紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析
高效液相色谱法测定复方立止咳颗粒中紫菀酮的含量
８ ％、０ ％、２ ％的紫菀酮对 照品溶液 ，按 质量标准制 备 ６ ０ １０ １０ 份供试液 ， 分别进样 ， 测定 回收率 ， 计算相对标准偏差 。结果
ｈ超声处理 ， ， 取出放冷， 滤过， 用三氯甲烷 ２ １ ０ 分次洗涤容 ｍ
１ 资 料 与 方 法
１ 仪器与试药 ． １ Ａ ｉ ｎ １０ 高 效 液 相 色 谱 仪 ，检 测 器 ： Ｖ－ｌ ， ｇ ｅｔ １０ ｌ ｕ Ｖ Ｓ Ａ Ｗ１０ Ａ １ ０ Ｕ ２ Ｄ， Ｓ— ０自动进样 器 ， Ｐ １Ｄ十万分之一 电子天 １ Ｂ ２ １ 平 （ 国 Ｓａｔ ｉｓ ； 德 ｔｒ ｒ ） 乙腈 为 Ｈ Ｌ ｏｕ Ｐ Ｃ级 ， 为纯化水 ； 水 紫菀酮对
ｇ共 ６份 ， ， 测定紫菀酮 含量 ， 算相对标 准偏差 ， 计 结果表 明 ， Ｒ Ｄ值为 １ ６ Ｓ ． ％。表明该方法重现性 良好 。 ８
ｎ ｍ。理论塔板数按紫菀酮计算应不低 于 ３０ 。 ０ ０ １ ． 对照 品溶 液的制备 ［： 密称取紫莞 酮对照 品 ５ｍ ， ．２ ２ ２精 ］ ｇ
见表 １紫菀酮的平均回收率为 １１ ６ Ｒ Ｄ值为 １ ３ ， ０． ％，Ｓ ０ ． ％。 ３
表 １ 回收率实验结果
１ ． 样 品测定干扰性试验 ： 上述 色谱 条件 ， ．１ ２Ｏ 按 分别 取供 试
式计算含量 ：
Ｍ 含量 （ 袋 ） —ｘＡ ｘ ２５ ｘ ｌ － ｍ ＝ Ｃｘ ｘ ｘ ０ Ｏ ３
中国药物与临床 ２ １ 年 ４ ０２ 月第 ｌ 卷第 ４ Ｃ ｉ ２ 期 ｈｎ
！
ｅ鱼 ｓ
巳！
・４ ７ ・ ５
紫菀(紫菀酮)高效液相色谱图(对照和样品)
<色谱图>
采集人: Admin 样品名称: 紫菀 样品 ID : 紫菀酮 进样体积: 20 uL
数据文件名: 紫菀（技术部样）对照02.lcd 方法文件名: 紫菀方法.lcm 批处理文件名:
报告文件名: Default.lcr
数据采集: 2010-8-2 10:55:49
数据处理: 2010-8-2 16:30:32
峰表
检测器 A Ch1 200nm 峰# 1 总计
保留时间 47.462 面积 1944877 1944877
高度 34377 34377
面积 % 100.000 100.000
高度 % 100.000 100.000
理论塔板# 16248.163
２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）
<色谱图>
采集人: Admin 样品名称: 紫菀 样品 ID : 紫菀酮 进样体积: 20 uL
数据文件名: 紫菀（技术部样）样品001.lcd 方法文件名: 紫菀方法.lcm 报告文件名: Default.lcr
数据采集: 2010-8-2 13:33:56
数据处理: 2010-8-2 16:27:17
峰表
检测器 A Ch1 200nm 峰# 1 总计
保留时间 48.071 面积 2540849 2540849
高度 43793 43793
面积 % 100.000 100.000
高度 % 100.000 100.000
理论塔板# 16390.375
２０１０版药典方法，岛津ＬＣ－２０１０Ｃ，迪马柱子（Ｃ１８＼２５０＊４０６）。
中药材高效液相色谱指纹图谱研究概述
