siRNA细胞转染实验操作指南
siRNA说明书
siRNA说明书产品以冻⼲粉的形式，常温运输。
收到产品后，请于-20 C?-80 'C保存，冻⼲粉可以稳定保存⼀年。
使⽤前请瞬时离⼼，⽤RNase-freeH 2O或者灭菌ddH20，配制成20gM储存液，分装保存，避免反复冻融（尽量不超过5次）。
表120 gM储存液的配置参考使⽤前须知为避免外界因素（包括酶，极端pH或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA操作规则。
实验过程中，产品最好于冰上放置，使⽤完毕后请于-20 C~-80 C⼩⼼保存。
细胞实验⽅法为了降低细胞密度、试剂⽤量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验可靠性和可重复性，⼀般建议：a. 转染实验中每个转染样品⾄少设置3个以上复孔；b. 接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持⼀致，并且细胞在各孔的表⾯平均分布。
1. 转染浓度：siRNA产品最佳⼯作浓度因不同的细胞类型及研究⽬的⽽异。
推荐初始转染浓度为50nM，转染后检测时间为24?72h。
最佳转染效率⼀般通过设置时间曲线和浓度梯度进⾏优化，优化的范围建议为5~100nM。
2. 转染步骤：以Iipofectamine2000（简称Iipo2000）转染siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器转染请参考表2。
1）转染前⼀天，接种适当数量的细胞⾄细胞培养板中，每孔中加⼊不含抗⽣素的培养基，使转染时的细胞密度能够达到30~50%（不同细胞⽣长速度不⼀样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验）。
注意: 转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之⼀，细胞⽣长过度会削弱细胞活⼒，降低细胞的转染效率。
2）对于每个转染样品，请按以下步骤准备siRNA-Iipo2000混合液：a. 稀释siRNA :⽤50 g 不含⾎清培养基Opti-MEM I （v1）稀释g I20 gM siRNA储存液，轻轻混匀，室温孵育5min ;b. 稀释Iipo2000 :⽤50 g不含⾎清培养基Opti-MEM I （v1）稀释1 g Ilipo2000，轻轻混匀并室温孵育5min ;c. 将a与b轻轻混匀，室温孵育20min（溶液可能会有浑浊，但不会影响转染）。
细胞sirna转染操作流程
细胞sirna转染操作流程细胞siRNA转染操作流程一、引言细胞siRNA转染是一种常用的基因沉默技术，通过引入特异性小干扰RNA（siRNA）分子进入细胞内，靶向沉默特定基因，从而研究该基因的功能和调控机制。
本文将介绍细胞siRNA转染的操作流程。
二、准备工作1. 获得目标基因的siRNA序列。
2. 确定需要转染的细胞类型。
3. 准备细胞培养所需的培养基和细胞培养器具。
三、细胞处理1. 将需要转染的细胞分散在培养基中，使细胞密度达到适宜的浓度。
2. 将细胞悬液均匀地分配到培养皿或培养板中。
3. 放置细胞在恒温培养箱中，使其在37摄氏度、5% CO2的条件下培养。
四、siRNA转染1. 将合成的siRNA溶解在无菌去离子水中，得到一定浓度的siRNA 溶液。
2. 向siRNA溶液中加入相应的转染试剂，如Lipofectamine 2000。
注意按照厂家提供的操作步骤和比例进行加入。
3. 轻轻混合siRNA溶液和转染试剂，静置15-30分钟，使其形成siRNA转染复合物。
4. 将转染复合物滴加到细胞培养皿或培养板中，轻轻摇晃培养皿或培养板，使转染复合物均匀分布。
5. 放置细胞在恒温培养箱中继续培养。
五、培养细胞1. 继续在37摄氏度、5% CO2的条件下培养细胞，观察细胞的形态变化。
2. 根据实验需要，可以在转染后一定时间点进行进一步的实验操作，如蛋白质检测、基因表达分析等。
六、细胞收集1. 根据实验需要，可以在转染后一定时间点收集细胞。
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞，去除培养基和转染试剂。
3. 用细胞裂解缓冲液裂解细胞，得到细胞裂解液。
七、实验分析根据实验需要，可以对细胞裂解液进行进一步的实验分析，如Western blot、RT-qPCR等。
