维生素B12注射液的定性分析与定量分析.doc
药品质量检测技术综合实训维生素B12注射液质量检验
6.掌握紫外-可见分光光 度法中吸收系数法定量方 法及标示百分含量计算。
7.能正确填写相关检验原 始记录及检验报告单。
8.培养正确操作、仔细观 察、认真记录的良好习惯。
I.能根据样品量及任务 要求计算取样量
2•熟悉注射剂内容物颜 色及其溶解性
3.依据中国药典（二部）， 正确使用紫外-可见分光 光度法进行鉴别。
10.能处理实验中的异 常现象
II.实验后能关闭、清洗、 干燥、贮存仪器
16
维生素
B12注射
液质量检 验
维生素B12注射液质量检验
序 号
项目
（章知识目标
技能目标
教学实施设计
教学方法
教学环境
4
项目 四注
射 剂 质 量 检 验
任
务2
16
维生素
B12注
射液质 量检验
1.学会查阅中国药典（二 部）及相关资料。
2.学会注射剂的一般取样 方法。
3.熟悉注射剂的外观性状 检查及标示量。
4.掌握紫外-可见分光光 度法进行鉴别。
5.依据中国药典（二部附 录），正确进行维生素B12注射液PH值检查
6.依据中国药典（二部附 录）中注射剂项下各项规 定进行操作
7.依据中国药典（二部）， 正确使用紫外-可见分光 光度法测疋本品的标示 百分含量。
8.会选用合适容器将药
品留样，贴好标签，并按 规定期限留样
9.会填写实验记录，并粘 贴取样标志
紫外分光光度法测定维生素B12注射液含量的不确定度分析
ｃｒ ｉ ｙｏ ｉｍｉ Ｂ２ ｎｅｔ ｎｗ ｓ ｓ ｂｉ ｅ ｎ ｅｕ ｃｒ ｉ ｙ ｆ ａｈｖｒ ｂｅ ａ ｃ ｃｌ ｅ ． ｕｂ ｓｔｅｓｎ ｅｉｎ ｎ ｅｔ ｎ ｆ ｔ ｎ １Ｉｊｃ ｏ ａ ｔ ｌｈ ｄａｄｔ ｎｅ ａ ｔ ｃ ａ ａｌ ｗ ｓ ａ ｕａ ｄ Ｑ ｉｕ ， ｙｔ ｓ ｉｇａ — ａｔ Ｖａ ｉ ｅａ ｓ ｈ ｔ ｎ ｏｅ ｉ ｌ ｔ ｈ ｈ ｚ
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紫外分光 光度法具有操作简便 、 应性广 、 速等优 点 ， 适 快
ｅ ｔｂｌｓ ｅ ｔ ｅ ｔｃ ｌｍｏ ｅ ｆｕ ｃ ｒａｎ ｙ ｍｅ ｓ ｒ ｍｅ ｔｗａ ｅ ｓ ｎａ ｌ ｎｄ ｒ ｌａ ｌ ｒｔ ｅ ｕｎ ｅｔ ｉ ｔ ｖ ｕａｉ ｎ ｏ ｔ ｎ ｓａ ｉｈ ｄ ｍａ ｈ ｍａ ｉａ ｄ ｌｏ ｎ ｅ ｔ ｉｔ ａ ｕ ｅ ｎ ｓ ｒ ａ ｏ ｂｅ ａ ｅ ｉｂ ｅ ｆ ｈ ｃ ｒａ ｎｙ ｅ ａ ｔｏ ｆＶｉ ｏ ｌ ａｍｉ
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8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12注射液(双语)
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B 12注射液【目的要求】1．掌握紫外分光光度计的基本结构及使用方法；2．掌握维生素B 12注射液的鉴别和含量测定方法。
【实验原理】1. 紫外分光光度计的组成与结构紫外分光光度计主要由光源（D 灯、W 灯）、单色器（棱镜、光栅、滤光片）、吸收池、检测器（光电管、光电倍增管、光电池）以及信号放大处理和显示系统等部分组成，其基本结构和工作流程如同21-1所示。
图21-1 单光束紫外分光光度计的基本结构2. 维生素B 12的定性鉴别由于物质的性质和结构不同，物质对光的吸收是具有选择性的。
维生素B 12的吸收曲线反映了其化学结构的基本特征，分别在278nm 、361nm 和550nm 波长处有三个吸收峰，因此可通过它的吸收光谱的特征，利用其特征吸收值之间的比值A 361/A 278和A 361/A 550进行定性鉴别，并了解维生素B 12的纯度，药典规定：A 361/A 278和A 361/A 550的比值应分别在1.70~1.88和3.15~3.45之间。
3. 维生素B 12注射液的定量分析由于维生素B 12在361nm 处的溶液吸收最强（2071%1cm,361nm =E ），且干扰因素少，因此以361 nm 作为测量波长，在此波长下测量其溶液的吸光度A ，采用吸光系数法直接测定浓度，按下式计算维生素B 12的百分含量：由 Cl E A 1%1cm = 则 g/ml)( 31.481020741%1cm μA A l E AC ×=×== %1005.031.48(%)VitB 12×××=∴n A （n 为稀释倍数） 【仪器与试剂】１. 仪器光闸TU1810紫外-可见分光光度计，1 cm石英比色皿。
２. 试剂维生素B12对照品，维生素B12注射液（标示量0.5 mg/ml）。
【实验内容】1. 对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。
维生素B_(12)注射液含量测定改进方法探讨
维生素B_(12)注射液含量测定改进方法探讨
李群
【期刊名称】《求医问药：下半月》
【年(卷),期】2013(0)8
【摘要】目的:建立维生素B12注射液的含量测定方法。
方法:采用高效液相色谱法,紫外检测器,C18柱,流动相分别为:甲醇-水(30-70)检测波长361nm,流
速:1.0mL·min-1:进样体积:10μL,柱温:30℃。
结果:维生素B12在21.2μg/mL～212μg/mL范围内与相应峰面积呈良好的线性关系r=,0.9998(n=5)平均回收率为99.7%(RSD=0.53%,n=6)。
该方法可靠、简便、专属性强、重现性好,可作为维生素B12注射液的含量测定方法。
【总页数】2页(P31-32)
【关键词】维生素B12;高效液相法;含量测定
【作者】李群
【作者单位】淄博市食品药品监督管理局高新区分局
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.维生素B12注射液含量测定改进方法探讨 [J], 李群
