或指示植物为依据的方法。 鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括 3～5种不同反应类型的寄主植物。一般包括3类： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主
思考题：
对检验检疫技术的要求有哪些？ 简介常用的检验检疫方法（至少4种） 染色检验法的原理，试举例？ 简述细菌的ELISA检测方法的优点。 植物病毒的鉴别寄主检测方法，鉴别寄主谱？
官方检疫 要求
疫区：由官方划定的发现有检疫性有 害生物存在与为害，并由官方采取措 施控制中的地区
疫区
非疫区：有科学证据证明未发现某种有害生 物并由官方维持的地区。
非疫区
第二节
有害生物风险分析定义
有害生物风险分析
有害生物风险分析（pest risk analysቤተ መጻሕፍቲ ባይዱs, PRA）：以生物或其它 科学的和经济的依据，确定一种 有害生物是否应该限制和加强防 治措施力度的评价过程。
• 3 比重检测
• 虫害、病害导致种子、籽粒重量降低。 间接
• 4 保湿萌芽检测
• 种子携带的病原物在种子萌发时显示症状。
• 5 分离培养检测
• 分离植物产品（种子苗木等）内部的病原物，人工培养。
• 6 血清学检测
• 利用抗原-抗体间的特异性反应，检测微生物。
四、染色检验法
• 某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原
菌本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上 特有颜色，利于检出和区分病虫种类
– 例如：马铃薯癌肿病（Synchytrium endobioticum）薯块上癌瘤
不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液，健康 组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。
以鉴别寄主反应或指示植物为依据的方法。 鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括 3～5种不同反应类型的寄主植物。一般包括3类： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主
思考题：
对检验检疫技术的要求有哪些？ 简介常用的检验检疫方法（至少4种） 染色检验法的原理，试举例？ 简述细菌的ELISA检测方法的优点。 植物病毒的鉴别寄主检测方法，鉴别寄主谱？
官方检疫 要求
疫区：由官方划定的发现有检疫性有 害生物存在与为害，并由官方采取措 施控制中的地区
疫区
非疫区：有科学证据证明未发现某种有害生 物并由官方维持的地区。
非疫区
第二节
有害生物风险分析定义
有害生物风险分析
有害生物风险分析（pest risk analysቤተ መጻሕፍቲ ባይዱs, PRA）：以生物或其它 科学的和经济的依据，确定一种 有害生物是否应该限制和加强防 治措施力度的评价过程。
第5章 动植物、动植物产品检验检疫技术
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（3)寄生虫病学检查
– 采集畜禽粪便检查虫卵或幼虫：涂片法、虫卵计数 – 寄生虫虫体的检查主要利用剖检的方法：从畜禽体 组织、脏器等获得 – 某些寄生虫还必须借助显微镜检查，如旋毛虫 – 血液寄生虫一般采血、涂片、染色镜检：弓形 体 ，螺旋体
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– 第二类，判定为有条件利用肉品 ------盖上“高 温”、“冻”、“腌”、 “食用油”等印章 – 第三类，判定为品质低劣不允许食用的肉品“工 业油”或“销毁”印章
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第5章 动植物、动植物产品 检验检疫技术
1
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一、动物检疫的基本方法
（一）、临床检疫
– 1 、群体检查：得来自同一地区或同一批的畜禽划 为一群，或以圈为一群进行检查，对禽、免、犬可 按笼、箱划分进行群检
休息状态的检查：在畜禽休息安静状态下，观察站立或 躺卧的姿势、精神、营养、被毛、呼吸和反当、咀嚼、 吸气状态 运动状态的检查：观察起立及行走姿势，排粪、排尿情 况 采食饮水状态的检查：观察畜禽自然采食、饮水状态 2
猪宰后检验程序
1)．头部检查：
– 检查鼻腔、口腔、舌面、舌根及喉粘膜等有无溃 疡、出血点 – 外咬肌主要检查有无囊尾幼寄生 – 淋巴结有无肿大，淤血
29
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（3)寄生虫病学检查
