任务三发酵罐实消接种
实验三 发酵罐使用及灭菌
四、操作步骤
L1523发酵罐操作流程 发酵罐操作流程 1、发酵前准备工作 、
1) 把进气过滤器、补料瓶、及可能用到的各种插针在高 把进气过滤器、补料瓶、 压锅内灭菌。 压锅内灭菌。 2) 打开水、电、空压机 打开水、 3) 打开发酵罐总电源 4) 校正 电极。之后插入发酵罐内 校正PH电极 电极。 5) 将提前配好的培养基放入罐内，并加入消泡剂。 将提前配好的培养基放入罐内，并加入消泡剂。
实验报告： 实验报告： 1、灭菌时为什么要搅拌？ 2、降温时为什么要通气？
A．到95℃时，系统出现提示，此时关小排气 关闭 ． 系统出现提示，此时关小排气(关闭 ℃ 后，回 旋1/3圈)，按“OK”。 圈， 。 B．当温度达到121℃时，较正 2零点。 ．当温度达到 较正PO 零点。 ℃ C．降温到100℃时，系统出现提示。此时，在火焰 ．降温到 系统出现提示。此时， ℃ 保护下接好进气插针，并通入压缩气体。 保护下接好进气插针，并通入压缩气体。 D．到达培养温度后，设定好转速、通气量后。此 ．到达培养温度后，设定好转速、通气量后。 时校正PO 时校正 2的100%。 。
3、清洗 、
在不开罐的情况下，放入水，加大转速即可。 在不开罐的情况下，放入水，加大转速即可。 废水可以从底阀排出。 废水可以从底阀排出。
4、关机 、
在关闭电源前，确认温度和转速处于“ 在关闭电源前，确认温度和转速处于“OFF”状 状 电源关闭后，及时关闭冷却水。 态。电源关闭后，及时关闭冷却水。发酵罐在不 使用的情况下，一般保持一定体积的清水。 使用的情况下，一般保持一定体积的清水。
实验三
培养基的制备、 培养基的制备、实罐灭菌 及接种反应器实罐灭菌，掌握无菌接种技术，掌握 学会反应器实罐灭菌，掌握无菌接种技术， 培养方法。 培养方法。 二、实验原理： 实验原理： 发酵罐能够提供微生物生长的适宜环境。 发酵罐能够提供微生物生长的适宜环境。 三、实验器材 发酵罐，带灭菌培养基等。 发酵罐，带灭菌培养基等。
发酵罐的空消与实消
教案首页
授课顺序学时日期年月日班级课
题
2.3 发酵罐的空消与实消
学习目标
通过老师的讲解和操作演示，学习、掌握蒸汽灭菌的原理，认识、熟悉蒸汽发生器，梳理蒸汽输入管道进罐路线，会进行空气过滤器蒸汽灭菌的保护操作，可以独立完成空消操作，可以独立完成实消操作。
主要内容（1）学习、掌握蒸汽灭菌的原理。
（2）学习发酵罐空消、实消两种灭菌方法。
（3）认识、熟悉蒸汽发生器，梳理蒸汽输入管道进罐路线。
（4）会进行空气过滤器蒸汽灭菌的保护操作。
（5）可以独立完成空消操作。
（6）可以独立完成实消操作。
教
学过程1、资讯→2、计划→3、决策→4、实施→5、检查→6、评价
教
具
或
工
具
工作任务单、DS-Y-10L操作手册等
载
体
DS-Y-10L发酵系统。
考核与评价采用工作任务单上的考核表进行评价，将评价结果记入期末总成绩，并填写教师评语部分。
轻工职业技术学院教案附页
2.3 发酵罐的空消与实消。
简述发酵罐实消和空消的工艺流程
简述发酵罐实消和空消的工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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发酵罐使用的基本流程有哪些
发酵罐使用的基本流程有哪些1. 准备工作在开始使用发酵罐之前，有一些准备工作需要做。
这些准备工作包括： - 清洁和消毒：确保发酵罐是干净的，并通过适当的消毒方法杀灭细菌和其他有害微生物。
- 准备培养基：根据实验的需要，准备适当的培养基填充发酵罐。
2. 接种菌种接种菌种是发酵罐中的关键步骤。
在接种之前，需要准备好菌种，并根据实验的需要进行相应处理。
接种菌种的步骤如下： - 从保存的菌种中挑取一小部分，并转移到无菌培养基中。
- 将培养基中的菌种均匀地分布在发酵罐中。
