大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析

离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究

ｃｌ，ｅｅｅｕｅｓｔｙｗｒｎ—ｒｇｌｔｎｒｌａｅ，ｉｇｅｗｖｅｕａｌａｅｉｔｎｉｎｒｌａｅ，ａｏｙｍｅｅｓｎｅｏｅｅｓＩｐｏｅｈｔｔｅｈｅｕａｏｅｓｓｎｌａｅｒｇｌｒｒｅｓ，ｎｅｓｅｓｐｒｘｓｒｌａｅａｄｐｒｄｒ］ａｅ．ｔｒｖｓｔａｉｅｅｏｅｉｈ
ＴｈｅＧｅｅａｅｔｉｔｖｔａａｔｒｆｎｒｌＥｌｃｒｃＡｃｉｉｙＣｈｒｃｅｓｏｔｅＲａｐｏａｐｓＥｘ — ｉｏＰｒｍｉｌＣｅｌｈｔＨｉｐｃｍｕ —ｖｖｙａｄａｌｓ
ＹＡＮＧｎｈｎＡＳｅｇＲｕｓｅｇ，ＰＮｈｎｗＵ，ＡＮＧｌＹＦＹｉｇ，ＡＧｈｎｃａｇｌＮＳｅｇｈｎ２
ｓｍｕａｔｉｔｌｎｓ．
ＫｅｒｓＲａｉｐｃｍｐｓＭｉｒｅｅｔｅＢｍｎｓｅ；ｐｎａｅｕｉｈｒｅｙｗｏｄ：ｔｈｐｏａｕ；ｅｏｌｅｏ；ｒｆｅＳｔｎｏｓｄｓａｇｒｄｉｏｃ
１引言
（．ｎａＥｐｒｅｔａ，ｕｎＰａｔｅｅ，ｏ１１ＨｓｉｌｆＰＡ，ｕｉ４０２Ｃ／１ＡｉｌｘｅｍｎＬｂＢｒ／／ＣｎｒＮ．８ｏｔＩＧｉｎ５１０，ｈｎｍｉｓｃｔｐａｏｌａ；２ＳｉｃｆｏｅｅＧａｇｉｒａＵｉｒｔ，Ｃｚｉ５１０）．ｃｎｅｒｅＣｌｇ，ｕｎｘｍｌｎｅｉａｌ４０２ｅｉｌｏＮｖｓｙｉｎ

膜片钳常见问题解答讲解

膜片钳常见问题解答（一）1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。

由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。

膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。

采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。

从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。

随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。

2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。

常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。

3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。

后者的灵活度大，因此多采用。

目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。

若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。

4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。

机能学教程-中心简介-哈尔滨医科大学

实验机能学教程哈尔滨医科大学《实验机能学教程》编写人员主编金宏波副主编宋英莉班涛编者边淑玲孙宏丽苏乐王瑞雪宋英莉曲丽辉谷长任李玉荣朱骥伟杨永滨张颖张永春张丽敏金宏波周建秋娄延平姜晓姝郝晓敏班涛贾淑伟霍蓉王然钟鑫吕春梅曹永刚王宁朱久新朴贤美刘妍妍李鸿珠邹向晖李文楠徐杰唐立勇李小雪吴志超卢方浩张莹张晓兰李红霞杨永良孙丽华李哲吴博刘晓宇苑立军李勇刘学义白云龙陈畅田振主审李玉荣李光前言机能学实验教学中心自2000年成立，特别是2007年成为教育部国家级实验教学示范中心（建设单位）以来，对实验教学进行了大量的改革，初步形成了较为完善的实验教学体系，实验机能学教材也已出版了三版。

2012年，根据教育部和卫生部对医学教育综合改革的精神，落实“进一步发挥高等学校实验室在培养人才中的作用若干意见”，学校提出了实验教学改革方案。

机能学实验教学改革将贯彻“以学生为中心”的教学理念，引导和激励学生自主学习，充分调动学生的学习积极性和主动性，密切联系临床实际，重点培养学生的动手能力和科学思维方式，提倡深入思考，逐步开展自主设计、自主实施、自主总结的探索设计性实验，培养学生终身学习能力。

