石蜡切片组织RNA提取
总RNA的提取及相关实验方法
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
EASYspin-石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书精品
EASYspin 石蜡包埋组织RNA 快速提取试剂盒目录号：RN3001适用范围：适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA ，RNA 可用于反转录PCR ，荧光定量PCR 。
❖ 试剂盒组成、储存、稳定性：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2. 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
3. 为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K 为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.5毫升灭菌水溶解（终浓度40mg/ml ）。
因为反复冻融可能会降低酶活性，试剂盒组成 保存50次(RN3001) 裂解液PKD 室温 15 ml 结合液RBC 室温25 ml 漂洗液RW 室温10ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 蛋白酶K 粉 40mg/ml -20℃ 20mg RNase-free H 2O 室温 10 ml 基因组DNA 清除柱和收集管室温 50套 RNA 吸附柱RA 和收集管 室温 50套因此溶解后立即按照每次使用量)分装冻存，－20℃保存。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。
不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。
COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。
所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。
石蜡包埋组织中RNA提取方法的改进和完善
石蜡包埋组织中RNA提取方法的改进和完善孟青，杨文秀，胡军，高勤（贵阳医学院病理学教研室，贵州贵阳550004）［摘要］目的：建立和完善石蜡组织RNA提取的方法。
方法：收集临床病理诊断用石蜡包埋组织块共100例，经RNA灭活处理后，进行组织切片、脱蜡、清洗、消化等一系列提取前预处理，用TRIZOL试剂提取组织的RNA，并在-20C长时间沉淀RNA。
对提取的RNA以核酸测定仪检测RNA的浓度和纯度，并通过RT-PCR检查提取RNA 的!-actin基因，以检测提取RNA的质量。
结果：100例石蜡包埋组织中提取的RNA经过核酸测定仪测定后，浓度在20~50mmoi/L，260nm及280nm光密度比在1.75~2.0；经过RT-PCR反应，提取的RNA都能扩增出190bp的!-actin目的片段。
结论：通过RNA提取前对材料的一系列合理处理，从福尔马林固定、石蜡包埋档案组织材料中提取小片段RNA进行目的基因mRNA检测，可以成为一种稳定成熟的方法应用于临床病理诊断。
［关键词］RNA，肿瘤；石腊包埋；逆转录聚合酶链反应［中图分类号］R730.23 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707（2005）03-0241-03The Improvement of Isolation Technigue of RNA from Formalin-fixedand Paraffin-embedded TissuesMENG Oing，YANG Wen-xiu，HU Jun，GAO Oin（Department of Pathology，Guiyang Medical College，Guiyang550004，China）［Abstract］Objective：To improve the technigue for extracting RNA from formaiin-fixed and paraffin-embedded tissue.Methods：Sampies of100cases that diagnosed pathoiogicaiiy were coiiected.After some pretreatment such as deparaffinage，washing，digestion，totai RNA were extracted from these tis-sues with TRIZOL reagent and，then，kept at-20C for iong time（above2h）to settie RNA.The pureness and content of these RNA extracts were assayed with a nucieic acid detecting instrument and the guaiity of the extracts was tested with detecting of gene!