高效液相色谱法同时测定四季青中4种酚酸类成分的含量
HPLC法同时测定茵陈中4个有机酸类成分的含量
HPLC法同时测定茵陈中4个有机酸类成分的含量目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定茵陈中绿原酸、1-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸共4个有机酸类成分的含量。
方法：采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱：Symmetry C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脱，流速1mL/min；柱温30℃；检测波长324nm。
结果：实验建立了同时测定茵陈中绿原酸、1-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸共4个有机酸类成分的HPLC 分析方法，并对这4个成分进行含量比较。
结果显示绿原酸含量最高，3,5-二咖啡酰奎宁酸次之，1-咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸含量较少。
结论：该方法方法准确可靠，可用于茵陈的质量控制。
关键词：茵陈；绿原酸；1-咖啡酰奎宁酸；3,5-二咖啡酰奎宁酸；4,5-二咖啡酰奎宁酸；含量测定；HPLC茵陈始载于《神农本草经》，春季采收的习称“绵茵陈”，秋季采割的称“花茵陈”[1]。
《中国药典》2020版规定茵陈为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst. et Kit.或茵陈蒿Artemisia capillaries Thunb.的干燥地上部分，规定绵茵陈中绿原酸不得少于0.50%。
据文献报道，茵陈所含的化学成分主要有有机酸类、香豆素类、黄酮类、色原酮类化合物[2]。
刘媛媛等[3]利用高效液相色谱法（HPLC）测定不同采收期2-11月采集的茵陈样品中绿原酸和咖啡酸的含量。
闫森等[4]建立了HPLC法同时测定14批绵茵陈中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和金丝桃苷4种成分的含量。
目前未见同时测定绿原酸、1-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸这4种成分含量的报道。
为此，本实验将建立一种同时测定茵陈中多个有机酸类成分含量的方法，这对于茵陈的质量控制有着重要的意义。
固相萃取—高效液相色谱联合测定植物根系分泌物中八种酚酸类化合物
固相萃取—高效液相色谱联合测定植物根系分泌物中八种酚酸类化合物酚酸类化合物是普遍存在于自然界高等植物组织中与植物的生长及萌发有着密切关系的次级代谢产物,主要经植物体内莽草酸或丙二酸的合成途径形成。
随着近几十年来的不断研究,人们对酚酸类化合物的认识也在逐渐加深。
酚酸类化合物对植物有“低促高抑”的影响,不仅影响植物的细胞膜系统、光合作用,还可以改变土壤中微生物的组成、改变土壤中酶的活性等。
研究还表明,酚酸类化合物对人体也有一定的保健作用,具有抗氧化性、抗心血管疾病、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等特点。
确立简便、高效的根系分泌物中酚酸类化合物的前处理以及优化高效液相色谱分离分析条件是固相萃取-高效液相色谱分析酚酸类化合物的两大重要任务。
本文成功设计了固相萃取装置,优化了固相萃取和高效液相色谱分析的实验条件,建立了固相萃取-高效液相色谱联用的分析方法。
不仅实现了八种酚酸类化合物快速、准确、高效地定性和定量检测,而且对实际样品的分析也能满足实验室分析要求,可为植物根系中其他酚酸类化合物测定方法的研究提供指导或借鉴。
1.确定了提取方式以及提取条件,设计了固相萃取装置,确定了萃取过程的最佳条件。
通过考察根系分泌物中8种酚酸类化合物提取的总量和各自提取效率以及苯甲酸的回收效率确定了提取方式为超声提取、提取溶剂为50%乙醇-水、提取时间为30min。
探索了C18、PEP-2、硅胶、DPS-401、DEAE等几种萃取材料的萃取效率,筛选出对几种酚酸都有较高萃取率的固相吸附剂和配比,利用正交试验对固相萃取中包括淋洗液及洗脱剂的类型、组成、体积、比例、萃取次数等诸多影响因素进行了对比与优化。
通过考察没食子酸、绿原酸、对羟基苯甲酸以及根皮苷的回收效率,确定了最佳的固相萃取吸附剂的种类即为PEP-2︰DEAE=4︰1(V/V),影响萃取效果的主要因素是淋洗剂的配比和体积。
固相萃取操作为:上样萃取3次,随后加入15 m L 10.0%甲醇-水(V/V)的淋洗剂对萃取小柱进行淋洗,之后用15 m L 2.0%乙酸-甲醇(V/V)对萃取小柱进行洗脱。
高效液相色谱法测定贯叶连翘提取物中4种成分的含量
高效液相色谱法测定贯叶连翘提取物中4种成分的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定贯叶连翘提取物中金丝桃素、金丝桃苷、芦丁和槲皮素含量的方法。
方法色谱柱为C18柱( 250 mm×4.6 mm，5 μm)；测定金丝桃苷、芦丁和槲皮素时，流动相为甲醇-乙睛-0.3%磷酸溶液，梯度洗脱，检测波长360 nm；测定金丝桃素时，流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液，检测波长580 nm。
