最优考马斯亮蓝染色Protocol
考马斯亮蓝染色液
考马斯亮蓝染色液(常规法)的详细信息考马斯亮蓝染色液(常规法)规格：250ml500ml公司提取试剂盒不同样本提取DNA一次时间：15-30min, 并且可以适用于配备仪器大批量提取使用。
同系列产品：大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒大鼠干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒考马斯亮蓝染色液(常规法)大鼠血管生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒大鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒许多因素都能够影响质粒的产量，包括细菌培养液的体积，质粒的拷贝数，培养基的种类及所使用的菌株。
纯化的质粒不需后续处理即可用于DNA的各种分子生物学操作,但若用于体外转录实验,还需配合核糖考马斯亮蓝染色液(常规法)核酸酶抑制剂的使用。
溶液II-NaOH-SDS液:NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。
但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH 就高达12.6,因而促使染色体DNA 与质粒DNA 的变性。
SDS:SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有:(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA 时)受到干扰。
DNA 溶液是DNA 以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA 周围的水分子,使DNA 失水而易于聚合。
考马斯亮蓝快速染色液使用说明
色，可以重复2-3次。 注：染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾，以 免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 4. 染色至看到清晰的目标蛋白条带后即可停止染色。弃染色液，加入适量的蒸馏水，停止染色反应。然后即可拍照记录。 注：通常使用本染色液染色后背景非常低，如果希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。 通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低，条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸 馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的考染蛋白 条带。
包装清单：
产品编号 P0017 —
产品名称 考马斯亮蓝快速染色液
说明书
包装 250ml
1份
保存条件：
4℃保存，一年有效。
注意事项：
本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。 如果使用微波炉加热，请特别注意避免沸腾。以免因暴沸而导致凝胶碎裂。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题：
1. 无染色条带：可能上样量太少，建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。 2. 背景太高：可能杂质没有除尽，建议延长最初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后，把凝胶放置在
蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡过夜，通常可以取得较好的脱色效果。 3. 染色条带的灵敏度不够理想：可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色，重复染色可以改善染色效果。在加热情况
使用说明：
1. 电泳结束后，取胶放入约50-100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5分钟，倒弃液体，再重复两次，共洗涤三次。 注：本步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。如果不能充分去除SDS会导致背景较高，如果胶非常厚，每次的 洗涤时间需适当延长并且洗涤次数也需适当增加。蒸馏水洗涤去除凝胶中的杂质时，如果使用经过加热至接近沸腾的蒸 馏水，每次洗涤1-2分钟即可。
蛋白质含量的测定考马斯亮蓝染色法
1 2
洗涤
用洗涤液洗涤染色后的蛋白质样品，去除多余的 染料。
测量
使用分光光度计测量蛋白质样品的吸光度值。
3
结果计算
根据标准曲线和吸光度值计算蛋白质含量。
04
结果分析
数据记录与整理
数据记录
在实验过程中，应详细记录每个实验 组的吸光度值，包括空白对照组。
数据整理
将实验数据整理成表格，包括实验组 别、吸光度值以及相应的波长等。
VS
药物研发
在药物研发过程中，考马斯亮蓝染色法可 用于评估药物对蛋白质表达的影响，为新 药研发提供实验依据。
未来发展方向与挑战
技术优化
随着科学技术的不断发展，考马斯亮蓝染色法需要不断优化和完善， 以提高检测的灵敏度和特异性。
应用领域拓展
随着蛋白质组学研究的深入，考马斯亮蓝染色法的应用领域将进一 步拓展，为生命科学和医学研究提供更多支持。
蓝色与黄色
考马斯亮蓝染色后呈蓝色，与未结合蛋白质的黄色形成鲜明对比，便于观察和 检测。
颜色深浅与浓度正相关
随着蛋白质浓度的增加，染色后样品的颜色逐渐加深，通过比色法可测定出不 同浓度下的光密度值，进而计算出蛋白质浓度。
03
实验步骤
样品准备
样品收集
蛋白质提取
选择具有代表性的样品，确保样品新 鲜、无污染。
05
应用与展望
在生物学领域的应用
蛋白质表达分析
考马斯亮蓝染色法常用于检测细胞或组织中蛋白质的表达水平，有助于研究生物体的生 理和病理过程。
蛋白质分离与鉴定
通过考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行染色，可以方便地对蛋白质进行分离和鉴定，为蛋 白质组学研究提供技术支持。
