多波长高效液相色谱法同时测定栀子中的三类成分
高效液相色谱法测定食品中栀子黄
[作者简介] 李永利(1972-),男,学士,主管技师,主要从事卫生理化检验工作。
【化学测定方法】高效液相色谱法测定食品中栀子黄李永利,张焱,翟志雷(河南省疾病预防控制中心,郑州 450016)[摘要] 目的:建立食品中栀子黄的高效液相色谱测定方法。
方法:样品经处理后,采用乙腈、水洗脱,用带有紫外检测器的高效液相色谱仪测定。
结果:方法检测限为1215ng,相对标准偏差藏花酸为312%,藏花素为116%。
回收率为9210～9810%。
结论:本方法前处理简便,检测灵敏度高,色谱峰分离效果好,具有良好的稳定性和重现性,适用于食品中栀子黄色素的测定。
[关键词] 栀子黄;藏花素;高效液相色谱[中图分类号] O65717+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2008)01-0072-02D eterm i n a ti on of cape j a s m i n e yellow i n food by HPLCL i Yong 2li,Zhang Yan,Zhai Zhi 2lei(Henan Center for D iseases Contr ol and Preventi on,Zhengzhou 450016,China )[Abstract] O bjecti ve:To establish a high p ressure liquid chr omat ography (HP LC )analyticalmethod for cape jas m ine yell ow in f ood 1M ethods:Sa mp les after extracti on were detected by HP LC 1Results:The method p recisi on was 116%1Detecti on li m it was 1215ng 1The recoveries ranged fr om 9210%t o 9810%1Conclusi on:Thismethod is si m p le,rap id and accurate and can be used t o deter m ine cape jas m ine yell ow in f ood 1[Key words] Cape jas m ine yell ow;Cr ocin yell ow;HP LC 栀子黄(Cape jas m ine yell ow,俗称黄栀子),由栀子果实、香椿属植物的花、毛蕊花属植物的花、藏红花的花等制取的一种食用天然黄色素。
高效液相色谱法测定湖北栀子熊果酸含量
１ １ ６・
科 投 论 坛
高效液相色谱 法测 定湖北栀子 熊果酸 பைடு நூலகம்量
曾令 红
（ 黑龙江天辰 药业有 限公 司， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ ０ ）
摘 要： 本 文 采 用 高校 液 相 测 定 了湖 北 栀 子 中 熊 果 酸 的 含 量 ， 固定 相 为 ： 安捷伦 Ｃ １ ８ （ ４ ． ６ ａ ｒ ｍ ×２ ５ ０ ｍｍ， ５ ｕ ｍ） ， 以 乙腈 一 甲 醇 一 水 一磷 酸一三 乙胺 （ ５ ０： ３ ０： ２ ０： ０ ． ０ ２： ０ ． ０ ４ ） 为流动相 ， 检测波长为 ２ １ ０ ｎ ｍ， 流速 １ ． ０ ｍＬ ・ ｍ ｉ ｎ 一 １ ， 柱温 ： ３ ０ ￣ Ｃ。熊果酸在 １ ０ ０ ～ ５ ０ ０ ｇ － ｍＩ １范围内 呈 良好的线性 关系。 熊果酸的平均 回收率为 ９ ９ － ３ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ６ ６ ％（ ｎ ＝ ６ ） ； 此方法 简便 、 准确 、 重现性好 ， 可用于湖北栀子 中熊果酸的含 量测
定。
关键 遢 湖北 栀干 锯果酸玲 量 栀子 （ 学名 ： Ｇ ａ ｒ ｄ ｅ ｎ ｉ ａ ｉ ａ ｓ ｍ ｉ ｎ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ Ｅ ｌ ｌ ｉ ｓ ） ￣名： 支子 、 越桃 、 山栀 结果表 明此方法 的重现性 良好 。 子、 枝子 、 小 卮子 、 黄栀 子 、 山栀 、 木丹 、 鲜支 、 卮子 、 黄鸡子 、 白蟾 ， 是 ２ ． ７稳定性试验。 茜草科植物栀子的果 实。栀子 的果实是传统 中药 ， 具有护肝 、 利胆 、 依照 ２ ． ３项下供试 品制备方法 制备供试 品溶液 至于零 摄 氏度 分别在 ０ ， ０ ． ５ 、 １ ． ０ 、 １ ． ５ 、 ２ ． ０小时精密 吸取供试 品溶液注入液 降压 、 镇静 、 止血 、 消肿等作用。 在中医临床常用于热病心烦 、 湿热黄 冰箱内 ， 进样测定 ， 供试品熊果 酸峰面积积分值的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ８ ％。 疸、 淋证、 肝火 目赤 、 口舌生疮 、 扭伤肿痛等 。《 药性赋》 记载 ： “ 味苦 ， 相色谱仪 ， 性大寒 ， 无 毒。沉也 ， 阴也 。 其用有二 ： 疗 心中懊 憔颠倒而不得眠 ， 治 结果表明熊果酸 至于零摄 氏度冰箱 内至少在 ２小时 内稳定。 ２ ． ８回收率试验 。 脐下血滞小便而不得利。易老云 ： 轻飘而象肺 ， 色赤而象火 ， 又 能泻 采用加样 回收试 验 ， 取 已知含量 的同一批 供试品各 ６份 ， 精密 肿中之火 。 ” 栀子具有保护肝脏 、 抑制肝癌细胞 、 防治动脉粥样硬化 、 抗 血栓 、 镇痛解热、 抗炎等作用 。 本 文采用高校液相测定了湖北栀 称定 ， 分精密 添加 一定量的熊果 酸对 照品 ， 按供试 品制备所述 方法 子中熊果酸 的含量 。 制备供试品溶液 ， 测定含量（ 同时测定样品含量 ） ， 计算 回收率 。