间接荧光法抗核抗体类型分布
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。
以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。
原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。
通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。
2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。
原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。
结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。
3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。
4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。
以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体（ANA）是一种特殊的抗体，它们是人体免疫系统产生
的一类抗体，主要针对自身细胞核中的蛋白质和核酸成分。
抗核抗
体的检测方法主要用于自身免疫性疾病的诊断，如系统性红斑狼疮（SLE）和类风湿性关节炎（RA）等。
目前常用的抗核抗体检测方法包括间接免疫荧光法（IFA）和酶
联免疫吸附试验（ELISA）。
1. 间接免疫荧光法（IFA）：
该方法主要通过观察抗核抗体与细胞核结构的结合情况来确定
是否存在抗核抗体。
具体步骤如下：
- 取一份患者血清，将其与细胞核结构进行反应。
- 通过荧光显微镜观察，如果血清中存在抗核抗体，它们会与
细胞核结构结合形成荧光标记的复合物。
- 根据荧光标记的情况，可以确定抗核抗体的存在及其荧光模式，进而进行疾病的诊断。
2. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
该方法通过测定抗核抗体与特定抗原的结合情况来确定是否存
在抗核抗体。
具体步骤如下：
- 取一份患者血清，将其与特定抗原进行反应。
- 加入特定抗核抗体的检测试剂，使其与抗核抗体结合。
- 加入酶标记的抗人免疫球蛋白抗体，使其与抗核抗体结合形
成复合物。
- 加入底物，使酶标记的抗体与底物发生反应，产生颜色反应。
- 通过测定反应产生的颜色强度，可以确定抗核抗体的存在及
其浓度水平。
以上是两种常用的抗核抗体检测方法。
这些方法的原理基于抗体与特定抗原的结合反应，并通过不同的检测手段来确定抗核抗体的存在及其水平。
这些检测方法在临床上被广泛应用于自身免疫性疾病的早期诊断和疾病活动性的监测。
抗核抗体(ana)荧光片判读与讲解
抗核抗体(ana)荧光片判读与讲解抗核抗体(ANA)荧光片判读与讲解抗核抗体(ANA)是一种通过间接免疫荧光法检测自身免疫系统异常的方法。
它是一项重要的临床检验指标，可用于诊断和评估自身免疫性疾病。
下面将对ANA荧光片的判读与讲解进行详细说明。
一、什么是抗核抗体(ANA)？抗核抗体(ANA)是一类能够与细胞核内的抗原结合的抗体。
在人体正常情况下，免疫系统不会产生抗核抗体。
然而，当免疫系统出现异常时，会产生大量的抗核抗体，这被认为是自身免疫疾病的一个重要特征。
二、抗核抗体(ANA)荧光片的检测原理ANA荧光片是通过将人体血清标本与已知含有荧光染料的抗人重链抗体结合，然后与携带抗原的细胞核结合，最终通过荧光显微镜观察是否出现荧光信号。
正常情况下，人体血清中不含有抗核抗体，因此在荧光显微镜下观察不到任何荧光信号。