可以使用一根无菌的玻璃棒或者一次性医用级的移液管来进行。
3. 调节发酵条件发酵罐的发酵条件对于生产出优质的发酵产品至关重要。
调节发酵条件的步骤如下： - 温度控制：根据菌种的要求，调节发酵罐的温度。
温度的调节可以通过加热或者冷却系统来实现。
- 氧气供应：某些菌种需要氧气来进行呼吸作用，因此需要保证发酵罐中的氧气供应充足。
可以使用搅拌机来增加氧气的溶解度。
- pH控制：不同的菌种对于pH值有不同的要求，因此需要根据菌种的需求调节发酵罐中的pH值。
- 随时间变化的参数：在发酵过程中，一些参数如溶解氧浓度、培养基的营养物质浓度等可能会发生变化，需要进行监控和调节。
4. 监测发酵过程在发酵过程中，需要定期监测和记录发酵罐中的各种参数，以确保发酵过程的正常进行。
这些参数包括： - 温度：发酵罐中的温度需要定期测量，并根据需要进行调节。
- pH值：发酵罐中的pH值需要定期测量，并根据需要进行调节。
- 溶解氧浓度：发酵罐中的溶解氧浓度需要定期测量，并根据需要进行调节。
- 生长曲线：监测菌种的生长曲线是评估发酵过程的有效方法之一。
5. 收获和处理发酵产物在发酵过程结束后，需要将发酵产物从发酵罐中收获出来，并进行后续的处理。
这些处理步骤可能包括： - 分离和提纯：将发酵产物中的目标物质分离出来，并进行进一步的提纯。
- 干燥和包装：将发酵产物进行干燥处理，并根据需要进行适当的包装，以延长产品的保质期和使用期限。
发酵罐操作规程
发酵系统操作规程一、发酵前准备工作（1）检查电源是否正常，空压机、微机系统和循环水系统是否正常工作。
（2）检查系统上的阀门、接头及紧固螺钉是否拧紧。
（3）开动空压机，用0.15Mpa压力，检查种子罐、发酵罐、过滤器、管路、阀门等密封性是否良好，有无泄漏。
罐体夹套与罐内是否密封（换季时应重点检测），确保所有阀门处于关闭状态（电磁阀前方的阀门除外）。
（4）检查水（冷却水）压、电压、气（汽）压能否正常供应。
进水压维持在0.12Mpa，允许在0.15-0.2Mpa范围变动，不能超过0.3Mpa，温度应低于发酵温度10℃；单相电源AC220V±10%，频率50Hz，罐体可靠接地；输入蒸汽压力应维持在0.4Mpa，进入系统后减压为0.24MPa；空压机压力值0.8Mpa，空气进入压力应控制在0.25-0.30MP（空气初级过滤器的压力值）。
（5）温度、溶氧电极、PH电极校正及标定，详见触摸屏PH、DO的标定帮助。
（6）检查各电机能否正常运转（共4个）。
电磁阀能否正常吸合（整套系统共11个电磁阀）。
二、灭菌1.发酵系统安装好后的初次清洗罐内的清洗：酸碱罐、补料罐、种子罐可将罐体上方的法兰卸开，由操作工采用洁净布手动清洗，结束后排尽罐内的污水，在多冲洗几遍即可。
发酵罐的清洗可采用自来水管通过手孔向罐体内壁冲洗，当水位上升到搅拌轴的第二片叶轮时停止冲洗，开动电机搅拌清洗。
各管路的清洗，可以先采用清水冲洗，再根据相应功能采用相应的清洗介质（清洗管路时应以保护管路中的各种元件为前提），具体步骤可参考“空气管路的灭菌”。
如果发酵系统长时间不用或培养的菌体与上一批次的不相同时，可采用2%NaOH清洗，其他各罐也可以采用发酵罐的清洗方式清洗，清洗结束后应对发酵系统灭菌。
2.空气管路的灭菌（1）空气管路上的除菌过滤器，使用蒸汽通过减压阀（空气减压阀不能进行蒸汽灭菌，所以空气预过滤器不灭菌）、蒸汽过滤器然后进入除菌过滤器。
实罐灭菌实验报告
一、实验目的1. 理解实罐灭菌的概念和原理。
2. 掌握实罐灭菌的操作步骤和注意事项。
3. 通过实验验证实罐灭菌的效果。
二、实验原理实罐灭菌是一种将培养基放入发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将培养基和容器加热至灭菌温度后维持一定时间，再冷却到接种温度的灭菌方法。