-actin with RT-PCR.Results：The con-centration of RNA in the extracts were between20~50mmoi/L.The ratio of260nm/280nm were be-tween1.75~2.00.The RNA of!-actin were detected in aii cases.Conclusions：The reasonabie pre-treatment adopted in this study makes it feasibie to extract RNA from formaiin-fixed and paraffin-em-bedded tissue and to detect genes specific to some diseases in daiiy pathoiogicai diagnosis.［Key words］RNA，neopiasm；paraffin embedding；reverse transcriptase poiymerase chain reaction在实际临床病理诊断和病理回顾性研究中，来源最丰富、最容易获得的是经过石蜡包埋保存的档案组织。
石蜡包埋组织中提取RNA的方法改良
【 关键 词 】 石蜡包埋组织 ； Ｎ ；ｍ ３ Ｈ Ｒ Ａ ｎ ２一 １
长期 以来 ， 一方 面南于固定 和包埋处理使 Ｒ Ａ分 子被 Ｎ 化学修饰或被降解 ，另一方面 由于 固定剂引起组织蛋 白质
１ 临床资料 ：４例肺腺 癌为大连 大学附 属新 华 医院胸外 ２ 科 １９ ９ ８年 １ 至 １９ 年 １ 手 术 病 例 。 月 ９８ ２月 ２ 主要试剂 ： 鼠抗 人 ｎ ３ Ｈ， ｍ２ 一 单克 隆抗 体 是 美 国 Ｏ ｃｇｎ ｎｏｅ ｅ Ｓｉ ｃ 公 司 产品 ，二 抗 、Ａ ｃ ｎｅ ｅ Ｄ Ｂ试剂 盒均 为 Ｓｎａ ｒｔ公 司产 ａ ｔＣｕｚ 品 。 ｍ２ 一 引物（：’Ｇ Ａ ｃ Ｇ Ａ Ｔ Ｃ Ａ ｃ Ｔ 一 ： ｎ ３ Ｈｌ ａ５ ｃ Ｇ ｃ Ｇ Ｇ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ａ ３； 一 ｂ
２１ ０ ０年 ４月 上 第 ２卷 第 ７期
Ａｐ ｉ ｒｌ ２ １ ０ ０ Ｖ ０． １ ２ ＮＯ７ ．
中国中 医药咨讯
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＣ ｎ ｒ ｄｔ ｎ ｌ ｉｅｅＭｅ ｉｉｅＩ ｆｒ ｔｏ ｏ ｒ ａ ｈｉａＴ ａ ｉｏ ａ ｎ ｓ ｄｃｎ ｎｏｍａｉｎ ｏ ｉ Ｃｈ ・６９ ・
Ｒ Ａ， 用 ＲＴ Ｐ Ｒ和 免 疫 组 化 方 法 检 测 ２ Ｎ 应 —Ｃ ４例 石 蜡 包 埋 肺 腺 癌 组织 中 ｎ ２ 一 基 因 ｍ Ｎ 及 其 蛋 白的 表 达 。结 果 ： 从 石 ｍ ３ Ｈｌ ＲＡ ①
蜡包 埋肺腺癌 组织 中提取 的总 Ｒ Ａ质量较高 ； ｍ ３ Ｈ１ 因 ｍ Ｎ Ｎ ②ｎ ２ 一 基 Ｒ Ａ和其 蛋白表达率分别为 ６ ． ２ ％和 ６ ． Ｒ — Ｃ ５ ８ ％， Ｔ Ｐ Ｒ结果 ８
石蜡切片组织RNA提取PPT课件
3. RNA 抽提
1.2.2 二甲苯脱石蜡 1.2.2.1. 加入1ml 二甲苯，至上述离心管中，盖紧盖子，剧烈 震荡混匀5min；瞬时离心，将附着在管壁的组织收集至管底； 50℃，3min，离心机最大转速室温离心2min，弃上清。 注意： 二甲苯有毒，应尽量在通风橱中开盖操作，以减少实验 室空气污染。 1.2.2.2. 观察形成的组织沉淀是否很紧实，如果异常，重复 1.2.2.1实验操作。 1.2.2.3. 加入1ml无水乙醇至离心管中，剧烈震荡混匀2min，离 心机最大转速（13200rpm)室温离心2min，小心弃上清；重复此 步骤一次。
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3. RNA 抽提
1.2.3.2 加入4μL Protease后，上下颠倒混匀，如果组织附着 在管壁上，用枪头或瞬时离心使组织浸入到裂解液里。 1.2.3.3 置于恒温金属浴中孵育，50℃，500rpm摇动3h；然后 70℃，500rpm摇动20min。 注意：如果延长70℃反应时间，有可能导致RNA降解，故不要随 意延长时间。
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3. RNA 抽提
1.2.4.4 加500µL Wash2/3至Filter Cartridge上，10,000g， 30s，弃滤液。 1.2.4.5 空甩，10,000g，30s，，去除残留洗液。 1.2.5 DNA酶消化和RNA分离纯化
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3. RNA 抽提
1.2.4 总核酸提取
1.2.4.2 混匀，吸取700µL混合液至过滤柱里，为放止堵住 过滤柱，避免吸到大块未被消化掉的组织块到过滤柱里，然 后10,000g，30s，弃滤液至原管。 1.2.4.3 加700µL Wash1至Filter Cartridge上，10,000g， 30s，弃滤液。
组织石蜡切片 rna 提取试剂盒 用处
组织石蜡切片RNA提取试剂盒是一种用于从组织样本中提取RNA的实验试剂盒。