６次 １ 仪 器 与试 药 测定 的平均 回收率为 ９ ９ ． ３ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ６ ６ ％。 Ｇ Ｗ— Ｕ Ｎ超纯水器 （ 北京普析通用仪 器有限责任公 司 ） ； Ｌ Ｃ ３ ０ ０ ０ ２ ． ９样品含量测定 。 高效液相色谱仪（ 安徽 皖仪科技股份有 限公司 ） ； Ｄ Ｃ 一 ０ ５ ０ ６ Ａ高精度 依 照上 述含量测定方法 ， 测定湖北栀 子三批样 品 ， 每批 测定三 液晶显示低 温恒温槽 （ 上 海衡 平仪 器仪 表厂 ） ； Ｓ Ｐ Ｃ Ｃ 一 ６ 一 Ｈ Ｔ Ｄ数 码可 次 。 调超声波清洗机 （ 东莞市谱标 实验器材科技有 限公 司 ） ； 奥豪斯 Ｅ ｘ — ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｒ 专业型分析天平 （ 奥豪斯仪器上海有 限公 司 ） ； Ｕ Ｖ 一 ５ １ ０ ０ Ｈ型 紫外可见分光光度计 （ 上海元析仪器有 限公 司） 。 熊果酸对照 品由中 国药 品生物制品检定所提供 。乙腈 （ 现代东方（ 北京 ） 科技发展有限 公 司海淀分公司 ） 、 冰醋酸 （ 现代东方（ 北京 ） 科技发展有限公司海淀 分公 司 ） 、 甲醇（ 格 耐博 生物科技 （ 上海 ） 有限公司 ） 、 磷 酸（ 现代 东方 （ 北京 ） 科技 发展有 限公 司海 淀分公 司 ） 、 三乙胺 （ 格 耐博生物 科技 （ 上海 ） 有限公司 ） 、 三氟乙酸（ 现代东方（ 北京 ） 科技发展有限公司海 ３ 讨 论 淀分公 司） 。 分别考察流动相为 １ ％醋酸 （ Ａ） 一 乙腈 （ Ｂ） ，梯 度洗 脱（ ０ ｍ ｉ ｎ ， ２ 含量测定 １ ０ ％Ｂ； ７ ａｉ ｒ ｎ ， ３ ３ ％Ｂ； ５ ５ ｍ ｉ ｎ ， ３ ３ ％Ｂ） ，乙腈 一 甲醇一 水一 磷 酸一 三 乙胺 ２ ． １色谱条件。 （ ５ ０ ： ３ ０ ： ２ ０ ： ０ ． ０ ２ ： ０ ． ０ ４ ） ， 乙腈 （ Ａ） 一 水（ Ｂ） 为流动相 ， 梯 度 洗脱 ［ ０ ｍ ｉ ｎ 依据查阅文献及考查 的结果 ， 确定色谱条件如下 。色谱柱为安 （ １ ８ ％Ａ） ２ ４ ｍｉ ｎ （ ２ ２ ％Ａ） ＿ ＋ ２ ６ ｍ ｉ ｎ （ ２ ６ ％Ａ） 一３ ０ ｍ ｉ ｎ （ ３ ２ ％Ａ） 一５ ０ ｍｉ ｎ 捷伦 ｃ 。 规格 为（ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍｍ， ５ ｕ ｍ） ； 流动相 为乙腈一 甲醇一 水一 磷 （ ３ ３ ． ５ ％Ａ） － － ＊ ５ ５ ｍｉ ｎ （ ３ ８ ％Ａ） １ ， 流速 为 １ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ ， 乙腈一 水一 三氟 乙酸 酸一 三 乙胺 （ ５ ０ ： ３ ０ ： ２ ０ ： ０ ． ０ ２ ： ０ ． ０ ４ ） ； 检测 波长 为 ２ １ ０ ｎ ｍ； 流速 １ ． ０ ｍ Ｌ・ （ ６ ： ９ ４ ： ０ ． ０ ５ ） ， 水一 甲醇 一 三 乙胺 （ ６ ０ ： ４ ０ ： ０ ． ０ １ ） ， 甲醇 一 水一 冰 醋酸 （ ４ ５ ： ａｉ ｒ ｎ ； 柱温 ： ２ ５ ￣ Ｃ。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于 ２ ０ ０ ０ 。 ５ ５ ： １ ） ， 乙腈一 ０ ． ０ ８ ％磷酸溶液 （ ２ ０ ： ８ ０ ） 不 同比例 的流动相 ， 结果 以乙 ２ ． ２供试品溶 液的制备 。 腈一 甲醇一 水一 磷酸一 三乙胺 （ ５ ０ ： ３ ０ ： ２ ０ ： ０ ． ０ ２ ： ０ ． ０ ４ ） 为 流动相 ， 供试 品各 取 湖北 栀子 ， 低 温干燥 ， 粉碎 ， 精 密称取 ， 加４ ０ 毫 升 甲醇 ， 超声 峰分离效果最 好 ， 故选用 以乙腈一 甲醇 一 水一 磷 酸一 三 乙胺（ ５ ０ ： ３ ０ ： ２ ０ ： 提取ｏ ． ５ 小时， 过滤， 将滤液转移置 ５ ０ ｍ ｌ 棕色容量瓶中， 用甲 醇稀 ０ ． ０ ２ ： ０ ． ４） ０ 为流动相 。此方法简便 、 准确 、 重现性好 ， 可用 于湖北栀子 释至刻度 ， 摇匀 ， 滤过 ， 取续滤液 ， 即得 。 ≮中熊果 酸的含量测定 。湖北 栀子 中熊果酸 的含 量按干 品算 不少于 ２ ． ３对照品溶液的制备。 ０ ． ３ ｍｇ ｇ 。试验发现对照品溶液 、 样 品溶液要置于 ０ ￣ Ｃ 冰箱 中贮存 ， 测 精 密称取熊果酸对照品约 ５ ｍｇ ，用 流动相溶解并稀释成每 ｌ ｍ ｌ 定时分析室的温度控制在 ２ ５ ￣ Ｃ 左右 ， 以避免熊果酸分解对结果造成 中含 ２ ０ ０ １ ｘ ｇ的溶液 ， 作 为对照溶液 。 影响 。 ２ ． ４准 曲线 的制备。 参考 文献 制 备 浓度 为 １ ０ ０ 、 １ ５ ０ 、 ２ ０ ０ 、 ２ ５ ０ 、 ３ ０ ０ 、 ３ ５ ０ 、 ４ ０ ０ 、 ４ ５ ０ 、 ５ ０ ０ ￣ ｇ ・ ｍ Ｌ 一 ［ １ ］ 毛卫 ， 贾玉杰， 姜妙娜． 栀子提取液对重症胰腺 炎大鼠过氧化损伤 的对照品溶液 ， 分别精 密吸取 １ ０ １ ￣ Ｌ注入 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ， 记录色谱 图。以峰 的影 响【 Ｊ 】 ． 中国 中西医结合外科杂志 ， ２ ０ ０ ４ （ ２ ） ． 面积积分值 Ａ （ ｇ ） 为横坐标 ， 进样量为纵坐标 ， 绘制标准曲线 ， 计算 ［ ２ ］ 张德权 ， 吕飞杰 ， 台建祥 ， 等． 栀 子黄 色素对四氯化碳肝 损伤 小鼠 回归方程。 试验表明 ， 熊果酸对照品在 １ ０ ０ — ５ ０ ０ ￣ ｇ ・ ｍ Ｉ 『 范 围内线性 的影响ｆ Ｊ 】 ． 营养学报 ， ２ ０ ０ ２ （ ３ ） ． 关系 良好。 【 ３ 】 王 莎， 周 小琴 ， 司徒 少金 ， 等． 