为此，本教材的编写在已有的“基础性-综合性-设计性实验”教学体系的基础上，引入PBL （Problem-based learning，PBL）和TBL（Team-based learning，TBL）教学理念，将贯彻启发式教学和学生自主学习作为教学改革的重点，改革实验流程和授课方式，减少教师讲授，增加学生讨论、团队协作，加强实验总结，进一步完善实验考核与评价。

在教材编写过程中，坚持“三基”和“五性”的要求，根据学科特有的实践特色，除了介绍实验机能学基础理论外，在实验项目编写过程中，尝试增加了数十个相关的临床病例和分析与思考问题，力图引导学生根据所学的机能学理论，自主查找文献资料，根据给定的实验条件自主设计相关实验，并在教师指导下进行小组讨论、完善实验方案，团结协作、共同实施，同时重视总结和实验报告的书写。

膜片钳记录钠电流实验结果

膜片钳记录钠电流实验结果膜片钳是一种用于记录细胞膜上离子通道电流的实验技术。

在钠电流实验中，膜片钳被广泛应用于研究神经元细胞膜上的钠离子通道的活动。

本文将详细介绍如何使用膜片钳记录钠电流实验结果。

一、实验目的通过使用膜片钳记录钠电流，我们可以了解神经元细胞膜上钠离子通道的特性和功能。

具体而言，我们可以研究钠离子通道的开放概率、电流大小和动力学特性等。

二、实验材料和设备1. 膜片钳：包括一个玻璃微电极和一个放大器。

2. 玻璃微电极：用于穿刺神经元细胞膜，并记录离子通道电流。

3. 放大器：用于放大微弱的离子通道电流信号。

4. 实验室常规设备：显微镜、注射器、培养皿等。

三、实验步骤1. 准备工作：a. 准备好玻璃微电极。

将一根玻璃毛细管拉制成细微的一端，并用火烧熔封，形成一个小孔。

b. 准备好实验室常规设备，确保实验环境安全和卫生。

2. 细胞准备：a. 选择合适的细胞进行实验。

可以使用培养的原代神经元细胞或转染表达特定蛋白质的细胞系。

b. 将培养皿中的细胞置于显微镜下，选择一个健康、完整的细胞。

3. 穿刺膜片：a. 将玻璃微电极连接到放大器上，并调整放大器参数，使其适应记录离子通道电流信号。

b. 控制玻璃微电极接近选定的细胞，并轻轻穿刺膜片，使其与玻璃微电极相连。

c. 在穿刺过程中，需要注意保持薄膜完整性和稳定性。

4. 录制钠电流：a. 穿刺成功后，将放大器参数调整到合适的范围。

通常需要设置合适的增益、滤波和采样频率等参数。

b. 开始记录钠电流。

通过施加一系列不同电压的脉冲，可以激活和测量钠离子通道的电流。

c. 记录一段时间内的电流数据，并保存以备后续分析。

5. 数据分析：a. 使用适当的软件对记录的数据进行分析。

可以计算钠离子通道的开放概率、电流大小和动力学特性等。

b. 可以绘制电流-电压曲线（I-V曲线）来描述钠离子通道的特性。

c. 进一步分析和比较不同条件下钠离子通道活动的差异。

四、实验注意事项1. 实验环境应保持安静和稳定，以避免噪音干扰。