它的用处包括但不限于以下几个方面：1. 研究基因表达组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助科研人员从组织样本中提取出RNA，进而研究基因的表达情况。
通过分析组织中的RNA，可以了解特定基因在不同组织中的表达水平，从而揭示基因在生物体内的功能和调控机制。
2. 疾病诊断与治疗利用组织石蜡切片RNA提取试剂盒提取组织中的RNA，可以帮助医学研究人员研究与疾病相关的基因表达变化。
这对于疾病的早期诊断、疾病的分子机制研究以及疾病治疗靶点的筛选具有重要意义。
3. 药物研发在药物研发过程中，需要了解候选分子对于特定基因的调控情况，以及候选分子在不同组织中的代谢情况。
组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助药物研发人员获取组织样本中的RNA信息，为药物靶点的筛选和药效评价提供数据支持。
4. 癌症研究在癌症研究领域，组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助科研人员研究肿瘤组织中的基因表达情况，发现潜在的癌症标志物和治疗靶点，为个性化治疗提供依据。
5. 组织工程在组织工程领域，需要了解工程组织中细胞的基因表达情况，以评估工程组织的生物学特性和功能。
组织石蜡切片RNA提取试剂盒可以帮助研究人员从组织样本中提取RNA，为工程组织的设计和评估提供必要的基因表达数据。
总结起来，组织石蜡切片RNA提取试剂盒在基础医学研究、临床医学应用、药物研发、癌症研究、组织工程等领域都具有重要的应用价值。
它为科研人员提供了方便、快速、高效的方式来提取组织样本中的RNA，为相关研究和应用提供了可靠的实验基础。
随着生物技术和医学研究的不断深入，相信组织石蜡切片RNA提取试剂盒的应用领域还会不断拓展，为人类健康和疾病治疗带来新的突破和进展。
随着生物技术和医学研究的不断深入，组织石蜡切片RNA提取试剂盒的应用领域正在不断扩展和深化。
在医学研究领域，组织石蜡切片RNA提取试剂盒不仅扮演着起到提取RNA的作用，同时它还在分子医学、疾病机制研究、药物研发等方面发挥着重要作用。
石蜡切片rna提取步骤
石蜡切片rna提取步骤
石蜡切片RNA提取是从组织切片中获取RNA的一种方法，通常用于病理学研究。
以下是一般的步骤：
切片准备：
获取包含感兴趣组织的石蜡包埋切片，确保切片的质量和完整性。
脱蜡：
将切片置于适当的脱蜡溶液中，通常使用挥发性有机溶剂或低熔点的脱蜡剂，以去除石蜡。
这一步骤通常需要多次反复，确保充分脱蜡。
去脂质：
利用脱脂剂去除切片中的脂质，以提高RNA的纯度。
组织裂解：
使用裂解缓冲液将切片中的组织细胞裂解，释放RNA。
这可以通过将切片浸泡在裂解缓冲液中，或者直接在切片上涂覆裂解缓冲液来实现。
RNA提取：
使用RNA提取试剂盒或方法，如酚/氯仿法、琼脂糖柱法等，从裂解的组织中提取RNA。
这一步骤通常包括酚酚氯仿相分离，然后通过醇沉淀法或其他方法纯化RNA。
DNase I 处理：
通过使用DNase I来降解可能残留在RNA中的基因组DNA，以确保纯化的RNA是无DNA的。
RNA沉淀：
将RNA在异丙醇中沉淀，然后通过离心将RNA沉淀下来。
洗涤：
对RNA沉淀进行洗涤，以去除残留的盐和污染物。
干燥：
将RNA溶解并在适当的条件下干燥，准备进行后续的实验，如逆转录和定量PCR。
检测和质量控制：
使用分光光度计或其他RNA检测方法，如琼脂糖凝胶电泳、生物分析仪等，对提取的RNA进行浓度和纯度的检测和质量控制。
每一步都需要在RNAase-free（不含RNase酶）条件下进行，以避免RNA的降解。
整个过程需要严格控制实验室条件和使用RNase-free试剂、器具。
石蜡包埋组织rna完全解交联的方法
石蜡包埋组织rna完全解交联的方法石蜡包埋是一种固定和保护组织样本的方法，而RNA的完全解交联通常是在样本被包埋后的步骤。
以下是一种在石蜡包埋的组织中实现RNA完全解交联的基本方法：获取石蜡切片：从包埋组织中获得石蜡切片。
这通常涉及到用刀片或者微tome 从石蜡块上切割薄片的过程。
脱脂：将石蜡切片放置在去石蜡剂（如xylene）中，以去除石蜡。
这个步骤通常需要进行多次，确保完全去除石蜡。
水洗：将脱脂后的切片经过一系列浓度递减的醇（如95%、70%）和水洗涤，以去除去脂剂。
蛋白酶消化：使用蛋白酶（如蛋白酶K）进行组织中的蛋白质消化。
这一步有助于打破蛋白质的交联，使得RNA更容易被释放。
RNA抽提：使用适当的RNA抽提试剂（如TriZol）进行RNA的抽提。
这可以通过将抽提试剂加入组织样本中并进行机械破碎来完成。
DNA酶处理：在RNA抽提过程中，使用DNA酶来降解DNA。
这有助于进一步减少RNA和DNA之间的交联。
氨基酸处理：有时候，对组织进行氨基酸处理（例如，通过加入氨基酸溶液）可以帮助打破RNA的交联结构。
DNase I处理：使用DNase I处理，以进一步降解可能残留的DNA。
这可以在RNA 抽提后、纯化RNA前进行。
RNA纯化：对抽提的RNA进行纯化，通常通过使用RNA纯化试剂盒。
这一步有助于去除潜在的污染物。
质控：对解交联后的RNA进行质控，例如通过琼脂糖凝胶电泳或分析仪器，确保RNA的完整性和纯度。
这些步骤可以在确保RNA完全解交联的同时，最大限度地保留RNA的完整性和稳定性。
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3.去除石蜡