栀 子 药材环 烯醚 萜类和 西红花酸 类 ２ ． ５精 密度试验 。 成分 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ指纹图谱研 究［ Ｊ ］ ． 中国实验方剂学杂志 ， ２ ０ １ ２ （ １ ９ ） ． 依照 ２ ． ３ 项下制 备对照 品溶液 ，精 密吸取 熊果 酸对照 品溶 液 ［ ４ 】 杨奎 ， 闵志强 ， 石娅 萍 ， 等． 栀 子总环烯 醚萜苷对脑 出血大 鼠炎症 ｌ Ｏ Ｉ ｘ Ｌ 重复进样 ６ 次， 测定 峰面积积分值 ， 对 照品峰面积积分值的 反应 与神 经元 凋亡的影响［ Ｊ ］ ． 中药新药与临床 药理 ， ２ ０ ０ ９ （ １ ） ． Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ８ １ ％。结果表 明 ， 本实验精密度 良好 。 ［ ５ ］ 何兵 ， 田吉， 李春 红 ， 等． 不 同成熟期和 不同部位栀子 中 ４ 种主要 ２ ． ６重珊 陛试验 。 活性 成分的含量 变化叨． 药物分析杂志 ， ２ ０ １ ０ （ ５ ） ． 称取同一批的湖北栀子样 品 ６份 ， 按测定方法项下 的方法制备 供试品溶液 ， 测定含量 ， 并 计算样品的 Ｒ Ｓ Ｄ值 ， 结果 Ｒ Ｓ Ｄ为 Ｏ ． ５ ６ ％，
高效液相色谱法测定栀子组分中栀子苷含量
高效液相色谱法测定栀子组分中栀子苷含量
高宝益;裴妙荣
【期刊名称】《世界中西医结合杂志》
【年(卷),期】2010(5)3
【摘要】目的利用高效液相色谱法以栀子苷为指标对栀子组分进行定量分析,建立栀子组分的含量测定方法。
方法采取反相高效液相色谱法,利用C18色谱柱,以乙腈∶水(15∶85)为流动相,在238 nm波长下测定栀子组分中栀子苷含量。
结果在上述
测定条件下,栀子苷在0.49～7.79μg范围内线性关系良好。
测定方法重复性良
好,RSD=1.15%(n=6),栀子组分中栀子苷的平均回收率
=100.06%(n=5),RSD=1.38%。
结论所建立的方法准确性、灵敏度、重复性高,简便,准确,易操作,可作为栀子组分的质量控制方法,色谱法为组分提供有意义的方法学参考。
【总页数】2页(P212-213)
【关键词】栀子苷;高效液相色谱法;栀子;栀子苷
【作者】高宝益;裴妙荣
【作者单位】黑龙江中医药大学;山西中医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定不同品质栀子中栀子苷的含量 [J], 饶黄云;邹盛勤
2.高效液相色谱法测定栀子黄柏口服液中栀子苷的含量 [J], 李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;黄欣欣
3.反相高效液相色谱法测定栀子金花丸中栀子苷的含量 [J], 郭永成;王学蕾
4.高效液相色谱法测定江津栀子中栀子苷含量 [J], 黄群莲;唐灿;张彦燕;李云鹏;赵剑
5.超高效液相色谱法测定生栀子和焦栀子药材中栀子苷含量 [J], 沈晨;吴虹;吴欢;滕越
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HPLC同时测定栀子金花丸中黄芩苷_大黄素_大黄酚的含量
由于样品为丸剂，用甲醇、70% 甲醇、50% 甲醇超声处理 10，20，30 min 等方法，结果发现 50% 甲醇超声处理 20 min， 测得的黄芩 苷、大 黄 素、大 黄 酚 含 量 较 高，且 操 作 简 单。 用 50% 甲醇回流提取样品，结果与超声 20 min 结果接近。
参考文献
1 中国药典［S］． 2010 年版． 一部． 22 2 徐迪，霍理坚，卓烨烨，等． 反高效液相法测定芩黄喉症胶囊 3 组
分别精密吸取混合对照品溶液3． 0，5． 0，10． 0，15． 0，30 μl 分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量（ X，μg） 为横坐 标，峰面积（ Y） 为纵坐标，绘制标准曲线，得黄芩苷回归方程 Y = 1 261． 8X + 1． 3，r = 0． 999 6，结 果 表 明，黄 芩 苷 进 样 量 在 0． 154 ～ 1． 540 μg范围内与峰面积线性关系良好； 大黄素回归 方程 Y = 3 478． 3X + 2． 1，r = 1． 000 0，结果表明大黄素进样量 在0． 071 ～ 0． 714 μg范围内与峰面积线性关系良好； 大黄酚回
通讯作者： 雷小红 Tel： 15974029780 E-mail： 164565609@ qq． com
櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊
4 贺金山，施金川，连秋燕． 首乌芪灵胶囊质量标准的探讨和急性
研究进展［J］． 中国实用医药，2008，3（ 10） ： 191-193
取缺黄芩、大黄的阴性制剂适量，按供试品溶液制备方 法制备成阴性样品溶液。 2． 5 干扰试验
取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液，按上述色谱条 件，分别进 10 μl，测定，结果见图 1。由图可见，样品色谱中 与对照品溶液在相同的保留时间内（ tR = 5． 3、tR = 18． 1、tR = 21． 8） 有相似的色谱峰而阴性样品无这些峰，且样品中黄芩 苷、大黄素、大黄 酚 与 其 他 峰 可 达 到 基 线 分 离，分 离 度 大 于 1． 5，结果表明阴性样品无干扰。 2． 6 线性关系考察
基于多波长HPLC—DAD比较栀子不同部位化学成分差异
基于多波长HPLC—DAD比较栀子不同部位化学成分差异采用多波长HPLC-DAD，同时测定栀子不同部位去乙酰车叶草酸甲酯、羟异栀子苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ和竹节参皂苷Ⅳa 7种化合物的含量，比较各成分在栀子不同部位的分布。
