人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立
裸鼠移植瘤 方法建立
裸鼠移植瘤方法建立-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One11.细胞准备：用 PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得 200μL 悬浮液里面含有 1×107个细胞。
总共需要细胞: 18（只）*200ul*=×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。
2.裸鼠准备：3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞 1×107/200μ L。
每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2 )/2(D表示肿瘤的长径, d表示肿瘤的短径)。
（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G）当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。
对照组，TO901317组，DADS组。
每天（每天给药会不会太频繁可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为25mg/kg/d，将粉末状的 TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有 TO901317 的蓖麻油 200μL；对照组注射等体积的蓖麻油。
连续注射两周。
（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。
每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。
以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。
实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。
人胃癌组织块裸鼠原位移植
人胃癌组织块裸鼠原位移植 转移模型的建立刘 平1,赵志泉1,张小勇1,潘世扬2,杨国平2,丁小健2摘 要:目的 用肿瘤组织块原位移植,建立人胃癌裸小鼠原位移植 转移模型。
方法 以人胃低分化腺癌细胞系接种于裸小鼠皮下,形成稳定传代的皮下移植瘤,再取该肿瘤组织块原位移植于裸鼠胃壁,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。
结果 原位移植成功率(成瘤率)为100%、局部淋巴结转移率100%、远处淋巴结转移率90%、肝转移发生率为75%。
荷瘤鼠的中位生存期为14周,晚期出现消瘦和全身衰竭。
结论 该裸小鼠原位移植 转移模型的生物学行为与人胃癌自然生长和转移过程相似,可作为一种有价值的工具用于胃癌转移机理和抗转移实验治疗的研究。
关键词:胃肿瘤;胃癌细胞;裸小鼠;疾病模型中图分类号:R 735.2 文献标识码:A 文章编号:100028578(2001)0120015202 收稿日期:2000201206;修回日期:2000204214基金项目:江苏省教委自然科学基金资助项目(95052)作者单位:1.210029南京医科大学第一附属医院消化科,2.中心实验室Establ ishm en t of Orthotop ic I m plan t M eta sta tic M odel of Hu manStomach Cancer usi ng I n tact Tu m or T issue i n Nude M iceL I U P ing ,ZHAO Zh i 2quan ,ZHAN G X iao 2yong ,et alD ep a rt m en t of D ig estive d isease ,T he F irst A f f lia ted H osp ita l ,N anj ing M ed ica l U n iversity ,N anj ing 210029,Ch inaAbstract :Objective To develop nude m ou se o rtho top ic i m p lan t m etastatic m odel of hum an gastric can 2cer u sing in tact tum o r tissue .M ethods T um o r cell line of hum an gastric adenocarcinom a w as inocu lated subcu taneou sly in to nude m ice to develop i m p lan t 2tum o r .In tact tum o r tissue w as then co llected and i m 2p lan ted o rtho top ically in to the nude m ou se stom ach .T he local tum o r grow th characteristics ,tum o r 2takerates and m etastasis rates w ere exam ined .Results A 100%tum o r 2take rate w as ob tained in the m odel.T he m etastases of local and distan t lym p h nodes ere ob served in 100%and 90%of the nude m ice resp ectivce 2ly .T he liver m etastases w ere found in 75%of the n i m als .T he m edian su rvival ti m e of the tum o r 2bearing nude m ice w as 14w eek s .Em acicati on and exhau sti on of the nude m ice w ere p resen ted in late stage of the exp eri m en t .Conclusion T he grow th and m etastasis characteristics of hum an stom ach cancer w ere exh ib itedin the o rtho top ic i m p lan t m etastatic m odel.T h is tum o r m odel m igh t be a u sefu l too l in the researches on m etastatic m echan is m s and an ti m etastasis treatm en t of hum an stom ach cancer .Key words :Stom ach neop las m s ;T um o r 2cells ;D isease m odel ;N ude m ou se 我国各种恶性肿瘤中胃癌的发病率居首位,占23%。
