痰液脱落细胞FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的评价
FISH痰脱落细胞检查诊断肺癌的价值
３ ７℃预热 的 ０ ０５ｍ ｌＬ的 Ｋ １ 渗液 ， 新 吹打 ．７ ｏ ／ Ｃ低 重 悬浮 细 胞 ，７℃ 水 浴 低 渗 ３ ｎ 期 间 吹 打 ５～６ ３ ０ｍｉ，
次 。加入 固定液 ２ｍ （ Ｅ 甲醇 ： 冰醋 酸 为 ３ １ ， 匀 ， ： ）混
规方 法 ） 。 １ ２ １ ＦＳ ． ． ＩＨ检 测 １ Ｌ中痰 液 加 入 ５—１ Ｌ ０ｍ ０ｍ 的痰 液 消化 液 ， 匀 ， 置 １ ２ ｉ ， ５ ０ｒｍｉ 摇 放 ０～ ０ ｍ ｎ １ ０ ｎ ／ 离心 １ ｉ 去上清 ， ０ｍ ｎ后 加入 ５ｍ Ｌ在 ３ ７℃预热 的胶
２ ）与 常规方 法 比较 ， ５ ， Ｐ分 别 ＝０ ０７ ０ ００ 三 种 ．０ 、． １ ； 方法判 断不 同分期 患者 的特异 性无 统计 学差 异 。
析。
１３ 统 计 学方法 ．
采 用 Ｓ Ｓ１ ． Ｐ Ｓ２ ０统 计 软 件 ， 实验
数据 以百分 比表 示 ， 用 独 立样 本 检 验 检 验 ， 采
Ｐ ．５ 差异有 统计学 意义 。 ≤Ｏ ０ 为
２ 结果
的玻片加热至 ５ ６℃。在片子上将 ｌ 的混合探 ０ 针加到一个反应区， 将盖玻片立刻覆盖反应区， 使探 针 溶液 弥漫整 个 覆 盖 区。用 树 胶封 固 ， 封 好 的 片 将
表 １ ０例正常人痰脱落细胞染色体数 目畸变率 （ ２ ％）
探针
０ 个信号点
Ｏ
Hale Waihona Puke 鱼堡堕变 旦１ 个信 号点 ３ 个以上信号点
３． ９ ４． Ｏ ４． ５ ３． ８ ４． ５ ４． ０ ２． ８ ５． ０
纤支镜活检和痰液标本FHIT基因检测对肺癌诊断的意义
Ｅ Ｍ］ ［ ］ Ｃｍ ．临床 骨科 学 ［ ．西安 ：世界 图书 出版西安公 司 ， ４ ｒ ｇ Ｖ
２ ０３： ４ ９ ０． ０ ９ ９— ５
［ ］ Ｓｆ ｇＲ Ｃ ｎｅ ｉｌ ｑ ｉ ｖ ｒ ｌ ｆ ｔ Ｊ． ｃ ｒ ｏ ｅ ， ５ ｅ ｎ ． ｏｇ ｎ ａ ｅ ｕ ｏａ ｓｃ ｂｏ ［ ］ Ａ ｔ Ｏ ｔ ｐＢ ｌ ｉ ｔ ｎ ｕ ｕ ｏ ａ ｈ ｇ
实用 医学杂志 ２０ 年第 ２ 卷第 ２ 期 ０８ ４ １
３ ７ ６ １
度引起 的 Ｃ Ｅ Ｔ Ｖ术后 前足 内收畸残 留或 复发而行跖 骨问松解和固定术治疗是可行 。 由于有的患儿残余前 足内收于术后 ３ 年左右可逐渐矫正 ，故何 种紊乱 ～５ 程度 的跖 骨 排列 需 要 在 Ｍｃａ 治 疗 Ｃ Ｅ ｋｙ术 Ｔ Ｖ的 同 时 ， 行跖 骨 间 松解 和 固定 术 ， 需 要今 后 进 一 步 的 研究 和 则 观察 。
４ 参考文献
［］ 何荣 ．先 天性 马蹄 内翻足治疗 进 展 ［］ 中国矫形 外科 杂志 ， １ Ｊ．
２０ ． １ １ ） ３ — ９ ０ ３ １ （７ ：７ ３ ．
ｓ ［］ Ｌ ｔ Ｍ ． ２ ｅｔ
Ｄａ ｉｓ ｎ ｖｄ ｏ Ｄ．
Ｔｈ ｒｌ ｆ ｂｌｔｒ ｌｔｌｃｏ ｉ ｔｅ ｅ ｏｅ ｏ ｉ ｅａ ａｅ ｔｍｙ ｎ ｈ ａ
ａ ｄ ｓｕｕ ｓｍｐｅ Ｌ ｉ — ｉｇ ｎ ｐ ｔｍ ａ ｌｓ ＩＤａ ｍ ｎ ，Ｘ Ａ Ｘ ｅｍ ｉ Ｉ ｈ ｏ ＨＥ Ｙ —ｉ ，Ｃ ＩＹｎ －ｕ ． Ｄｅａｔ ｎ ｏ ｎ Ｉ ｕ — ｅ，Ｌ Ｕ Ｃ ａ ，Ｃ Ｎ ｕｑｎ ｇ Ａ ｉｇｙ ｎ ｐｒ ｔｆ ｍｅ Ｒ ｓ ｉ ｏｙＤｉ ａｅ ， ｆ ｌｔｄＨ ｐｔｌ Ｂ ｎ ｂ ｄｃｌＣ ｌｇ ， ｅｇ ｕ２ ３ ０ ，Ｃ ｉ ｅ ｒ ｒ ｓ ｓｓ Ａ ｉ ｅ ａ ｉ ， ｅｇ ｕＭｅｉａ ｏ ｅｅ Ｂ ｎｂ ３ ０ ４ ｈｎ ｐａ ｔ ｅ ｉ ａ ｓ ａ ｌ ａ
痰分子标志物在肺癌早期诊断中的研究进展
１ ．ｐ ｓ ３基因 ， 位于 １ ７ ｐ １ ３ ． １区域 ， 参 与细胞周 期调控 ， 诱 导细胞凋亡 ， 具有稳定基 因、 抑制 细胞突变 的作用 ， 是研究最