结果表明栀子中各成分在各部位分布不同，且含量存在较大差异，其中栀子苷主要分布在果实和叶中，竹节参皂苷IVa主要分布于根和茎中，西红花苷类成分主要存在于果实中，绿原酸以叶和茎含量较高，羟异栀子苷在叶和根中含量较高，去乙酰车叶草酸甲酯在根和茎中含量较高。
通过分析栀子不同部位化学成分含量差异，为栀子资源综合开发利用和质量评价提供依据。
标签：多波长高效液相色谱；栀子；不同部位；化学成分[Abstract] Seven compounds（deacetylasperulasidic acid methyl ester，gardenoside，chlorogenic acid，geniposide，crocin-Ⅰ，crocin-Ⅱ，chikusetsu saponin Ⅳa）were determined simultaneously by multiple wavelength HPLC with diode array detector（DAD）in different parts of Gardenia jasminoides. The results showed that these components in different parts of G. jasminoides had a different distribution，and there was a large difference in content of each component. Geniposide was mainly distributed in fruits and leaves；chikusetsu saponin Ⅳa was mainly distributed in roots and stems；crocus glycosides existed mainly in fruits；chlorogenic acid had a higher distribution in leaves and stems；gardenoside had a higher distribution in leaves and roots，while ceacetylasperulasidic acid methyl ester had a higher distribution in roots and stems. Based on the analysis of the chemical composition and content difference in different parts of G. jasminoides，the basis for the comprehensive utilization and quality evaluation of resources of G. jasminoides was provided.[Key words] multiple wavelength HPLC；Gardenia jasminoides；different parts；chemical composition梔子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。
高效液相色谱波长转换法测定西红花苷1和栀子苷的含量
高效液相色谱波长转换法测定西红花苷-1和栀子苷的含量【摘要】目的采用HPLC波长转换法测定栀子药材中西红花苷-1和栀子苷的含量。
方法色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XBD-C18，流动相为乙腈∶水(梯度洗脱) ，流速为1 ml/min，检测波长为238 nm（0～20 min）;440 nm（20～40 min），柱温为30℃，采用20 min转换检测波长。
结果栀子苷在4.52～180.8 μg 范围内， r=0.999 9，西红花苷-1在0.9～9.0 μg范围内，r=0.999 7，与色谱峰面积呈线性关系。
平均回收率分别为99.52％，100.76%，RSD分别为1.10%，1.41%。
结论该测定方法具有简便、稳定、准确、重复性好的特点。
【关键词】高效液相法；栀子苷；西红花苷-1Abstract：ObjectiveTo determine the jasminoidin and safflower glucoside-1 of Gardenia. MethodsUsing RE-HPLC with Agient Zorbax Eclipse XBD-C18 column，the mobile phase was composed of a mixture ofacetonitrile-water(grads elution).The flow rate was 1ml/min， and the UV detection wavelengths were set at 238nm(0～20 min)and 440nm(20～40 min)，and the tempetature was at 30℃.The wavelength was converted at20min.ResultsIrisflorentins of the drugs showed linear relationship with peak areas in the range of 4.52～180 μg/ml and 0.9～9.0μg/ml respectively(r=0.999 9，0.999 7).The average recoveries were 99.52% and 100.76%.The RSD were 1.10% and 1.41%.ConclusionThe method is simple，stable，accurate and repeatable.Key words：HPLC； Jasminoidin； Dafflower Glucoside-1现代研究表明，栀子中含有许多的化学成分，主要有环烯醚萜类(栀子苷类)、色素类(西红花苷类)，另外还含有黄酮类（栀子素类)、有机酸酯类(绿原酸等)、D-甘露醇、甾醇类、三萜皂苷类、长链烷烃、醇，还含有挥发油、多糖等成分［1］。