该方法无需专门的灭菌设备，灭菌效果可靠，但温度低、时间长，对培养基成分破坏较大。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基2. 发酵罐：5L通气机械搅拌发酵罐3. 蒸汽发生器4. 温度计5. 秒表6. 冷却水四、实验步骤1. 空消：将发酵罐用蒸汽进行灭菌，消除所有死角的杂菌，保证系统处于无菌状态。
具体操作如下：- 将发酵罐内加入适量的水，开启蒸汽发生器，调节蒸汽压力至0.13MPa。
- 维持蒸汽温度在121℃左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水。
- 对气路、料路、种子罐、发酵罐进行灭菌，空消时间大约为30到40分钟。
- 当设备初次使用或长期不用的情况下，最好采用间歇灭菌的方法，即第一次空消结束后，间隔3到5个小时再空消一次，以便杀死芽孢。
- 蒸汽减压阀必须调整在0.13MPa，不得超过0.15MPa。
- 空消时，应将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13～0.15MPa。
- 空消结束后，应将罐内冷凝水排掉，并将排空阀门打开，防止冷却后罐内产生负压、损坏设备。
- 空消时，溶氧、pH电极取出，可以延长其使用寿命。
2. 实消：当罐内加入培养基后，用蒸汽对培养基进行灭菌。
具体操作如下：- 将配好的培养基从加料口加入罐内，此时夹套内应无冷却水。
- 开启蒸汽发生器，调节蒸汽压力至0.13MPa。
- 维持蒸汽温度在121℃左右，维持一定时间，以确保培养基和容器内所有微生物被杀灭。
- 实验过程中，应密切观察罐内压力、温度变化，确保灭菌效果。
- 灭菌结束后，关闭蒸汽发生器，将发酵罐冷却至接种温度。
五、实验结果经过实罐灭菌处理后，培养基和发酵罐内均无杂菌生长，说明实罐灭菌效果良好。
任务三发酵罐实消接种
任务三：发酵罐实消、接种子任务二；发酵罐接种引导课文通过本任务的学习你应该能够掌握下列知识：1．掌握小型发酵罐无菌接种的原理和方法。
2．理解杂菌污染的途径和防治方法。
3. 掌握接种安全操作规程通过操作训练你应该具有下列能力：1. 能进行发酵罐无菌接种操作。
2．对接种异常问题能及时预见、反应、处理。
3. 能严格按照安全操作规程进行操作。
前面我们已经制备了符合要求的产黄青霉菌种子，进行了发酵罐的清洗及空消、实消，接下来的任务就是进行接种了，那么发酵罐接种的知识你了解多少呢？一、无菌接种的必要性：案例：山东省某大型制药企业的2号发酵生产车间连续发生染菌污染事件，且每次杂菌的种类基本相同，分析可能染菌的原因，提出检查方案和防治措施。
分析：若排除了管路灭菌、空消、实消不彻底而导致染菌的因素外，能导致污染的另外一个原因就是接种操作不规范引起的。
我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在上罐之前，发酵人员必须具备以下两种意识：⏹无菌意识⏹安全意识二、接种量的确定接种量指移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。
但接种量过大或过小，均会影响发酵。
接种量过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而却会过多移入代谢废物；接种量过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。
通常接种量：细菌1-5%，酵母菌5-10%，霉菌7-15%，有时20-25%。
二、发酵罐接种的方法一般情况下，发酵罐接种有三种方法：①火圈直接倒种②注射器接种③压力差接种。
前两种方法适用于小型发酵罐，第三种方法适用于大型工业化生产发酵罐。
1、火圈直接倒种法操作规程如下：⏹当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。
⏹准备合格的摇床菌种。
