色谱分析平面色谱法

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经典液相色谱法平面色谱分析

经典液相色谱法平面色谱分析
0.1~0.2 >5000 3~6 3 ~ 20 0.1 ~ 0.5 5 ~ 10
18.6 纸色谱法
18.6.1 纸色谱法的分离原理 paper chromatography
~是以纸为载体的色谱法,分离原理
属于分配色谱的范畴。
固定相:纸纤维上吸附的水分。(或甲酰胺、 缓冲液等滤纸可以吸留的物质。) 流动相:不与水相混溶的有机溶剂。或可与 水混溶的溶剂。
l2、l1分别为原点至两斑点中 心的距离, d为两斑点中心间的距离 ,W1、W2为斑 点的宽度。
分离数 定义在相邻斑点分离度为1.177时,在
Rf 0和Rf 1两种组分斑点之间能容纳的 色谱斑点数。
SN l0 /b0 b1 1
其中,b0、b1为Rf 0和1时组分的半峰宽, 二者由外推法获得。
c.点样方法 吸取一定量的样液,轻轻接触于薄层的
点样线上,点样线一般距薄层底边 1.5~2cm, 点间距约0.8~1.5cm(新药典规定为1.5~2.0 cm)。点样后形成的原点面积越小越好,一 般原点直径不超过2~4mm为宜。
展开和展开剂的流速
展开
先预饱和。展开前,将薄层板置于盛有展 开剂的色谱缸内饱和15~30min,此时薄板不与 展开剂直接接触,当色谱缸内展开剂蒸汽、薄 层与缸内大气达到动态平衡时,即饱和时,再 将薄层板浸入展开剂中,称预饱和。
常用展开剂:水饱和的正丁醇、正戊醇、 酚等,即含水的有机溶剂。
为了防止弱酸、弱碱的离解,加入少量 的酸或碱。如甲酸、醋酸、吡啶等。
纸色谱的操作步骤有点样、展开、显色、 定性定量分析几个步骤。
复习题
1、在硅胶薄层板A上,以苯-甲苯(1:3)为 展开剂,某物质的Rf值为0.50,在硅胶板B 上,用相同的展开剂,此物质的Rf值为0.40, 问哪块板的活度大?

仪器分析--平面色谱法

仪器分析--平面色谱法

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50-17
氧化铝吸附活性:与含水量有关,水分增加, 等级增大,活性降低。
硅胶 含水量%
0 5 15
25 38
活性 等级
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
Ⅳ Ⅴ
氧化铝
含水量% 活化温度
0 3
300-400℃
6
150-300℃
10
15
100-150℃
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国药典》2010版中许多药物采用此法。
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50-12
一、薄层色谱的固定相
吸附剂,adsorbent 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺
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50-13
1. 硅胶(SiO2·H2O,silica gel)
结构:内部— 硅氧交联结构→多孔结构 表面— 硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
适用范围:硅胶具有微酸性,适于分析酸性或中 性物质
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50-14
基本特性:
① 易形成氢键:与极性物质或不饱和化合物。物质 极性↑,吸附能力↑,不易洗脱。
② 吸附活性次序:活泼型>束缚型>游离型 ③ 吸附活性等级:与含水量有关,含水高,活性级
数高,吸附能力弱。
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50-2
二、平面色谱法参数
1、定性参数 ① 比移值(retardation foctor)
Rf = L / L0
可用范围:0.2~0.8 最佳范围:0.3~0.5
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50-3
② 相对比移值(relative Rf ): Rr=Rf(i)/Rf(s)=Li /Ls

第十八章平面色谱法

第十八章平面色谱法

L1
W
L2
第二节 薄层色谱法(TLC)
一、薄层色谱法的主要类型
(一)吸附薄层色谱法 固定相:吸附剂
(二)分配薄层色谱法 固定相:吸留在载体上的液体(如,硅胶上的水) 流动相极性<固定相极性 正相色谱 流动相极性>固定相极性 反相色谱
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
(一)吸附剂
1. 硅胶 为多孔性无定形粉末,表面有硅醇基呈弱酸性,通 过硅醇基与极性基团形成氢键而表现其吸附性能。 失活:硅胶吸水后形成水合硅醇基而失去吸附能力 活化:加热至100C以上 pH~5,适合中性、酸性物质的分离 种类:硅胶H、硅胶G、硅胶GF254等 2. 氧化铝 种类:中性、碱性、酸性
(四)显色
在日光下观察 在紫外灯下观察 荧光薄层板检测 显色剂显色
四、定性和定量分析
(一)定性分析
用Rf值定性
(二)定量分析
1. 洗脱法 用溶剂将斑点中的组分洗脱下来,再定量测定 2. 直接定量法 目视法 薄层扫描法
五、高效薄层色谱法HPTLC
➢ 高效薄层板用喷雾法制成 ➢ 吸附剂颗粒比经典薄层色谱法小得多 ➢ 有效塔板数可达5000以上
(二)相平衡参数
设 R 为在单位时间内一个分 子在流动相中出现的几 率
( 1 R ) / R C sV s / C mV m KV s / V m k
R 1 1k
R 也可表示组分分子在平 面上移动的速度
Rf
L L0
t 0t
R
Rf
1 1k

k 1 R Rf
Rf
1 1 KV s
/ Vm
六、薄层扫描法
➢ 用一定波长和强度的光束照射薄层上的斑点, 用仪器测量照射前后光束强度的变化,从而 求得物质含量的方法。