结果金丝桃苷，槲皮素，芦丁、金丝桃素线性范围分别为1.97～20.3 μg・ml-1 (r=0.999 2)，2.47～24.7 μg・ml-1(r=0.999 1)，2.25～22.5 μg・ml-1(r=0.999 1) ， 0. 08～0.4 μg・ml-1(r=0.999 5)，方法回收率均不低于98%。
结论该方法简便、准确、重复性好，可用作贯叶连翘提取物中此4种成分的含量测定。
【关键词】贯叶连翘提取物金丝桃素金丝桃苷高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTo develop a rapid high-performance liquid chromatography method for determination of hypericin， hyperoside，rutin and quercetin in Hypericum perforatum L. extracts.MethodsHPLC method was employed on C18 column (250 mm×4.6 mm， 5 μm). The hyperoside， rutin and quercetin were detected at 360 nm， eluted with gradient three mobile phase (methanol-acetonitrile-0.3% phosophoric acid). The Hypericin was detected at 580 nm and the mobile phase consisted of methanol and 0.02 mol·L-1 KH2PO4.Results The HPLC method showed a good linear relationship in the range of 1.97～20.3 μg/ml(r=0.999 2) for hyperoside， 2.47～24.7 μg/ml (r=0.999 1) for quercetin， 2.25～22.5 μg・ml-1 (r=0.999 1) for rutin and 0.08～0.4μg/ml(r=0.999 5) for hyperin. Recoveries for the four components were all above 98%.CondusionThis HPLC method is simple， accurate and repeatable and can be used for determination of the four components in Hypericum perforatum L. exatracts.Key words：Hypericum perforatum L. extracts; Hyperin; Hyperoside; HPLC贯叶连翘Hypericum performatum L.为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎［1］，国外在抗抑郁症方面也有广泛应用［2］。
酚类化合物的测定液相色谱分析法
酚类化合物的测定----液相色谱分析法1 范围1.1 本法规定了液相色谱法测定水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚。
1.2 本法适用于生活饮用水、地下水和地表水中苯酚、4-硝基酚、3-甲基酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚的测定。
1.3 本法的最低检测质量浓度：取水样1.0L，固相萃取后溶剂洗脱，定容1.0mL，进样体积40μL，最低检测质量浓度（μg/L）见下表。
最低检测质量浓度酚类苯酚4-硝基酚3-甲基酚2，4-二氯酚2，4，6-三氯酚五氯酚Sp i，μg/L 0.16 0.032 0.15 0.093 0.14 0.072 0.61 0.12 0.56 0.35 0.54 0.272 原理用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。
在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。
3 试剂3.1 流动相3.1.1 甲醇：HPLC级，经0.22μm滤膜过滤。
3.1.2 高纯水：经0.22μm滤膜过滤。
3.2 标准物酚类标准储备液各组分浓度（μg/mL）苯酚2004-硝基酚503-甲基酚2002，4-二氯酚2002，4，6-三氯酚200五氯酚2003.3 四氢呋喃：重蒸馏。
3.4 正己烷：重蒸馏。
3.5 硫酸：0.5mol/L。
3.6 冰乙酸。
3.7 无水亚硫酸钠。
4 仪器4.1 高效液相色谱仪：可编程紫外检测器。
4.2 微量注射器：50μL、100μL。
4.3 色谱柱：C18或C8柱。
4.4 化学工作站。
4.5 尖底浓缩瓶：10ml具刻度。
4.6 富集柱。
5 样品5.1 水样采集及贮存方法：样品应贮于棕色玻璃瓶中避光，用硫酸调pH至＜2，冷冻保存，应尽快过柱，检测。
5.2 样品的预处理5.2.1 富集柱的活化：首先用10~15ml甲醇活化，再用30ml纯水活化，然后浸在纯水。
高效液相色谱法测定酚类物质的探讨
[1] 周 晓 珍,肖 熳.高 效 液 相 色 谱 法 测 定 水 中 六 种酚 类 化 合 物 [J].南 昌 高 专 学 报,2005,1 (56):103-105.
[2] 刘桂明,邓义敏.水 中 苯 酚、五 氯 酚、2,4,6三氯酚 的 高 效 液 相 色 谱 法 [J].云 南 环 境 科 学 ,2005,4(19):59-61.