指 纹图谱 ： 色谱条件 ， 依利 特 Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ 色谱 柱 （ ２ ０ ０ ｍ ｍ Ｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ ｍ） ； 柱 温 ４ ０ ℃； 流 动相 为 甲醇 （ Ａ相 ） 、 ６ ｍ ｍ ｏ ／ Ｌ— Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ （ Ｂ相 ， Ｈ Ｐ Ｏ 调 ｐ Ｈ ６ ． ５ ） ， 梯 度 洗脱 。流速 ０ ． ６ ｍ ｌ ／ 分； 检测 波 长 分段 用
科研人员对 指纹 图谱分 析技术 进行 了大
量研究 ， 取得 了可喜 的成绩 。中药指纹 图
谱 的研究 已经从早 期 只对单一 谱 图进行
简单评述 的阶段 ， 发展到利用计算机技术
雷海 民等 ｊ 报道， 不 同产地 牛 蒡 子
药材 Ｒ Ｐ—ＨＰ Ｌ Ｃ指 纹 图谱 研 究 ， 由于采 用梯度洗脱 的方式 ， 各批次供试 品指 纹图 谱 中色谱峰保 留时间可能不一致 ， 故 相似 度计算时未采用 自动校正方式 ， 而是使 用
获 取 的 色谱 条 件 ， 供 试 品 制备 方 法及 评 价
研 究等 ３个 方 面进 行 阐述 。结 果 ： 中药 指
数的一致性 ） ， 且稳定， 制 定 的指 纹 图谱
可对 白术药材组 分群体 特征 的一 致性作 出判断 。白术指 纹 图谱 有 自身化 学条码 的特征 ， 是其 内在化学成分种类与数量 的
色谱指纹图谱 ， 流速 ０ ． ５ ｍ ｌ ／ 分， 检 测波长 ２ ５ ０ ｎ ｍ， 其他色谱条件与 白术基本相 同。
李小 燕 等 报 道 ， 广 西 粉葛 药 材 高 效液相色谱指纹 图谱 的研究 ， 用 乙腈 一 ０ ．
高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定紫菀止咳冲剂中紫菀酮的含量
高效液相色谱法蒸发光散射检测器测定紫菀止咳冲剂中紫菀酮
的含量
李萍;范向红;李秀萍;张彬
【期刊名称】《中国药物与临床》
【年(卷),期】2004(004)010
【摘要】紫菀止咳冲剂为紫菀、知母、百合、川贝等中药组成的经水煎取的冲剂，具有化痰止咳的功能。
为了进一步提高中药的产品质量标准，达到质量可控，对该制剂中的君药紫菀的有效成分紫菀酮，采用高效液相色谱法(HPLC)测定含量。
【总页数】1页(P804)
【作者】李萍;范向红;李秀萍;张彬
【作者单位】山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省活血化瘀研究所药剂科,030001;山西省药品检验所中药室
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.HPLC法测定雪梨止咳糖浆中紫菀酮的含量 [J], 郭迎霞
2.薄层扫描法测定止咳清肺口服液中紫菀酮的含量 [J], 张旭;佟志清;姜铁夫;汪宇;
李长见
3.高效液相色谱法测定复方立止咳颗粒中紫菀酮的含量 [J], 张颖娟;郭阿霞
4.HPLC法测定紫菀止嗽颗粒中紫菀酮的含量 [J], 张军;于红宇;蔡晓燕;罗绮祺
5.薄层扫描法测定蝉蜕止咳颗粒中紫菀酮的含量 [J], 秦文杰;马开;高寒;曲彩虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的探讨
２０００年７月第２２卷第７期中成药ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＰａｔｅｎｔＭｅｄｉｅｉｎｅＪｕｌｙ，２０００Ｖ０１．２２Ｎｏ．７［中药指纹图谱］高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱的探讨屠鹏飞（北京大学医学部药学院，北京１０００８３）中图分类号：Ｒ２８４．１文献标识码：Ｂ文章编号：１００１—１５２８（２０００）０７—０５１６—０１１建立特征指纹图谱的意义特征指纹图谱是指某种（或某产地）中药材或中成药中所共有的、具有特异性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。