高效液相色谱法测定栀子中栀子甙的含量
栀子别名黄栀子 、 黄果树 、 山栀子 、 红枝子 、 山栀 、 白蟾 ， 是茜 草 称取 同一批 的栀 子样 品 ６份 ， 按测定方法项下 的方 法制备供试 科植物栀子 的果实 。栀子具有护肝 、 利胆 、 降压 、 镇静 、 止血 、 消肿 等 品溶液 ， 测定含量 ， 并计算样 品的 Ｒ Ｓ Ｄ值 ， 结果 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ６ ３ ％， 结果 作 用㈣ 。栀子的果实是传统 中药 ， 属 卫生部颁 布的第 ｌ 批药食两用 表 明此方法的重现性 良好 。 资源。 栀子常用于治疗 黄疸 型肝炎 、 扭挫伤 、 高血压 、 糖尿病等症［ ３ － ６ ］ 。 ２ ． ７准确度试验 《 本草通玄》 记载 ： “ 仲景多用枝 子茵陈 ， 取其利小便而蠲湿热也 。古 取对 照品适量 ， 分别 添加供试 品中 ， 含 量分别相 当于标示 量 的 方治心痛 ， 每用枝子 ， 此为火气上逆 ， 不得下降者设也 。 （ 若） 泥丹溪之 １ ２ ０ ％、 １ ５ ０ ％、 １ ８ ０ ％。 取模拟样品照“ 含量测定”项 下方法试验 ，计 说， 不分寒热 ， 通用枝子 ， 属寒者何以堪 之。 ” 栀子含有去羟栀子甙泊 算 回收率为 ９ ９ ． ８ ％，Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ２ ％。 素一 １ 一葡萄糖甙 、 栀子素 、 藏红花素 、 格尼泊素 一 １ 一Ｂ— Ｄ 一龙胆二糖 ２ ． ８ 样 品稳定性试验 甙等。 现代药理研究表 明栀子具有镇静 、 降压 、 凝血 、 抑制 胃酸 、 泻下 取同一批栀子样 品， 按２ ＿ ３ 项下 的供试 品制备方法制备供试 品 ， 等作用。 本实验采用高效液相色谱法对栀子中的栀子甙 的进行 了含 将供试品置室 温下放置 ， 分别 于第 ０ 、 １ 、 ２ 、 ３ 、 ４ 、 ５ 、 ６小 时 ， 精密 吸取 量测定。 供试品溶液 ｌ Ｏ 注入液相色谱仪中 ， 记录色谱图。 测定栀子 中栀子 １仪 器 与 试 药 甙的 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｏ ． ６ ３ ％。结果表明供试 品 ６ 小时 内稳定 。 １ ． １ 仪器 ： Ｓ Ｐ Ｅ Ｃ Ｏ Ｒ Ｄ ２ ５ ０ Ｐ Ｌ Ｕ Ｓ紫外可见分光光度计 （ 德 国耶拿 ２ ． ９样 品含量测定 分析仪 器股 份公 司 ） ； Ｆ Ａ１ ０ ０ ４万分之一分析天平 （ 上海书培实验设 依 照上述含量测定方法 ，测定栀子三批样 品中栀 子甙的含量 ， 备有 限公 司 ） ； 赛多 利斯 Ｐ Ｂ 一 １ ０酸度 计（ 北京晨 曦勇创科 技有 限公 结果三批样 品的含量分别为 １ ． ９ ％、 ２ ． Ｏ ％、 １ ． ９ ％。 ３讨 论 司） ； 博翔兴 旺 ８ ０ Ｋ Ｈ Ｚ 高频超声波 清洗机（ 北京博 宇宝威实验设 备 有 限公 司） ； 莱伯泰科 Ｌ Ｃ ６ ０ ０高效液相色谱仪（ 北京莱伯泰科仪器股 ３ ． １流 动 相 的 选 择 份有 限公 司） ； Ｒ 一 ２ １ ０ 瑞士 Ｂ Ｕ Ｃ Ｈ Ｉ 旋转蒸发仪ｆ Ｊ 一 州 尚准仪 器有 限公 分 别考察水 一甲醇 一磷 酸（ ４ ０ ： ６ ０ ： ０ ． ０ １ ） ， 水 一甲醇 一乙腈 一磷 酸（ ５ ０ ： １ ０ ： ４ ０ ： ０ ． ０ １ ） ， ０ ． １ ％醋酸铵溶液 一甲醇 （ ８ ０ ： ２ ０ ） ， 水 一甲醇 一乙 司）； Ｈ Ｑ 一 ５ ０高端试剂级超纯水机 （ 郑 州华新 电气公 司） 。 ５ ０ ： １ ０ ： ４ ０ ） ， 甲醇 一水 一三 乙胺 （ ７ ０： ３ ０ ： ０ ． ２ ） ， 水 一乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 不 １ ． ２ 色谱柱 ： 奥泰公司 ｃ 色谱柱 （ ２ ２ ０ ｍ ｍ× ４ ． ６ ｍ ｍ， ５ Ｘ Ｉ ｍ） 。 腈（ １ ． ３ 对 照品 ： 栀 子 甙 同比例 的流 动相 ， 结果 以水 一乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 为流动相为流动 相 ， 供试 １ ． ４试剂 ： 甲醇 （ 金坛市金冠 化工厂 ） 、 乙腈 （ 天津 市顺 呈化 工有 品各峰分离效果最好 ， 故选用水 一乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 为流动相为流动相。 限公 司 ） 、 三 乙胺 （ 济南鸿 鑫化工有 限公 司） 、 磷 酸（ 金 坛市金冠化工 ３ ． ２检测波长的选择 厂） 、 醋酸铵 （ 济南润 尔特化工有 限公司 ） 。 制备栀子甙对照 品稀 释液 照紫外 一可见分光光度法 （ 中国药 典 １ ． ５ 试药： 栀子 ２ ０ １ ０ 版 一 部 附 录 Ｖ Ａ） ， 于 １ ９ ０ ～９ ０ ０ ｎ ｍ 波 长 范 围 内进 行 全 波长 光 ２测 定 方 法 确 定 谱扫描 ， 记 录吸收光谱 。在 ２ ３ ８ ｎ ｍ处有最大 吸收峰 ， 故选 用 ２ ３ ８ ｎ ｍ 为检测波长【 １ １ 。 ２ ． １色谱条件 本实验表 明此方法分离效果好 、 方法 简便 、 快捷、 准确， 、 专属性 依据查阅文献及考查 的结果 ， 确定色谱 条件如下 。 流动相 ： 水一 可用 于栀 子 中栀 子 甙 的 含 量 测 定 。 乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 为流动相 ， 检测波长 ： ２ ３ ８ ｎ ｍ， 流速 ： １ ． ０ ｍ ｌ ・ ｍｉ ｎ ～ 。柱 温 ： 好， 参 考 文 献 ３ ０ ￣ Ｃ。