4.裂解消化DNA
通过蛋白酶消化组蛋白,消化裂解3h。 （加入4µL蛋白酶，）
5.消化DNA与收集RNA
使用Ambion1975纯化柱收集
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RNA提取前
1.2 操作步骤 1.2.1 石蜡包埋组织样品的预处理 1.2.1.1. 取石蜡块和一张干净的称量纸，使用冷却后的洁净刀片将 组织轻轻刮下来，刮片厚度不大于50µ m，尽量避免刮下石蜡。 注意： 切取石蜡组织块的时候，组织碎屑越薄越好，并且尽可能 少地切取石蜡块。 1.2.1.2. 将刮取的组织小心地转移至干净的1.5ml 离心管中，至总体 积约为300 µ L。 1.2.1.3. 如果样品为石蜡切片，可以直接进行后续的脱蜡处理，但 是建议5-20µm石蜡卷量不要超过总厚度80µm：即5µm切片取16片， 而20µm切片取4片。 注意：如果需要进行miRNA实验，石蜡切片厚度应不低于10µm。
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3. RNA 抽提
1.2.4.4 加500µ L Wash2/3至Filter Cartridge上，10,000g，30s，弃 滤液。 1.2.4.5 空甩，10,000g，30s，，去除残留洗液。 1.2.5 DNA酶消化和RNA分离纯化
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3. RNA 抽提
1.2.5.2 加入60µ LDNase mix至每个Filter Cartridge中心，盖上管盖， 室温孵育30min。 1.2.5.3 加700µ L Wash1至Filter Cartridge上，室温孵育30-60s后， 10,000g，30s，弃滤液。 1.2.5.4 加500µ L Wash2/3至Filter Cartridge上，10,000g，30s，弃 滤液； 1.2.5.5 重复一次4.2.5.4操作后，10,000g，空甩1min。 1.2.5.6 将Filter Cartridge转入另一新Collection Tube管中，加60µ L Elution Solution到滤膜中心，盖上管盖室温静置1min后，最大转 速1min。 1.2.5.7 进行Nano Drop RNA定量，如果不马上定量，将样品保存 于-80℃。
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注意事项
使用二甲苯脱蜡，去蜡更完全，但二甲苯有毒；
观察脱蜡后形成的组织沉淀是否很紧实，如果异常，重复脱蜡;
真空旋转浓缩仪干燥组织中残余乙醇,充分干燥影响下一步消化; 电泳：用DEPC水清洗，及配胶（加甲醛）;
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控制交叉污染
必须严格控制样品间交叉污染
从石蜡切片组织中提取RNA
董进曲/ Jinqu Dong 2013.12.26
ANNUAL BUSINESS REVIEW
概览
有关石蜡组织切片
补：DNA石蜡组织 切片。
试剂及仪器
样品处理 定量
RNA 质控RNA 提取
RNA 质控
电泳
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有关石蜡切片
石蜡切片（paraffin section）： 组织学常规制片技术中最为
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3. RNA 抽提
1.2.4 总核酸提取
1.2.4.2 混匀，吸取700µ L混合液至过滤柱里，为放止堵住过 滤柱，避免吸到大块未被消化掉的组织块到过滤柱里，然后 10,000g，30s，弃滤液至原管。 1.2.4.3 加700µ L Wash1至Filter Cartridge上，10,000g，30s，弃 滤液。
切片
提取及质检
RNA
实验/数据
存放位置, 使用情况, 是否返还 样品移交记录（实验室间）
实验室信息管理系统 Microsoft Excel 手写记录
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RNA提取前
组织蜡块
切片
提取及质检
RNA
实验/数据
1.1 实验前的准备工作 1.1.1 打开超净台的紫外灯，灭菌15min，然后通风 10min。 1.1.2 在第一次使用Wash1和Wash2/3之前，按照下 列步骤加入无水乙醇：加入42mL的无水乙醇（如 试剂瓶上所示）至Wash1中，充分混匀，即为工作 液；加入48mL的无水乙醇（如试剂瓶上所示）至 Wash2/3中，充分混匀，即为工作液。 1.1.3 用镊子将刀片蘸取少量酒精，酒精灯上灼烧 刀片，冷却后备用。