八、结果分析根据实验结果，可以分析目标基因的表达水平和功能，从而深入研究其调控机制。
九、总结细胞siRNA转染是一种重要的基因沉默技术，可以帮助研究者深入了解基因的功能和调控机制。
siRNA 使用说明
siRNA 使用说明siRNA 使用说明一、简介siRNA（small interfering RNA，小干扰RNA）是一种短双链RNA分子，能够特异性地靶向靶标基因的mRNA，从而抑制基因的表达。
本文档旨在提供有关siRNA的使用说明，包括实验准备、转染方法、验证转染效果等内容。
二、实验准备1、设计siRNA序列：根据目标基因序列，使用专业软件设计siRNA序列，确保合适的靶向位点和抑制效果。
2、合成siRNA：选取可靠的siRNA合成公司，按照其提供的合成方案进行合成，并确保纯度和浓度的准确性。
3、存储siRNA：将合成好的siRNA按照要求进行冻干或溶解保存，避免反复冻融对siRNA的影响。
三、细胞培养1、细胞系选择：选择适合的细胞系进行实验，一般常用的细胞系有HEK-293、HeLa、CHO等。
2、培养条件：按照细胞系的要求，配置好适合的培养基，并添加适当的血清和抗生素。
3、培养状态：维持细胞在良好的状态下生长，保持培养皿内细胞的完整和无菌。
四、siRNA转染1、转染试剂选择：根据不同细胞系的特点，选择适合的转染试剂，如RNMAX、Lipofectamine等。
2、转染条件优化：通过实验室预实验，优化转染试剂的用量、培养时间和上清液收集时间等参数。
3、转染操作步骤：a：将siRNA转染试剂溶解于无血清的培养基中，按照转染试剂说明书的推荐比例进行稀释。
b：将稀释后的转染试剂静置15-30分钟，直至形成转染试剂- siRNA复合物。
c：将复合物滴加到细胞培养皿中，保持培养皿在37°C的培养箱中进行适当的培养时间。
d：收集转染后的上清液，进行进一步的实验。
五、转染效果验证1、Real-time PCR：使用逆转录酶和合适的引物进行实时荧光定量PCR，检测目标基因表达水平的变化。
2、Western blot：通过Western blot实验检测目标蛋白的表达水平是否下调。
3、免疫荧光染色：利用免疫荧光染色技术观察目标蛋白在细胞中的表达情况。
细胞sirna转染操作流程
细胞sirna转染操作流程细胞siRNA转染是一种常见的实验操作，用于沉默特定基因的表达。
下面我将从多个角度全面地介绍细胞siRNA转染的操作流程。
1. 实验准备：a. 准备所需的细胞培养基、细胞培养皿、siRNA转染试剂（如Lipofectamine™ RNAiMAX等）、siRNA、目的基因的控制siRNA、PBS等。
b. 在转染前，需要将细胞培养至适当的密度，确保细胞处于良好的生长状态。
2. siRNA转染操作流程：a. 将需要转染的细胞计数并分配至培养皿中，使得在转染时细胞密度达到合适的水平。
b. 在一个离心管中混合适量的siRNA转染试剂和无血清培养基，轻轻振荡混合，并静置15分钟。
c. 将siRNA转染试剂混合物滴加到含有细胞的培养皿中，轻轻摇晃培养皿使转染试剂均匀分布。
d. 将细胞培养皿放回培养箱中，根据试剂的要求进行培养，通常在转染后的24-72小时内进行下一步实验。
3. 转染后处理：a. 根据实验需求，在转染后的适当时间点进行细胞的取样或者其他实验操作。
b. 如果需要进行长期实验或者观察，可以在转染后适当时间内更换培养基。
c. 对于不同的细胞系和siRNA转染试剂，最佳的转染条件可能会有所不同，因此需要根据实验要求进行优化。
总的来说，细胞siRNA转染是一个常用的实验技术，通过沉默特定基因的表达，可以帮助研究人员探索基因功能和细胞信号通路。
在进行操作时，需要严格按照试剂的说明书和实验要求进行操作，并且根据具体情况进行优化，以确保实验结果的准确性和可靠性。
希望这些信息能够帮助到你。
用LIPO3000向细胞中转染siRNA
用LIPO3000向PK-15细胞中转染siRNA
以24孔板为例。
1 转染前一天细胞消化计数，之后细胞在0.5 ml不含双抗的完全培养基中正常生长。
2 细胞的密度为30%-50%适宜。
（注意：根据转染后细胞检测时间的长短决定细胞密度，如果转然后需要很长时间去检测，则细胞密度适当降低，以避免细胞过度生长导致存活性降低。
）
3 第二天（24到36小时）每孔转染方式如下：
A 将20 pmol siRNA溶于150 微升Opti-MEM无血清培养基中。
B 将1 微升lipo2000溶于150 微升Opti-MEM无血清培养基中，混匀室温放置