理论板数按栀子甙峰计算应不得低于 ２ ０ ０ ０ 。 ２ ． ２对 照品溶液 的制备 【 １ 】 李利娟， 李宏 霞， 吴欣桐， 鄢波， 周 东． 栀 子甙对血管性痴呆 大鼠行 为 Ｊ 】 ． 四川大 学学报 （ 医学版） ， ２ ０ ０ ９ （ ４ ） ． 精密称 取栀子甙对照 品适 量 ，置容量 瓶中 ，加流 动相制成每 学和脑组 织病理改 变的影响『 ｌ ｍ Ｌ含 ２ ０ ｇ的溶 液 ， 即得。 【 ２ 】 杨奎， 闵志强， 石娅萍， 向靓 ， 蒙亚江， 邬春 久， 黄薇， 唐 波． 栀予 总环 烯 醚萜苷 对脑 出血 大鼠炎症反应与神 经元凋亡的影响［ Ｊ ］ ． 中药新 药与 ２ ． ３ 供试 品溶液 的制备 取供试 品粉 碎 ， 精 密称取 （ 相当于栀子甙 ２ ０ ０ ｇ ） ， 置具塞锥形 临床 药理。 ２ ０ ０ ９ （ １ ） ． 瓶中， 精密加入 流动相 １ ０ ｍＬ ， 密塞 ， 精密称定重 量 ， 超声处理 ２ ０分 【 ３ ］ 任强， 孙 丽华， 刘新 民， 刘春 雨， 权 丽辉 ， 谢忱 ， 廖永 红． 栀 子的化 学成 Ｊ １ ． 广 东药学院学报， ２ ０ ０ ９ （ ２ ） ． 钟， 放冷， 精密称定 ， 用 流动相补 足重量 ， 摇匀 ， 滤过 。取续滤液 ， 即 分及抗 白血病活性研 究『 得。 『 ４ 】 刘益华， 李 晶， 林 曼婷， 周海虹， 陈少东． 栀 子有效成分栀子苷 的现代 ２ ． ４精 密 度 试 验 研 究进展『 Ｊ １ ． 中国药学杂志， ２ ０ １ ２ （ ６ ） ． 精密称取栀 子甙对照 品适量 ，加流动相使 溶解 ，制成 浓度为 【 ５ 】 丁 嵩涛， 刘洪涛， 李文明， 李秀英， 于超． 栀 子苷对氧化 应激损伤血 管 ２ Ｏ ｇ ・ ｍＬ － 的供试 品溶液 。照上述 色谱条件 ， 精密吸取 １ Ｏ ｌ ， 连续 内皮细胞的保护作 用『 Ｊ ］ ． 中国药理学通报， ２ ０ ０ ９ （ ￣． ６ 】 李宝莉腾 雅 慧， 杨 暄＇ 古 月 锐， 方志远， 袁秉祥 ． 栀子油的提取和 对中枢 进样 ６次 ， 记 录峰面积 。 结果， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ５ ５ ％， 表 明本方法精密度 良好。 【 ２ ． ５ 对 照品的线性考察 神 经系统的作用『 Ｊ ］ ． 第四军医大学学报， ２ ０ ０ ８ （ ２ ３ ） ． 精密称取适 量栀 子甙对照 品 ， 加人流动相溶液使溶解分别配制 成每毫升含 ５ 、 １ ０ 、 １ ５ 、 ２ ０ 、 ２ ５ 、 ３ ０ 、 ３ ５ 、 ４ ０ 、 ４ ５ 、 ５ ０微克的溶液 。分别精 密上述溶液吸取 ｌ ０ Ｌ ， 注人液相色谱仪 ， 依照 ２ ． １ 项下 的色谱条件 测定 ， 记录色谱峰 。以峰面积 ） 为纵坐标 ， 对照 品进样量㈤ 为横坐 标， 绘 制标准曲线 ， 计算 回归方程 。结果 表明 ， 栀子 甙在 ５～ ５ ０ ｇ ・ ｍ Ｌ － 范 围内呈 良好的线性关 系。
高效液相色谱法测定三子散中栀子苷的含量
高效液相色谱法测定三子散中栀子苷的含量贺承山;刘峰群;袁海龙;肖小河;蔡光明【期刊名称】《解放军药学学报》【年(卷),期】2001(017)002【摘要】Aim Gardenoside was determined in Sanzisan without other components' interference.Methods Samples were determined by macroporous absorption resin-high performance liquid chromatography(MAR-HPLC).Results Gardenoside's regression equation was Y=1 501.52X-5.55(r=0.999 9)，linear range was 0.13～2.08μg,recovery rate was 99.02% with RSD 0.89%.Conclusion The MAR-HPLC method can be used for the quality control of Sanzisan.%目的为排除其他成分的干扰，准确、快速地测定复方中药制剂三子散中的栀子苷。
方法大孔吸附树脂预处理样品，高效液相色谱法测定。
结果栀子苷峰面积积分值与进样量的回归方程为:Y=1 501.52X-5.55，r=0.999 9，线性范围为0.13～2.08μg。
平均加样回收率99.02%,RSD为0.89%。
结论大孔吸附树脂小柱预处理三子散中的栀子苷，结合高效液相色谱测定含量，色谱柱污染小，柱压低，分离度、专属性及重现性好、灵敏度高。
【总页数】2页(P104-105)【作者】贺承山;刘峰群;袁海龙;肖小河;蔡光明【作者单位】中国人民解放军第302医院,;中国人民解放军第302医院,;中国人民解放军第302医院,;中国人民解放军第302医院,;中国人民解放军第302医院,【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法测定蒙成药三子散中栀子甙的含量 [J], 白炜;周雪梅2.高效液相色谱法测定兽药龙胆泻肝散中龙胆苦苷、栀子苷和黄芩苷的含量 [J], 栾庆祥;黄鑫;杨强;金晓峰;钱莘莘3.高效液相色谱-二极管阵列检测法测定茵陈蒿散中的栀子苷 [J], 林仙军;王彬;陈晓林4.高效液相色谱法测定蒙成药三子散中川楝素含量 [J], 张建平;王栋;周雪梅;孙倩男;杜文亚5.吸附小柱-高效液相色谱法测定五味沙棘散中栀子苷的含量 [J], 刘峰群;韩晋;袁海龙;张新全;崔燕;肖小河;蔡光明;贺承山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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多波长高效液相色谱法同时测定栀子中的三类成分徐 燕,曹 进,王义明,罗国安3(清华大学药物研究所,北京100084)摘要:目的 同时测定栀子中3类有效组分,9个成分(栀子酸、栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、绿原酸、藏红花酸、3种藏红花素)的含量。