哇巴因预处理对模拟缺血大鼠海马神经元NMDA电流的影响

ＥｆｃｆｏａａｎｐｅｒａｍｅｔｏｈＮＭＤＡｌｔｉｃｒｅｔｉｈｐｏａｐｌｎｕｏｓｆｓｎｌｔｄｆｔｏｕｂｉｒｔｅｔｎｎｔｅｅｅｅｒｃｕｒｎｎｉｐｃｍａｅｒｎｏｈｕａｅｃｉｈｍｉａｓｓｅａｒｔｃＷＡＮＧｈｏＨＣａ，ＺＡＮＧＺｈ．ＴｅｌｉａＴｉｌｅｔｒｅｅｒｖｎｉｌＰｅｐｅ’ＳｅｈＣｉｃｌｒＣｎｅ，ＨｂｉＰｏｉｃａｏｌｎａＨｏｐｔｌｓｉ，ａ
模拟缺血可促进ＮＡ通道开放。哇巴因预处理能保护神经元抵抗由ＮＡＭＤＭＤ
受体诱导的兴奋性神经毒性，此神经保护机制与哇巴因阻断缺血对ＮＤＭＡ受体的过度激活、解神经元缓
【关键词】ＮＤＭＡ受体；钠泵；模拟缺血；全细胞膜片钳【中图分类号】Ｒ３８３【文献标识码】Ａ【文章编号】１０７８（０１２ — ６５００２— ３６２１）４３８ — ３
ｉｅｅａｍｏｅｓｉｉｏｗｒｓａｌｈｄｂｐｌｉｇｏｙｅｎｌｃｓｅｒａｉｎｓｐｒｓｏｎｏｎｕｏｓＳｓｈｍｉｄｌｎｖｔｅｅｅｔｂｉｅｙａｐｙｎｘｇｎａｄｇｕｏｅｄｐｖｔｕｅｆｉｎｉｔｅｒｎＯｒｓｉｏｕ
ｐｏｔｔｅｐｎｎｏＮＭＤＡｒｍｏｅｈｏｅｉｇｆｐｔｗａ．ＯｕｂｉｐｅｒａｍｅｔａｐｔｃｈｐｏａａｎｕｏｓｇａｎｔａｈｙａａｎｒｔｔｎｃｎｒｅｔｉｐｃｍｐｌｅｒｎａｉｓｅｏＮＭＤＡ・ｎｕｅｅｒｔｘｃｔａｄｔｅａｔｎｍｅｈｎｓｉｃｏｅｙｃｒｅａｅｉｈｉｕｐｅｓｏｆｃｎｏｅｉｄｃｄｎｕｏｏｉｉｙ，ｎｈｃｉｃａｉｍｓｌｓｌｏｒｌｔｄｗｔｔｓｐｒｓｉｎｅｅｔｏｖｒｏｓａｔａｉｎｏｃｉｔｆＮＭＤＡｒｃｐｏｓｔｒｕｈｂｏｋｎｓｈｍｉｎｅｉｖｎｖｏｅｅｔｒｈｏｇｌｃｉｇｉｃｅａａｄｒｌｉｇＮＭＤＡ— ｄｃｄＣ “ ｏｅｌａ．ｅｉｕｅａｎｖｒｄｏ

降钙素基因相关肽对大鼠海马神经细胞钠离子通道的作用

－Ｉ，ｔｎ川ｎＰＬｌｌＨＩａｉｒｉ，ｉａｉ￣ｏｔ１１【ｉｌｉｌｔｆｌｌ￣，ｌｉ￣・ｗ（ｒｓｌ
ｉｎ
，ｕｐｌｌ … Ｉｌ』ｌｓ】ｎＩｎａ】ｒ・＿～７ｌｖ『Ｊ【土
Ｍｉｈｉｓ：ｌ【ｌｄＩＨｉ，ｉ１ ‘ ｌｈｔ — ＩＩｅｌｎｔｉ１１Ｋ，１ｄｓ￣ｉｅ－ｌ￣ｔ１Ｉａｉｔｎｌ］ｙ￣ｌ１１＇ｘａｌｎ，ｌ・ｋ “ Ｚ［１ｆ￣４
维普资讯
６
司
‘ Ｉ
．Ｉ＿１
２８
５２００６
降钙素基因相关肽对大鼠海马神经细胞钠离子通道的作用
房春燕。宁，．李韩慧蓉。琳，启，，王孙文史立宏‘康白，
①ＣＲＧＰ可以使大鼠海马神经细胞钠
通道电流的峰值增加４％；ｃｉ使其钠离子通道电流的激活曲线和稳态失活曲线产生显著的向超极化（１ ② Ｇ寅值）方向移动１ｍ０Ｖ左右：ＧＰ．７ ⑧ＣＲ８可以阻断ＣＲ３ＧＰ的上述作用结论 ①ＣＲＧＰ能够增加海马神经元钠离子
，。Ｗｅ－・ ¨ ¨ ．１ｎｑ一Ｉ（
ｔ＾ＮＪ¨ Ｋ【
［Ｔｒｅｔｈ￣ｔｎｔｍ
Ⅷｍ ∞ 。ｉｇ妇ｌＰ・ｅｍ２１４；ｐ＇ｃ［ｒｔｎｒｒ怅ｔｗｔｔＪｌｔ “ｔｗ蕾ｇ６０２’ ｉｎＭｒＬ３Ｉ／ｚｉ，￣ａ￣．ａ
选用】ｔＳ～７Ｄ大鼠，ｌ以酶消化加吸管吹打法急性分离其海马神经元细胞，用全细胞膜片钳