人卵巢癌裸鼠移植实体瘤模型的建立
（ ．ｉｎｘ ｎｔｕｅｏ ａ ｏ ｒＨｙｉｎ ｎ ｃ ｕａｉｎ ｌＭｅ ｉ ｎ ， ａ ｃ ａｇ３ ０ ０ ， ｈｎ １Ｊ ｇｉＩｓｔｔ ｆ ｂ ｕ ｇｅ ｅａ ｄＯ ｃ ｐｔ ａ ｄｃ ｅ Ｎ ｎ ｈｎ ３ ０ ６ Ｃ ｉａ ａ ｉ Ｌ ｏ ｉ
２． ｉｎ ｘ ｔｒ ｌａ ｄ Ｃｈｌ ａｔ Ｎａ ｃ ａ ｇ ３ ０ ０６， ｉａ； Ｊａ ｇ ｉＭａｅｎａ ｎ ｉ Ｈｅ ｌｈ， ｎ ｈ ｎ ３ ０ ｄ Ｃｈｎ
【 要 】 目 的 建 立 人 卵 巢 癌 裸 鼠移 植 实 体瘤 模 型 。方 法 摘
将 １ 例人 卵 巢 癌 组 织 移 植 裸 鼠 ， 立 人 卵巢 癌 裸 建
鼠原 代 移 植 实 体瘤 模 型 的 基础 上 ， 再将 实体 瘤 皮 下 移 植 、 体瘤 原 位 移 植 、 体 瘤 细 胞 移 植 裸 鼠 。观 察 裸 鼠实 体 瘤 实 实 生 长 和 转 移情 况 ， 量 其 体 重 、 宫 卵 巢 重 、 重 及瘤 的 大 小 ， 作 病 理 、 镜 、 色 体 检 查 。结 果 成 功 地 建 立 人 称 子 瘤 并 电 染
３． ｄｃｌ ｃ ｏ ｌ ｆ ａ ｃ ａ ｇＵ ｉｅｓ ｙ Ｎ ｎ ｈｎ ３ ０ ６ Ｃ ｉａ Ｍｅ ｉ ｈ ｏ ｏ ｎ ｈ ｎ ｎｖｒｉ ， ａ ｃ ａｇ３ ０ ０ ， ｈｎ ） ａＳ Ｎ ｔ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊｃｖ Ｔ ｓ ｂ ｓ ｈｍ ｎｏａｉ ａｃｒｒｎｐ ｎ ｄｓｂｕ ｎｏｓ ｕｅｍｃ ｏｅ．Ｔ ｓ ｂｓ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｔｅ ｏｅａｌｈ ｕ ａ ｖｒ ｎｃｎｅ ａｓｌ ｔ ｕｃｔ ｅｕｌ ｎｄ ｉ ｍ ｄ１ ｏｅｔ ｌｈａ ｉ ｔ ｉ ａ ｔ ａｅ ａ ｙ ｅ ａｉ
维普资讯
２０ ０ ８年 ８月
中 国 比 较 医学 杂 志
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。
观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。
电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。
结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。
结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
人胃癌裸鼠移植瘤转移模型的研究概况
关键词
裸 鼠
移植瘤转移模型 Ｒ ３ ．； ７５ ２
胃癌 Ａ
中图法 分类号
文献标识码
动物模 型是人 类 肿 瘤 学 研 究 的 重要 工 具 之 一 。 虽然 动物 肿 瘤 的生 物学 特 性 与 人 类 肿 瘤 有 着 明显 差异 ， 而运 用 免疫 缺 陷 动物 建 立 人 类 肿 瘤 的移 植 模 型能更 好 地 研 究 人 类 肿 瘤 生 物 学 行 为 。 胃癌 的基
常用 的是 细胞株 悬 液 皮 下 注 射成 瘤 后 ， 鼠间 反 复 在 传代 ， 再取 形 成 的实 体 瘤 进 行 原 位 移 植 ； 是 将 手 或 术 切下 的新 鲜肿 瘤组 织块 直接 种植 于裸 鼠 胃壁 内。
４ １ 细 胞悬 液 皮下接 种模 型 ．
三 个代 表 性 阶 段 。早 期 研 究 一 般 取 胃癌 细 胞 株 悬 液 接种 于裸 鼠皮下 。例如 １７ ９５年 Ｋ ｇ 等 将包 括人 ｕａ
型成功的数种关键 因素 ， 该模型则 为研究人 胃癌侵
袭 、 移较 为理 想 的模型 。 转
２ 移植部位及 数量
采 用皮 下种植 法 时 ， 受体 的胸 前 外 侧 及腋 窝处
１ 裸 鼠的 品系和大 小
裸 鼠虽为无胸 腺、 Ｔ细胞 免疫缺 陷动物 ， 其 但 Ｎ Ｋ细胞及 巨噬细胞功能仍存在 ， 故仍具一定 的免
率 与 生长 率 更 高 ， 只是 它们 也 更 易 发 生 感 染 ， 亡 死 率 较 高 ， 采用 者不 多 。 故
础与临床研究都离 不开能真实模拟 胃癌 在人 体 内
生长 、 侵袭 及转 移 过 程 的 动 物模 型 。人 胃癌完 整 组 织 块 移植 于 裸 鼠 胃壁 的方 法 是 更 接 近 人 体 内 肿 瘤 生 物学 特性 的建 模 方 法 ， 果 能 严 格 控 制好 影 响 模 如
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。
一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。
2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。
3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。
三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。
（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。
2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。
3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。
注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。
为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。
人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法
人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法人胃腺癌SGC27901 细胞株，裸鼠皮下注射(2x106/L 细胞悬液) ，成瘤后反复传代形成实体瘤，以第6 代瘤源为组织材料，打开腹腔，通过生物胶粘贴法用OB 医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处；待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查。
一、皮下种植瘤模型的建立和传代BALB/c nu/nu 裸鼠24 只，雄性，6 周龄，体质量18～20 g，SPF 级条件下饲养。
人胃腺癌细胞株SGC-27901，2x106/L 细胞悬液裸鼠皮下注射，成瘤后反复传代形成实体瘤，本组瘤源为第6代。