– 采集畜禽粪便检查虫卵或幼虫：涂片法、虫卵计数 – 寄生虫虫体的检查主要利用剖检的方法：从畜禽体 组织、脏器等获得 – 某些寄生虫还必须借助显微镜检查，如旋毛虫 – 血液寄生虫一般采血、涂片、染色镜检：弓形 体 ，螺旋体
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– 第二类，判定为有条件利用肉品 ------盖上“高 温”、“冻”、“腌”、 “食用油”等印章 – 第三类，判定为品质低劣不允许食用的肉品“工 业油”或“销毁”印章
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第5章 动植物、动植物产品 检验检疫技术
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一、动物检疫的基本方法
（一）、临床检疫
– 1 、群体检查：得来自同一地区或同一批的畜禽划 为一群，或以圈为一群进行检查，对禽、免、犬可 按笼、箱划分进行群检
休息状态的检查：在畜禽休息安静状态下，观察站立或 躺卧的姿势、精神、营养、被毛、呼吸和反当、咀嚼、 吸气状态 运动状态的检查：观察起立及行走姿势，排粪、排尿情 况 采食饮水状态的检查：观察畜禽自然采食、饮水状态 2
猪宰后检验程序
1)．头部检查：
– 检查鼻腔、口腔、舌面、舌根及喉粘膜等有无溃 疡、出血点 – 外咬肌主要检查有无囊尾幼寄生 – 淋巴结有无肿大，淤血
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动植物检验检疫学
动植物检验检疫学动植物检验检疫学是一门研究动植物检疫的学科，旨在减少动植物疾病、有害生物和其他危害因素对农业生产和经济发展的影响。
它涉及到对动植物的检测、诊断、监测、预防和控制，以及对动植物及其产品的进出口检验检疫。
一、动植物疾病预防动植物疾病是导致农作物和畜禽损失的主要原因之一，因此，动植物检验检疫学的一个重要任务就是预防这些疾病的传播和扩散。
在动植物疾病预防中，主要采取以下措施：1. 检疫检验：对进出口的动植物和动植物产品进行检验，确保其不携带病原体或其他危害生物。
2. 疫情监测：定期对农作物、果树和畜禽进行疫情监测，及时发现并采取措施控制疫情的蔓延。
3. 疫苗开发与接种：开发适合的动植物疫苗，对易感动物进行预防性接种，提高它们的抵抗力。
二、动植物进出口检验检疫动植物及其产品的进出口检验检疫是保障国家农业安全和贸易顺利进行的重要环节。
它主要包括以下内容：1. 检验检疫标准制定：制定和修订动植物进出口检验检疫的标准和规范，确保检验检疫工作的准确性和公正性。
2. 证书签发：对符合出口要求的动植物及其产品签发检验检疫证书，以确保货物符合目的地国家的要求。
3. 检疫检验设施建设：建设现代化的检疫检验设施，配备先进的设备和技术，提高检验检疫的效率和准确性。
三、非法贸易和有害生物防控动植物检验检疫学还致力于防止非法贸易和有害生物的传入。
非法贸易和有害生物是对国家农业、生态和经济安全造成威胁的重要因素。
因此，为了防止非法贸易和有害生物的传入，以下几方面需要重点关注：1. 边境监测：加强边境监测，严防动植物及其产品的非法贸易和有害生物的传入。
2. 信息共享：加强与其他国家和国际组织的信息共享，及时了解全球动植物疫情和有害生物的动态。
3. 风险评估：对进出口的动植物及其产品进行风险评估，根据评估结果采取相应的防控措施。
总结：动植物检验检疫学是为了保障国家农业安全、促进贸易发展和减少动植物疾病传播的学科。
通过预防动植物疾病、确保动植物产品的质量和安全，以及防止非法贸易和有害生物的传入，动植物检验检疫学为动植物农业的可持续发展和经济繁荣做出了重要贡献。
植物检疫
具体条例
第一条为了防止为害植物的危险性病、虫、杂草传播蔓延，保护农业、林业生产安全，制定本条例。
第二条国务院农业主管部门、林业主管部门主管全国的植物检疫工作，各省、自治区、直辖市农业主管部门、 林业主管部门主管本地区的植物检疫工作。
第三条县级以上地方各级农业主管部门、林业主管部门所属的植物检疫机构，负责执行国家的植物检疫任务。 植物检疫人员进入车站、机场、港口、仓库以及其他有关场所执行植物检疫任务，应穿着检疫制服和佩带检疫标 志。
在农业上，防止病虫害传播的早期法规是1660年法国卢昂地区为了控制小麦秆锈病流行而提出的有关铲除小 檗（小麦秆锈病菌的转主寄主）并禁止其输入的法令。19世纪40～70年代，由于一系列灾难性病虫的远距离传播， 造成爱尔兰马铃薯晚疫病的大流行，葡萄白粉病、和葡萄黑腐病的相继发生，以及为害柑橘的吹绵蚧从澳大利亚 传入西欧等，逐渐使越来越多的国家重视采用检疫措施以保护农业。1873年德国明令禁止美国的植物及其产品进 口，以防止毁灭性的马铃薯甲虫传入。1877年英国也为此而颁布了禁令。随后，欧洲、美洲、亚洲其他一些国家 以及澳大利亚等纷纷制定植物检疫法令，并成立了相应机构执行检疫任务。当前世界上绝大多数国家都已制定了 自己的植物检疫法规。