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK成年大鼠海马CA1锥体细胞BK1.成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的特性在海马，大电导Ca~(2+)激活K~+通道（BK_(Ca)通道）由动作电位上升相所进入的Ca~(2+)和膜去极化所激活，它介导了动作电位复极化和快后超极化电位（fAHP）的产生，且在调节静息状态时神经元兴奋性中也具有重要作用。

近年来，有关海马神经元BK_(Ca)通道的研究主要是用膜片钳技术在培养的或新生的神经元上进行的。

然而，大部分有关海马神经元BK_(Ca)通道在动作电位复极化和fAHP中的作用的研究则主要是在成年脑片或在体上进行的。

到目前为止，对成年海马神经元BK_(Ca)通道的特性还知之甚少，因此本实验应用膜片钳内面向外式研究了成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的特性。

当[Ca~(2+)]_i=0.01μM时开始观察到BK_(Ca)通道的活动，使BK_(Ca)通道激活一半（P_o＝0.5）的[Ca~(2+)]_i浓度为2μM。

当膜片两侧K~+相等时（140mM），BK_(Ca)通道的电导约为245pS；[Ca~(2+)]_i 为2μM时，膜电位每变化17mV时P_o呈e倍增加。

二级指数可较好地描述BK_(Ca)通道的开放时间（时间常数为2.07ms和14.36ms），表明BK_(Ca)通道存在两种不同的开放时间状态。

另外，BK_(Ca)通道偶尔还出现低电导开放状态，其单通道电流约为正常情况下单通道电流幅度的45％。

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的大电导、高[Ca~(2+)]_i敏感性可能是CA1锥体细胞成熟后动作电位时程变短的机制之一。

2．成年大鼠海马CAI锥体细胞BKh通道的调控门）磷酸化作用对 BKC。

通道的调控尽管有关磷酸化。

去磷酸化作用对BKC。

通道的调控己在大脑皮层神经元、垂体前叶神经终木、嗅球神经元进行过研究，然而目前尚无其对海马神经元BKC。

慢性应激抑郁大鼠海马miRNA的差异表达及生物信息学分析

中华行为医学与脑科学杂志2020年12月第29卷第12期Chin J Behav Med Brain Sci,December2020,Vol.29,No.12・1073・-基础研究-慢性应激抑郁大鼠海马miRNA的差异表达及生物信息学分析赛音朝克图'赵俊2罗彤$邓套图格'宋美丽彳艾丽雅彳阿茹娜'I内蒙古自治区国际蒙医医院，呼和浩特010065；2北京中医药大学针灸推拿学院100029；3内蒙古医科大学蒙医药学院，呼和浩特010110通信作者：赛音朝克图，Email:saiyin2012@【摘要)目的分析慢性应激抑郁模型大鼠海马组织miRNA表达特征,探究与抑郁发作相关的差异表达miRNA。

方法将12只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组和模型组，每组6只。

对照组大鼠群养,正常饮水摄食，不给任何刺激。

模型组大鼠孤养,并给予8种不可预知的慢性应激刺激28d,建立大鼠抑郁模型。

利用旷场实验检测大鼠的抑郁行为，运用miRNA 4.0Array芯片技术筛选出对照组和模型组大鼠海马间差异表达miRNA,利用Fisher精确检验，筛选出具有显著性差异的miRNA,采用miRanda和TargetScan两个数据库对显著性差异miRNA分别进行靶基因预测，取两种预测结果的交集，对差异表达miRNA利用GO数据库进行基因功能注释,KEGG数据库进行信号通路(Pathway)注释。

结果miRNA芯片技术分析结果显示，与对照组比较，模型组大鼠海马组织中得到25条差异表达miRNA,其中上调的miRNA有15条(P<0.O5,FC>1.3)，下调的miRNA有10条(P<0.O5,FC>1.3)。

这些miRNA的靶基因主要参与细胞内信号转导、RNA聚合酶II启动子转录的调节、DNA模板化、蛋白质磷酸化、大脑发育、心脏发育等生物学进程(P<0.01)o Pathway分析显示，轴突导向和癌症通路的显著性水平最为显著,其次是AMPK信号通路、cGMP-PKG信号通路、神经营养信号通路等抑郁发作的经典信号通路(P<0.05)。