广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形 态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断 细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于 其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本 多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明， 各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜 下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组 织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包 埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其 形态结构。
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有关石蜡切片
石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包
埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。 一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标 本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
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Ambion1975
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石蜡组织切片RNA提取：实验原理
二甲苯&Ambion1975试剂盒： 通过二甲苯的去蜡以及蛋白酶K使RNA从石蜡组织中裂解释 放，并通过DNA吸附柱有效提取RNA. 关键点：
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3. RNБайду номын сангаас 抽提
1.2.2 二甲苯脱石蜡 1.2.2.1. 加入1ml 二甲苯，至上述离心管中，盖紧盖子，剧烈震荡 混匀5min；瞬时离心，将附着在管壁的组织收集至管底；50℃， 3min，离心机最大转速室温离心2min，弃上清。 注意： 二甲苯有毒，应尽量在通风橱中开盖操作，以减少实验 室空气污染。 1.2.2.2. 观察形成的组织沉淀是否很紧实，如果异常，重复 1.2.2.1实验操作。 1.2.2.3. 加入1ml无水乙醇至离心管中，剧烈震荡混匀2min，离心 机最大转速（13200rpm)室温离心2min，小心弃上清；重复此步 骤一次。
1.2.3.2 加入4μL Protease后，上下颠倒混匀，如果组织附着在管 壁上，用枪头或瞬时离心使组织浸入到裂解液里。 1.2.3.3 置于恒温金属浴中孵育，50℃，500rpm摇动3h；然后 70℃，500rpm摇动20min。 注意：如果延长70℃反应时间，有可能导致RNA降解，故不要 随意延长时间。
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石蜡组织切片RNA提取步骤
1.石蜡组织切片收集 及鉴定
每个样本以约300ul的石蜡组织切片量 为宜.
2.组织切片刮取
使用一次性解剖刀从组织片中刮取石蜡 组织至离心管中，尽量防止组织碎片飞 散造成交叉污染. 向含有石蜡组织的离心管中加入二甲苯， 通过二甲苯溶解石蜡并去除，再用无水乙 醇去除二甲苯。
一个样品用一个解剖刀片 实验前后清洁工作区
经常换手套
无PCR产物区域 尽量防止组织碎片飞散造成交叉污染
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试剂、仪器及耗材
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试剂、仪器及耗材
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试剂、仪器及耗材
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Thanks！
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受破坏RNA（固定步骤）
二甲苯：溶解并去除石蜡
降低RNA 得率 蛋白酶K：消化与RNA结合的组蛋白 后续分析困难
注：RNA降解
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内容
有关石蜡组织切片
1、样品处理
补：DNA石蜡组织 切片。
样品处理
2、RNA抽提
试剂及仪器
RNA 质控RNA 提取 RNA 质控 定量 电泳
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样品处理
组织蜡块
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3. RNA 抽提
1.2.2.4. 弃上清，室温短暂离心，用移液器将剩余的无水乙醇吸 出。 1.2.2.5. 真空旋转浓缩仪干燥组织中残余乙醇（5min)，45℃，浓 缩时间＜20min；如果室温晾干组织沉淀，时间为15-45 min。 。 1.2.3 蛋白酶消化
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3. RNA 抽提