5 min。
C 将A、B混合放置5 min。
4 转染期间，将24孔板中的培养基换成无血清培养基，每孔400 微升。
将C管Mix加入到每孔中，6小时后换成有血清培养基。
细胞sirna转染操作流程
细胞sirna转染操作流程细胞siRNA转染操作流程一、引言近年来，细胞siRNA转染技术在生物医学领域中得到了广泛的应用。
该技术通过靶向靶标基因的mRNA，使用小干扰RNA (siRNA) 来沉默特定基因的表达，从而研究基因功能及其在疾病中的作用。
本文旨在介绍细胞siRNA转染的操作流程。
二、实验材料和设备1. 细胞培养基：含有适当的营养物质和补充物的培养基。
2. 细胞培养器具：细胞培养板、离心管、培养皿等。
3. siRNA转染试剂：包括转染试剂和转染缓冲液。
4. 离心机5. 显微镜6. 实验室安全设备：如实验室无菌操作台、手套、护目镜等。
三、细胞处理1. 培养细胞：将所要研究的细胞株在适宜的培养条件下培养至合适的生长状态。
2. 细胞传代：当细胞达到足够密度时，使用适当的方法将细胞传代到新的培养皿中，以保持细胞的生长状态。
四、siRNA转染操作1. 转染试剂配制：按照转染试剂说明书的要求，将转染试剂稀释至适宜的浓度。
2. 转染试剂与siRNA混合：将所需转染试剂与合适浓度的siRNA混合，使其充分结合。
3. 细胞转染：将混合好的转染试剂和siRNA溶液滴加到培养皿中的细胞上。
4. 转染时间：根据实验需要，确定转染时间，并在转染后的适当时间点进行下一步实验操作。
5. 细胞处理：根据实验目的，对转染后的细胞进行相应的处理，如培养、药物处理等。
6. 细胞观察：使用显微镜观察转染细胞的形态变化、细胞数量等。
五、结果分析1. 蛋白检测：使用Western blot或免疫荧光技术检测转染后的细胞中目标蛋白的表达情况。
2. mRNA检测：使用RT-PCR或原位杂交等技术检测转染后的细胞中目标基因的mRNA水平。
3. 细胞功能分析：根据实验需要，进行细胞增殖、凋亡、迁移等功能分析实验。
六、讨论与展望细胞siRNA转染技术是一种有效的基因沉默方法，可以用于研究基因功能和疾病机制。
然而，该技术仍面临一些挑战，如选择合适的siRNA序列、提高转染效率等。
sirna转染实验步骤及实验要点
sirna转染实验步骤及实验要点siRNA转染实验步骤如下：1.细胞接种：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度在30%左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。
2.转染过程：•取0.67μg (50pmol) 的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。
注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
•取1μl的EntransterTM-R4000，然后加入24μl无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。
室温静置5分钟。
•将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。
转染复合物制备完成。
•将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。
注意：对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。
•转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。
3.观察和检测：根据具体实验需求，可以在转染后的不同时间点观察细胞状态、检测基因表达、蛋白质表达等。
实验要点：1.细胞接种密度要适宜，一般在30%左右汇合度较好。
2.无血清稀释液的选择对于siRNA的稳定性和转染效率至关重要。
建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640等品牌。
3.在制备转染复合物时，要保证各个步骤的混合均匀，避免产生气泡。
4.在将转染复合物加入细胞时，要保证细胞的生存环境，避免对细胞造成损伤。
5.在转染后的观察和检测中，要注意保证实验结果的准确性和可靠性。
以上信息仅供参考，建议查阅专业文献获取更准确的信息。