而当免疫系统异常时，会产生抗核抗体，这些抗体会与细胞核中的抗原结合，形成免疫复合物。
在荧光显微镜下观察，这些免疫复合物会出现不同形状和分布的荧光信号。
三、ANA荧光片的判读结果ANA荧光片的判读结果通常是根据观察到的荧光信号的形状、分布和强度来确定的。
常见的荧光信号形状包括均匀核仁型、颗粒型、环型、线型等。
不同的形状对应着不同的自身免疫疾病。
1. 均匀核仁型：荧光信号分布在细胞核的整个核仁区域，常见于系统性红斑狼疮。
2. 颗粒型：荧光信号呈颗粒状分布在细胞核内，常见于滑膜炎、干燥综合征等。
3. 环型：荧光信号呈环状分布在细胞核周围，常见于系统性红斑狼疮、硬皮病等。
4. 线型：荧光信号呈线状分布在细胞核内，常见于系统性红斑狼疮。
判读结果还包括荧光信号的强度，通常以阴性、弱阳性、中阳性和强阳性来表示。
荧光信号的强度与抗体的浓度和免疫复合物的数量有关。
四、ANA荧光片的临床意义ANA荧光片判读结果可以提供重要的临床信息，特别是在自身免疫性疾病的诊断和评估中起到关键作用。
阳性的ANA荧光片结果表明可能存在自身免疫疾病的风险，但并不能单凭此项检测结果做出具体的诊断。
浅议间接免疫荧光法检测抗核抗体的报告模式
得进一步推广 刊。
参 考 文 献
人喉癌上皮细胞 ， 其核抗 原丰富 、 特异性强 、 含量高 ， 核大 、 乡 Ⅲ 胞 结构清 晰 ， 易于判读荧光染色核 型结果 ， 该基质 片较 鼠肝 （ 肾） 冰冻切片检测 Ａ Ｎ Ａ， 阳性率可提高 １ ０ ％～ ２ ０ ％［ ６ １ 。
期 细 胞 染 色 体 阴性 ， 主要 包 括 抗 Ｐ Ｍ — Ｓ ｃ ｌ 抗体 、 抗 Ｒ ＮＡ多 聚 酶
Ｉ抗 体 、 抗 原 纤 维 蛋 白抗 体 和 抗 Ｓ ｃ ｌ 一 ７ ０抗 体 ④ 核 膜 型
（ ｍｅ ｍ ｂ ｒ ａ ｎ ｏ ｕ ｓ ｐ ａ ｔ ｔ ｅ ｒ ｎ ， Ｍ） ， 间期 细胞 核 呈 均 匀 的荧 光 ， 核周增 强 ，
１ ４ ３ －１ ４ ４ ．
光染色模型 （ 以Ｈ ｅ ｐ 一 ２细胞为基质 ） ： ① 核均质型（ ｈ ｅ 一ｍｓ
ｐ ａ ｔ ｔ ｅ ｒ ｎ ， Ｈ） ， 间期 细胞 核 呈 均 匀 的 荧 光 ， 分 裂 期 细 胞 浓 缩 染 色 体
ｆ ３ ］ 翟暖峰． 经阴道彩色多普勒对早期未破裂 型宫外 孕的临床价值叨．
浓缩染色体 阴性 ， 染色体周 围区域为颗粒 样荧光 ， 可 细分 为核
粗 颗 粒 型 和 核 细 颗 粒 型 ，其 靶 抗 原 主要 有 ｎ Ｒ Ｎ Ｐ 、 Ｓ ｍ、 Ｓ Ｓ — Ａ ｆ ｌ １ 】
ｓ ｓ — Ｂ 。③核仁型（ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｌ ａ ｒ ｐ ａ ￣ ｅ ｍ， Ｎ） ， 问期细胞核ｆ 性， 分裂
１ 抗 核 抗 体 简 介
荧光染色 阳性 ， 主要 包括抗线粒 体抗体 （ 胞浆粗 颗粒 型 ） 、 抗核 糖体 Ｐ蛋 白抗体 （ 胞浆细颗 粒型 ， 有 时可见核彳 ＿ 阳性 ） 、 抗Ｉ Ｊ Ｉ １ — １ 抗体 、 抗高尔基抗体 、 抗溶酶体抗体 、 抗 肌动蛋 白抗体和抗波形 蛋 白抗体等。实际工作 中， 同一份标 本同时检 出 ２种或 ２种 以 上荧光染 色模 型 的混合 型也 比较常 见 ， 此外， 还有 一 些较少 ＿ 』 ］ Ｌ
间接免疫荧光法检测抗核抗体的结果分析
间接免疫荧光法检测抗核抗体的结果分析目的探讨间接免疫荧光法（IIFA）检测抗核抗体在自身免疫性疾病（AID）患者中的结果应用分析。
方法分别采用IIFA和胶乳法检测50例自身免疫性疾病患者血清样本抗核抗体（ANA）。
结果IIFA法检测血清ANA的灵敏度为76%，胶乳法检测血清ANA的灵敏度为58%，差异有统计学意义（P＜0.01）。
结论IIFA 法检测ANA的敏感度明显高于胶乳法，提高了临床的阳性检出率。
IIFA法用于ANA的筛查，阳性标本在进行滴度检测，有助于临床诊断。