中国的植物检疫始于20世纪30年代。1949年以后，在对外贸易部商品检验局下设置了植物检疫机构，建立中 国统一的植物检疫制度，颁布了“输出输入植物病虫害检验暂行办法”，并陆续在中国海陆口岸开展对外植物检 疫工作；国内植物检疫则由农律、行政和技术的手段，防止危险性植物病、虫、杂草和其他有害生物的人为传播，保障 农林业的安全，促进贸易发展的措施。它是人类同自然长期斗争的产物，也是当今世界各国普遍实行的一项制度。 由此可见，植物检疫是一项特殊形式的植物保护措施，涉及法律规范、国际贸易、行政管理、技术保障和信息管 理等诸多方面，为一综合的管理体系。
植物检疫检验技术(共31张PPT)
——镜检 (2)该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养；
——分离纯化
(3)将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害； ——接种
(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性状与接种物相同。 ——再次镜检鉴定
病虫害识别与防治技术
接种检测类型 （1)拌种接种：病菌孢子拌种，之后培养鉴别。 (2)浸种接种：用病原孢子或细菌的悬浮液浸种。 (3)花器接种：将孢子悬浮液用注射器喷到花内。 (4)喷雾接种：将细菌或孢子悬浮液喷到植物上。 (5)针刺接种：用针束蘸取菌液后在叶片上穿刺。 (6)剪叶接种：用解剖剪剪去叶尖，浸细菌悬浮液。 (7)摩擦接种：用手或玻璃棒蘸病毒液，摩擦叶片。
碘或碘化钾染色法：
对象: 豆象类蛀害的豆籽。 方法: 取代表样品50g，放入铜网或包于纱布内，浸入1%碘化钾溶液或2%洒精碘溶液中，经， 取出移入0.5%氢氧化钾溶液中浸30s，取出用清水洗涤15-20s，立即用扩大镜观察。凡豆粒表面有1-2mm直 径圆斑者，即为虫蛀粒，结合镜下剖检。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
凡籽粒上有黑点的，捡出解剖镜检。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
品红染色法：取样品15g，放入铜丝网内，在30℃水中侵1min，移入酸性品红溶液中浸染2～ 5min，取出用清水洗净，倒入白色吸水纸上，用扩大镜检查。凡虫蛀粒表面均染有左右樱桃红小点；
若是虫伤或机械损伤则染色浅且斑点不规则形。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
水浴锅内加温，待充分显色。若有多酚体存在则成深蓝色，反之则呈黄色。
注意事项：
样品有多酚体存在，呈蓝色的时间不长，当与空气接触后，在5-10min内，即起氧化作用而变成红色，
故检查应及时。 植株在受伤后也会产生多酚体，故取样时应避免截取受伤的叶片和根、枝。
——分离纯化
(3)将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害； ——接种
(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性状与接种物相同。 ——再次镜检鉴定
病虫害识别与防治技术
接种检测类型 （1)拌种接种：病菌孢子拌种，之后培养鉴别。 (2)浸种接种：用病原孢子或细菌的悬浮液浸种。 (3)花器接种：将孢子悬浮液用注射器喷到花内。 (4)喷雾接种：将细菌或孢子悬浮液喷到植物上。 (5)针刺接种：用针束蘸取菌液后在叶片上穿刺。 (6)剪叶接种：用解剖剪剪去叶尖，浸细菌悬浮液。 (7)摩擦接种：用手或玻璃棒蘸病毒液，摩擦叶片。
碘或碘化钾染色法：
对象: 豆象类蛀害的豆籽。 方法: 取代表样品50g，放入铜网或包于纱布内，浸入1%碘化钾溶液或2%洒精碘溶液中，经， 取出移入0.5%氢氧化钾溶液中浸30s，取出用清水洗涤15-20s，立即用扩大镜观察。凡豆粒表面有1-2mm直 径圆斑者，即为虫蛀粒，结合镜下剖检。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
凡籽粒上有黑点的，捡出解剖镜检。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
品红染色法：取样品15g，放入铜丝网内，在30℃水中侵1min，移入酸性品红溶液中浸染2～ 5min，取出用清水洗净，倒入白色吸水纸上，用扩大镜检查。凡虫蛀粒表面均染有左右樱桃红小点；
若是虫伤或机械损伤则染色浅且斑点不规则形。
虫蛀
病虫害识别与防治技术
水浴锅内加温，待充分显色。若有多酚体存在则成深蓝色，反之则呈黄色。
注意事项：
样品有多酚体存在，呈蓝色的时间不长，当与空气接触后，在5-10min内，即起氧化作用而变成红色，
故检查应及时。 植株在受伤后也会产生多酚体，故取样时应避免截取受伤的叶片和根、枝。