早 的抑 癌 基 因 之一 。 ｐ ５ ３突 变 丧 失 正 常 功 能 ， 导 致 细 胞 无 限
突变 检出率为 ２ ２ ％～ ４ ５ ． ５ ％， 与肿瘤 的分期无 关 ， 但在 重度 吸烟者中却未发现突变 Ｊ 。Ｋ — ｒ ａ ｓ 基 因突变在痰 液中 的检测
酶， 其过表达可导致多种恶性肿瘤 的发生 ， 并 与 肿 瘤 的侵 袭 、
年 生存率 不足 ２ ０ ％ ； 另一方 面是 目前 尚缺乏 有效 的肺癌 早期 筛查 及诊 断 的手 段 。痰 液直 接 来 源于 呼 吸道 ， 取 材 简
便、 无创 、 可 重复性 强 ， 因此 ， 研 究 者 们 不 断 尝 试 将 分 子 生 物
学的先进技术应用 于痰液 检查 中 ， 以寻求 高敏感 性 、 高特 异
性 的分 子 标 志 物 。 现 将 近 年 来 痰 分 子 标 志 物 在 肺 癌 早 期 诊 断 中 的研 究 进 展 作 一 综 述 。
一
、
Ｄ Ｎ Ａ水 平
作为肺癌早期诊断 的分子标志物 的可能性 。
３ ．Ｋ ． ｒ ａ ｓ 基因， 位于 １ ２ ｐ １ ２ ． １区域 ， 是原 癌基 因 ｒ ａ ｓ 家 族
长、 分化 、 凋 亡 中 发 挥 重 要 的调 控 作 用 １ ４ ］ 。Ｋ — ｒ ａ ｓ的 突ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｐ Ｃ Ｒ） 已被 广 泛 应 用 于 处 于 细 胞 间期 的单 个 细 胞 Ｄ Ｎ Ａ变 异 的 检 测 。在 痰 脱 落 细胞 的 Ｄ Ｎ Ａ检 测 中 也 取 得 了 一 些 进 展 ， 有 望 实 现 早 期 肺 癌
痰液脱落细胞FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的评价
痰液脱落细胞FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的评价作者：庄鹏晖，蒋晓刚，潘承恩，尚东【摘要】目的通过检测痰液脱落细胞FHIT基因微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)和杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)，评价FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的敏感性，探讨肺癌筛查的有效方法。
方法以液基细胞学为基础，采集并分离高危人群痰液脱落细胞，提取DNA，检测FHIT基因MSI和LOH。
结果在肺癌患者中出现MSI或LOH异常的阳性率在41.6%～49.5%之间，以D3S1300最高，达到49.5%，3个位点中至少1个位点出现微卫星异常为72.3%(n=73)，至少2个位点出现微卫星异常为45.5%(n=46)。
统计学分析表明，FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌和非肺癌患者中的差异有统计学意义(P<0.05)。
结论以液基细胞学为基础，检测痰液脱落细胞FHIT基因的MSI和LOH可以作为肺癌早期诊断的新途径。
不同微卫星位点出现异常表现的具体形式有所不同，多位点联合检测可以提高诊断的敏感性和特异性。
【关键词】液基细胞学痰液标本微卫星不稳定性杂合性缺失肺癌诊断ABSTRACT: Objective By detecting microsatellite instability (MSI) and loss of heterozygosity (LOH) in FHIT gene in sputum specimen, we intended to evaluate the sensitivity of FHIT gene detection to early diagnosis of lung cancer