其特点在于：（１）通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别样品的真伪或产地；（２）通过指纹图谱主要特征峰的含量或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保样品质量的相对稳定。
因此，在有效成分不完全明确的前提下，特定中药材或中成药的特征指纹图谱，对于有效地控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。
目前指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。
２用ＨＰＬＣ法建立特征指纹图谱的方法学考察特征指纹图谱必须具备特异性、重现性和再现性。
为此，必须进行严格的方法学考察。
２．１样品处理方法考察样品处理包括：样品提取方法、提取溶剂、纯化方法等考察。
应选择提取率高、操作简便的提取、纯化方法。
在选定提取、纯化方法后，必须考察１０份以上同一批号的样品，要求１０份样品的指纹图谱完全一致，特征色谱峰面积的ＲＳＤ％不得大于５％。
２．２特征指纹图谱确定对于所含成分类型相同或相似的中药材或注射剂，可以采用一张指纹图谱；对于所含成分类型较多的中药材或注射剂（尤其是复方中药注射剂），应根据所含成分类型，制作多张指纹图谱。
确定特征指纹图谱必须具有充分的代表性和特异性，至少对１０个产地以上不同等级的样品进行分析，或对同一产地不同规格的１０批以上的样品进行考察，从中归纳出各批合格样品所共有的、峰面积相对稳定的色谱峰作为指纹峰。
所选取色谱峰的组合必须具备特异性，对于原药材多来源的品种，必须考察种间的特异性。
高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用(6)
1-2色谱条件及系统适用性试验 Cromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm， 5µ m)；流动相乙腈50mmol· -1磷酸二氢钾 L 溶液(磷酸调pH 3.0) (50:50)，内含SDS 12.5mmol· -1；检测波长345nm；流速 L 1mL· -1；柱温为室温；进样量10µ min L； 盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱与 其他峰的分离度均大于1.5。
2方法与结果 2-1稳定性试验 取酒制黄连供试液，分别于0，2， 4，6，8，12，24，36，48h进样10µ L， 记录指纹图谱。 2-2精密度试验 取酒制黄连供试液，重复进样6次， 记录指纹图谱。
2-3重复性试验 取酒制黄连药材粉末6份，精密称定， 按1-1项下方法制备供试液，分别进样， 记录指纹图谱。结果表明，各主要色谱 峰相对保留时间和相对峰面积比值无明 显变化，RSD分别为0.02%~1.02%和 1.24%~ 1.93%，符合指纹图谱要求。
2-4指纹图谱的建立
2-5相似度计算与系统聚类分析
图2 黄连不同炮制样品聚类谱系图
1.5.3中药提取物或制剂中间体的质量 评价
示例一： 穿心莲提取物的HPLC指纹图谱研究 蒋珍藕，饶伟源，陈秋虹，等. 中成药, 2008,30(2):243.