植物检疫
2 现场检验的主要方法
（1）肉眼检查：现场快速检查。 （2）过筛检查：植物籽粒的现场检查。 （3）x 光机检查：旅客携带物的现场检查。 （4）检疫犬检查：旅客携带物的现场检查。
3 现场取样主要方法
抽样检验以样本推断总体。 具体方法应根据货物的种类和特性决定。 （分立个体和散料两类） 样本量和样本数。抽样一般建立在“批” 的基础上。 取出的样品划分为：原始样品、复合样品、 平均样品、试验样品及保存样品。
植物检疫程序
植物检疫主要方式： 产地检疫 现场检疫 实验室检疫 隔离检疫 国际邮包检疫
第一节 检疫许可
也称检疫审批，是植物检疫法定程序之一。 目的是在某些检疫物入境前实施超前性预 防，即对其是否被允许进境采取控制措施。 有利于进口国的农林业及生态安全。 我国《中华人民共和国进出境动植物检疫 法》和《植物检疫条例》中对相关物品的 检疫许可做出了明确规定。
2 办理检疫申报的基本规定
一般由报检员凭《报检员证》向检疫机关办理手 续，报检员由检疫机关负责考核。 办理检疫申报手续时，报检员首选填写报检单 （Application Form），然后将报检单、检疫证书 （Quarantine Certification,由输出国家或地区的官 方检疫机关出具）、产地证书（Certification of Origin），贸易合同（Trade Contrat）、信用证 （Letter of Credit）、发票（Invoice）等单证一并 交检疫机关。
（3）经检验发现植物种子、种苗等繁殖材 料感染限定的有害生物，且无有效除害方 法的。 （4）输入植物、植物产品经检疫发现有害 生物，危害严重并已经失去使用价值的。
2.2 禁止出口处理
森林植物检疫技术规程完整
森林植物检疫技术规程1．总则1.1 为了防止危险性森林病虫的传播蔓延，确保林业生产安全，使检疫工作规化、制度化，根据《植物检疫条例》和《植物检疫条例实施细则（林业部分）》的有关规定，特制定本规程。
1.2 本规程适用于森林植物及其产品的产地检疫、调运检疫、国外引种审批及疫情监测。
2. 产地检疫2.1 种苗繁育基地的建立2.1.1 生产单位（个人）新建种苗繁育基地，应在当地森林植物检疫（以下简称森检）机构指导下，选择符合检疫要求的地方设立。
2.1.2 种苗繁育基地所用的野生、栽培种子、果实、苗木（含试管苗）、插条、接穗、砧木、叶片、芽体、块根、块茎、鳞茎、球茎、花粉、细胞培养材料等繁殖材料，不得带有检疫对象和其它危险性病、虫。
2.1.3 种苗繁育基地周围定植的植物应与所繁育的材料不传染或不交叉感染检疫对象和其它危险性病、虫。
2.1.4 已建的种苗繁育基地发生检疫对象和其它危险性病、虫的，要采取措施限期扑灭。
2.1.5 种苗繁育集中的区域（单位），应配备兼职森检员负责本区域（单位）的疫情调查、除害处理，并协助当地森检机构工作。
2.2 产地检疫调查2.2.1 种苗繁育基地的检疫调查2.2.1.1 检疫调查应根据不同检疫对象和其它危险性病、虫的生物学特性，在病害发病盛期或末期、虫害危害高峰期或某一虫态发生高峰期进行，每年不得少于两次。
2.2.1.2 检疫调查前，森检员（或兼职森检员）应询问种苗繁育基地的种苗来源、栽培管理及检疫对象和其它危险性病、虫发生情况，确定调查重点和调查方法，做好观察、采集、鉴定用的工具和记录表格等准备。
2.2.1.3 检疫调查一般先进行踏查。
踏查要选择有代表性的路线，穿过种苗繁育基地，必要时可采用定点（定株）检查。
a. 踏查苗木时，需查看顶梢、叶片、茎干及枝条等有无病变、病害症状、虫体及被害状等，必要时挖取苗木检查根部。
初步确定病虫种类、分布围、发生面积、发生特点、危害程度。
b. 对在踏查过程中发现的检疫对象和其它危险性病、虫，需进一步掌握危害情况的，应设立标准地（或样方）做详细调查。
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第五章
植物检验检疫技术Biblioteka • 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
• 噬菌体是感染细菌的病毒，能在活细菌细 胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细胞，在 液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄 清，在固体平板上培养时，则出现许多边 缘整齐，透明光亮的圆形无菌空斑，称为 “噬菌斑”，肉眼即可分辩。
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
萌芽法检验 沙土萌发检验 土内萌发检验 试管幼苗症状测定
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 10、诱捕器诱集检验
信息素 诱饵
第五章
植物检验检疫技术