and exploreeffective method to screen lung cancer. Methods Based on liquid based cytology, we collected and isolated sputum specimens in high risk group, abstracted DNA, and detected MSI and LOH in FHIT gene. Results The positive rate of MSI or LOH at single locus was between 41.6% and 49.5%; the site D3S1300 was the highest and it was 49.5%. At least 1 site out of 3 sites that had abnormal microsatellite accounted for 72.3% in lung cancer patients, two sites that appeared to change accounted for 45.5%, which was significantly different compared to non lung cancer patients (P<0.05). Conclusion Based on liquid based cytology, detection of MSI and LOH in FHIT gene in sputum specimen may be a means of screening lung cancer. Different loci may have different abnormal appearance; combination detection in multi locus might raise sensitivity, which could provide new means for lung cancer screening.KEY WORDS: liquid based cytology; sputum specimen; microsatellite instability; loss of heterozygosity; lung cancer diagnosisFHIT基因异常是肺癌演变中的一个早期、频发事件。
痰液细胞学检查在肺癌筛查中的意义
痰液细胞学检查在肺癌筛查中的意义作者：周格琛来源：《右江医学》2009年第05期【关键词】痰液细胞学;肺癌筛查;分型诊断文章编号:1003-1383(2009)05-0581-02中图分类号:R 734.2文献标识码:Bdoi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.05.040痰液细胞学检查因简便易行,患者无痛苦而成为筛查肺部恶性肿瘤最常用的方法,笔者回顾性分析其敏感性、特异性和准确性,旨在探讨其在诊查肺癌中的价值,现报道如下。
资料与方法1.一般资料从2007年6月到2009年6月在我院行痰液细胞学检查的患者1460例,其中男性803例,女性657例,年龄26～83岁。
2.检查方法患者的痰液每天诊查1次,连续查3天,标本的采集选用自然咳痰法,清晨排痰以后,在上午8～9时让患者先用清水漱口数次,再用力咳出气管深处的痰(尽量避免混入唾液或鼻咽分泌物)盛入无菌容器中立即送检,挑取黄豆大小带血丝部分、灰白色细丝或透明蛋清样黏痰于一张清洁的载玻片上,用压拉法制成2张厚薄均匀适中的涂片,湿固定于95%乙醇中至少15分钟,苏木素尹红(HE)染色后待干用中性树脂封片,在光学显微镜下按细胞病理学检查标准化程序进行定性及分型诊断[1]。