方法二:流动相为70% 乙 腈—1% (v/v)乙 酸 水 溶液;流速为1ml/min;柱温 箱 温 度 为 35℃;进 样 量 为 10μL,测 定 波 长 在 254nm。 2.2.2 定性标准溶液的配制
本项目旨 在 确 定 碎 煤 加 压 气 化 酚 氨 回 收 水 中 酚类的检验 方 法,因 此,本 实 验 选 择 了 样 品 中 可 能 存在的 20 中 酚 类 物 质,利 用 标 准 物 质 进 行 定 性 分析。
在反相色谱分 析 体 系 中,待 测 的 酚 类 物 质 在 反 向固定 相 和 流 动 相 之 间 进 行 一 定 比 例 的 分 配,此 时,可以通 过 改 变 流 动 相 的 种 类 以 及 组 成 比 例,或 者是流速,来改变或 者 控 制 待 测 物 质 在 色 谱 柱 上 的 保留时间,以达 到 待 测 物 质 有 效 分 离 的 目 的。 通 过 查询文献 发 [2] 现 多 数 采 用 甲 醇 或 者 乙 腈 作 为 流 动 相,而且在流 动 相 中 加 入 1% 的 冰 乙 酸 能 够 有 效 的 改善目 标 物 峰 形 并 且 降 低 峰 宽,获 得 更 好 的 分 离 度。本文 中 选 用 两 种 流 动 相,一 种 是 70% 甲 醇— 1%(v/v)乙酸水溶液,另 一 种 是 70% 乙 腈—1%(v/ v)乙 酸 水 溶 液 。 2.3.2.3 酚类化合物色谱分析结果
反相高效液相色谱法同时测定中成药保健食品中4种生育酚含量
反相高效液相色谱法同时测定中成药保健食品中4种生育酚含量ZHANG Jing;WANG Xueqin;WANG Qian;XU Jinling;WANG Haibo【摘要】目的建立同时测定中成药保健品中4种生育酚含量的反相高效液相色谱法.方法色谱柱为YMC Carotenoid-C30柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为294 nm,柱温为20℃,进样量为10μL.结果α,β,γ,δ-生育酚质量浓度线性范围分别为5.28～63.36,5.42～65.09,5.23～62.77,5.10～61.15μg/mL(r>0.999),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％;平均加样回收率分别为95.77％,95.23％,97.43％,94.83％,RSD值分别为1.13％,1.86％,1.34％,1.73％(n=6).结论该方法操作简便,准确,精密度、稳定性、重复性、耐用性均较好,可用于同时测定中成药保健品中4种生育酚含量.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2019(028)014【总页数】3页(P29-31)【关键词】反相高效液相色谱法;中成药保健食品;天然维生素E;α-生育酚;β-生育酚;γ-生育酚;δ-生育酚;含量测定【作者】ZHANG Jing;WANG Xueqin;WANG Qian;XU Jinling;WANG Haibo 【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】R932;R284.1;R286.0维生素E又称生育酚，为脂溶性维生素，具有抗氧化、抗衰老、促生育功能、提高免疫、保护肝脏、提高记忆、防治白内障、减轻肾损害等众多生理功能[1]。
按其来源可分为人工合成和天然维生素E，来自动植物的天然维生素E是苯并二氢呋喃的衍生物，共有8种类似物，包括α，β，γ，δ-生育酚和α，β，γ，δ-生育三烯酚，生理活性均不同，其中以α-生育酚生理活性最强，其次为β-生育酚[2]。
高效液相色谱法测定四季青中长梗冬青苷
第30卷，第4期化学分析计量Vol.30,No.42021年4月CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE Apr.2021doi：10.3969/j.issn.1008-6145.2021.04.013高效液相色谱法测定四季青中长梗冬青苷蒋婷婷，郑金星,林雪志（浙江福立分析仪器股份有限公司，浙江台州317500）摘要建立了高效液相色谱法测定四季青中长梗冬青苷含量的方法。
采用C18色谱柱，蒸发光散射检测器，以甲醇-异丙醇(9：1)与水-异丙醇(9：1)为流动相梯度洗脱,流量为1.0mL/min,柱温为309,气体流量为2.5L/min,漂移管温度为509。
长梗冬青苷的质量在0.16~16“g范围内线性关系良好，线性相关系数为0.9999,检出限为0.016 mg/mL。
样品的加标回收率为96.25%~98.89%,测定结果的相对标准偏差为0.30%~3.56%(n=6)。
该方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，且满足药典要求,可用于四季青中长梗冬青苷的含量测定。