1-1色谱条件和系统适用性试验 Waters C18色谱柱；以乙腈为流动 相(A)和0.1%磷酸溶液为流动相(B)进行 梯度洗脱，流速：1.0mL/min；检测波 长为254nm；柱温：25℃。记录60min 色谱图，35min以后没有出峰，说明 35min内穿心莲提取物成分出峰完全。
虽然无论是原药材、中间体还是成 品，都因组方已固定、生产工艺相对恒 定，而使药品的安全性不可能直接通过 指纹图谱来保障，但因为中药指纹图谱 可直接解决中间体、成品的批间一致性 及稳定性问题，从而可以间接并最终保 障成品的安全性和有效性。
高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用
几种特征成分（如色谱指纹图谱）以保证制剂和产品质量的一致”［２］。
我国国家药品监督管理局２０００年颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》，要求到２００２年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料， 使中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。
为实现中药材、中成药质量标准现代化，使中药走向世界，研究建立指纹图谱对实现中药质量标准现代化具有重要的意义。
２ 高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用２．１ 高效液相色谱法构建中药指纹图谱应用于中药材的真伪鉴别及质量评价由于高效液相色谱仪的诸多优点并能对中药样品中含有的绝大多数成分进行分析检测及质量评价，故高效液相色谱技术已成为当前研究中药指纹图谱的主要手段。
欧洲国家现在普遍采用高效液相色谱法对植物药物中已知及未知组分进行控制，并形成相应的规范。
因此高效液相色谱法在构建中药指纹图谱对中药的定性鉴别与定量分析中得到广泛应用。
采用高效液相色谱法测定指纹图谱可对中药材的产地、采收时间、加工方法、工艺流程等多方面通过化学成分的差异来反映中药材的种属差异、真伪鉴别等，从而达到控制中药质量的目的。
刘梅［３］等采用ＨＰＬＣ色谱指纹图谱可以快速、准确对药材夏天无和延胡索进行定性鉴别。
张玉杰等［４］对不同产地正伪品沙苑子及伪品的主要有效成分黄酮类进行利用ＨＰＬＣ指纹图谱进行鉴别研究，研究显示不同来源的正品沙苑子ＨＰＬＣ指纹图谱十分相似，而２种伪品则显示出完全不同的指纹图谱特征，得出ＨＰＬＣ指纹图谱特征可以作为沙苑子质量评价和药材鉴别的依据。
李磊等［５］以不同产地正宗丹参和市场上充作丹参的其他鼠尾草属植物为分析对象，采用ＨＰＬＣ法构建丹参ＨＰＬＣ指纹图谱，可鉴别不同来源丹参与其他鼠尾草属丹参伪品。
高效液相色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用许一平１ 罗启恩２１．山东中医药高等专科学校 ２６５２００２．莱阳农学院 ２６５２００高效液相色谱法（Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）是在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种新的色谱技术。
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析【关键词】高效液相色谱法摘要：综述了高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱在中药质量操纵方面的应用，并通过供试品的制备、标准品的选择、结果分析方式来论述中药指纹图谱的应用现状，指出高效液相色谱法应用于中药指纹图谱中现有不足的地方和以后的进展方向。