3.判断指标相关指标以下公式计算:敏感性(%)=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%;特异性(%)=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%;准确性(%)=(真阳性+真阴性)/(真阳性+真阴性+假阳性+假阴性) ×100%。
结果检查的1460例患者中,根据临床表现,通过细胞学、影像学及肿瘤标志物筛查,经组织病理学确诊为恶性肿瘤的202例,其中鳞癌98例、腺癌69例、未分化癌27例、腺鳞癌6例、转移癌2例;痰液细胞学筛出161例,分别是鳞癌93例、腺癌41例(其中1例为误诊)、未分化癌22例、腺鳞癌4例、转移癌1例,总敏感性为79.21%、特异性为99.92%、准确性为97.06%,痰液细胞学检查对肺部原发性鳞癌和未分化癌的敏感性较高,而对腺癌、腺鳞癌和转移癌的敏感性相对较低(见表1)。
肺癌患者痰脱落细胞检查结果病理分析
胁 。 目前 ，临床对 肺癌 的治疗仍 无十分 有效 的方 法 ，早期 不 当等 】 。为提高检 出阳性率 ，医务人员应指导 患者 正确 正 诊断对治疗 该病 有至关重要的作用…。痰脱落 细胞检查是临 确采 集痰液 标本 ，勿将 口水直接 吐入标 本收 集器皿 ，而应 床诊 断肺癌 应用较 广泛 的诊 断方 法之一 ，该方法 具有 操作 深 呼 吸 后 从 肺 部 咯 出痰 液 。另 外 标 本 收 集 完 成 后 应 及 时 送 简单 、可 重复 性好 、对 患者无 创伤 等优 点［ ２ ］ 。我 院病 理科 检 ， 以避 免 造 成 标 本 污 染 、 变 质 ， 技 术 人 员 操 作 过 程 应 严
１ 资料 与方 法
１ ． １ 一 般 资 料
细 胞癌等 肿瘤类 型 ，且 鳞癌 患者 占肺 癌患者 的 多数 。高 倍 镜 下 显 示 腺 癌 细 胞 多 呈 团 状 、 不 典 型 腺 腔 样 或 呈 桑 葚 样 排 列 ，染色 质 呈颗 粒 状 ， 胞浆 内有 空泡 ，胞 质淡 染 ，核 仁
较 大易见 。鳞癌细 胞常 呈蝌蚪 型或纤 维型 ，多为单 个散在 机 选取 １ ６ ８ 例作 为研 究对 象 ，所有 患者 均符 合肺 癌 的临床 分 布 ，细 胞核较 大 易染 色 ，明显畸形 。小细 胞癌形 状不 规 诊 断标 准 ，并 经组 织 病理 检 查 确 诊 。所 有 患者 均 自愿 配 则 ，呈镶 嵌式排 列 ，胞 核大小 不一核 内染色 质增 多 ，呈 椒 合 并完 成 相 关 病理 检 查 ，排 除 因各 种 原 因而 放 弃检 查 的 盐样改变 ，颗粒较粗 。 患 者 。其 中 男９ ３ 例 ，女７ ５ 例 ；年 龄 ４ ５ ～７ ２ 岁 ， 平 均 年 龄 另外 ，随着医 学科技 的发展 ，肺癌 患者 的检查 及确 诊 （ ５ ８ ． ６ ±１ ２ ． ７ ）岁 。 手 段 也 逐 渐 增 多 ， 如 纤 维 镜 刷 片 细 胞 学 检 查 、 痰 液 基 薄 层 １ ． ２ 方 法 细 胞 学 检 查 等 。 由于 不 同 组 织 学 分 型 的 肺 癌 在 治 疗 原 则 上 １ ． ２ ． １采 集痰液标本 ：所有 患者均采用 自然咯痰法采集 存 在差异 ，细 胞学 除了区分 良性 、恶 性外 ，还要进 一步 分 痰 液标本 ，嘱 患者晨起 后清 洁 口腔 ，并咯 出喉部痰 液 ，后 型 。细胞 学对 于大细 胞癌和低 分化 鳞癌 、腺癌分 型较为 困 深 呼吸用力 咯出肺部痰液并用专用器皿收集 。 难 ，在 区分小 细胞癌 和非小细 胞癌 上准确 性则较 高 。有 研 １ ． ２ ． ２涂片检查 ：用竹签挑选痰液中带血丝或 白色粘液的 究 显 示 ， 痰 细 胞 学 分 型 的 准 确 性 高 于 纤 支 镜 刷 片 细 胞 学 ， 有 效痰 液置 于 载玻 片 上 ，并 制成 长 ２ ． ０ ～３ ． ０ ｃ ｒ ｆ ｌ ，１ ． ０ ￣１ ． ５ ｃ ｍ， 这 主 要 和 取 材 的 方 式 有 关 。 痰 细 胞 学 中 的 肿 瘤 细 胞 是 自然 厚１ ～２ ｍｍ的痰 液薄膜，刮去多余 唾液 ，操 作过 程应 动作 轻 咳 出的，来 自肿瘤表 面 ，细 胞 的分 化程度 较高 。而 纤支镜 微 细致 ，避免破 坏标本 ，后 立即用等 量无水 乙醇 和 乙醚 的 刷片 中的肿瘤 细胞往 往来 自肿 瘤 的深层 ，分化程 度较低 ， 混 合 液 固定 １ ０ ￣２ ０ ｍｉ ｎ ，经 ＨＥ 染色后镜检 。 容 易 导 致分 型 的偏 差 ［ ４ 】 。