标签：抗核抗体；间接免疫荧光法；胶乳法[Abstract] Objective To discuss the results of indirect immunofluorescence in detecting the antinuclear antibodies in patients with autoimmune diseases. Methods The antinuclear antibodies of serum samples of 50 cases of patients with autoimmune diseases were detected respectively by the IIFA and emulsion method. Results The difference in the sensitivity degree of ANA detected by IIFA method and emulsion method had statistical significance（76% vs 58%）（P＜0.01）. Conclusion The sensitivity degree of ANA detected by IIFA method is obviously higher than that detected by the emulsion method，which improves the positive detection rate in clinic，the application of IIFA method for ANA screening and the application of positive specimens for titer detection contribute to clinical diagnosis.[Key words] Antinuclear antibodies；Indirect immunofluorescence；Emulsion method抗核抗体（ANA）包括细胞核的自身抗体和细胞质内的核酸和核蛋白的所有成分的自身抗体，是指哺乳动物的细胞中以细胞核为靶抗原的自身抗体的总称[1]。
间接免疫荧光法检测抗核抗体与免疫印迹法检测抗核抗体谱结果分析
—
Ａ Ｎ Ａ—Ｉ Ｉ Ｆ法 与 Ａ Ｎ Ａ ｓ—Ｌ Ｉ Ａ法 检 测 结果 ： Ａ Ｎ Ａ—Ｉ Ｉ Ｆ法与 Ａ Ｎ Ａ ｓ—Ｌ Ｉ Ａ法分 别 检测 ３ ０ ０例与 ２ ６ ３例 患者血 清抗 核抗 体 和抗核抗体谱 ， 两种方法检 出的阳性率 无 显著性差异 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） 。见表 １ 。 ３ Ｏ例 同 时 进 行 Ａ Ｎ Ａ —Ｉ Ｉ Ｆ 、 Ａ Ｎ Ａ ｓ— ｕＡ检测 结果 比较 ： ３ Ｏ例 中结 果 一 致 的
摘 要 目 的 ： 探 讨 间 接 免 疫 荧 光 法
（ Ｉ Ｉ Ｆ ） 检 测 抗 核 抗体 （ Ａ Ｎ Ａ ） 与线 性 免 疫 印
３ ０ ０ ０ ｒ ／ 分离 心 １ ０分 钟 ， 分 离 血清 直接 检
测。
迹 法（ Ｌ Ｉ Ａ） 检测抗核 抗体谱 （ Ａ Ｎ Ａ ｓ ） 在自 身免疫性 疾病临床诊 断中的价值 。方法 ：
种 方法不能相互取代 ， 应联合应 用。
和抗 Ｓ Ｓ Ｂ抗体多见于干燥综合征患者 ， 抗
Ｓ Ｓ Ａ抗体敏感性较强 ， 抗Ｓ Ｓ Ｂ抗体 特异性
关键词 自身免 疫性 疾病 抗核 抗体
间接 免 疫 荧 光 法 免 疫 印迹 法
２ ２例 中， １ ０例 全 阳性 ， １ ２例全 阴性 ， 一致 率７ ３ ． ３ ％； 结果不 一致 的 ８例 中 ， Ａ Ｎ Ａ—
检率 ６ ． ７ ％， 见表 ２ 。
讨 论
体 和胞 质 抗 原抗 体 。Ａ Ｎ Ａ和 Ｅ Ｎ Ａ抗 体