平面色谱法-su

平面色谱法-su
平面色谱法
汇报人:XX
01 单 击 添 加 目 录 项 标 题 02 平 面 色 谱 法 的 概 述 03 平 面 色 谱 法 的 技 术 发 展 04 平 面 色 谱 法 的 实 验 操 作 05 平 面 色 谱 法 的 应 用 实 例 06 平 面 色 谱 法 的 未 来 展 望
目录
01 添加章节标题
实验步骤:样 品处理、色谱 展开、显色、
测量等
实验注意事项: 避免阳光直射、 保持色谱板平 整、防止样品
污染等
实验步骤
准备实验材料:色谱板、样品、溶剂、显色剂等 制作色谱板:在色谱板上均匀涂抹样品,晾干 展开色谱:将色谱板放入溶剂中,使样品在色谱板上展开 显色:在色谱板上喷洒显色剂,使样品显现出来 观察结果:在紫外线灯下观察色谱,分析样品的组成和含量
检测生物体内的有机污染 物
在其他领域的应用
医药领域:分 离药物中的有
效成分
食品领域:检 测食品中的添 加剂和污染物
环境领域:监 测环境中的污 染物和生态变

化工领域:分 离化工产品中 的杂质和副产

06 平面色谱法的未来 展望
技术创新和改进
提高分辨率:通过改进色谱仪和检测器,提高分辨率,使分析结果更加精确。
对未来科学发展的影响
平面色谱法在药 物分析中的应用
平面色谱法在环 境监测中的应用
平面色谱法在食 品分析中的应用
平面色谱法在生 物医学研究中的 应用
THNK YOU
汇报人:XX
加快分析速度:通过优化色谱条件,提高分析速度,缩短分析时间。
扩展应用范围:通过开发新的色谱模式和检测方法,扩展平面色谱法的应用范围,使其能 够应用于更多领域。
提高自动化程度:通过引入自动化设备和软件,提高平面色谱法的自动化程度,降低操作 难度,提高分析效率。

平面色谱法

平面色谱法
2014~2015学年
3.扫描方式 直线扫描和曲折扫描。 (二)定量分析法 常用外标一点法。
m样 A样 m标 A标
2014~2015学年
第三节 纸色谱法简介
以纸做载体进行的液-液分配色谱法


固定相:纸纤维吸附的水 流动相:与水不互溶的有机溶剂(饱和正丁醇) 分离机制:同液-液分配色谱 定性参数:
L 1 Rf L0 1 K VS Vm

讨论:Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留,Rf 小(流动相极性↑, Rf ↑) 非极性组分→易流出,Rf大(流动相极性↑,Rf ↓)
2014~2015学年
(二) 相对比移值Rr
相对比移值:是在一定条件下,被测组分的比移值与参 考物质的比移值之比。
原点到组分斑点中心的距离 L1 Rr R f(参) 原点到参考物斑点中心的距离 L2
讨论

R f(组)
参考物与被测组分在完全相同条件下展开,可以消除系统 误差,大大提高重现性和可靠性. 参考物可以是后加入的纯物质,也可是样品中已知组分。 相对比移值Rr与组分、参考物性质及色谱条件有关,范围 可以大于或小于1.
吸附剂裝于柱中。都是经典液相色谱法的一种。
2014~2015学年
(四)薄层色谱操作方法
操作步骤:制板、点样、展开、斑点定位 1.制板 ⑴薄层板的选择:表面光滑、平整、洁净、厚度均匀
⑵薄层板的涂布: 软板(不加粘合剂):干,湿法铺 硬板(加粘合剂):湿法铺板(匀浆) 要求:涂布均匀 ,厚度0.25mm ~ 0.5mm 常用硅胶: 硅胶G——自含粘和剂 硅胶H——不含粘和剂,铺板时另加入CMC-Na 硅胶G254——含荧光剂,254nm紫外光照发绿光 硅胶HF356——含荧光剂,356nm紫外光照发光