痰脱落细胞学在肺癌诊断中的价值及影响因素
痰细胞学诊 断阳性 １ ８ ５例 ，其 中确诊为鳞状 细胞癌 ６ ８ 例 （ ３ ６ ． ７ ６ ％， ６ ８ ／ １ ８ ５ ） ，腺癌 ７ １ 例（ ３ ８ ． ３ ８ ％， ７ １ ／ １ ８ ５ ） ，小 细胞 癌 ２ ７例 （ １ ４ ． ５ ９ ％， ２ ７ ／ １ ８ ５ ） ，鳞腺癌 ２例 （ １ ． ０ ８ ％， ２ ／ １ ８ ５ ） ， 可疑 癌 １ ７例 ， 可见核异质细胞 １ ３ ９ 例 。见表 ２ 。
表 ２ 痰 细 胞 学 分 型 诊 断 结 果
１ ． ２ 方法 ： ①患者在清晨漱 口， 用力 咳取呼吸道深部 的痰液 ， 置 于塑料杯 中。留取的样本要及时送检 ， 连送 ３ ｄ 。将送检的 痰液用竹签挑取 灰白色或带血 丝或透明的痰液涂片 ２张 ， 置 于９ ５ ％乙醇固定 １ ０ ｍ ｉ ｎ 。②另取少量置于离心管 中， 加入适
・
９ ６ ０・
中国药物与临床 ２ ０ １ ４ 年７ 月第 １ ４ 卷第 ７ 期Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｒ ｅ ｍ ｅ ｄ ｉ ｅ ｓ ＆Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ｓ ， Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． １ ４ ， Ｎ ｏ ． ７
痰脱 落细胞 学在肺癌诊 断 中的价 值及 影响 因素
察 细胞 层若 肉眼仍见血丝或黏液则重复上述步骤 ） 。③ 将有
标 本的细胞保存瓶置于新柏 氏液基细胞制片仪 中， 经过滤程
痰脱落 细胞 学检查找 癌细胞 ， 虽然方 法简单 ， 患者容 易 接受 。 但影 响阳性检 出率的 因素也 很多 ， 笔者分 析 ７ ３ ９例 痰 脱落细胞学检查 ． 发现影响痰脱落细胞学 阳性率 的因素 主要 有 以下几点 ： ① 留取痰液方法不当 ， 患者 未用 力咳取深部痰 ，
肺癌患者早期的诊断应该先查痰液
肺癌患者早期的诊断应该先查痰液引言肺癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率逐年增加。
早期诊断对于肺癌的治疗和预后具有重要意义。
近年来，随着医疗技术的进步，人们对于肺癌的早期诊断有了更深入的了解。
本文将详细介绍肺癌早期诊断的重要性，并阐述肺癌患者早期诊断应该先查痰液的原因。
肺癌的早期诊断重要性肺癌的早期诊断对于患者的治疗和预后具有重要意义。
早期肺癌患者的治愈率相对较高，同时患者生存质量也会更高。
相比于晚期诊断，早期诊断可以避免肿瘤进一步扩散和转移，减少手术切除的难度，增加治疗成功的机会。
因此，早期诊断是肺癌治疗中的关键一步。
痰液检查在肺癌早期诊断中的作用在肺癌的早期诊断中，痰液检查作为一种简便、无创的方法，具有重要作用。
以下是肺癌患者早期诊断应该先查痰液的原因：1. 痰液中癌细胞的检测痰液中可以检测到肺癌细胞的存在，这对早期诊断非常有帮助。
通过细胞学检查，可以发现癌细胞的形态特征、数量和分布情况，从而判断肺癌的类型和分级。
这对于制定个体化的治疗方案具有重要意义。
2. 基因突变的检测肺癌的发生和发展与基因突变密切相关。
痰液检查可以通过检测肿瘤相关基因的突变情况，确定肺癌的分子分型，从而指导个体化治疗和靶向药物的应用。
痰液检查的特异性和敏感性较高，是进行基因检测的良好样本来源。
3. 评估治疗效果和监测复发进行肺癌治疗后，痰液检查可以评估治疗效果和监测复发情况。
