免疫组织化学技术标准化及常见问题的处理

１ ２ 染色 ．
１１ 染 色前 的处理 ．
正确 的取 材 、 脱水 、 浸蜡 十 分 重
１ ２ １ 内源性 过氧 化 物 酶 的灭 活 如 果 采用 过 氧化 ． ． 物酶 检测 系统 ， 则必 须 对 内源 性 过 氧化 物 酶 进行 封 闭
要， 组织 材料处 理是 获得 良好结果 的前 提 ， 须保证 要 必 检测 的细胞 或 组 织 取 材 新 鲜 、 固定 及 时 ， 态 保 存 良 形
免疫 组织化 学 技术 标 准化及 常见 问题 的处理
黄世琪 宋 芳 郝 奋 韩 秀雁
（ 包头 医学院组 织学与胚胎 学教研 室， 内蒙古 包头 ０ ４ ６ ） １０ ０
随着单克 隆抗 体技 术 的 迅速 发 展 ， 疫组 织 化 学 免 染色 已成为广 泛应用 的实 验手段 ， 尽管 其理 论很简单 ， 但在实 际操作 中还存 在 着许 多有 待 商讨 的 问题 ， 多 诸
选 择酶消 化 法 。加 热 抗 原 修 复 法是 １９ ９ １年 Ｓ ｉ ｈ 等 报 道 的 ， 理后使 免疫组 化染 色 的敏 感度 大大提高 ， 处 其 机 制还不 十分清楚 ， 推测 可 能是 加 热 打开 了组织 抗 原
因福尔马林 固定 引起 的抗原 决定簇 的交联 。常用 的加
为保证实 验 的顺 利进 行 ， 般需 采 用 黏 附剂 对 已清 洗 一 的载玻 片进行 处理 ， 常用 的 有 Ａ Ｅ 、ｏｙ—Ｌ—Ｌｓ 、 Ｐ Ｓ Ｐｌ ｙｉ ｎ Ｈ ｓ ｇｉ 。 。切 片 的厚 度应在 ４～ ｍ， 厚 的切片 ｉｏｒ 等 ｔ ｐＭ ５ 过 不仅 容易脱 片 ， 还影 响免 疫反 应 和观察 效 果 。高 温烤
［ ］ 葛友华 ， ３ 袁健． 课堂教学手段合理运用 的探索 ［ ］黑龙江 Ｊ． 教育（ 高教研究 与评估 ） ２０ ，７—８ ：３ ，０７ （ ） １６—１７ ３．
（ 收稿 日期 ：００ １－９ ２ １－００ ）
教学内容、 教学方式的改革是一个任重道远 的过 程， 也是一个 循序 渐 进 的过 程 。 以创 新 思 维 带 动多 角 度、 多层次 的教学 ， 断探 索 教 与学 中 的新 方 法 ， 设 不 建
参考 文献
［ ］ 王心如． １ 毒理学实验 方法与技术 ［ ． Ｍ］ ２版． 北京 ： 民卫 人
生 出 版 社 ，０７ １ ２ ２０ ： — ．
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讨 ［］职业教育 ， ０ ， （２ ）５ — ８ Ｊ． ２ ８１ １９ ： ５ ． ０ ０ ７
性福 尔马林 ， 固定 时 间不 易 过 长 。福尔 马林 固定 引 但
起组织抗原决定簇 的封闭与交联可以通过抗原修复的 方 法来修 正 】但 我 们 根据 经 验 认 为 采 用 Ｂ ｕｎ固定 ， ｏｉ
液 可 以避 免交联 键 的形 成 ， 于新 鲜 组织 可 不 做抗 原 对 修复。 由于在免疫组 化 操 作过 程 中极 易 出现 脱 片现 象 ，
好 。 目前许 多实验 室公认 组织 脱片 的原 因之一是取 材
处理 ， 一般 用 ３％ Ｈ Ｏ ， 染色 结 果 和组 织 细胞 的抗 ： 对
原性 均无 明显影 响 。
过厚 以及脱水 、 浸蜡 处理 不 当所致 ， 想 的取 材厚度 是 理
２ｃ 。 ｍ
１２２ 抗原 修复 目前所 进 行 的常规 石 蜡 切片 均用 ．． 甲醛 固定 ， 由于形成 醛 键 或蛋 白之 间发 生 交 联而 使抗 原决 定簇 隐蔽 ， 因此 有 些抗 原 需 要 先进 行 抗 原修 复 或
因素可 以影 响免疫 组化 的染 色结 果 ， 因此 将免 疫 组 化 技术标 准化成 为 目前 的焦 点 。
１ 免疫 组 织化 学标 准化 的染 色方法
片对 抗原有 破坏 ， 我们 建议 ５ Ｏ℃左 右 烤 片过 夜 ， 既保 持 了抗原活 性又避 免 了脱 片现 象 的发 生 。切 片 的脱蜡 步骤 与常规 Ｈ Ｅ染 色 的脱 蜡 步 骤相 同 ， 免 疫 组 化要 但 求脱 蜡彻底 、 干净 ， 因此 最 好 与 常 规 Ｈ Ｅ脱 蜡 分开 ， 以 达 到更好 的染色效 果 。
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包
头
医
学
院
学
报
第２ ６卷
取 、 胃技 术 、 灌 性别 鉴 定 、 色标 记 、 颈椎 处 死 等 ， 染 断 并
素质过硬 、 结构合 理 的师资 队伍 ， 将对 培养合 格 的预防 医学毕业 生 和 未 来 的毒 理 学专 业 人 才 打 下 坚 实 的 基
础。
把这 ５项基 本技能 作为实验 考试 的 内容 。训练 中 以小 鼠为实验对 象 ， 训练 学生 如何正确 抓取 动物 ， 求每个 要 学生 必须独 立 、 正规 、 准确 的操作 。对 于少部 分对实验 动物有 畏惧 心理 的学生 ， 课 教 师耐 心 反 复地 讲 解 和 授 示 范 ， 学生克 服胆怯 心理 ； 使 通过多 看多练 、 循序 渐进 ， 使 每个学 生掌握 最基本 的技 能 ， 在这 个基础 上 ， 种染 各 毒 方法 、 材方法 都 能很 好地 被学生 掌握 ， 实验课 的 取 使 基 本技 ｆｉｌ 到预期 目的。 ｉ Ｊ练达 ￣ ａ
暴 露 。常用 的有酶 消 化 法 和加 热抗 原 两 种 修 复方 法 。 酶 消化法是 最早 的抗原 修复方 法 ， 用 的酶 有 ： 蛋 白 常 胰 酶、 胃蛋 白酶等 ， 已很少 应 用 ， 现 只有少 数 的 抗体 可 以
要 针对 组织渗 透性及 保持 组织结 构 的完 整性 和抗 原 活性选择 固定 液
热方法有水浴法、 微波法和高压法， 高压法优于其它两 种 方法 。加 热 抗 原 修 复 液 有 柠 檬 酸 盐 缓 冲 液 、 ｆ 、 ｒ ｓ ｉ
ＥＴ Ｄ Ａ等 ， 目前 首选 柠檬 酸盐 缓 冲液 ， 优点 是 染色 背 其 景 清晰 ， 合于 大多数抗 体 ， 两种对 部分抗 原修 复效 适 后