的检 测 ， 对胶原性疾病， 特别 是 Ｓ Ｌ Ｅ、 与
原 因分析为 ， 该谱只含有与常见 自身免 疫 性 疾病相关的 １ ２项抗 核抗 体 ， 而 不代 表
ana检测方法
ana检测方法ANA检测方法。
ANA（抗核抗体）是一种自身免疫性疾病的重要指标，其检测方法对于诊断和治疗自身免疫性疾病具有重要意义。
目前，常见的ANA检测方法包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法等。
下面将分别介绍这些方法的原理和操作步骤。
一、间接免疫荧光法。
间接免疫荧光法是目前最常用的ANA检测方法之一。
其原理是将待检血清与细胞抗原结合，然后用荧光标记的抗人球蛋白抗体进行染色，通过荧光显微镜观察是否存在抗核抗体。
操作步骤为，将待检血清与细胞抗原混合，孵育后洗涤，再加入荧光标记的抗人球蛋白抗体，最后洗涤并观察荧光显微镜下的荧光情况。
二、酶联免疫吸附法。
酶联免疫吸附法是利用酶标记的二抗或抗原与待检血清中的抗体结合，再加入底物，通过酶的反应产生显色反应来检测抗体的方法。
操作步骤为，将待检血清加入包被抗原的微孔板中，孵育后洗涤，再加入酶标记的抗人球蛋白抗体，最后加入底物并测定吸光度。
三、免疫印迹法。
免疫印迹法是利用抗体与抗原特异性结合的原理，通过电泳将待检血清中的抗体与抗原分离，再转膜到膜上，用荧光素等进行染色来检测抗体的方法。
操作步骤为，将待检血清进行电泳分离，再将分离的蛋白转膜到膜上，用特异性抗体结合后再进行染色观察。
综上所述，ANA检测方法有间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法和免疫印迹法等多种。
每种方法都有其特定的原理和操作步骤，能够准确、快速地检测出抗核抗体的情况。
在临床诊断中，医生可根据具体情况选择合适的检测方法，以辅助诊断和治疗自身免疫性疾病。
以上就是关于ANA检测方法的介绍，希望对您有所帮助。
ANA的检测方法对于自身免疫性疾病的诊断和治疗具有重要意义，因此在临床实践中需要严格按照操作规程进行检测，以确保结果的准确性和可靠性。
感谢您的阅读！。
1725例血清抗核抗体及抗核抗体谱检测结果分析
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间接免疫荧光法（IF）
在荧光显微镜之下去进行观察
抗双链DNA抗体阳性/阴性例子
抗双链DNNA抗体阴性。 短膜虫动基体没有特异荧光。
抗双链DNNA抗体阳性。
短膜虫动基体可观测到明显的 特异荧光。
抗双链DNNA抗体阳性。 短膜虫动基体和细胞核 可观测到明显的特异荧光。
自身免疫性肝病和自身抗体（AID-1）
按照显微镜形式种类荧光像不同
Negative U 激起
Positive
B 激起
B 激起（新的机器种类）
－ 2011年度自身抗体质控
－ Sample No.41
Ho
0.4%
Sample No.43
Sp 99.6%
Ho 17.7%
Sp 5.3%
Ho+Sp 76.2%
Sp+Dis 0.4%
Ho+Dis 0.4%
间接免疫荧光法（IF）
荧光显微镜之下进行观察
Negative
（阴性)
主要的染色型和相关自身抗体
Homogeneous Peripheral
（均质型）
（边缘型）
Speckled
（斑点型）
抗染色体相关蛋白质 抗体
Nucleolar
（核仁型）
抗DNA抗体
Centromere
（着丝点型）
抗ENA抗体等
抗核仁抗体
Distribution of endpoint titer
140
120
beroflabs.
100 80 60
num 40
20
＜0×20 ×20 ×40 ×80×160×320×640×1280×2560
Distribution of endpoint titer
140
120
oflabs.