第十八章 平面色谱法-分析化学

第十八章 平面色谱法-分析化学

d
28
5、显色
xe 仪 器 分 析
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
日光下观察有色物质的色斑 紫外灯下观察荧光或无荧光色斑 通用显色剂:碘、硫酸、荧光黄
专用显色剂:茚三酮、三氯化铁
显色方法:直接喷雾法、浸渍法
d
29
四、定性与定量分析方法
xe 仪 器 分 析
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
一般在105℃~110℃加热30分钟。但加热 温度不可太高,否则易使硅胶失活:
O H + Si O H Si O 5000C Si Si + H2O
d
硅胶具有微酸性,适用于分离酸性和中 性物质,如有机酸、氨基酸、甾体等
18
2、氧化铝
xe 仪 器 分 析
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
目视法:直接比较样品斑点与对照 品斑点的颜色深度或面积大小; 薄层扫描法
d
32
五、高效薄层色谱法(HPTLC)
xe 仪 器 分 析
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
1、高效薄层板
由较小颗粒的吸附剂(或其他固定相) 用喷雾法制备而成的均匀薄层。
2、点样 要求:原点直径小;铂-铱合金点 样毛细管、专用点样器
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
被分离物质的结构和性质 薄层板的性质,固定相的粒度, 薄层的厚度,吸附剂的活度 温度(主要对分配层析)
d
展开室内的展开剂蒸气饱和程度
7
3、分离参数
xe 仪 器 分 析
第 十 八 章 经 典 液 相 色 谱 法
分离度
2d R W1 W2 R
d
12

《仪器分析》——平面色谱法

《仪器分析》——平面色谱法

10
(三)高效薄层法(high performance thin layer chromatography;HPTLC)
• 在现代色谱理论指导下,以经典薄层色谱法为基 础发展起来的一种薄层色谱技术。
• 特点
分离效率高 分析速度快 检测灵敏度高等
高效薄层色谱法与经典薄层色谱法比较见表19-3
11
二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂
(2)吸附剂
不活泼
活泼
B’ B
非极性
A’ A
极性
(3)展开剂 C
C’
非极性
极性
(1)被分离物质
18
三、薄层色谱操作方法
(一)薄层板的制板 选择 5cm 20cm 、10cm 20cm、 20cm 20cm
涂布 活化
不加粘合剂 加粘合剂如5~15%石膏 或 0.25~0.75%CMC-Na
涂布
晾干
0.2~0.3mm
光物质;在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光 背景
16
(二)展开剂
展开剂的选择
根据被分离物质的极性、吸附剂的活度和展开 剂的极性三者的相对关系进行选择
先用单一溶剂展开,然后根据分离效果进行调 整,经常使用混合展开剂
分离酸碱组分时,展开中加入少量酸、碱
常用混合展开剂 表19-3
17
化合物极性、吸附剂活度和展开剂极性间的 关系
2. 相对比移值(Rr)
R =R /R =L /L
r
f(i)
f(s)
is
定性参数
纯物质加入试样中
同样条件下测定
或试样中某已知组分
i
s
Li Ls
s+i
在一定程度上消除系统误差

平面色谱法学习指导(山西医科大学)

平面色谱法学习指导(山西医科大学)

第十九章 平面色谱法第一节 内容和要求1.基本内容 本章内容包括平面色谱分类;平面色谱参数:比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数,比移值与分配系数(保留因子)的关系;薄层色谱法的基本原理及类型,吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂及其选择,薄层色谱操作步骤及定性定量分析;高效薄层色谱法;薄层扫描法;纸色谱法。

2.基本要求 本章要求掌握薄层色谱和纸色谱的基本原理,常用的固定相和流动相,比移值和相对比移值、分配系数和保留因子、分离度和分离数,比移值与分配系数(保留因子)的关系。

吸附色谱中固定相和流动相的选择。

熟悉平面色谱法分类,薄层色谱中薄层板的种类,薄层色谱操作步骤,显色方法,影响薄层色谱比移值的因素,面效参数与分离参数,定性、定量分析方法。

了解各种类型色谱的操作方法,薄层扫描法,高效薄层色谱法,应用与示例。

第二节 要点和难点(一)平面色谱的基本术语和公式1. 定性参数:比移值(R f )与相对比移值(R r )0f L L R = (s )(i )(s ) f (i ) f r L L R R R == 2.R f 与分配系数(K )和保留因子(k )的关系m s f 11V /KV R += f 11R k=+ 3.面效参数:理论塔板数(n )与塔板高度(H )2)(16WL n = n L H 0= 4.分离参数:分离度(R )与分离数(SN ))(2)()(2212112W W d W W L L R +=+-= 1)()(1210210-+=W W L SN(二)主要平面色谱类型色谱类型分离原理 载体 固定相 流动相 R f 顺序 吸附薄层色谱吸附 硅胶 有机溶剂 极性小的R f 值大 正相薄层色谱分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的R f 值大 反相薄层色谱分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的R f 值小 纸色谱 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的R f 值大(三)吸附薄层色谱条件的选择被测组分的极性大,吸附剂的活度小,流动相极性大;被测组分的极性小,吸附剂的活度大,流动相极性小。