siRNA细胞培养步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例方法/步骤1. 11.提前1天细胞种植采用对数生长期的悬浮细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。
如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。
END方法/步骤21. 12.转染过程⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。
注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
2. 2⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加入24ul无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。
室温静置5分钟。
3. 3⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。
转染复合物制备完成。
4. 4⑷将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。
5. 5⑸转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。
END注意事项∙siRNA转染后，继续培养24-72小时在mRNA水平得到结果，继续培养24-96小时在蛋白水平得到结果。
mRNA转染后，根据需要在24小时后得到结果。
∙在部分实验室，由于血清和培养条件等差异，转染后镜下培养基中可能出现少量黑点状沉淀，为转染试剂和血清中蛋白结合产物，不影响转染结果和细胞状态，可通过换液除去。
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siRNA细胞转染实验操作指南
siRNA产品的最佳工作浓度、转染后检测时间因不同的细胞类型和研究目的而异。
一般推荐的siRNA工作浓度为50nM，检测时间为转染后24~72h。
可以通过设置时间梯度和浓度梯度进行组合实验来选择最优的siRNA工作浓度和检测时间。
由于siRNA过量会对细胞产生毒性，实验建议的siRNA 工作浓度优化的范围为5~100nM。
下面以Lipofectamine 2000转染24孔板的293T细胞为例，选取50nM的siRNA工作浓度，介绍siRNA转染细胞的操作步骤。
若使用其他的转染试剂，请参照对应的产品说明书进行操作。
1.在转染前一天，按1×105~5×105个/孔的量将细胞接种于不含抗生素的完全培养基中，使次日转染时细胞融合度30-50%为宜。
接种时尽量
保证每孔细胞的接种数量一致，使细胞均匀地平铺在生长表面。
注意:降低转染时的细胞密度可延长转染和收样的时间间隔，避免细胞过度生长对实验结果造成影响。
可根据细胞特性和实验目的等，调整接种时的细胞密度。
2.每个待转染的细胞样品（每个培养孔），按以下体系配置转染所需的siRNA-Lipofectamine 2000复合物:
（1）配制稀释液A:取25pmol siRNA于50ul Opti-MEM无血清培养基中稀释，轻轻混匀。
（*siRNA的用量计算参照表1）
（2）配制稀释液B:使用前先将Lipofectamine 2000轻轻混匀，取出1ul于50ul Opti-MEM无血清培养基中稀释，轻轻混匀，室温下孵育5分钟。
注意孵育时间不能超过25min。
（3）孵育完成后，将稀释液A与B轻轻混匀得到siRNA-Lipofectamine 2000复合物，在室温下孵育20分钟。
此时溶液可能会浑浊，属于正常现象。
表1 不同细胞培养板siRNA 转染用量参考表
3.将孵育好的siRNA-Lipofectamine 2000复合物分别加到对应的细胞孔中，轻轻混匀。
注意：转染前无需更换新鲜培养基，直接将复合物加到原细胞培养基中即可。
如有需要，也可根据情况更换培养基优化该步骤。
4.如果需要进行其他特殊处理，如加药等，可在此时进行。
5.将细胞培养板置于37℃的CO2培养箱中培养24-72h。
具体培养时间根据细胞生长特性、实验目的进行调整。
注意：加入siRNA-Lipofectamine 2000复合物后一般无需更换培养基，但若脂质体类转染试剂对细胞毒性较大，可根据细胞的状态，在转染4-6小时后更换培养基。
6.进行后续总RNA提取、蛋白提取、细胞活性分析等实验。