考马斯亮蓝染色
考马斯亮蓝染色的原理和方法
考马斯亮蓝染色的原理和方法在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用。
因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。
考染的历史考马斯亮蓝染色最早由fazekas等在1963年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。
1965年meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。
考染的灵敏度托福马斯亮蓝染色可以达至0.2~0.5μg（200~500ng），最高可以验出0.1μg蛋白；银染的灵敏度比考染高将近100倍，最高可以验出2ng蛋白。
通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白，如在8.6×6.8cm（w×l）?.75mm厚的胶上15~20μg蛋白大约是下面这样的条带：考马斯亮蓝染料的种类托福马斯亮蓝分成r-150、r-250、r-350、g-250等。
其中r-350最为灵敏，r为红蓝色，g为绿蓝色。
r-250即为三苯基甲烷，每个分子所含两个so3h基团，略偏酸性，与氨基白一样也就是融合至蛋白质的碱性基团上。
g-250即二甲花青亮蓝，就是一种甲基替代的三苯基甲烷。
所推荐一种考染的方法⑴电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500ml乙醇，100ml冰醋酸，400ml蒸馏水）中至少30min，如有必要可在固定液中浸泡过夜；⑵将紧固后的凝胶在冷的染色液（0.29g托福马斯亮蓝熔化在250ml脱色液中，在采用前边烘烤边冷却至60℃）中煮沸10min，然后用蒸馏水将凝胶热解一次；⑶多次变换脱色液（250ml乙醇，80ml冰醋酸，加蒸馏水至1l），直至凝胶背景脱净为止，为加快脱色，可略加温度；以上各步最好用振荡器（摇床）震荡染色皿。
⑷为了防止凝胶干燥后的龟裂，脱去背景色的凝胶在保存液（25ml87%甘油加225ml脱色液）中浸泡30min。
然后将凝胶放在玻璃板上，再用保存液浸湿玻璃纸包住凝胶在室温下晾干。
须要声明一点，托福马斯亮蓝染色的方法不是唯一的，你可以参照几种之后总结一个适宜自己的方案出。
考马斯亮蓝染色原理
考马斯亮蓝染色原理
考马斯亮蓝是一种广泛应用于生物学实验室的染色试剂，它在细胞生物学和分
子生物学领域发挥着重要作用。
了解考马斯亮蓝染色的原理对于正确使用和解释实验结果至关重要。
本文将介绍考马斯亮蓝染色的原理及其在实验中的应用。
首先，我们来了解一下考马斯亮蓝染色的原理。
考马斯亮蓝是一种阴性染色试剂，它通过与细胞内的蛋白质结合来显示细胞的形态和结构。
考马斯亮蓝分子中含有许多带负电荷的基团，这些基团可以与细胞内的带正电荷的蛋白质发生静电作用，从而使细胞内的蛋白质被染色成蓝色。
这种染色方式可以帮助我们观察细胞的形态、大小和分布情况。
其次，考马斯亮蓝染色在实验中有着广泛的应用。
在蛋白质电泳实验中，考马
斯亮蓝通常用来染色蛋白质条带，通过比较不同样品中蛋白质的表达情况。
此外，在细胞培养实验中，考马斯亮蓝也可以用来观察细胞的形态和数量变化。
在分子生物学实验中，考马斯亮蓝还可以用来检测DNA或RNA条带，帮助研究者确定目
标分子的存在和纯度。
除了以上的应用，考马斯亮蓝染色还可以帮助我们了解细胞内蛋白质的分布情况。
通过观察染色后的细胞，我们可以发现某些蛋白质在细胞内的定位，从而推断其可能的功能和作用机制。
这对于研究细胞生物学和分子生物学中的许多问题都具有重要意义。
总之，考马斯亮蓝染色是一种简单而有效的染色方法，它通过与细胞内蛋白质
的静电作用来显示细胞的形态和结构。
在实验中，它有着广泛的应用，可以帮助研究者观察蛋白质的表达情况、细胞的形态变化以及分子的定位等。
因此，了解考马斯亮蓝染色的原理及其应用对于开展生物学实验和解释实验结果具有重要意义。
考马斯亮蓝染色总结
考马斯亮蓝染色总结考马斯亮蓝染色是一种广泛应用于生物学实验中的染色技术，它可以用于检测许多不同的分子和细胞类型。
这种染色方法是法国生物学家Louis-Charles Malassez于1867年发明的，后由德国生物学家Richard Kuhn于1933年进行改良，使其成为现代生物学实验的标准技术之一。
本文将对考马斯亮蓝染色的方法、应用以及优缺点进行总结。
一、方法考马斯亮蓝染色的原理是，亮蓝染料可以与DNA的碱基对结合而形成复合物。
这种染色技术需要一些基本试剂，包括亮蓝染料、甲醛、醋酸以及石蜡等。