通过检测痰液中癌细胞的变化，可以判断治疗是否有效，是否需要调整治疗方案。
同时，痰液检查还可以早期发现复发或转移，及时采取相应的治疗措施，提高患者的生存率。
痰液检查的操作方法痰液检查是一项简便、无创的检查方法，操作方法如下：1.患者需空腹或进餐后2小时以上采集痰液。
2.打开空气流通的容器，患者咳痰到容器中，尽量避免唾液的混入。
3.采集足够的痰液样本，约2-3ml。
4.将采集好的痰液样本盖好，送至医院检验科进行检查。
结论肺癌的早期诊断对于患者的治疗和预后具有重要意义。
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痰液脱落细胞FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的评价作者：庄鹏晖，蒋晓刚，潘承恩，尚东【摘要】目的通过检测痰液脱落细胞FHIT基因微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)和杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)，评价FHIT基因检测在肺癌早期诊断中的敏感性，探讨肺癌筛查的有效方法。
方法以液基细胞学为基础，采集并分离高危人群痰液脱落细胞，提取DNA，检测FHIT基因MSI和LOH。
结果在肺癌患者中出现MSI或LOH异常的阳性率在41.6%～49.5%之间，以D3S1300最高，达到49.5%，3个位点中至少1个位点出现微卫星异常为72.3%(n=73)，至少2个位点出现微卫星异常为45.5%(n=46)。
统计学分析表明，FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌和非肺癌患者中的差异有统计学意义(P<0.05)。
结论以液基细胞学为基础，检测痰液脱落细胞FHIT基因的MSI和LOH可以作为肺癌早期诊断的新途径。
不同微卫星位点出现异常表现的具体形式有所不同，多位点联合检测可以提高诊断的敏感性和特异性。
【关键词】液基细胞学痰液标本微卫星不稳定性杂合性缺失肺癌诊断ABSTRACT: Objective By detecting microsatelliteinstability (MSI) and loss of heterozygosity (LOH) in FHIT gene in sputum specimen, we intended to evaluate the sensitivity of FHIT gene detection to early diagnosis of lung cancer and explore effective method to screen lung cancer. Methods Based on liquidbased cytology, we collected and isolated sputum specimens in high risk group, abstracted DNA, and detected MSI and LOH in FHIT gene. Results The positive rate of MSI or LOH at single locus was between 41.6% and 49.5%; the site D3S1300 was the highest and it was 49.5%. At least 1 site out of 3 sites that had abnormal microsatellite accounted for 72.3% in lung cancer patients, two sites that appeared to change accounted for 45.5%, which was significantly different compared