方法 紫外2可见三波长同时检测的高效液相色谱法:色谱柱为Phenomenex LunaC 18柱(250mm ×416mm ID ,5μm );流动相为(A )013%甲酸水溶液,(B )甲醇2乙腈(9∶1);流速为018m L ・min -1;柱温为35℃;检测波长为240nm (栀子酸、栀子苷、异栀子苷、京尼平龙胆二糖苷),330nm (绿原酸)和440nm (藏红花酸和3种藏红花素);线性梯度洗脱。
结果 建立了同时对栀子中的9个成分进行定量的测定方法,并将此方法用于5个产地栀子各成分的测定。
结论 为中药材栀子提供了更合理、可靠的质控方法。
关键词:高效液相色谱法;栀子;环烯醚萜苷;绿原酸;藏红花素;藏红花酸中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2003)07-0543-04Simultaneous determination of 3kinds of components in Gardenia by high 2perform ance liquid chrom atography u nder di fferent UV 2vis w ave lengthX U Y an ,CAO Jin ,WANG Y i 2ming ,LUO G uo 2an3(Institute o f Medicine ,Tsinghua Univer sity ,Beijing 100084,China )Abstract :Aim T o determine 3kinds of biologically active com ponents (9com pounds )in Gardenia ,namely geniposidic acid ,gentiobioside ,gardenoside ,genipin geniposide ,chlorogenic acid ,crocin 1,crocin 2,crocin 3and crocetin simultaneously and quantitively.Methods An HP LC method detected by 3different UV 2vis waves —240nm for geniposidic acid ,geniposide ,gardenoside ,genipin gentiobioside ,330nm for chlorogenic acid ,440nm for crocin 1,crocin 2,crocin 3and crocetin respectively ,has been developed :Phenomenex Luna C 18column (250mm ×416mm I D ,5μm )with linear gradient elution using methanol 2acetotrile (9∶1)and 013%aqueous formic acid.R esults This method success fully determined 9com pounds in Gardenia (from 5different areas )simultaneously and quantitively.Conclusion This is a m ore reas onable and credible quality control method for the Chinese traditional medicine.K ey w ords :HP LC ;Gardenia jaminoides ;iridoid ;chlorogenic acid ;crocetin ;crocin收稿日期:2002210215.基金项目:国家973重点基础研究项目“中药方剂关键科学问题基础研究”资助项目(G 1999054404).3通讯作者 T el ΠFax :86-10-62781688,E 2mail :luoga @chem. 栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jaminoides )的干燥成熟果实,具有清热利尿和凉血解毒的功效[1]。
化学成分研究表明,栀子含有3类主要有效成分(结构见图1):环烯醚萜苷,有机酸和色素(主要为藏红花素)[1]。
运用高效液相色谱法(HP LC )研究栀子化学成分的文献已有不少,但绝大部分只对其中的栀子苷进行定量测定,小部分对多种环烯醚萜苷类物质进行了定量分析[2～6],至今未见运用HP LC 法对其中3类成分进行同时测定的文献报道。
现代药理实验表明,仅将栀子苷作为栀子的质控指标是不够的,很有必要将其中有机酸、色素类物质的测定纳入到质控标准中[1,7,8]。
中药材属于复杂体系,单味药中就含有在常规色谱条件下难以同时分离、定量的多类成分。
本文提出的在HP LC 2DAD 上实现的多波长高效液相色谱法,根据栀子中3类成分不同的光谱・345・药学学报Acta Pharmaceutica S inica 2003,38(7):543-546特性,建立了在3个紫外2可见(UV2Vis)检测波长下,同时测定其中3类组分(9个成分),并将方法运用于5个产地栀子中各成分的测定。
多波长高效液相色谱法为中药材中多类组分的同时测定提供了新的模式,也提供了更加合理、可靠的质控依据。
Figure1 Structures of the major constituents of Gasdenia jaminoides材料与方法仪器和试剂 Agilent1100型高效液相色谱仪(DAD二极管阵列检测器),SZ293自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂),离心机(LD522A型,北京医用离心机厂)。