发酵罐灭菌接种操作规程
发酵罐灭菌接种操作规程发酵罐灭菌接种操作规程操作前请认真检查冷水机、空压机、反应器、进出水管、气管情况。
填好使用说明书。
开机：先打开其他单元上的开关，再打开主机背后的开关。
关机：先把控制器上所有单元的参数状态调到off，把进气开关打开后关机；关机时先关控制器后面的开关，再关其他单元上的开关。
灭菌操作1、取下马达，平放于桌上。
罐顶端套上黑色保护帽。
2、由罐上取下温度传感器，该传感器不需要灭菌。
3、取下PH电缆线，盖上红色保护帽；将PH电极要插到底。
务必拧紧电极的上下两个固定螺帽。
PH电极灭菌前要标定。
PH电极标定：接好电缆后拧开电极的固定螺帽（第一个），将PH电极取出后用去离子水冲洗干净后，轻轻用面纸吸干上面的水后先放入标准溶液4.01中校正，等控制器上数据稳定后在 set zero处输入4.01（不管实际数值的微弱差别）；输入完闭后从标准液中取出电极，冲洗、吸干后放入7.00的标准溶液中，等控制器上数据稳定后在set span处输入7.00（不管实际数值的微弱差别）。
PH电极校正后不要关控制器。
4、取下DO电缆线，DO电缆接口处用锡箔纸包好后套上黑色帽。
DO电极灭菌完后标定。
DO电极要插到底，拧紧电极的上下两个固定螺帽。
灭菌前要注意溶氧电极里头的保护液是否还有，没有则要进行添加。
5、取下消泡或液位电缆线，将消泡或液位电缆插到底，灭菌后定位到所需要的高度后就不要再压下去。
消泡电极的高度离液面约1.5cm处。
6、拆下发酵罐上和冷凝器上的进、出水管，拆下的同时要用夹子夹住拆下水管的接头处，以防水流出。
7、发酵罐上的过滤器的两端多要用夹子夹死，过滤器的出口处用锡箔包好，所有过滤器的两端多要用夹子夹住。
发酵完毕倒罐后注意检查过滤器是否被打湿，若有则赶快用吸球将其中的液体吹出。
8 、用铁夹夹死收获管上的硅胶管以防在灭菌锅内跑液。
收获管不用时上面一定要卡死不移走。
9、在灭菌前.将发酵罐的六个固定螺帽拧松出气，其他螺帽一定要拧紧！灭菌完后打开高压锅后立刻将其拧紧，注意戴上手套防止被烫伤。
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任务三：发酵罐实消、接种
子任务二；发酵罐接种
引导课文
通过本任务的学习你应该能够掌握下列知识：
1．掌握小型发酵罐无菌接种的原理和方法。
2．理解杂菌污染的途径和防治方法。
3. 掌握接种安全操作规程
通过操作训练你应该具有下列能力：
1. 能进行发酵罐无菌接种操作。
2．对接种异常问题能及时预见、反应、处理。
3. 能严格按照安全操作规程进行操作。
前面我们已经制备了符合要求的产黄青霉菌种子，进行了发酵罐的清洗及空消、实消，接下来的任务就是进行接种了，那么发酵罐接种的知识你了解多少呢？
一、无菌接种的必要性：
案例：山东省某大型制药企业的2号发酵生产车间连续发生染菌污染事件，且每次杂菌的种类基本相同，分析可能染菌的原因，提出检查方案和防治措施。
分析：若排除了管路灭菌、空消、实消不彻底而导致染菌的因素外，能导致污染的另外一个原因就是接种操作不规范引起的。
我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以
后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在上罐之前，发酵人员必须具备以下两种意识：
⏹无菌意识
⏹安全意识
二、接种量的确定
接种量指移入的种子液体积与接种后培养液体积的比例
接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度，采用较大的接种量可以缩短发酵罐中菌丝繁殖达到高峰的时间，使产物的形成提前到来，并可减少杂菌的生长机会。
但接种量过大或过小，均会影响发酵。
接种量过大会引起溶氧不足，影响产物合成；而却会过多移入代谢废物；接种量过小会延长培养时间，降低发酵罐的生产率。