to non lung cancer patients (P<0.05). Conclusion Based on liquid based cytology, detection of MSI and LOH in FHIT gene in sputum specimen may be a means of screening lung cancer. Different loci may have different abnormal appearance; combination detection in multi locus might raise sensitivity, which could provide new means for lung cancer screening.KEY WORDS: liquid based cytology; sputum specimen; microsatellite instability; loss of heterozygosity; lung cancer diagnosisFHIT基因异常是肺癌演变中的一个早期、频发事件。
大多数学者认为肺癌发生的基因变化顺序首先是3p等位基因(FHIT)缺失或微卫星改变，随后依次为9p21杂合性缺失、Myc基因过表达，8p2123、13q等位基因(RB)和17p杂合性缺失等。
以上基因异常均发生在原位癌之前，之后才是5q21(APC MCC)杂合性缺失及K ras癌基因突变[1]。
因此，对FHIT基因异常的检测可能对早期发现癌前病变、早期诊断及治疗具有重要意义。
检测微卫星异常的标本除了传统的肿瘤组织外，还有支气管灌洗液分离得到的细胞和痰液等。
由于支气管镜检费用较高、痛苦较大、并发症较多，很难开展早期诊断的筛查。
液基细胞学处理的痰液标本，可得到脱落细胞并去掉杂质。
在我们先前的研究中，液基细胞学处理明显提高了痰液标本的诊断准确率和敏感性[2]，因此液基细胞学标本是很好的分子生物学研究平台，适合进行免疫组化和RT PCR 分析等多种实验性研究。
液基细胞学与分子生物学的结合将为临床肺癌筛查提供更客观、更早期的检查手段，对于提高肺癌早期诊断的检出率有重要意义。
1 材料与方法1.1 标本来源收集西安交通大学医学院第一附属医院2006年2月至2006年9月临床送检的肺癌高危人群痰液标本287例。
嘱患者在早晨排痰以后，留取上午8～9时的新鲜痰并及时送检。
痰量很少或没有自然排痰者，可采用雾化吸入法促进排痰。
每例患者连续送检3d。
在287例痰液标本中,最终经纤维支气管镜活检或手术治疗得出病理诊断为肺癌的是101例。
1.2 标本处理收集痰液于已消毒的50mL试管中，加入等体积标准固定液，双层消毒纱布过滤滤液，4℃ 2500r/min离心5min，沉淀物用PBS、ddH2O 2mL分别洗涤各2次(2500r/min离心5min)，沉淀物(即脱落细胞)冻存于-20℃冰箱或直接用于DNA提取。
1.3 DNA提取脱落细胞按DNA抽提试剂盒(WizardTM Genomic DNApurification Kit)说明书进行：取冻存的细胞置于37℃水浴中解冻5min；加入600μL核裂解液至细胞混悬液中，吹打至无细胞结块；加入3μL RNA酶溶液至溶液中；加200μL蛋白沉淀液至上述溶液中；小心将上清液移至另一装有600μL室温异丙醇的离心管中，轻柔晃动试管，只至线状DNA形成团线状；加600μL室温700mL/L乙醇至离心管中，轻柔颠倒几次以洗涤DNA；加100μL DNA再水合液溶解DNA，4℃过夜溶解DNA并保存备用。
1.4 微卫星引物MSI分析选用的3个微卫星位点及引物序列见表1。
引物序列来自GenBank，由上海生物工程技术服务有限公司合成。
表1 3个微卫星位点及引物序列（略）1.5 聚合酶链式反应单链长度多态性(PCR SSLP)分析 PCR反应体系体积为25μL。