栀子果实(购于安国市,分别产于:江西、广西、浙江、湖南、海南)和藏红花(购于北京市同仁堂药店)药材,由西南交通大学药学系张兴国副教授鉴定。
乙腈、甲醇(Fisher公司,色谱纯),甲酸(分析纯),二次蒸馏水(自制)。
标准品:栀子苷(geniposide)、异栀子苷(gardenoside)、栀子酸(geniposidic acid)、京尼平龙胆二糖苷(genipin gentiobioside)购于Y oneyama公司(日本),绿原酸(chlorogenic acid)、藏红花酸(crocetin)购于Sigma公司,藏红花素1(crocin1)、藏红花素2(crocin2)、藏红花素3(crocin3)由本实验室从藏红花中得到,并经波谱分析确定其结构。
供试品溶液的制备 精密称取粉碎后的栀子果实011g,加入甲醇25m L,超声处理20min,放冷,过滤,滤液离心10min,取上清液备用。
对照品溶液的制备 精密称取各对照品,分别溶于甲醇,配制5个浓度水平对照品溶液:01002,01004,01006,01008和01010g・L-1的栀子酸对照溶液;01002,01004,01006,01008和01010g・L-1的异栀子苷对照溶液;01005,01010,01015,01020和01025g・L-1的京尼平龙胆二糖苷对照溶液;0105,0110,0115,0120和0125g・L-1的栀子苷对照溶液;01001,01002,01003,01004和01005g・L-1的绿原酸对照溶液;01001,01002,01003,01004和01005g・L-1・445・药学学报Acta Pharmaceutica S inica2003,38(7):543-546的藏红花素1对照溶液;01001,01002,01003,01004和01005g・L-1的藏红花素2对照溶液;010005, 010010,010015,010020和010025g・L-1的藏红花素3对照溶液;010002,010004,010006,010008和010010g・L-1的藏红花酸对照溶液。
色谱条件 色谱柱:Phenomenex Luna C18色谱柱(250mm×416mm I D,5μm);流动相:A为013%甲酸水溶液,B为甲醇2乙腈(9∶1);流速:018 m L・min-1;柱温:35℃;检测波长:240,330和440 nm;进样量:20μL。
线性梯度洗脱时间程序如下:开始时10%B;15min时40%B,保持3min;35min时100%B,保持5min;45min时10%B。
结果与讨论1 流动相的选择实验过程中尝试了甲醇2水、乙腈2水、甲醇和乙腈(改变两者比例)2水等体系,并尝试在流动相中添加甲酸或四氢呋喃,以调节pH值或极性,分别试验了等度和梯度洗脱的方式。
试验发现,乙腈比例增加,可以显著缩短保留时间,但分离度有所降低;加入甲酸使体系呈弱酸性能够改善峰形及分离度。
经过条件优化,最终确定了如前所述的色谱条件。
2 检测波长的选择DAD检测器在200～600nm全波长扫描,结果表明:环烯醚萜苷类在239nm处有最大吸收;绿原酸在220,246和329nm有3个吸收峰,其中246nm 处最弱,329nm处最强;藏红花素类在250～260nm, 320～340nm和400～500nm有3个吸收峰,其中250～260nm处吸收最弱,(cis2)藏红花素类在320～340nm处吸收最强,但在藏红花和栀子中含量很低,藏红花和栀子中含量较高的藏红花酸、藏红花素1,2和3属于(trans2)藏红花素类,在400～500nm 处有强吸收[9,10]。
为了使各组分达到吸收强、干扰小的目的,选择在240nm测定环烯醚萜苷类物质, 330nm测定绿原酸(绿原酸在246nm有吸收,故240 nm的色谱图上亦有绿原酸的峰,但吸收弱而不适于定量),440nm测定藏红花素类物质。
3 色谱分离在优化后的色谱条件下,进行了3个波长(240, 330和440nm)下测定栀子3类成分的HP LC色谱法,可看出,各成分均得到了很好的分离,保留时间见表1。
4 标准曲线和检测限在优化的色谱条件下,各成分分别在5个浓度点,平行测定3次,用峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归,结果表明各成分在各自浓度范围内线性关系良好。
回归方程、线性范围、相关系数及检出限结果(SΠN=2)见表1。
T able1 R egression equation and detection limitC om pound Retention timeΠm in Regression equation C orrelation coefficient Linear rangeΠmg1L-1Detection lim itΠmg・L-1 G eniposidic acid1011Y=36718X+1212019994015-10001356G ardenoside1211Y=40712X+1419019993110-20001552G enipin gentiobioside1514Y=27414X+918019990110-50001503G eniposide1719Y=9918X+413019995110-100001446 Chlorogenic acid1319Y=46411X+1214019993015-5001201 Crocin12711Y=40913X+1210019992110-10001523 Crocin22818Y=44613X+1712019993110-10001425 Crocin33218Y=39719X+1412019991015-5001352 Crocetin3515Y=41213X+1311019992015-50012315 方法的重复性、稳定性和回收率考察平行配制5份供试品溶液,在优化的色谱条件下测定,以峰面积值为指标计算RS D(n=5),考察方法的重复性。