通常接种量：细菌1-5%，酵母菌5-10%，霉菌7-15%，有时20-25%。
二、发酵罐接种的方法
一般情况下，发酵罐接种有三种方法：①火圈直接倒种②注射器接种③压力差接种。
前两种方法适用于小型发酵罐，第三种方法适用于大型工业化生产发酵罐。
1、火圈直接倒种法操作规程如下：
⏹当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。
⏹准备合格的摇床菌种。
⏹用酒精棉擦洗罐顶接种口，并在接种口四周围上酒精棉。
接种者的双手也需用酒精
棉擦洗消毒、晾干。
⏹调进气阀，减少进气量（不能关闭，否则罐压跌零，引起污染），拧松接种口螺母；
检查罐内压力是否在0.01MPa以下（如不在应开大排气阀或调进气阀，减少进气量），点燃接种口四周的酒精棉；拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛有酒精的培养皿中。
⏹将菌种瓶的瓶口在火焰上烧一会儿，并在火焰下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐
内。
⏹盖上接种口螺母，灭火焰，拧紧螺母；并用酒精棉将接种口擦洗干净。
⏹调节进气阀及排气阀，达到工艺要求的通气量及保持罐压。
图示：火圈直接倒种法
2、注射器接种法：
灭菌及罐压调节都同于火圈直接倒种法。
此时准备无菌注射器，预先在超净台上将菌种液体吸入注射器内，无菌操作将菌种注射入发酵罐内。
此种方法尤其适合于微小型发酵罐（容积在5L）以下。
3、压力差接种：
●移种前应先路内的冷凝水随时可以排空。
●移种时在关闭蒸汽阀后应当立即进行移种，避免造成负压污染。
●采用压差移种即P小大于P大，移种前对移种管道、阀门蒸汽灭菌20min，P
小0.05 Mpa，P大0.03Mpa，打开移种管道上的阀门，通过压差作用转罐，移
种结束后立即关闭移种阀，然后打开与之联通的蒸汽阀通入蒸汽进行冲刷消毒，
并立即清洗种子罐，防止发酵料粘结在管道阀门及罐壁上，消毒后立即关闭蒸
汽阀门和排冷凝水的阀门及管帽。
三、我们实验室发酵罐接种操作及注意事项
●注意事项：
1.环境：关闭车间门窗和排气扇，接种环境周围禁止人员来回走动，降低空气流动
性；
2.无菌：倒摇瓶需靠在火焰附近，三角瓶不可倾斜过度，避免种子液流出；接种操
作过程中罐压不能掉零；
3.安全：三角瓶靠近火焰倾倒，但需注意操作人员应离开火焰一段距离，穿好防护
服，严禁穿羽绒服、尼龙等易燃衣物；女生不可披头发、带丝巾操作；点燃火焰
圈不可随处乱扔，熄灭以后才可以继续操作。
●准备操作
➢准备好接种所需材料
➢关闭门窗、排气扇
➢操作人员合理分工，一个为主操作，一个为副操作
●消毒
➢副操作用酒精棉擦拭接种口进行消毒
➢消毒以后用火焰保护好接种口
●接种
1.本系统采用火焰封口接种，接种前应事先准备：酒精棉花、钳子、镊子、
接种环、石棉网手套、Z字扳手。
2.菌种装入三角烧瓶内，接种量根据工艺要求确定。
3.将酒精棉花围在接种环周围点燃，将菌种瓶口在火焰上烧一会儿，用Z
字扳手拧开接种口，迅速将菌种倒入罐内，此时应向罐内通气，使接种
口有空气排出（压力接近与零，但不能为零）。
4.将接种口盖在火焰上灭菌后拧紧。
接种后，罐压保持在0.03-0.07Mpa
（0.05Mpa），调节通风量。
●消毒
➢副操作用酒精棉擦拭接种口消毒以后迅速盖上接种盖，设置好参
数后进行培养
任务工单
任务：阅读完引导文后，请结合网络资料查阅设计我们实验室小型发酵罐的接种方案，内容至少包括：接种准备（药品、器具、发酵罐压力调试）、接种量确定、接种操作（分组，主操作与副操作）、接种后压力调试。
❖接种准备
药品：
器具:
接种量：
接种前调节发酵罐压力至：
❖接种操作
组号：，成员：
主操作：；主要职责：
副操作：；主要职责：
❖接种后操作：
消毒工作：
发酵罐压力调试：
❖请总结下本次任务安全操作注意事项：。