植物乳杆菌代谢产物诱导人结肠癌细胞系LoVo细胞的凋亡作用
《2024年LPS诱导人结肠上皮细胞(NCM460)凋亡机制研究》范文
《LPS诱导人结肠上皮细胞（NCM460）凋亡机制研究》篇一一、引言细胞凋亡是一种复杂的生理过程，对于维持体内稳态具有至关重要的作用。
近年来，许多研究指出脂多糖（LPS）对多种细胞类型的生物学行为有显著影响，其中也包括对人类结肠上皮细胞的影响。
人结肠上皮细胞（NCM460）作为肠道屏障的主要组成部分，其凋亡过程对于理解肠道炎症性疾病的发生与发展机制具有重大意义。
本研究将深入探讨LPS诱导NCM460细胞凋亡的机制，为肠道疾病的治疗和预防提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料实验选用人结肠上皮细胞（NCM460）作为研究对象，LPS 为刺激剂，同时使用一系列相关试剂和设备进行实验操作。
2. 方法（1）细胞培养与处理：在适宜条件下培养NCM460细胞，并使用不同浓度的LPS进行处理。
（2）凋亡检测：通过流式细胞术、Western blot等方法检测细胞凋亡情况。
（3）信号通路分析：利用PCR、免疫印迹等技术分析相关信号通路的变化。
（4）数据统计与分析：采用SPSS软件进行数据分析，结果以平均值±标准差表示。
三、结果1. LPS诱导NCM460细胞凋亡实验结果显示，随着LPS浓度的增加，NCM460细胞的凋亡率显著增加。
流式细胞术检测结果表明，LPS处理后，细胞早期和晚期凋亡的比例均有所上升。
2. 凋亡相关基因和蛋白的表达变化Western blot和PCR结果表明，LPS处理后，促凋亡基因和蛋白的表达水平上升，而抗凋亡基因和蛋白的表达水平下降。
3. 信号通路分析通过对相关信号通路的检测，发现LPS处理后，NF-κB、MAPK等信号通路被激活，进一步促进了细胞的凋亡。
四、讨论本研究表明，LPS能够诱导人结肠上皮细胞（NCM460）发生凋亡。
通过检测凋亡相关基因和蛋白的表达变化，以及分析相关信号通路的激活情况，我们得出以下结论：1. LPS通过上调促凋亡基因和蛋白的表达，下调抗凋亡基因和蛋白的表达，从而诱导NCM460细胞发生凋亡。
乳杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制及其应用的研究进展
乳杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制及其应用的研究进展[摘要]宫颈癌作为第四大恶性妇科肿瘤，有关宫颈癌的研究一直是妇科肿瘤的研究热点。
其发病与HPV病毒的感染和阴道微生态紊乱具有相关性。
乳酸杆菌是阴道微生态中主导菌群，可通过微生态机制维持正常的阴道微生态。
此外，在宫颈癌的治疗方面，乳酸杆菌也能通过调节宫颈癌细胞生物学行为以及触发免疫反应抑制宫颈癌的发展。
研究表明，相较于手术和放化疗，利用乳酸杆菌制剂治疗宫颈癌，其副作用小，易于管理，对护理要求小。
利用其微生态特性开发治疗性疫苗诱导粘膜免疫也是重要的研究趋势。
故本文对乳酸杆菌及其代谢物抗宫颈癌机制进行综述，并总结乳酸杆菌制剂在宫颈癌治疗方面的主要应用，为宫颈癌的治疗提供新思路。
[关键词]宫颈癌；乳酸杆菌；微生态；治疗性疫苗[中图分类号]R711.74Research Progress on the Mechanism and Application of Lactobacillus and Its Metabolites Against Cervical CancerLIU Xia1（1.Dalian Medical University, Dalian Liaoning 116044, China）[Abstract] Cervical cancer is the fourth malignant gynecological tumor. The research on cervical cancer is the research hotspot of gynecological tumors. Its pathogenesis is related to HPV virus infection and vaginal microecological disorder. Lactobacillus is the dominant flora in vaginal microecology, which can maintain normal vaginal microecology through microecological mechanism. In addition,in the treatment of cervical cancer, lactobacillus can also inhibit the development of cervical cancer by regulating the biological behavior of cervical cancer cells and triggering immune response. Research shows that compared with surgery and radiotherapy