2.紫外分光光度法测定维生素B_(12)注射液含量的不确定度分析 [J], 李秀珍;刘风琴;吕光宇;李文;田海燕
3.反相离子对高效液相色谱法测定维生素B_(12)注射液的含量 [J], 姜丽华;勾晓丹
4.HPLC测定注射用13种复合维生素中维生素H、叶酸及维生素B_(12)含量 [J], 宋金春;陆迅;曾俊芬;黄岭
5.改进HPLC法测定萘敏维滴眼液中维生素B_(12)的含量 [J], 康丽红;江志华;黄奇建
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VB12注射液鉴别实验教学
2、定量分析
样品名称 所用仪器 型号 测定序号 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 1 检验日期 检测波长 2 3
数据处理
计算样品标示量（含量）
对照样品标示量%=90%-110%，合格
结果讨论
1、试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优 缺点。
2、利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液 在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰 波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解 释。
数据记录
1、定性鉴别
波长（nm） 峰3 277 278 279 峰2 360 A 0.421 0.423 0.403 0.761
A361 /A550=3.15~3.45
A361 /A278=1.70~1.88
361
362 峰1 549
0.778
0.756 0.245
550
551
0.246
0.243
按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
4 检测器 5 信号显示系统
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用方法
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
1.接通电源，开机预热钟
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
2.调节波长
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
3.比色皿加样，依次放入比色槽中 注意：手拿比色皿毛 面，高度为比色皿的 2/3。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
4.调“100%”：光标调到T,将参比溶液对准光路， 按“100%”，仪器自动校正；完毕后显示“100.0”， 即T=100%。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
5. 测定吸光度：将样品溶液对准光路，仪器数值 变动；完毕后显示即样品溶液的吸光度。
04-维生素B12注射液检验+05-药用辅料苯甲酸钠的质量分析
预习：实验八、戊巴比妥的鉴别及含
量测定
实验九、维生素AD胶丸中维生
素A的含量测定
实验四 维生素B12注射液检验
一、实验目的
掌握维生素B12注射液的紫外分光光度法鉴别及
含量测定
掌握吸收系数法定量测定的计算公式。
二、实验原理
维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫外 吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。
三、实验内容：
（一）定性鉴别：
1、供试液配制：本品针剂1支（0.5mg :1ml）+水→ 25ml 2、比色测定：278nm，361nm，550nm处测定A值 规定：A361/A278 = 1.70~1.88，A361/A550 = 3.15~3.45
掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的基本原理
掌握双相滴定法的基本操作和实验技巧
二、实验原理
苯甲酸钠水溶液呈碱性，若直接用盐酸滴定液滴定，则滴 定过程中析出的苯甲酸不溶于水，且会使滴定终点的pH突跃 不明显，影响滴定终点的正确判断。因此，采用双相滴定法测 定含量。在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂乙醚，则滴定 过程产生的苯甲酸不断萃取入乙醚层中，减少苯甲酸在水中的 浓度，使滴定反应进行完全，终点清晰。
（二）含量测定：
1、吸收系数法： 2、标准曲线法： A A供
A361 A 361 稀释倍数 25 E 100 207 100 标示量% 100% 100% C标示量 0.0005
精密量取VB12贮备液(0.1mg/ml）1.0ml
4.0ml 10ml 40μg/ml C供 C H2O为空白，361nm处测得吸光度A。C为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲 线，得C供。
维生素B12注射液的定性分析与定量分析.doc
注意事项与上个步骤所注意的相同
3.仪器的使用：
（１）安装好打印机和UV-1600型紫外-可见分光光度计然后打开两个的开关，UV-1600型紫外-可见分光光度计进入自检菜单，8秒钟后按任意键开始自检（但不能按红色的键），“ＯＫ”表示仪器正常，可以工作。“ＥＲＲ”表示有故障，待排除故障后方可使用。
——“F4”打印
注意事项：
（1）在使用紫外－可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作注意事项。
（2）吸收池的光学面，必须清洁干净，不准用手触摸，只可用擦镜纸擦拭，并只能顺着一个方向擦.