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
国内已采用噬菌体法检查水稻稻种是否带有 白叶枯病菌。病田稻种的稻壳中通常都带 有专化性的噬菌体或存活细菌，可据以确 定稻种确系带菌。
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 3、软X光透视检测 • 4、检疫犬检查
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 1、相对密度检验 • 一定浓度的食盐水或其它溶液
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 2、染色检验法
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
保湿培养检验 吸水纸检验法 通常用底部铺有三层吸水纸的塑料培养皿或其它适 用容器作培养床。先用蒸馏水湿润吸水纸，将种 子按适当距离排列在吸水纸上，再在一定条件下 培养，对多数病原真菌，适宜的培养温度为 20— 25℃，每天用近紫外光 (NUV) 灯或日光灯照明 12h 。
第五章
植物检验检疫技术
• 第二节 植物检验检疫新技术的应 用 • 一、核酸杂交技术 • 二、限制性片断长度多态性标记技术 （RFLP）
第五章
• • • • • • •
植物检验检疫技术
第二节 植物检验检疫新技术的应用 三、聚合酶链式反应（PCR） 1、免疫PCR技术 2、反转录PCR检测技术 3、巢式PCR 4、多重PCR 5、实时荧光PCR
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
洗涤检验的操作程序如下： (3)镜检计数：弃去离心管内的上清液，加入一定量 蒸馏水或其它浮载液，重新悬浮沉集在离心管底 部孢子，取悬浮液，滴加在血球计数板上，用高 倍显微镜检查孢子种类并计数，据此可计算出种 子的带菌量。 (4)孢子生活力测定：用常规孢子萌发测定法、分离 培养法或红四氯唑(TTC)染色法判定孢子死活。
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 11、鉴别寄主检测
应用于植物病毒的鉴定、诊断及检疫中
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 12、植物病原线虫的各种分离方法
漏斗分离法：此法适于分离少量植物材料中有活动能力的线 虫。基本装置是一个直径适当的漏斗，漏斗颈末端接一段 乳胶管，用弹簧夹把管子夹住。漏斗放置在支架上，其内 盛满清水。把检验的植物材料洗掉泥土后，切成0．5cm长 的小段，放在纱布中包起来，轻轻地浸入漏斗内。线虫从 植物组织中逸出，经纱布沉落到漏斗颈底，经 12h或过一 夜后，打开弹簧夹使胶管前端的水流到玻皿内，镜检线虫
取10g稻种，脱下谷壳剪碎或磨碎，放入已灭 菌处理的烧杯中，加灭菌水20ml浸泡30min， 过滤后分别吸取滤液1.5、1.0和0.5ml，置 于三个灭菌的培养皿内
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 8、噬菌体检验法
各加 lml 新培养的白叶枯细菌指示菌液 ( 浓度 为9X108／ml以上)混匀后加入10ml融化的肉 汁胨琼脂培养基，摇匀凝成平板后，放在 25—28℃温箱中，培养10—12h
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
用于检测种子表面附着的真菌孢子，包括黑 粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、锈菌 的夏孢子以及多种半知菌的分生孢子等。
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 4、洗涤检验法
洗涤检验的操作程序如下： (1)洗脱孢子：将一定数量的种子样品放人容器内并 加入定量蒸馏水或其它洗涤液，振荡 5 一 lOmin ， 使孢子脱离种子，转移到洗涤液中。 (2)离心富集：将孢子洗涤液移人离心管，低速离心 (2500—3000r／min)10—15min，使孢子沉集在离 心管底部。
第五章
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
保湿培养检验 吸水纸检验法 培养7 一 l0d 后检查和记载种子带菌情况，检查时， 用两侧照明的实体显微镜逐粒种子检查。本法依 据种子上真菌菌落的整个形象，即“吸水纸鉴别 特征”来区分真菌种类。检查时应特别注意观察 种子上菌丝体的颜色、疏密程度和生长特点、真 菌繁殖结构的类型和特征
第五章
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
保湿培养检验 冰冻吸水纸法 是前一个的改进版，可以减少杂菌污染、抑 制种子发芽