and chemotherapy, the use of Lactobacillus preparation in the treatment of cervical cancer has less side effects, easy management and less nursing requirements. Using its micro ecological characteristics to develop therapeutic vaccines to induce mucosal immunity is also an important research trend. Therefore, this paper reviews the anticervical cancer mechanism of Lactobacillus and its metabolites, and summarizes the main application of Lactobacillus preparation in the treatment of cervical cancer, so as to provide new ideas for the treatment of cervical cancer.[Keywords]cervical cancer; lactobacillus; microecology; therapeutic vaccine1 引言由国际癌症研究机构公布的GLOBOCAN可知，2018 年全球估计有569 847 例宫颈癌新确诊病例，其中311 365 例死于宫颈恶性肿瘤，其发病率和死亡率均排在妇科恶性肿瘤的第四位[1]，故宫颈癌的防治显得尤为重要宫颈癌的发生与HPV感染、气候条件、环境和饮食习惯等有关[2, 3]。
氧化苦参碱对结肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的作用研究
氧化苦参碱对结肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的作用研究韩凌1，彭燕2，孙静1，危建安1（1.广州中医药大学第二临床医学院，广东广州510006；2.遵义医学院珠海医院，广东珠海519100）摘要：目的：探讨氧化苦参碱（oxymatrine，OM）对人结肠癌LOVO细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。
方法：采用MTT法检测OM对LOVO细胞的增殖抑制率；流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡率以及细胞周期分布；吉姆萨染色法观察用药前后细胞形态变化；荧光定量逆转录－聚合酶链式反应（qRT－PCR）法检测药物作用后p53mRNA表达变化情况。
结果：MTT法显示，OM在一定浓度范围（200μg/mL 5mg/mL）对人结肠癌LOVO细胞的生长有明显的抑制作用，对LPS诱导的LOVO细胞的过度增殖也具有明显的抑制作用。
LOVO细胞经OM作用后光镜下可见细胞数量明显减少，细胞内空泡明显增多。
流式检测表明OM可明显诱导LOVO细胞凋亡，使LOVO细胞周期停滞于S期。
荧光定量PCR法显示，OM作用后LOVO细胞p53mRNA表达明显下降。
结论：OM能显著抑制人结肠癌LOVO细胞增殖，并诱导LOVO 细胞凋亡，其机制可能与OM使LOVO细胞周期停滞于S期，下调LOVO细胞p53mRNA表达有关。
关键词：氧化苦参碱；结肠癌中图分类号：R735．3文献标识码：A文章编号：1000－1719（2012）08－1455－05Effect of Oxymatrine on Proliferation and Apoptosis in Human colon Carcinoma LOVO CellsHAN Ling1，PENG Yan2，SUN Jing1，WEI Jianan1（1.The Second Clinical Hospital of Guangzhou University of Chinese Medcine，Guangzhoug510006，Guangdong，China；2.The Fifth Clinical Hospital of Zunyi Medcine，Zhuhai519100，Guangdong，China）Abstract：Objective：To investigate the effect of oxymatrine（OM）on modulating proliferation and apoptosis in human colon cancer cell lines LOVO．Methods：Human colon cancer cell lines LOVO was treated with OM．The inhibitory rates were detected by MTT assay．Apoptosis rate and cell cycle distribution were analyzed by flow cytometric technique．