反应结束后，PCR产物部分进行15～20g/L琼脂糖凝胶电泳，以观察括增效果，之后进行80g/L变形聚丙烯酰胺凝胶电泳、显色和终止等步骤后封片。
PCR试剂和变形聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂由上海生物工程技术服务公司。
1.6 MSI和LOH的判定与Marker比较，若某一微卫星位点的等位基因条带增多或位置发生改变，则记为MSI；若某一微卫星位点的等位基因条带消失或相对密度减少50%以上记为LOH。
1.7 统计学处理全部数据均使用SPSS11.5软件进行统计学处理，MSl和LOH 诊断肺癌的灵敏度和假阳性率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 D3S1234位点的DNA分析在101例确诊肺癌患者中，出现MSI有27例，占26.7%，出现LOH的有18例，占17.8%，两者总和为45例，占44.6%；其他186例非肺癌患者中，出现MSI有37例，占19.9%，出现LOH的有8例，占4.3%，两者总和为44例，占24.2%。
统计学分析表明，FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌组织和非肺癌组织中的差异有统计学差异(P<0.05)。
2.2 D3S1300位点的DNA分析在101例确诊肺癌患者中，出现MSI有30例，占29.7%，出现LOH的有20例，占19.8%，两者总和为50例，占49.5%；其他186例非肺癌患者中，出现MSI有39例，占21.0%，出现LOH的有10例，占5.4%，两者总和为49例，占26.3%。
统计学分析表明FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌组织和非肺癌组织中的差异具有统计学差异(P<0.05)。
2.3 D3S1481位点的DNA分析在101例确诊肺癌患者中，出现MSI有25例，占24.8%，出现LOH的有17例，占16.8%，两者总和为42例，占41.6%；其他186例非肺癌患者中，出现MSI有35例，占18.8%，出现LOH的有7例，占3.8%，两者总和为42例，占22.6%。
统计学分析表明，FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌组织和非肺癌组织中的差异具有统计学差异(P<0.05)。
2.4 两组患者3个位点MSI、LOH的比较在101例确诊肺癌患者中出现MSI或LOH异常的阳性率在41.6%～49.5%之间，以D3S1300最高，达到49.5%；3个位点中至少1个位点出现微卫星异常为72.3%(n=73)，其中有45.5%(n=46)呈多位点的改变。
在186例非肺癌患者中出现MSI或LOH异常的阳性率在22.6%～26.3%之间,以D3S1300最高，达到26.3%；3个位点中至少1个位点出现微卫星异常为30.6%(n=57)，其中至少2个位点出现微卫星异常为12.4%(n=23)。
统计学分析表明FHIT基因出现MSI或LOH在肺癌和非肺癌患者中有显著差异(P<0.05，图1)。
3 讨论肺癌是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症[3]，其总体五年存活率仅13.9%。
但是不同阶段的肺癌生存率差别很大，如晚期肺癌不能手术的5年生存率仅仅2%～3%；而早期肺癌，尤其是2cm以下的肺癌，5年存活率可达90%～100%[4]。
至今肺癌尚缺乏有效的早期诊断方法，80%的患者确诊时已经是中晚期[5]。
因此，早发现、早诊断已成为肺癌防治工作的重中之重，而早期诊断的关键是能否找到一种灵敏度高、特异性强的非创伤性诊断方法。
痰液细胞学的先行者GENO SACCOMANNO的研究表明，在肺癌高危人群得到临床诊断之前，痰液中就可以检测到恶变的细胞，但是对这些脱落细胞的监测，需要有经验的专业人员对其细胞核的变化做出准确的判断，因此这种方法无法在临床开展筛查。