具体操作步骤如下：1. 取需要染色的细胞或组织样本，用生理盐水进行清洗；2. 将样本固定在载玻片上，用甲醛和醋酸进行固定处理；3. 将载玻片在70％乙醇和95％乙醇中依次浸泡，以去除固定剂；4. 在50％和75％醇溶液中浸泡数分钟，使样本逐渐变暗；5. 用亮蓝染料染色，通常需要在100倍和400倍低倍镜下观察。
二、应用考马斯亮蓝染色可以用于检测DNA、RNA、核蛋白和细胞质等细胞成分。
在分子生物学实验中，考马斯亮蓝染色被广泛应用于检测DNA条带的大小、纯度和含量。
此外，它还可以用于细胞形态和结构的观察，如观察细胞核、染色质和核仁等。
在医学领域中，考马斯亮蓝染色可以用于检测肿瘤、癌细胞、炎症细胞和血液样本等。
从组织样本中提取DNA或RNA 时，也会使用该染色技术。
三、优缺点优点：1.对许多不同类型的细胞和分子具有高度灵敏度和特异性。
2.操作简便，仅需要一些基本试剂和设备。
3.观察结果清晰，可以展示细胞组织的形态和结构。
4.染色技术稳定性好，结果可复制性高。
缺点：1.过程中可能会使样本遭到破坏或溶解。
2.亮蓝染料可能与背景杂质结合，导致结果不准确。
3.需要专业人员进行染色和观察，较为复杂。
4.染色后，样品无法再进行分子生物学的使用，比如PCR 反应等。
结语：考马斯亮蓝染色是一种简便、灵敏并且重要的分子生物学实验技术。
考马斯亮蓝染色的原理
考马斯亮蓝染色的原理
考马斯亮蓝染色是一种常用的细胞和组织染色方法，广泛应用于生物学和医学研究中。
该染色方法的原理是利用考马斯亮蓝钴染料对细胞和组织中的核酸物质进行染色。
考马斯亮蓝是一种碱性染料，其负荷正电荷，而核酸物质则具有负电荷。
当考马斯亮蓝溶液与细胞或组织接触时，考马斯亮蓝分子中的正电荷部分会与核酸物质中的负电荷部分发生静电吸引作用。
这种吸引力使得考马斯亮蓝分子能够紧密地结合在核酸物质上，从而实现对核酸的染色。
在染色过程中，通常会加入钴盐作为增强剂。
钴离子能够进一步提高考马斯亮蓝与核酸的结合力，使得染色效果更加明显。
染色后的细胞或组织在显微镜下观察时，核酸物质会呈现出深蓝的颜色，而其他细胞结构和背景则呈现出浅蓝或无色，使得核酸的位置和分布能够清晰可见。
总之，考马斯亮蓝染色的原理是通过考马斯亮蓝钴染料与核酸物质间的静电相互作用，实现对细胞和组织中核酸的着色，从而使其能够在显微镜下被观察和分析。
考马斯亮蓝染色总结
12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇30ml冰乙酸10ml加ddH2O至100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇30ml冰乙酸10ml加dd H2O至100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。
2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。
（2）脱色液也可以用0.5％mol/l的氯化钠，没有气味，脱色效果也不错。
但胶可能会胀的厉害!（3）20%的甲醇和0.1M的tis-磷酸（PH6.5）先用tis-磷酸（PH6。
5）漂洗2min，然后用20%的甲醇漂洗1min（最好不要超过1min），最后用20%的NH4SO4固定30min3. dd H2O煮法脱色PAGE胶染色完毕后，如果用一般的甲醇－乙酸脱色液进行脱色，一般至少需要2－3h，可利用蒸馏水煮的方法：（1）. 先将500ml蒸馏水放在一个干净的烧杯中，在电炉上煮沸。
（2）. 将染色好的胶用DD水冲净后放入煮沸的蒸馏水中，煮3～5min。
（3）. 将DD水倒掉，看胶是否已经脱净，如果还不好，可以用少量水再煮一次。
一般整个脱色过程最多15min即可搞定！还可以避免每次脱色时的醋酸味！4. 重复利用（1）染色液和脱色液重复次数不一定的,可以根据他们的着染能力和脱色能力考虑是否换新的.夏季甲醇挥发快,用3~5次应该可以用.当然,用时要加盖.（2）脱色时注意防止挥发,脱色液可以用活性碳处理后反复用多次的.（3）脱色液反复使用，用两三次后用活性炭“包被”的滤纸过滤，滤纸可反复使用。
脱色液反复使用后，胶有点泛红，但不影响观察，如果要发表，建议用新配脱色液。
5. 加快染色和脱色速度（1）染色和脱色都可以在微波炉中加热甚至煮沸，很省时间。
但注意不要沸腾时间太长，否则容易把胶上煮出泡状的破损。
（2）若为了提高考染及脱色速度，可在45℃左右的水浴中进行，染色时间只需几分钟（其间轻轻晃动一二次，整个胶变为较深的亮兰色即可）。
考马斯亮蓝染色法
考马斯亮蓝染色法
原理