Changes of morphology were ob-served by Gimmsa staining when cells were treated with OM．Effect of OM on the expression of p53in LOVO cells was examined by real time PCR．Results：OM exhibited a clearly inhibitory effect on the growth of colon cancer cell line LOVO within the dosage from200μg/mL to5mg/mL．OM could inhibit the excessive proliferation of LOVO induced by LPS．In the light microscope，the number of cells was significantly reduced after the role of OM，intracellular vacuoles were significantly increased．Oxymatrine could induce apoptosis of LOVO cells and apoptotic rate amounted to about25%after treatment with2．0mg/mL oxymatrine for 48h．Oxymatrine could block LOVO cells in S phase and prevent cells entering into G0/G1phase．It resulted in an obvious accu-mulation of S phase cells with decrease of G0/G1phase cells．We also foundd that oxymatrine down-regulated expression of p53 gene expression．Conclusion：OM could significantly inhibit the proliferation and induce apoptosis in human colon cancer cells LO-VO．The mechanisms may be related to blocking in LOVO cells in S phase，and reducing p53mRNA expression in LOVO cells．Key words：oxymatrine；colon cancer目前我国内地大肠癌发病率以4．71%逐年递增，远超2%的国际水平。
榄香烯乳对结肠癌Lovo细胞端粒酶活性、细胞凋亡及细胞周期的影响
榄香烯乳对结肠癌Lovo细胞端粒酶活性、细胞凋亡及细胞周期的影响黄富春;范钰;郑树【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2004(23)10【摘要】目的:探讨榄香烯乳对结肠癌Lovo细胞的作用机制.方法:采用不用浓度的榄香烯乳处理结肠癌Lovo细胞后,分别应用四唑蓝比色试验、端粒重复扩增-微孔板杂交法、琼脂糖凝胶电泳方法及流式细胞仪研究榄香烯乳对结肠癌细胞生长、端粒酶活性、凋亡及细胞周期的影响.结果:榄香烯乳对结肠癌Lovo细胞增殖具有较强的抑制作用,能够抑制端粒酶活性,诱导细胞凋亡,且这种作用呈浓度及时间依赖;且细胞阻滞于G0/G1期.结论:榄香烯乳抑制结肠癌Lovo细胞恶性增殖与抑制端粒酶活性、诱导凋亡及细胞周期阻滞有关.【总页数】3页(P712-714)【作者】黄富春;范钰;郑树【作者单位】河南省漯河市第二人民医院消化科,462000;浙江大学医学院附属第二医院浙江大学肿瘤研究所,杭州,310009;浙江大学医学院附属第二医院浙江大学肿瘤研究所,杭州,310009【正文语种】中文【中图分类】R979.1;R735.35【相关文献】1.白细胞介素6对结肠癌Lovo细胞细胞周期的影响 [J], 冯秋娟;柯长涛;李妙丹;李颖欣;程小广;曾今诚2.siRNA抑制PTTG表达对人结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 [J], 王茂楠;夏昕;徐松柏;刘玉石3.高表达p55PIK细胞株的建立及其对结肠癌LoVo细胞周期的影响 [J], 曹小年;胡发涌;杨熹;来森艳;孙威;胡俊波4.大蒜素对结肠癌Lovo细胞端粒酶活性、环氧化酶-2及核因子-κB的影响 [J], 关文明;范钰;林庚金;钱立平;许祖德;黄富春5.榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响 [J], 范钰;林庚金;钱立平;李华;朱行;颜吉丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制
丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制李明;谭诗云【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2014(11)7【摘要】目的观察丹皮酚对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制.方法用不同浓度丹皮酚处理体外培养的LoVo细胞24、48、72、96 h,CCK-8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;根据CCK-8结果分为丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)和对照组,处理48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化;RT-PCR和Western blot法检测RUNX3基因表达情况.结果丹皮酚能显著降低LoVo细胞存活率,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)处理细胞48 h后,凋亡率分别为(12.3±1.3)％、(22.4±1.5)％、(36.2±2.1)％,与对照组[凋亡率(2.3±0.9)％]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);丹皮酚组处理48 h后,细胞钙离子荧光强度分别为(41.36±4.62),(57.51±3.83)和(69.43±3.76),与对照组[荧光强度(24.45±3.74)]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);丹皮酚能上调RUNX3基因的表达,呈剂量依赖性.结论丹皮酚能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞内Ca2+含量和上调RUNX3基因的表达有关.【总页数】5页(P23-27)【作者】李明;谭诗云【作者单位】武汉大学人民医院消化内科,湖北武汉430060;武汉大学人民医院消化内科,湖北武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R735.3【相关文献】1.红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞增殖、凋亡、侵袭作用机制研究 [J], 孙伟;童仕伦;郑勇斌;秦凯迪;宋丹;肖旷2.丹皮酚对人结肠癌 LoVo细胞增殖及凋亡的作用 [J], 史浩;揭志刚;向德雨;李正荣;刘逸3.丹皮酚对人结肠癌LoVo细胞增殖抑制机制的研究 [J], 李正荣;史浩;揭志刚4.Zebularine联合丁酸钠对结肠癌细胞系LOVO增殖、凋亡以及P16基因表达的影响 [J], 占义军;邓涛;李红艳;万新月;皮小雨5.lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究 [J], 许建勇; 时艳; 汪洪友因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
植物乳杆菌代谢产物和Ca^2+诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究
黑龙江医药科学
２ ０ １ ３ 年４ 月第３ ６ 卷第２ 期
植 物乳 杆 菌代 谢 产物 和 Ｃ ａ ＋ 诱 导人 舌 鳞癌 Ｃ ＡＬ 一２ ７ 细胞 凋亡 的研 究
张秀 静 ， 王 心或 ， 张 国梁 ， 赵 华， 刘 志 ， 徐 峰， 关 键
（ 佳 木 斯 大 学 第 二 附属 医 院 ， 黑龙江 佳木斯 １ ５ ４ ０ ０ ２ ）
１ 实验 材 料 、 仪 器 和 方 法 １ ． １ 主要 的实 验 材 料 和 仪 器
１ ． ４ ． １ 植物乳杆菌２ ３ ２ ０ １ 的 培 养 及 代 谢产 物 的 制 备
植物乳 杆菌２ ３ ２ ０ １ 经 ＭＲ Ｓ培 养 基 连 续 扩 增 培 养 ３ ０ ： 后， 离心 ， 用与培养基等体 积的无 菌ｌ Ｏ ｍＭ Ｃ ａ Ｃ １ 的 生 述 生 理 盐 水 悬 浮 菌 体 制 备
中的 Ｃ ａ 。 获 得 不含 Ｃ ａ 的 代谢 产 物 （ Ｌ Ｐ Ｍ１ 一Ｆ ） ； 采 用 ＭＴ Ｔ 法 检 测 不 同浓 度 的 Ｌ Ｐ Ｍ１ 和 Ｌ Ｐ Ｍ１ 一Ｆ对 Ｃ Ａ Ｌ一 ２ ７ 细 胞 体 外 增
殖的抑制作用； 通 过 吖 啶 橙 染 色法 观 察 凋 亡 细胞 的 形 态 学 变化 ； 采 用 Ａｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ ｖ －Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ／ Ｐ Ｉ 双 染 试 剂 盒检 测早 期 凋 亡 率 。 结果： 不 同浓 度 Ｌ Ｐ Ｍ１ 和Ｌ Ｐ Ｍ１ 一Ｆ分 别作 用 Ｃ ＡＬ 一２ ７ 细胞２ ４ ｈ ， 最 大 抑制 率分 别 达 到 （ ４ ８ ． ８ １ 土４ ． ９ ６ ） ％和 （ ５ ６ ． ７ ０ ±２ ． ３ ３ ） ； 荧光 显 微 镜下观察 ， 凋 亡 细胞 皱缩 ， 凝 聚呈 新 月形 或 马 蹄 形 ， 贴 壁 不 良； 流 式 细 胞 仪 结 果显 示 ： 经Ｌ Ｐ Ｍ１ 和Ｌ Ｐ Ｍ１ 一Ｆ 处理 的 Ｃ ＡＬ 一２ ７ 细 胞 早 期 凋 亡 率 均 高 于对 照 组 结论 ： 植 物 乳 酸杆 菌代 谢 产 物 体 外抑 制 Ｃ Ａ Ｌ一２ ７ 细胞生长 ， 呈 剂 量 的依 赖 性 ， 并且诱导细胞凋
丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控
丁酸钠诱导结肠癌Lovo细胞凋亡及其对p53靶基因的调控【摘要】目的观察丁酸钠对结肠癌Lovo细胞P53的三个重要靶基因，p21wafl> Bax和Gadd45的调控，进一步探讨其抑制细胞增生、诱导细胞凋亡的分子机制。
方法Lovo细胞常规培养分别用1.25、2.5、5.0、10 mmol/L 丁酸钠进行干预。
用MTT法检测细胞增生，流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期; AnnexinV FITC/PI双标记观察细胞凋亡；RT PCR和Western blotting分别检测丁酸钠对p21wafl、Bax和Gadd45三种基因mRNA和蛋白的表达。
结果丁酸钠以剂量和时间依赖的方式抑制Lovo结肠癌细胞的增生，诱导其凋亡，并阻滞Lovo细胞停滞丁‘G2/M期。
p21wafl、Gadd45和Bax基因mRNA和蛋白的表达增加，其中以Gadd45的表达变化最明显。
结论2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠以剂量和时间依赖的方式，抑制结肠癌Lovo细胞增生，诱导调亡；了酸钠参与结肠癌Lovo细胞周期的调控，2.5 mmol/L以上浓度的丁酸钠可以引起Lovo细胞的G2/M期阻滞；r酸钠的上述作用可能与其调控Lovo细胞中p21wafl、Bax和Gadd45基因的表达有关。
【关键词】Lovo结肠癌细胞；丁酸钠；细胞凋亡；p53靶基因【Abstract】 Objective To observe the regulation of sodium butyrate on the three main target genes of p53，includingp21wafl, Bax and Gadd45, and to explore the molecule mechanism ofits inhibiting proliferation and inducing apoptosis of Lovo colon cancer cells. Methods The colon cancer cell line Lovo was cultivatedin different concentrations of NaBT which concentrations were1. 25mmol/L,2.5 mmol/L, 5.0 mmol/L, 10 mraol/L respectively. MTT was used to detect the cellular proliferation. The apoptosis was examined by both flow cytometry and Annex in V FITC/PI double tagging. RT PCR and Western blotting were used to study the expression ofp21wafl, Bax, and Gadd45 messenger ribonuclcic acid(mRNA) and that of the protein. Results Sodium butyrate inhibited proliferation，induced apoptosis, and blocked Lovo cell mainly in G2 phase in a timeand dose dependant manner. The expression of p21wan, Bax and Gadd45 gene was all enhanced after being treated with sodium butyrate bothat mRNA and protein levels, and the expression of Gadd45 was the most obvious of all. Conclusions Sodium butyrate above 2. 5 mmol/L may inhibit proliferation, induce apoptosis and blocked Lovo cell mainlyin G2 phase in a time and dose dependant manner. Maybe the effect associated with its up regulating the expressions of p21waf1,Bax and Gadd45 within Lovo cell.【Key words】 Lovo colorectal cancer cell line, sodium butyrate, cell apoptosis , p53 target genesT酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种四碳短链脂肪酸（丁酸) 的钠盐。