100 80
糖‐磷酸骨骼
碱基序列
双联DNA以及单链 DNA 病情恶化SLE
变性单链DNA
SLE、其他的自身免 疫疾病
HEp2细胞的染色情况
Peripheral（边缘 型）
抗双链DNA抗体
确认实验
ELISA法 （参考） MESACUP DNAII Test
｢ds｣
12 IU/ml ≧ 12 IU/ml ＜
阴性 阳性
型）
质型）
Speckled（斑点型）Nucleolar（核 仁型）
还有其他很多的染色型 可以进行观察！
Centromere（着丝点型）
核膜型
抗核膜核纤层蛋白抗体
抗核膜孔复合体抗体
临床上的意义 PBC（原发性胆汁性肝硬化） AIH（自身免疫性肝炎）
临床上的意义 PBC（原发性胆汁性肝硬化）
抗 PCNA 抗体
・关于细胞的结构和细胞周期的理解 染色型判定和推定自身抗体的种类上需要
・关于主要的自身抗体的理解 染色型和自己抗体的之间的关系以及临床意义 染色型的混合一两个以上的自身抗体的共存
・关于荧光显微镜的理解 结构・功能 维修
抗双链DNA抗体
• 跟DNA会反应的自身抗体。 • 抗单链DNA抗体识别DNA的碱基序列，而抗
Cytochrome P450IID6 (50kD) 被证明是相对应的抗原。
可利用間接免疫蛍光抗体法 （IF法）以及ELISA法检出。
判断时需要注意的例子
ANA共存
抗核糖体抗体
抗胃壁抗体
ERROR: undefined OFFENDING COMMAND: ‘~
STACK:
Homogeneous（均质 型）
间接免疫荧光法 FLUORO nDNA Test
样本稀释 1：5 以上 阳性
抗双链DNA抗体 间接免疫荧光法
间接免疫荧光法检测抗双链DNA抗体。 由于作为基质的短膜虫的巨大线粒体（动基体）富含 双链DNA，但不包含单链DNA、组蛋白，因此能准确、 灵敏的检测出抗双链DNA抗体
抗着丝点抗体
Homogeneous型（均质型）
• 细胞核整体染色得很光 滑。
• 分裂期细胞的染色体的 荧光比较强。
Peripheral型（边缘型）
• 细胞核整体的染色很滑 溜，而且核边缘的部分 的染色比较强。
• 分裂期细胞的染色体领 域的染色比较强。
• 可以推测抗DNA抗体的 存在。
Speckled型（斑点型）
抗平滑肌抗体
Anti Smooth muscle antibody
Fluoro AID-1 test 的染色图像 大鼠胃组织切片的肌层可看到 特异荧光染色。
用以区别自身免疫性肝炎和SLE 的自身抗体、Type I以及Type IV 的AIH中出现。
相对于肌动蛋白等构成细胞骨 架的蛋白的自身抗体。
可通过間接免疫蛍光抗体法（IF 法）检出。
肝脏相关的自身免疫性疾病 ·自身免疫性肝病（AIH）
抗ASMA抗体、抗体LKM-1抗体等 ·原发性胆汁性肝硬化（PBC）
抗线粒体抗体（抗M2抗体）
利用间接免疫荧光抗体法 检测抗线粒体抗体标记 抗人Ig抗体
抗原是使用大鼠胃，肾的组织切片，把检体稀释后利 用间接免疫荧光抗体法来检出自身抗体。
Anticytoplasmic
antibody
对疾病有特异性的自身抗体确认方法
IF ELISA DID ELISA DID ELISA DID ELISA DID ELISA DID ELISA IF ELISA IF ELISA DID ELISA IF IF
Anti DNA Anti Sm
SLE
• 在细胞核内有颗粒状的 荧光，而且细胞核整体 的感觉不光滑。
• 在核仁没有染色的例子 比较多。
• 分裂期细胞的染色体领 域没有染色。