在医学领域的应用
考马斯亮蓝法——完整版
一、基本原理
酸性溶液两者结合，使染料溶液 的最大吸收峰的位置，由465nm变 为595nm，溶液的颜色也由棕黑色 变为兰色。
二、试剂与器材
1. 试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml
（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量 不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏 差，在制作标准曲线时最好选用 γ—球蛋白为标准蛋白质， 以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有： 去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1M 的NaOH
三、操作方法
1、标准曲线的制作
试管编号
0123456
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
最好的方法； 干扰物质少； 颜色稳定； 颜色深浅随不同
双缩脲反应；磷 钼酸－磷钨酸试 剂 被 Tyr 和 Phe 还 原
非蛋白氮（可 用三氯乙酸沉 淀蛋白质而分 离）
硫酸铵； Tris缓冲液； 某些氨基酸
各种嘌吟和嘧 啶； 各种核苷酸
硫酸铵； Tris缓冲液； 甘氨酸； 各种硫醇
用于标准蛋白质 含量的准确测定； 干扰少；费时太 长
用于快速测定， 但不太灵敏；不 同蛋白质显色相 似
用于层析柱流出 液的检测；核酸 的吸收可以校正
考马斯亮蓝染色原理
考马斯亮蓝染色原理
考马斯亮蓝染色原理是一种非常重要的染色技术，它可以有效解决染色过程中的颜色发生改变的问题。
19世纪末，考马斯亮蓝染料在染色领域内开始流行，它成为一种有效的染色方法，能够有效地提供出美观、耐用的染色效果。
考马斯亮蓝染色原理是一种常用的染色技术，它依据矿物质中的亮蓝矿物为原料，以及活性盐的辅助，通过精密的混合和周转，以及微观的改变来发挥其有效的染色效果。
在染色过程中，染色料与活性盐形成一个“涂料-原料”的交互，以及“铸锭处理-熔融”的依赖，从而有效地提供出良好的染色效果。
此外，考马斯亮蓝染色原理还可以提供出一种精确、良好的染色效果。
根据不同的环境条件，可以精确地控制所需要的颜色深浅，并有效地保证染色材料的纯净性，从而获得出精确、良好的染色效果。
此外，考马斯亮蓝染色还可以较好地防止抗菌性漂浮微粒的影响，且比常规染料具有更高的抗氧化性，从而使染色物料的使用寿命大大延长。
另外，考马斯亮蓝染色原理还有效地降低了生产工艺的复杂度。
比起其他染色方法，减少了很多涉及熔融，干燥等复杂工序，有效提高了染色材料的优质性，降低了生产成本。
综上所述，考马斯亮蓝染色原理是一种有效的染色方法，可以有效实现出良好的染色效果，又有效降低了生产工艺的复杂度，从而受到广泛的应用。
它不仅可以用于纺织品的染色，还可以用于化工、油
漆等行业的染色，以及塑料、树脂的加工业的染色，从而发挥其重要的作用。
最优考马斯亮蓝染色Protocol
考马斯亮蓝染色推荐选用前三种染色方法,另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验,染色效果不好,不推荐使用,仅供参考;见后页比对照片操作步骤：1、取出SDS-PAGE凝胶,经超纯水漂洗；以下每步操作皆在摇床上进行;2、固定：将凝胶放入相应的固定液中,固定1小时；3、染色：取出凝胶,放入相应的染色液中,过夜染色；也可依实际情况缩短时间4、脱色胶体法&改良法：凝胶放入纯水中洗脱,换液数次；脱色Neuhoff法：取出凝胶,用M Tris-H3PO4缓冲液漂洗2分钟;再用25%乙醇淋洗＜1 min;然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可;试剂的配制：1、胶体考马斯亮蓝染色法colloidal Coomassie brilliant blue,cCBB：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇脱色液：H2O2、改良考马斯亮蓝染色法modified Coomassie brilliant blue,mCBB：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇着色1小时即可;脱色液：H2O3、Neuhoff染色法：固定液：12%三氯醋酸染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇;染色时,取一定体积的染色液,加入1/4体积的甲醇;脱色所需：M Tris-磷酸缓冲液、25%乙醇、10%醋酸4、传统考马斯亮蓝染色法：固定液：%甲醇、%乙酸染色液：%甲醇、%乙酸、% CBB-G250脱色液：5%甲醇、%乙酸5、网上方法：固定液：40%甲醇、10%乙酸染色液：30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250脱色液：30％甲醇,10％乙酸比对照片：每块胶左道是Marker质量原因,未跑开ˇˇ 上样量5μl,右道是BSA分子量68kDa,上样量为3μg.-Neuhoff法传统法胶体法改良法网上法。
考马斯亮蓝蛋白快速染色液
贮存：
室温密封保存
使用说明 1.洗涤 电泳结束后，将凝胶剥离玻璃板， 放入烧杯或塑料盒中，加入 100ml 的蒸馏水。 煮沸或微波炉中加热至沸腾，维持 1 分钟， 弃水。 2.染色 倒入适量染色液，煮沸或微波炉中 加热至沸腾，维持 2 分钟；如果胶非常厚， 染色的时间需适当延长。
注：在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。 加热时，敞开容器口，容器尽量大些 ，以免出现因
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 Commassie Blue Fast Staining Solution
包装：
Cat.No
产品名称
规格
WB021 考马斯亮蓝蛋白胶快 100ml
WB022
速染色液
50ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱml
产品简介： ※考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝R-250 为染料配 制而成的染色液，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE 蛋白电泳胶的快速染色，或Western转膜后PAGE胶 上残余蛋白的检测。 ※考马斯亮蓝快速染色液采取新配方，超薄胶只需 染色 10 分钟，就可以显示出清晰的蛋白电泳条带； 检测到低达 10ng的蛋白电泳条带。 ※无需对蛋白和凝胶进行固定，操作更加简单。 ※本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性 气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用 剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，而本公司生产的考 马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒 和无刺激性气味。 ※本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色 的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。
考马斯亮蓝染色总结
考马斯亮蓝染色总结考马斯亮蓝染色是一种广泛应用于生物学实验中的染色技术，它可以用于检测许多不同的分子和细胞类型。
这种染色方法是法国生物学家Louis-Charles Malassez于1867年发明的，后由德国生物学家Richard Kuhn于1933年进行改良，使其成为现代生物学实验的标准技术之一。
本文将对考马斯亮蓝染色的方法、应用以及优缺点进行总结。
一、方法考马斯亮蓝染色的原理是，亮蓝染料可以与DNA的碱基对结合而形成复合物。
这种染色技术需要一些基本试剂，包括亮蓝染料、甲醛、醋酸以及石蜡等。
具体操作步骤如下：1. 取需要染色的细胞或组织样本，用生理盐水进行清洗；2. 将样本固定在载玻片上，用甲醛和醋酸进行固定处理；3. 将载玻片在70％乙醇和95％乙醇中依次浸泡，以去除固定剂；4. 在50％和75％醇溶液中浸泡数分钟，使样本逐渐变暗；5. 用亮蓝染料染色，通常需要在100倍和400倍低倍镜下观察。
二、应用考马斯亮蓝染色可以用于检测DNA、RNA、核蛋白和细胞质等细胞成分。
在分子生物学实验中，考马斯亮蓝染色被广泛应用于检测DNA条带的大小、纯度和含量。
此外，它还可以用于细胞形态和结构的观察，如观察细胞核、染色质和核仁等。
在医学领域中，考马斯亮蓝染色可以用于检测肿瘤、癌细胞、炎症细胞和血液样本等。
从组织样本中提取DNA或RNA 时，也会使用该染色技术。
三、优缺点优点：1.对许多不同类型的细胞和分子具有高度灵敏度和特异性。
2.操作简便，仅需要一些基本试剂和设备。
3.观察结果清晰，可以展示细胞组织的形态和结构。
4.染色技术稳定性好，结果可复制性高。
缺点：1.过程中可能会使样本遭到破坏或溶解。
2.亮蓝染料可能与背景杂质结合，导致结果不准确。
3.需要专业人员进行染色和观察，较为复杂。
4.染色后，样品无法再进行分子生物学的使用，比如PCR 反应等。
结语：考马斯亮蓝染色是一种简便、灵敏并且重要的分子生物学实验技术。
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考马斯亮蓝染色
推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。
（见后页比对照片）
操作步骤：
1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。
）
2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时；
3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间）
4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次；
脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用0.1 M Tris-H3PO4缓冲液（pH6.5）漂洗2分钟。
再用25%乙醇淋洗＜1 min。
然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。
试剂的配制：
1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）：
固定液：40%甲醇、10%乙酸
染色液：1.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB-G250、20%乙醇
脱色液：H2O
2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）：
固定液：40%甲醇、10%乙酸
染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、0.12% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。
脱色液：H2O
3、Neuhoff染色法：
固定液：12%三氯醋酸
染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、0.02% CBB-G250、使用前振摇。
染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。
脱色所需：0.1 M Tris-磷酸缓冲液（pH6.5）、25%乙醇、10%醋酸
4、传统考马斯亮蓝染色法：
固定液：45.4%甲醇、4.6%乙酸
染色液：45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.1% CBB-G250
脱色液：5%甲醇、7.5%乙酸
5、网上方法：
固定液：40%甲醇、10%乙酸
染色液：30%甲醇、10%乙酸、0.125% CBB-G250
脱色液：30％甲醇，10％乙酸
比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇˍˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg.
Neuhoff法
传统法胶体法改良法网上法。