关键词：高效液相色谱；中药指纹图谱Application and Analysis of Fingerprint in Traditional Chinese Medicine by HPLCAbstract:This paper summarized the application of fingerprint of traditional Chinese medicine by HPLC to the quality also reviewed the actuality of fingerprint in traditional Chinese medicine through the preparation for sample,the choice for standard sample,and the method of result pointed out the main problems at present and the prospective future in application of fingerprint of traditional Chinese medicine by HPLC.Key words:HPLC; Fingerprint of Traditional Chinese medicine当前，中药指纹图谱技术在国内外已成为一种进展趋势。
第一是美国食物与药品治理局(FDA)许诺草药保健品申报资料能够提供色谱指纹图。
世界卫生组织(WHO)在1996年草药评判指导原那么中也规定：若是草药的活性成份不明，能够提供指纹图谱以证明产品质量的一致。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生长在同一地段而致误采。
其二是三脉叶马兰生长范围较广而且量多，某些药农见利忘义有意伪充。
４．２药材切成饮片后，形状上较难分辩，但二者的头状花序较易区分，刘寄奴的呈椭圆形，白色似米粒，小花全为管状花，其叶脉羽状，无离基三出脉。
药材具芳香气，味淡。
而三脉叶马兰头状花序呈半球形，较大，小花有舌状花和管状花，其叶有离基三出脉和羽状脉。
气微，苦、辛。
４．３二者的显微特征差别较大，刘寄奴药材表面具“Ｔ”字形非腺毛，腺毛顶面观呈鞋底形；叶主脉底部钝圆略呈圆锥形，上表面稍突起，且中央微凹。
叶图６三脉叶马兰的粉末显微特征１．非腺毛２．草酸钙针晶３．方晶４．腺毛５．簇晶６．花粉粒７．叶下表皮及气孔肉组织与茎髓薄壁细胞中有草酸钙簇晶散在。
三脉叶马蓝无“Ｔ”字形非腺毛，叶主脉上下面突起明显，底部钝圆呈半圆形。
髓部薄壁细胞内含多数短小的草酸钙针晶。
二者花粉粒的形态和大小，表面特征差异也较明显。
参１处理２０ｍｉｎ，过滤，取滤液加９５％乙醇稀释至适量浓度。
于岛律ＵＶ２４５０型紫外分光度计上，在２００—４００ｎｍ波长范围内测定其紫外光谱。
结果：刘寄奴考文献在３３０ｎｍ波长处有一最大吸收峰，在３００ｎｍ波长处有肩峰；而三脉叶马兰仅在３２９ｎｍ波长处有一最大吸收峰。
４４．１中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究所等．中药志．第四册．ｊＥ京：人民卫生出版，１９８８：４３讨论刘寄奴的混杂原因可能有二：其一是二者均２李时珍．本草纲目（校点本，上册）．北京人民出版社，１９９ｌ：９５９来源于菊科植物，在开花之前茎叶的形状和色泽均有相似之处，其生长环境与习性相似，且二者常混杂（２００３一１１—２６收稿）紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析周军辉１伍蔚萍１谢子民２孙文基ｈ（１．西北大学陕西省生物医药重点实验室，西安７１００６９；２．西安市药品检验所，西安７１００６８）摘要目的：建立紫菀药材的反相液相色谱定性和定量鉴别分析方法。
方法：ＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅＯＤＳＣ。
色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５斗ｍ），流动相为甲醇－乙腈（１：２）－０．４％磷酸梯度洗脱，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为３６０ｎｍ，柱温为２５℃。
紫菀药材经８０％甲醇超声处理，进行指纹图谱分析，并对紫菀药材中的主要成分槲皮素进行含量测定。
结果ｉ在该色谱条件下，６份不同紫菀药材的ＲＰ－ＨＰＬＣ指纹图谱中可检出１０个共有峰作为定性鉴别；紫菀药材中槲皮素的含量在０．１３５％一０．２４６％之间。
结论：本方法样品处理简便，准确性好，可用于紫菀药材的质量控制。
关键词紫菀槲皮素反相高效液相色谱法紫菀为菊科植物ＡｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓＬ￡的干燥根在我们制定的紫菀指纹图谱中，含有分离较好的槲皮素色谱峰，这样，既可以得到指纹图谱提供的紫菀化学成分组成信息，又可测定槲皮素有效成分的含量。