五、实验数据的记录与处理
1.数据的记录
光度测量 标准法
no.
波长
A
T%
no.
c
A
T%
1
279.0
0.243
57.2
0.117
2
204.0
1.292
208.0
1.336
7
330.0
0.101
361.0
0.497
3
210.0
1.290
211.0
1.297
8
400.0
0.034
412.0
0.042
4
266.0
0.189
279.0
0.239
9
435.0
0.038
520.0
0.134
5
299.0
0.136
306.0
0.140
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渤海大学学生实验报告课程名称：仪器分析实验任课教师：实验室名称：理工二房间号 207 实验时间： 2013 年 4 月 3日学院化学化工与食品安全学院专业班级姓名学号同组人实验项目维生素B12注射液的定性分析与定量分析组别实验成绩一、实验目的和要求1.掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2.掌握吸收曲线的绘制；3.掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。
二、实验原理物质的紫外吸收光谱是物质分子中生色团和助色团的特征表现，例如具有共轭双键化合物、芳香烃化合物在紫外区都有强烈吸收。
维生素B12是含有Co2+的有机化合物，分子量为1355.38.分子式：C63H88CoO14N14P.维生素B12注射液为粉红色至红色的澄明液体。
维生素B12在可见光550处有吸收，VB12中苯环等含有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，在278nm和361nm处也有最大吸收。
1.定性分析（1）样品与标准比较，吸收峰位置不超过+/-2nm。
（2）最大吸收峰与相邻吸收峰的比值是否在一定范围内。
维生素B12有3个吸收峰，分别位于278nm、361nm、550nm。
(A1%cm361nm)/( A1%cm278nm)=1.70-1.88(A1%cm316nm)/( A1%cm550nm)=2.82-3.452.定量分析（1）标准比较法：根据朗伯-比尔定律：A=Kbc 当c=1g/100ml,b=1cm时，A=Ebc,E单位：100ml/(g*cm)国家药典中规定：A标=E1%1c m入361nm用标准比较法计算： A标/A样=c标/c样 c样=c标*（A样/ A标）式中，c标=1g/100ml; A标=207; A样:通过测试得到；样品标示量（样品）= c样*稀释倍数=对照样品标示量%=样品标示量（样品）/样品标示量（标准）*100%式中，样品标示量（标准）=500ug/ml, 对照样品标示量%=90%-110%,合格。
（3）标准曲线法在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上直接查出注入色谱柱中样品组分的浓度三、实验仪器与药品1．实验仪器UV-1600型紫外-可见分光光度计一台;容量瓶（10ml）一只吸量管（5.00ml、1.00ml）一只；烧杯一个；滴管一个；洗耳球一个；2.实验药品维生素B注射液（样品）：500ug/ml(医用)；12注射液（标准溶液）：50ug/ml；维生素B12四、实验步骤1、溶液配制用加样器移取维生素B12注射液500μl，转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2. VB12标准系列溶液的配制：标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、用吸量管移取50ug/ml维生素B126.00ml放在10ml编号为2、3、4、5、6、7的10ml容量瓶中，然后用去离子水定容。
注意事项与上个步骤所注意的相同3.仪器的使用：（１）安装好打印机和UV-1600型紫外-可见分光光度计然后打开两个的开关，UV-1600型紫外-可见分光光度计进入自检菜单，8秒钟后按任意键开始自检（但不能按红色的键），“ＯＫ”表示仪器正常，可以工作。
“ＥＲＲ”表示有故障，待排除故障后方可使用。
（２）按任意键进入主菜单，按数字键选定功能操作。
进入功能操作后，请按照屏幕提示操作，切勿无目的地接触键盘，以免误操作。
（3）各操作按键功能如下：“RESET”为红色键，用于重新开启仪器；“GOTO”为蓝色键，继续操作，如图谱缩放、入波长界面、键入标准样浓度、查看修改等。
“CE”清除，否定。
“ENTER”返回，返回主菜单操作界面。
“F1”进入参数设定。
“F2”测定。
“F3”测量后的处理。
“F4”打印（预先开启打印机，安装打印纸）。
“——”图谱切换，A——T转换，数据查询等。
“。
”游标。
“1-9”数字键。
输入数据，确定菜单。
“上下箭头”选项光标，下箭头还用于多数据切换屏幕。