二、人胃癌组织块裸鼠原位种植模型的建立1. 实验动物术前禁食12 h，氯胺酮50 mg/kg 腹腔麻醉，常规消毒，选择左侧正中旁切口进腹，暴露胃壁，在胃大弯处近胃窦旁用1 mL无菌空针头划破胃壁浆肌层，用无齿镊将破损处向内推压，使局部胃壁形成凹龛，植入1 块瘤组织块，并在瘤表面滴上1 滴OB 生物胶(由广州白云医用胶公司提供) ，使其覆盖瘤组织表面, 约40 s 凝固后将胃壁回纳入腹腔，0 号丝线缝合腹膜及皮肤，关腹。
2. 整个过程严格遵循无菌操作。
3. 所有模型动物无麻醉意外，SPF 级饲养。
4. 术后1 周内，死亡2 只。
5. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。
6. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，脱颈椎处死解剖，取原位瘤体、肿大淋巴结、胸腹腔内脏器、收取腹水。
7. 所取标本以10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片，H-E 染色，作组织病理学检查。
8. 实体瘤细胞染色体鉴定。
注意事项体外实验虽然能在一定程度上反映胃癌细胞的运动能力和侵袭能力，但是不能完全替代体内胃癌转移的器官环境及转移效果，因此体内移植模型成为肿瘤实验研究的主要方法。
以往多是皮下移植，但可能因皮下纤维包膜的包绕致转移较少。
近年研究表明，肿瘤细胞株原位种植裸鼠体内不能完全表达肿瘤的生物学特性，而完整组织块原位移植可显著提高转移率。
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人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立
动物：／c(／)裸小鼠，鼠龄6～1 0周，体重l5～25 g，雄性。
饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。
笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。
方法：收集培养的823细胞(癌细胞在含10% 小牛血清的1640 培养液中，于2恒温孵育箱中培养，常规传代。
)在细胞培养至对数期时，用1640制成约2×l07个／细胞悬液，取0．2(4x106个823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植瘤长至直径为l 3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约l ×l ×2的小块，加入适量的备用。
以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的23大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。
作鼠间传代(2只／代)。
移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5，质地较硬，在以后的几天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。
随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。
大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。
A具体操作：
1一般要求
需在无菌条件下进行。
可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。
动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。
瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。
常用腋下部位皮下作为实体瘤接种部位；肌肉接种则用大腿肌肉；腹水型接种于腹腔。
2瘤块的制备
接种用的瘤块应选择接种后7－10d、肿瘤生长旺盛且无溃破而动物健康较好的瘤源动物，颈椎脱臼，固定于蜡板上，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤(消毒面应尽可能大一些)。
切开皮肤、选择生长良好无坏死或液化的瘤组织。
在无菌平皿内，剪成2－33的小块。
平皿内放置少许消毒的生理盐水缓冲液或其它营养液，以保存瘤块。
平皿应放置在冰块上。
用无菌套管针抽吸或向套管针内塞进一小瘤块，接种于同种受体动物右前肢腋窝皮下(接种部位皮肤应先用碘酊、酒精消毒)。
接种操作时间应尽可能的缩短，从一个瘤块所取的材料一般应在30内接种完。
3瘤细胞悬液的制备
如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞悬液接种。
具体方法为，在无菌操作下取瘤块，除去坏死组织，将数个瘤块混合，剪成小块，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水适量稀释成1∶3－1∶4的瘤细胞悬液。
容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前应将细胞混匀。
每个动物接种0.2。
整个操作应在30内完成。
停止给予受试物之次日(或停止给予受试物后1－5d)处死动物，先称体重，后解剖皮下瘤块，称重。
如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，表示肿瘤生长不良。
在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。
应当减少剂量重新试验。
取平衡饲养1周的裸鼠若干只，于第3d将瘤细胞悬液按0.5只(含瘤细胞7.5X10e个)接种于裸鼠左侧肋部皮下。
823单细胞悬液的制备：将823细胞，用一1640培养基培养基(7.2，含10%胎牛血清，青霉素100，链霉素100)，于37度，502，饱和湿度的C02培养箱中培养，2~3d传代一次。
该细胞贴壁生长，呈多角形。
实验时取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后机械吹打成单细胞悬液，1500离心，弃上清液，用适量配制成细胞浓度分别为1.5x1)悬液，0.4%台盼蓝染色法测细胞活力在95%以上。
18号的硬脊膜外穿刺针，把外面的套管针部分磨平磨尖（为什么要磨，看到实物你就明白了），里面的实体针不用磨。
一次用6根左右就可以了，先用一个不锈钢饭盒之类的东西作一个手术包，把所有相关的手术器械（剪刀镊子什么的，包括接种针）都装进去，盖上盖子，8层纱布包裹，121度，半个小时。
操作的时候在超净台里面进行无菌操作，接种针一字排开，一个塞个5、6根，然后一起接种，一轮完了以后继续塞，不用消毒处理，但是接种的时候要保证无菌操作，如果接种针碰到什么非无菌的地方，这根针这次就不能接着用了，要下次高压消毒后才能用。