１及根茎，有润肺下气、消痰止咳的功能，用于痰多喘咳，新久咳嗽，劳嗽咳血，是许多常用的止咳平喘复方中药制剂中的重要药物之一。
槲皮素（ｑｕｅｒｃｅ．ｔｉｎ）为紫菀中已知的有效成份之一，现代药理研究表明，它具有较好的祛痰、止咳和一定的平喘作用。
－５６２・仪器与试药ＢｅｃｋｍａｎＧｏｌｄＳｙｓｔｅｍ高效液相色谱仪，包括中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据１２５泵、１６８ＰＤＡ二极管阵列检测器、自动进样器和３２Ｋｒａｔ工作站。
甲醇、乙腈均为色谱纯（ＴＥＤＩＡ，美国）；其它试剂均为分析纯。
槲皮素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号００８１－９９１５）。
６份紫菀药材分别采自河北祁州（２００２年９月和２００３年５月），购自西安空军４５１医院、陕西西安藻露堂药店、河北某地及河北定州，分别编号为２０９０１、３０５０１、３０９０１、３０９０２、３０９０３、３０９０４。
以上样品均经过陕西省生物医药重点实验室鉴定，留样保存于陕西省生物医药重点实验室。
以上样品粉碎后过４０目筛，６０。
（２干燥１ｈ，密封保存，待用。
２实验部分２．１对照品溶液的配制精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每１ｍｌ含２７¨ｇ的溶液，摇匀。
２．２供试品溶液的配制精密称取紫菀粉末１．００９，置具塞锥形瓶中，精密加入２０ｍｌ８０％甲醇溶液，超声３０ｍｉｎ，取出，放冷，补足减失重量，离心，取上清液１０ｍｌ，蒸干，加入适量８０％甲醇溶解，转移至５ｍ１量瓶，用８０％甲醇稀释至刻度，０．４５斗ｍ滤膜过滤。
２．３色谱条件的选择优化ＢｅｃｋｍａｎＵｈｒａｓｐｈｅｒｅＯＤＳＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｒａｍ，５＃ｘｍ）；柱温：２５。
Ｃ；流速：１．０ｍ／ｍｉｎ；检测波长：使用ＰＤＡ二极管阵列检测器记录不同波长的色谱图，结果表明，在３６０ｎｍ检测波长下，槲皮素有较大吸收，色谱图中色谱峰较多，信息丰富，故选择３６０ａｍ为检测波长；流动相：Ａ．０．４％磷酸水溶液，Ｂ．（甲醇－乙腈，１：２），梯度洗脱：０＿５ｍｉｎ，８７％Ａ，１３％Ｂ；５＿５０ｍｉｎ，７３％Ａ，２７％Ｂ；５０－－＊７５ｍｉｎ，５５％Ａ，４５％Ｂ。
３方法学研究３．１线性关系考察分别精密吸取不同体积的槲皮素对照品贮备液，用甲醇稀释调配成系列对照品溶液，分别进样１０“ｌ，测定峰面积积分值，以槲皮素进样量（斗ｇ／ｍ１）为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得到槲皮素的线性方程为：Ｙ＝８０９４８Ｘ一３５０１４８，ｒ＝０．９９９２。
结果表明，槲皮素在２．７—１３．５¨∥ｍｌ（ｎ＝３）范围内线性关系良好。
３．２重复性实验取同一批号紫菀材料五份，按“２．２”项方法制得供试品溶液。
按“２．３”项下色谱条件分别测定，得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９８８３、０．９６２９、０．９６０３、０．９９０５、０．９６８７，ＲＳＤ＝１．４７％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为６１１４０６、６０４０８５、５８３６１８、５９０１４６、５８２０８３，中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据ＲＳＤ＝２．１８％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６１．９８ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、６１．５２ｍｉｎ、６１．８０ｍｉｎ、６２．１８ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．３９％（ｎ＝５）。
３．３精密度实验取紫菀药材（祁州）一份，按“２．２”项方法制得其供试品溶液。