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植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 9、保湿萌芽检验
保湿培养检验 琼脂平皿法 用琼脂培养基代替了吸水纸
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植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 5、分离培养检验
主要适用于潜伏于种子、苗木、繁殖材料及 植物产品内的病原菌 分离真菌一般用PDA培养基，分离培养细菌用 牛肉汁培养基，对于特殊要求的菌类可以 用选择性培养基
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 5、分离培养检验
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 12、植物病原线虫的各种分离方法
浅盘分离法：原理同漏斗法
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 12、植物病原线虫的各种分离方法
简易漂浮分离法：本法利用干燥的线虫胞囊 能漂浮在水面的特性分离土壤中的马铃薯 金 线 虫 (Globoderarostochiensis) 和 各 种 胞囊线虫(Heterodera)。
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植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 2、过筛检验：将需用的筛层，按筛孔大小顺序
套好(小筛孔放在下面)，将样品放人上层选筛内 (不宜过多，约达筛层高度的2／3)，套上筛盖， 电动或手动回旋转动一定时间后，按筛层将筛上 物和筛下物分别倒入白瓷盘中，用扩大镜或解剖 镜检查，检出昆虫和螨类，同时还可检出虫粒、 病粒、杂草籽和其它夹杂物。若检查时室温低于 10℃，最下层筛出物须在20—30℃下处理15— 20min，促使害虫活动，再行检查。
方法有：组织分离法 稀释分离法 划线分离法
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 6、血清学检验
方法有：免疫电镜技术 酶联免疫吸附技术 斑点免疫法 免疫荧光抗体法
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 7、生理生化测定
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植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 2、染色检验法
对植物病原细菌检验可以用革兰氏染色法和 鞭毛染色法，对于植物病原线虫则用透明 染色法
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• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 3、直接镜检
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植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 1、直接检查：利用肉眼或放大镜 • 注意有无害虫的排泄物、脱皮壳、卵、 幼虫、蛹、茧和成虫诸虫态以及食痕 和危害状等。
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 一、现场检验检疫技术 • 2、过筛检验：取样携回室内进行过筛 检验，按粮谷、油料、豆类颗粒形状 和大小，选用不同孔径的规格筛
第五章
植物检验检疫技术
• 第一节 常规检验检疫技术 • 二、实验室检验检疫技术 • 12、植物病原线虫的各种分离方法
过筛分离法：本法用于从大量土壤中分离各类线虫。将充分 混匀的土壤样品置于不锈钢盆或塑料盆中，加入2—3倍的 冷水，搅拌土壤并振碎土块后过20目筛，土壤悬浮液流人 第二个盆中并喷水洗涤筛上物，弃去第一个盆中和筛上的 剩余物，第二个盆中的土壤悬浮液经lmin沉淀后再按上法 过 150 目筛，从筛子背面将筛中物冲洗到烧杯中，盆中土 壤悬浮液再继续过325目和500目筛。筛中物收集在烧杯中 静置 20—30min ，线虫沉集底部，弃去上清液，将沉集物 转移到玻皿内镜检或吸取线虫鉴定。
第五章
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• 第二节 植物检验检疫新技术的应 用 • 四、随机扩增多态性DNA技术（RAPD） • 五、基因芯片检测技术