关键词高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；四季青；长根冬青苷中图分类号：O657.7文献标识码：A文章编号：1008-6145(2021)04-0054-04Determination of Pedunculoside in Ilex Chinensis Sims by high performance liquid chromatographyJiang Tingting,Zheng Jinxing,Lin Xuezhi(Zhejiang Fuli Analytical Instruments Inc.,Taizhou317500,China)Abstract The high performance liquid chromatography method was established to determine Pedunculoside in Ilex chinensis Sims.The C18column(4.6mm x250mm,5j m)and evaporative light scattering detector were used(ELSD), gradient elution was performed with methanol-isopropyl alcohol(9:1)and water-isopropyl alcohol(9:1)as mobile phase with flow rate of1mL/min,the column temperature was30r,the temperature of detector was50r,the flow rate of N2was2.5L/min.The linear range of Pedunculoside was0.16-16j g with the linear correlation coefficient of0.9999, the detection limit was0.016mg/mL.The recoveries of standard addition were96.25%-98.89%,and the relative standard deviations of determination results were0.30%-3.56%(n=6).The method is simple,accurate,sensibility,reproducible and meet pharmacopoeia requirements.It can be used for the determination of Pedunculoside in Ilex Chinensis Sims.Keywords high performance liquid chromatography;ELSD;Ilex Chinensis Sims;pedunculoside四季青是一种中药材，为冬青属植物冬青的干燥叶，广泛分布于长江以南的各省，叶片呈椭圆形或披针形,具有清热解毒、凉血止血、收敛生肌等功效临床上用于急性支气管炎、肺炎、急性咽喉炎、胆道感染、尿路感染、痢疾、烧伤、下肢溃疡、皮炎等疾病治疗［5—^。
高效液相色谱法测定去痛片中四种成分的含量
! 试 验方 法及 结果
!"# 色谱条件 色 谱 柱 采 用 # 0+ $ 1*2345)6 S 78 柱 0,./$$ %9:!$$! . ! $$% 0" $ ;2*<5)6 => ?@78 柱 0,./$$ %9:!$$! . ! $$! 柱 温为 室温 & 流 动 相为 /://.$A6B’ 己烷 磺 酸钠 甲 醇溶 液 C 磷 酸盐缓 冲液 0&:&.$A6B’ 磷 酸二 氢钾 溶液 ! 含 , $ 三乙 胺 ! 用 磷 酸调 节 DE 值 至 F:/ $ 0-. #G. $! 流 速为 ,:F$’B$)* ! 检测波长为 --/*$& !"! 样品溶液配制 取样品 -/ 片 ! 精密称定 ! 研细 ! 精密称取细粉适量 0 约相当 于氨基比 林 G.$% $ 置 ./$’ 容量 瓶中 ! 加甲醇 .$’ ! 超声 -$ )* ! 再加 -. $ 甲醇 适量 ! 超 声 .$)* ! 放冷 至室温 ! 用 -. $甲醇 稀释至刻 度 ! 摇匀 ! 滤 过 & 精密量 取续滤液 .$’ ! 置 ./$’ 容量瓶中 ! 用流动 相稀释至刻 度 ! 摇匀即得 & !"$ 色谱行为 色谱柱 0, $ 上 9 成分的出峰顺序分别为 氨基比林 ’ 咖啡因 ’ 苯 巴比妥 和非 那西丁 ! 各 组分 峰的 分离 度均 大于 -:- ! 理论板数均大于 9/// ! 见图 , % 色谱柱 0- ( 上 9 成分的 出峰 顺序分 别为 氨基 比林 ’ 咖啡 因 ’ 非那 西丁 和苯巴比妥 ! 各组分峰的 分离度均 大于 -:. ! 理 论板数 均大于 ./// ! 见图 - &
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89‘LNB 泵 ! "O(089‘NB 检测器 ! "$3089‘(NB 自动 进样 器 ! 岛津 P3‘"" 0^O 色谱 工作站 # ‘/&@’.Q 8899 全自 动 高效液相色谱仪 ! ‘/&@’.Q $.1QRT?’.Q 色谱工作站 # "5R& Q-R&T1 cOE88( 十万分之一天平 % -X# 试药 氨基比 林 $ 非那西丁 $ 咖啡因 $ 苯巴比 妥对照品 均 由中国药品生物制品检定所提供 % 去痛片样品来源于 E99G 年国家重点抽验品种的抽样 ! 共有 J 个厂家的 I 批样品 ! 编号 *d% % 磷酸二氢钾 $ 三乙胺为分析纯 ! 己烷 磺酸钠 由山东省禹王 实业总公司 化学试剂 厂生产 ! 磷 酸为优级纯 ! 甲醇为色谱纯 ! 水为 O‘33 高纯水 % -XY 对照品溶液的配制 取氨基比林对照 品 D;?/ $ 非那西丁对照 品 D;?/