按拟定的色谱条件平行测定５次，得相应色谱图数据，并用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数计算，分别为０．９７９２、０．９９１４、０．９９１７、０．９８６８、０．９８６７，ＲＳＤ＝０．５１％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为５１６５４１、５１６９８３、５２５４８１、５３２４２６、５１６４５ｌ，ＲＳＤ＝１．３７％，槲皮素峰的保留时间分别为６２．４０ｍｉｎ、６２．１２ｍｉｎ、６２．０７ｍｉｎ、６２．１８ｍｉｎ、６２．１０ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．２１％（ｎ＝５）。
３．４稳定性实验按“２．２”项下制备供试品溶液，按“２．３”项下色谱条件分别在０ｈ，２ｈ，４ｈ，６ｈ，１２ｈ，２４ｈ进样。
得到相应色谱图数据，用计算机辅助相似度评价系统评价整体相似度，结果以相关系数法计算，分别为０．９９１８、０．９７５８、０．９９１５、０．９８４５、０．９８０９，ＲＳＤ＝０．７０％（ｎ＝５）。
计算槲皮素峰的面积，分别为７６１４１９、７４１５２４、７４２９２２、７３４０６４、７２３１６９，ＲＳＤ＝１．８９％（ｎ＝５）；计算槲皮素峰的保留时间分别为６３．０５ｍｉｎ、６１．８８ｍｉｎ、６１．８７ｍｉｎ、６１．８５ｍｉｎ、６１．８０ｍｉｎ，ＲＳＤ＝０．８７％（ｎ＝５）。
３．５加样回收率精密称取已知含量的样品粉末５份，准确加人一定量的槲皮素对照品，按“２．２”项下色谱条件测定槲皮素的含量，计算回收率。
结果平均回收率９８．２０％，ＲＳＤ为１．７８％（ｎ＝５）。
３．６系统适用性按“２．２”项方法处理６种不同产地的样品，得到相应的供试品溶液。
在拟定色谱条件下分别测定，结果均以槲皮素峰计算理论塔板数。
结果表明，理论塔板数以槲皮素峰计算不得暑■ｌ‘Ｊ■１●ｌｔ－●图１紫菀药材（Ａ）和槲皮素对照品（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱图・５６３・表１不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对保留时间比较共有峰相对保留时间（ｄ）样品编号———２————了—————４—————６—————７————１—１————１—２————１—３————１—４————Ｓ———＿１６３２０９０１３０５０１３０９０１３０９０２３０９０３３０９０４ｄ０．２４６０．２４８０．２３６０．２３５０．２４９０．２３６０．２４２２．７５０．２５４０．２５６０．２４６０．２４３０．２５６０．２４５０．２５０２．３９０．３１００．３０９０．３０００．３０００．３１００．３０２０．３０５１．６４０．３９８０．３９６０．３９７０．３９３０．３９７０．３９４０．３９６０．４９０．４６８０．４６４０．４５９０．４５９０．６５２０．６３９０．６４４０．６９００．６９３０．６８１０．６８００．６８８０．６８００．６８５０．８３０．７３５０．７３８０．７２５０．７２６０．７３４０．７２６０．７３２０．７７０．７７６０．７９６０．７６５０．７６５０．７７６０．７６６０．７７４１．１５１１．１４９１．１４５１．１５２１．１５１１．１５１１．１５８１．１５ｌ０．６４３０．６５００．６４３０．４６４０．４６００．４６２０．７８０．６４５０．７６ＲＳＤ！％００．３７表２不同紫菀药材Ｉ－ＩＰＬＣ图谱中共有峰相对峰面积比较比较６批供试品的ＨＰＬＣ图谱发现，其中有ｌＯ个色谱峰是６批供试品所共有的。
计算图谱中各共有色谱峰相对于参照峰（ｓ，槲皮素）的相对保留时间（０【＝ｔｉ／ｔ。
）和相对峰面积值（Ａ。
＝Ａｉ／Ａ。
）（见表１、２）。
计算每个紫菀样品的色谱图中槲皮素峰的面积积分值（ｎ＝３）。
图２６批不同紫菀药材色谱图５相似度评价及样品分析以２、１１和ｓ峰作为标记峰，分别用中南大学计从下至上依次为２０９０１，３０５０１，３０９０１，３０９０２，３０９０３，３０９０４低于４０００。
４算机辅助相似性评价系统和西北大学中草药指纹图谱比对系统计算６批不同批次的紫菀药材相似度，结果见图２和表３。
６标准指纹图谱的建立与槲皮素定量分析分别精密吸取槲皮素对照品溶液适量和６批供试品溶液各１５恤ｌ，注入液相色谱仪，色谱图见图１。
・５６４・讨论中药材第２７卷第８期２００４年８月万方数据６．１样品处理过程中曾使用水煮醇沉法，８０％甲不尽相同（如表４中两种软件的相关系数法计算结果），因此应制定合适的相似度软件评价标准，使结果具有一定的统一性。
６．３醇超声和甲醇超声等不同方法，其中甲醇超声所得槲皮素的含量最高，８０％甲醇超声稍次之，水煮醇沉方法所得样品中槲皮素含量最低。