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰(lmax)的位置，由465 nm变为 595 nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。
配制
考马斯亮蓝G―250 100 mg溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL。
注意事项
1.在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。
2.测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。
3.利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
考马斯亮蓝染色法
考马斯亮蓝染色法考马斯亮蓝染色法——标准方法1．电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。
加入5倍于凝胶体积的0．25％考马斯亮蓝R—250(溶解于50％甲醇和10％乙酸中)。
2．室温下振摇温育4h至过夜。
3．去除染色液，收集保存可重复使用20～40次。
4．依次在25％甲醇、7．5％乙酸中室温振摇下脱色。
灵敏度为0．1～0．5ttg蛋白／每条带。
注：①使用加热的染液或脱色液可以缩短染色或脱色的时间。
将染液或脱色液在微波炉或水浴中加热(大约50-6013)。
染色时间可缩短至20min，脱色时间约1—2h。
②加入泡沫橡胶(海绵)、羊毛状物或其他物品吸收染料，可以加快脱色时间，特别是在室温下脱色时。
考马斯亮蓝染色法——快速方法1．将凝胶放入一洁净的玻璃或塑料培养皿中加入5倍于凝胶体积的0．25％考马斯亮蓝R-250(溶解于50％三氯乙酸中)。
2．室温下振摇温育20min。
3．去除染色液，收集保存可重复使用多次，用水洗去未与凝胶结合的染料。
4．加入数倍体积的脱色液(25％甲醇、7％乙酸)。
必要时更换脱色液，将凝胶加温或在脱色液中放入海绵、滤纸片等吸收残余的染料，有助于加快脱色。
灵敏度为1．0ug蛋白／每条带。
考马斯亮蓝染色法——最高灵敏度1．染色前，考马斯亮蓝G-250(系考马斯亮蓝R-250的二甲基化衍生物)必须纯化。
因为商品制剂中的杂质可增强染色背景。
在250m17．5％乙酸中溶解4g染料，加热到70℃；加入44g硫酸铵，溶解后，冷却过滤或置室温离心(3000g，10min)，去除上清液，让染料干燥。
2．配制染色液：在500m1 2％磷酸中溶解30g硫酸铵，待其完全溶解后，加入溶于10m1水中的0．5g 纯化的考马斯亮蓝G—250。
室温保存。
3．电泳后，将凝胶放入一洁净的玻璃或塑料容器中加入5倍于凝胶体积的12．5％三氯乙酸。
4．室温下振摇温育1h或更长时间。
5．排干液体。
摇动考马斯亮蓝G—250染液，使大颗粒胶体分散，加至凝胶内。
考马斯亮蓝染色法原理
考马斯亮蓝染色法原理考马斯亮蓝染色法是一种常用于病理学实验室的染色技术，主要用于肿瘤组织的诊断和研究。
该染色法的原理是利用某些化学物质的亲和性，将细胞或组织中的特定结构染色，从而能够观察到细胞和组织的形态特征，进而进行病理学分析。
考马斯亮蓝染色法的原理主要涉及到两个方面，即亲和性和染色效应。
首先是亲和性，考马斯亮蓝染色法使用的考马斯亮蓝染料具有与DNA分子特异性结合的能力。
DNA在细胞核中起着存储遗传信息的作用，而考马斯亮蓝染料能够与DNA分子中的负电荷结合，形成染色复合物。
这种亲和性使得考马斯亮蓝染料能够选择性地染色细胞核。
其次是染色效应，考马斯亮蓝染色法使用的考马斯亮蓝染料在细胞核中形成的染色复合物呈现出蓝色。
这是因为考马斯亮蓝染料分子中含有苯环结构，该结构能够吸收可见光中的蓝色波长，使得染色复合物呈现蓝色。
而其他组织结构或细胞器中的成分不具备与考马斯亮蓝染料结合的亲和性，因此不会被染色。
考马斯亮蓝染色法的操作步骤相对简单。
首先，需要将待染的组织切片置于玻片上，并进行固定和脱水处理。
接下来，将考马斯亮蓝染料溶液滴在组织切片上，使其与细胞核结合形成染色复合物。
然后，将组织切片在显微镜下观察并进行分析。
考马斯亮蓝染色法的应用广泛，特别是在肿瘤学领域。
通过使用该染色法，可以观察肿瘤细胞的形态特征，如细胞核形态、大小、核仁的形成情况等。
此外，还可以通过对组织切片的染色程度进行评估，从而判断肿瘤的恶性程度。
考马斯亮蓝染色法还可以用于研究细胞增殖、凋亡和细胞周期等生物学过程。
考马斯亮蓝染色法是一种常用的病理学染色技术，通过特定化学物质与细胞核中的DNA结合形成染色复合物，从而实现对细胞和组织的染色。
该染色法的原理清晰，操作简单，具有广泛的应用前景。