舒林酸抗肿瘤作用的研究进展
舒林酸抗肿瘤作用的研究进展舒林酸作为一种非甾体类抗炎药，近年来研究发现，非甾体类抗炎药除了环氧合酶-2途径外，其可以通过许多非COX-2依赖性途径发挥抗肿瘤的作用，但具体机制尚不清楚。
本文就舒林酸抗肿瘤的机制及临床研究进行综述。
Abstract：As a non-steroidal anti-inflammatory drugs，sulindac has been found in recent years，in addition to the cyclooxygenase-2 pathway，non-steroidal anti-inflammatory drugs can exert anti-tumor through many non-COX-2 dependent pathways.But the specific mechanism is still unclear. This article reviews the mechanism and clinical research of sulindac anti-tumor.Key words：Cyclooxygenase-2；Sulindac；Tumor非甾体类抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）是临床上常用的抗炎镇痛药物，也是预防消化道肿瘤的常用药物，分为两大类：一类为选择性类，其可抑制环氧合酶-2（cycloxygenase-2，COX-2），主要包括塞来昔布、NS-398等；另一类为非选择性类，其不但可以抑制COX-2，还可以对环氧合酶-1（COX-1）有抑制作用，主要包括布洛芬、阿司匹林等，臨床上广泛用于抗炎、解热、镇痛和抗血小板聚集，此外，长期服用非甾体类抗炎药能减少和预防胃癌、食道癌等肿瘤的发生[1，2]。
舒林酸（sulindac）为较新型的NSAIDs，对肾及胃肠道损伤较小，是环氧合酶的选择性抑制剂，目前国内外对舒林酸防治肿瘤的研究较多，现对舒林酸抗肿瘤的机制及临床研究进行总结。
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钾２ ｇ ， 无水 乙酸钠 ５ ｇ ， 柠檬酸 三铵 ２ ｇ ， 硫 酸镁 ２ ０ ０ ｍ ｇ ， 硫酸锰 ５ ０ ｍ ｇ 。加水 至 １ １ ， ｐ Ｈ ６ ． ０ —６ ． ５ ， １ ２ １ ｏ Ｃ， 灭菌 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
２ ． 脱 盐 乳 清 粉 一菊 糖 培 养 基 ： 乳 清粉 ５ ０ ｇ ， 碳 酸钙 ２ ０ ｇ ，
细胞增殖 的抑制作用 ； 采用吖啶橙染色 法检测 细胞凋亡 ； 采用 Ａ ｎ ｎ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｖ—Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ ／ Ｐ Ｉ 双染 流式 细胞 术检 测
细胞 凋 亡 率 。 结 果
抑制作用 ， Ｉ Ｃ ５ ０为 ２ ７ ． ２ ３±０ ． ７ ５ ｍ Ｓ ／ ｍ ｌ ； Ｌ ＷＭ（ ２ ４ ｍｇ ／ ｍ １ ） 作用 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细胞 １ ４～ １ ６ ｈ后 ， 细胞形态 出现细胞 凋亡 的特 征 ， 早期凋亡率和晚期凋亡率分别为 １ ３ ． ５和 ９ ． ８ ％ 。结论 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ＷＭ可 以抑制 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细胞 的增殖 ， 呈
公 认 为 可 安全 食 用 的益 生 菌 ， 具 有 降 解 乳 清 蛋 白和 菊糖 的能 力 。 张秀 静 等 人 研 究 发 现 植 物 乳 杆 菌 ２ ３ ２ ０ １ 经脱盐 乳清粉 一
３ ． Ｌ ＷＭ的制备 ： 植 物乳 杆 菌 ２ ３ ２ ０ １经 ＭＲ Ｓ连续 扩培 ３
次后 ， 离心， 弃上清液， 利 用 等体 积 的 无 菌 含 有 １ ０ ｍ ｍ ｏ Ｖ１ Ｃ ａ Ｃ １ ：的生理盐 水洗涤菌体沉 淀 ２次 ， 经离心弃 去上清液 ， 利 用上述生理盐水悬浮菌体细胞 ， 制备菌悬液 ， 利用分光光度计 测定 ６ ０ ０ ｎ ｍ处菌悬液的光密度 （ ０ Ｄ ） 值 。接种于脱盐 乳清 粉 一菊糖培养基 中 ， 菌体终 浓度 为 １ ． ０ Ｏ Ｄ ６ ０ ０ ／ ｍ ｌ ， 于４ ０℃、 １ ２ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｍ振荡培养 ４ ８ ｈ ， 离心取 上清液 ， 经 真空冷 冻干燥 获 得冻干粉 ， 即植 物乳杆菌 ２ ３ ２ ０ １的代谢 产物 （ Ｌ ＷＭ） ， 一２ ０℃