“左右箭头”游标微调。
（4）操作中屏幕出现“E”表示测量时间也取样间隔不匹配，需重新设定。
（5）参比溶液放在参比池中，其余样池按号放置。
（6）断电或关机后，测量数据将丢失，请及时打印数据和图谱。
（7）操作完毕后，返回主菜单关闭打印机，关闭仪器。
（8）清洗比色皿，按编号顺序，透光面朝上放置好。
操作流程：开机——自检（OK）——按“5”(系统设置：氘灯和钨灯都开)——RETURN——按“1”（波长扫描）——F1（参数设定：测量速度（快）取样间隔（1.0）样品位置（1）波长范围（200.0-600.0））——按“F2”(测量：第一测量作为参比)——“F4”打印（图）——按“F3”（处理）—— RETURN——按“F4”（打印）—— RETURN——光度测量——“F1”（样池数为1，波参数为3）——“GOTO”—— RETURN——按“F2”——“F4”（打印）—— F1（参数设定：输入三个波长）——“GOTO”（选定输入浓度）——按“F2”——按“F4”（打印）——RETURN ——按“3”——按“F2”—— RETURN——按“4”——选中1号池——按“F2”——“F4”打印注意事项：（1）在使用紫外－可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作注意事项。
（2）吸收池的光学面，必须清洁干净，不准用手触摸，只可用擦镜纸擦拭，并只能顺着一个方向擦.五、实验数据的记录与处理1.数据的记录光度测量标准法no. 波长 A T% no. c A T%1 279.0 0.243 57.2 1 5 0.074 84.3361.0 0.495 32.0 2 10 0.169 67.7549.0 0.152 70.5 3 15 0.273 53.44 20 0.331 46.75 25 0.448 35.66 30 0.544 28.6峰谷检测波长谷波长峰波长谷波长峰1 200.0 1.267 203.0 1.310 6 317.0 0.110 323.0 0.1172 204.0 1.292 208.0 1.336 7 330.0 0.101 361.0 0.4973 210.0 1.290 211.0 1.297 8 400.0 0.034 412.0 0.0424 266.0 0.189 279.0 0.239 9 435.0 0.038 520.0 0.1345 299.0 0.136 306.0 0.140 10 530.0 0.133 549.0 0.152标准法 K1=0.000 K2=0.018 B=-0.000 R=-0.998no. c A T% 1 28.504 0.495 32实验用图:0.20.40.60.811.21.41.6200300400500600入/nmA2.数据的处理医用注射液的定性分析；维生素B12（1）峰位置的确定。
（在波长为279nm、361nm、549nm处有强烈的吸收）（2）A1%cm比值的确定。
(A1%cm361nm)/( A1%cm279nm)=0.495/0.243=2.037(A1%cm316nm)/( A1%cm550nm)=0.495/0.152=3.25由以上定性分析结果，得出结论：该物质是：维生素B12 。
维生素B医用注射液的定量分析12c=28.504 ug/ml样样品标示量（样品）= c*稀释倍数=28.504 ug/ml*20=570.08样对照样品标示量%=样品标示量（样品）/样品标示量（标准）*100%对照样品标示量%=(570.08/500)*100%=114%式中，样品标示量（标准）=500ug/ml, 对照样品标示量%=90%-110%,合格。
以上定量分析结果，得出结论：该样品不合格。
六、结果讨论1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。
误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。
而多次重复，在同一波长所得吸光度值也不一样，与波长的调节有关。
2.在实验中，第一次检测波长在548nm~552nm之间的吸光度值变化微小，数据不理想，当把调到380nm~1000nm后，第二次试验结果明显比第一好。
在实验过程中，我们除了把实验操作规范化和熟练实验步骤外，还应细心观察，对我们所用的仪器要有相当的认知。
3.使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度。
七、思考题1.在紫外-可见分光光度计法中可否用去离子水作参比？答：可以，因为在测量时溶液中只有去离子水和维生素B12并没有其他物质。
2.紫外-可见分光光度计法适用于什么样品的分析？答：此物质在紫外、可见光区中其分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁后能得到其吸收光谱曲线的。
教师评语：。