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2.分离数(separation number; SN)
定义:相邻斑点分离度为1.177时,在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之 间能容纳的色谱斑点数。
SN
L
1
W( 1 )o
W (
1
)1
2
2
W(1/2)0, W(1/2)1为实验测得的某组分色谱峰的半峰宽对ds作图外推至在原点处 和溶剂前沿处的半峰宽。
Description: The thermo-stability of phospholipids and lysophospholipids was determined by one dimensional thin-layer chromatography (TLC). A chloroformmethanol-28% aqueous ammonia solvent system (65:35:8, v/v) provided clear separation of major phospholipids (PL) and their lyso forms. The 5% (w/v) dodecamolybdophosphoric acid solution in ethanol was used as spray reagent. The thermo stability of phospholipids was evaluated by compare the spots density and area of PL samples with varying heat treatment.
一般薄层板的分离数为 7~10,高效薄层板可达10~20。SN是衡量分 离容量的重要参数。
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第二节 薄层色谱法
Thin Layer chromatography TLC
• 一、主要类型 • 二、吸附剂与展开剂 • 三、操作方法 • 四、定性与定量分析 • 五、高效薄层色谱法 • 六、薄层扫描法 • 七、应用实例
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概述
1.TLC定义:将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上, 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法
2.操作过程: 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量)
3.分离机制:吸附* 、分配*、离子交换、空间排阻 4.特点;分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色
可以消除系统误差,大大提高重现性和可靠性;
• 参考物可以是后加入纯物质,也可是样品中已知组分
• 相对比移值Ris与组分、参考物性质及色谱条件有关,范 围可以大于或小于1
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(二)面效参数
与展开剂的速率常数、组分在展开剂中的扩散系数、吸附剂的平均 粒径及其粒度分布等因素有关。
毛细作用,展开剂(流动相)上行。
-----吸附色谱
▪ 薄层电泳法:荷电组分样品负载于惰性支持介质(纸、纤维素、聚
丙烯酰胺凝胶等),在电场作用下进行分离。
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二、平面色谱法的基本流程
• 确定样品的预处理方法 • 选择吸附剂和展开剂 • 制备层析用薄板 • 点样 • 层析分离 • 显色 • 定性或定量分析 • 分析结果,给出结论
• 1、理论塔板数 N=16(ds/W)2 ds:原点到斑点中心的距离 W:组分斑点的纵向宽度 • 2、塔板高度 H=ds/N=(Rf L)/N ds:原点到展开剂前沿的距离 N越大,H越小。
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(三)容量因子k’与比移值Rf的关系
• 容量因子: k’=ts/tm
ts 、 tm 分别为组分在固定相和展开剂中的保留时间
方便。 5.应用:药物杂质检查、纯度测定、定性及定量等。
保留值的定义:
Rf
tm ts tm
Rf
1 1 k'
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(四)分离参数
1、分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距 离与两斑点平均宽度的比值 R=2(ds2-ds1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2)
• ds1 、ds2 :分别为原点至两半斑点中心的 距离, W1、W2斑点的宽度。
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三、平面色谱法参数
(一)定性参数 1. 动比相移移值动Rf距(r离eta之rd比ation factor; Rf) 溶质移动的距离与流
Rf
原点到组分斑点质量中心的距离
原点到溶剂前沿的距离
ds L
Rf范围:
0< Rf <1 Rf = 0.2~0.8(常用) Rf = 0.3~0.5(最佳)
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第五章 平面色谱法
• 定义:平面色谱法(plane chromatography)是在平面上 进行分离的一种色谱方法。
• 一、平面色谱法的分类和原理
分类
▪ 纸色谱法:滤纸为载体,纤维素的羟基与水结合形成液-液分配色谱 固定相,展开剂由于毛细作用沿滤纸向上运动。---分配色谱
▪ 薄层色谱法:将吸附材料均匀固定在载板上,由于吸附剂颗粒间的
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Rapid determination of thermo-stability of phospholipids by TLC
1.Thin-layer chromatography of standard PL samples Fig.1
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第五章 平面色谱法
第一节 概 述
• 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天 然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一 书,推动了这一技术的发展。
• 因TLC法设备简单,分析速度快,分离效率高,结果 直观,很快被用作定性和半定量的方法。
• 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展 了薄层色谱光密度扫描仪,和各步操作的仪器化,并 实现了计算机化。
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Rf1
d s1 L
L
ds2
ds1
Rf
2
ds2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱL
图18-1
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2. 相对比移值Ris
Ris
R f(i) R f(s)
原点到组分斑点质量中心的距离 原点到参考物斑点质量中心的距离
di ds
✓ 讨论
• 参考物与被测组分在完全相同条件下展开
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