Nucleolar型（核仁型）
• 在细胞核内有几个比较 大的点，或者颗粒块的 荧光。
• 关于小点染色的数量一 般来说按一个细胞核里 有六个点以内。
• 分裂期染色体的染色不 一定。
利用荧光抗体法 检测抗线粒体抗体（AMA）／抗平滑肌抗体（ASMA）
抗线粒体抗体（AMA）
抗平滑肌抗体（ASMA）
大鼠肾组织切片的尿细管 和胃壁細胞有特异的荧光 染色。 PBC特异的。
大鼠胃组织切片的肌层、肾的血管
壁中检出特异荧光染色。 AIH中出现
抗細胞質抗体
PBC
抗线粒体抗体
特异
FLUORO AID-1 Test
Type I
自身免疫性肝炎的自身抗体
自身免疫性肝炎（AIH） Type II
Type III
ASLA 抗可溶性 肝細胞抗体
ANA 抗核抗体
ASMA 抗平滑肌抗体
anti LKM-1 抗肝腎微粒体抗体
原発性胆汁性肝硬変（PBC）
原发性硬化性胆管炎（PSC）
AMA 抗线粒体M2抗体
有时 ANCA 抗好中球細胞质抗体
抗肝肾微粒体抗体 Anti liver kidney microsome -1 antibody
Fluoro AID-1 test の染色图像 大鼠腎切片的近位尿細管有特 异荧光染色。胃部不被染色。
抗LKM-1抗体阳性病例是Type II的AIH。
HCV非感染病例归类为Type II a 、感染病例归类为Type II b。
（分裂期染色质体）
阳性
染色型判断
均质型
均质型+斑点型
Speckled（斑点型）
阴性
斑点型
混合型的例子
Homogeneous（均值型） ＋
Centromere（着丝点型）
Speckled（斑点型） ＋
Nucleolar（核仁型）
Speckled（斑点型） ＋
抗细胞质抗体
Pe/Ho
A N Sp A
Ho Cen
・其他
细胞周期相关･･･PCNA等 Granular（dot） 核膜
两个以上的自身抗体在一起的时候，显示混合型。
混合型的例子
Ho（均质型）
+
Ho+Sp
ANA（抗核抗体）
(centromere：着丝点型)
+
ANA+ACyA
着丝点型和抗线粒体抗体 混杂型
混合型的例子
（间期细胞核）
Homogeneous（均质型）
▲ 能防止的例子
A.利用专业样本稀释液， 有的例子可以防止。
另外，不能使用水性红 色、蓝色的笔。
Q.染色结果不稳定…。
正常的染色
由于受潮
由于干燥
A.原因是在使用试剂前受潮了或 者操作实验时候干燥了。把片子 的袋子必须请孵温后拆开，而且 操作实验时候请注意不能干燥。
利用间接免疫荧光法， 操作抗核抗体检验时需要的知识
双链DNA抗体识别DNA的双链结构、糖/磷酸 骨骼。 • 抗双链DNA抗体是对SLE（系统性红斑狼疮） 有特异性，而抗单链抗体在种种自身免疫疾病 上会出现。
抗双链DNA抗体
抗双链DNA抗体
抗原决定 双链DNA 部位 跟DNA反 双链DNA 应性 相关疾病 SLE（非常罕见）
抗双链/单链DNA抗 抗单链DNA抗体 体
系统性狼疮
Anti RNP Anti SS-A Anti SS-B
MCTD
混合结缔组织病
SjS
干燥综合征
Anti Scl70
SSc
Anti Centromere
系统性硬化病
AMA
PBC
原发性胆汁性肝硬化
Anti Jo-1
PM/DM
多发性肌炎/皮肌炎
ASMA
AIH
自身免疫性肝炎
APCA
Pernisious anemia 恶性贫血
2013.10.8
间接免疫荧光法 抗核抗体、抗双链DNA抗体、
抗自身免疫肝炎抗体 检验的基础