．
论著 ．
植 物 乳 杆 菌 代谢 产 物诱 导人 结 肠 癌 细胞 系 Ｌ ｏ Ｖ ｏ 细 胞 的凋 亡 作 用
关宏 张 杰 孙 永旭 刘伯 阳 王睿
【 摘要 】 目的
方法
王 慧荣 刘韩 王 丽萍 刘 吉成
评价植物乳杆菌 ２ ３ ２ ０ １ 代谢产物 （ Ｌ ＷＭ） 诱导结肠 癌细胞系 Ｌ ｏ Ｖ ｏ 细胞凋亡 的活性 。
材 料与 方法
（ 一 ）材 料 与 试 剂 ： 植 物乳 杆 菌 ２ ３ ２ ０ １（ Ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ
ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ａ ｒ ｕ ｍ ２ ３ ２ ０ １ ） 由齐 齐 哈 尔 医 学 院 微 生 态 工 程 技 术 研 究 中
４ ． Ｌ ｏ Ｖ ｏ细胞的活 力检 测 ： 采用 ＭＴ ｒ法进 行 。将 对数 生 长期 的 Ｌ ｏ Ｖ ｏ 细胞 以每孔 ６ ． ０×１ ０ 个细胞接种 于 ９ ６孔板 中 ，
放人 Ｃ Ｏ 培 养 箱 中培 养 ２ ４ ｈ ， 加入 用 高糖 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培 养 基 稀 释 的Ｌ ＷＭ， 终浓度分别为 ３ ， ６ ， １ ２ ， ２ ４， ４ ８ ｍ ｓ ／ ｍ Ｌ， 同时以 １ ０ ０ ｇ ／ ｍＬ的 ５一氟 尿 嘧 啶 （ ５一 ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｏ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｌ ， ５一Ｆ Ｕ） 作 为 阳性 对 照 ， 继
・
２１ ９ ４・
齐齐 哈 尔 医学 院 学 报 ２ ０ １ ５年 第 ３ ６卷 第 １ ５期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｑ ｉ ｈ ａ ｒ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆＭｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， ２ ０ １ ５ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ６ ， Ｎ ｏ ． １ ５
保存待用 。
菊糖 培养基培养制备 的代谢产 物 （ Ｌ ＷＭ） 具 有体外 诱导 人舌
鳞 癌 细胞 系 Ｃ Ａ Ｌ一２ ７细 胞 凋 亡 的 活 性 Ｊ 。本 实 验 进 一 步 评
价Ｌ ＷＭ对 人结肠癌 细胞 系 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细胞生长 和凋亡的影 响 ， 为 益生菌的代谢产物在功 能食 品中的研制提供理论依据 。
植 物乳 杆菌 ２ ３ ２ ０ １ 经脱盐乳清乳清粉 一 菊糖培养基培养制备 Ｌ ＷＭ； 采用 ＭＴ ｒ法检测 Ｌ ＷＭ对 Ｌ ｏ Ｖ ｏ
Ｌ ＷＭ 在 ３ ｍ ｒ ＝ ／ ｍ ｌ ～ ４ ８ ｍｇ ／ ｍ ｌ 浓 度 范 围 内作 用 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细 胞 ２ ４ ｈ对 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细 胞 增 殖 具 有
心保 藏 ， 结肠癌细胞系 Ｌ ｏ Ｖ ｏ细胞购于 中国协和 医科大学研究 所 细胞 中心 ， 脱 盐乳 清 粉 Ｄ ７ ０（ 总蛋 白 １ ２ ． ０ ％， 乳糖 ７ ８— ８ ４ ％） 购 于 帕维特 （ Ａ ｌ ｐ ａ ｖ ｉ ｔ） 公司（ Ｌ ａ ｕ ｂ ｅ ｎ ， Ｇ ｅ ｒ ｍ ａ ｎ ｙ ） ， Ｄ ＭＥ Ｍ 培养 基为美 国 Ｇ Ｉ Ｂ Ｃ Ｏ公 司产 品 ， 胎 牛血清 、 吖啶橙购 于上海
剂量依赖性关 系 ， 以诱导 Ｌ ｏ Ｖ ｏ 细胞凋亡方式 为主 ， 其主要生物活性 成分及作 用机 制还 有待 进一 步的研究 。
【 关键词 】 乳清蛋 白； 乳杆 菌 ； 代谢产物 ； 结肠癌细胞 ； 凋亡作用
脱盐乳清粉是 干酪生产过程 中产生 的乳清 ， 经脱 盐、 浓缩
和 干燥 等 工艺 加 工 而成 的 产 品 ， 其 中 的 主 要 成 分 是 乳 糖 和 乳
清蛋 白。近年来 ， 乳清蛋 白因其对人体 健康 的促进作用 而成
为 良好 的 功 能性 食 品 的 添加 剂 Ｉ ２ 。菊 糖 是 一 种 可 溶 性 的膳
菊糖 １ ０ ｇ ， 加水至 １ １ 。１ ２ １ ℃灭菌 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
食纤 维 ， 具有降低胆 固醇 含量 、 预防结肠 癌发生 、 降低肠 道感 染 和有助 于双歧杆 菌生 长等 生物 活性 Ｉ ４ Ｊ 。植物乳酸杆菌被