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考马斯亮蓝染色
一产品简介：
本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。
二保存条件：室温保存，至少一年有效。
注意事项：
可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
三使用说明：
1. 常规染色脱色方法：
a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。
染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c. 倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。
通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。
脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
f．完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨，可以把胶保
存在含20%甘油的水中。
长期保存可以制备干胶。
2. 快速染色脱色方法：
a. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。
b. 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。
c. 倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
e. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
f. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。
此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
g. 更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。
h. 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨，可以把胶保
存在含20%甘油的水中。
长期保存可以制备干胶。
四常见问题：
1. 常规染色脱色方法和快速染色脱色方法的优缺点？
常规染色脱色方法耗时较长，但检测灵敏度更高，染色效果更加稳定。
快速染色脱色方法通常检测灵敏度略低，并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况，需特别注意。
另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发，最好能在通风橱中进行。
附：
考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）：别名考马斯灿烂蓝、弱酸性艳蓝6B、考马斯亮兰R250、酸性蓝83、考马斯亮蓝R，室温保存。
分子式：C45H44O7H3S2Na，MW=825.99。
化学性质：不溶于冷水，微溶于热水呈艳红色蓝光，微溶于乙醇呈艳蓝色。
遇浓硫酸呈橙红色。
其水溶液加氢氧化钠呈紫色。
R250中的R代表Red，偏红，R250属于慢染，染色浓度为65%，但脱色脱的完全，故主要用于电泳条带染色。
λmax=560―590nm，染色灵敏度比氨基黑高5倍。
尤其适用于SDS 电泳微量蛋白质染色，但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意。
考马斯亮蓝G250，又名Xylene brilliant cyaninG。
比考马斯亮蓝R250多二个甲基，MW=854，λmax=590―610nm。
G250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。
优点：反应速度快，约在2分钟左右达到平衡，在室温一小时内稳定；在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择性地染色蛋白质而几乎无本底色。
所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析，在0.01~1.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。