人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书

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循环肿瘤细胞(CTC)的富集与检测

循环肿瘤细胞(CTC)的富集与检测循环肿瘤细胞(CTC)的富集与检测上海优宁维生物科技有限公司1896年，澳大利亚学者Ashworth在一例转移性肿瘤患者血液中首次观看到从实体肿瘤中脱离并进入血液循环的肿瘤细胞，领先提出了循环肿瘤细胞（CTC）的概念。

多数肿瘤几乎都会通过血液传播到身体的其他器官，癌细胞远端转移是导致肿瘤患者死亡的主要缘由，因此早期发觉血液中的肿瘤细胞，对于患者预后推断、疗效评价和个体化治疗有着重要的指导作用。

随着讨论的深化，讨论人员鉴定出了更多的癌细胞生物标记物，如人类表皮生长因子受体2(HER2+)、表皮生长因子受体（EGFR）、类肝素酶（HPSE）和Notch1等。

之前报道称这四种生物标记物与癌细胞迁移相关，结合这四种标记物就能够特异的标记集中的癌细胞，并确定最终这些癌细胞所转移的位置。

大量试验证明循环肿瘤细胞的消失与乳腺癌患者的临床分期、及预后均亲密相关。

循环肿瘤细胞检测作为一种简洁的血液检测，可随时捕获并评估循环肿瘤细胞以确定转移性乳腺癌患者的预后。

大量讨论已经证明，CTCs检测将有助于乳腺癌复发转移监控、推断患者预后、指导术后帮助治疗等。

与淋巴结、骨髓相比，外周血标本易获得、创伤性小、可反复采集，是临床上常规检测较为抱负的标原来源，大大提高了这一方法的应用价值。

而且CTCs不仅是肿瘤预后和猜测指标，也有可能成为药效学的生物标志物。

比如在药物治疗后1-2周，通过CTC的检测，临床医师就可以观看循环细胞数量的转变即可猜测治疗效果，效果不好的以准时调整方案，不必让患者停留在无效治疗中甚至死亡。

目前，美天旎公司为您供应富集和检测CTC的多种产品，如autoMACS Pro全自动磁性细胞分选仪、手动磁珠分选设备及CTC富集磁珠，让您的CTC讨论更便利和高效。

MACS分选用于肿瘤细胞的富集，有两种策略：?阳性分选：CK/CD326、ErbB-2、CD30或其它肿瘤特异性标志优点：特异，受操作和其它非特异性颗粒影响小缺点：不同类型的肿瘤细胞表达不同的标记物，选择某种标志时不是全部肿瘤均表达?去除分选：CD45磁珠去除白细胞，富集肿瘤细胞优点：掩盖面广，可以函概全部肿瘤缺点：阴性成分中含有多种其它细胞和颗粒针对不同类型的肿瘤细胞，我们供应各种肿瘤细胞富集和检测试剂盒：。

人外周血循环肿瘤细胞(CTC)

人外周血循环肿瘤细胞(CTC)检测技术的研发及临床应用开发美国肿瘤协会于2006 年发表的年度报告指出，目前全世界范围内每3 人中就有1 人在其一生中会患有某种肿瘤，而且肿瘤发病率在发展中国家随着污染程度的增加，患病几率还会高于1/3 的比例。

现今全世界用于肿瘤治疗与防治的费用每年以16.5% 的比例递增。

仅用于乳腺癌，结直肠癌及前列腺癌（还不包括发病率最高的肺癌）的投资，目前世界范围内已达每年92 亿美元。

目前全世界用于肿瘤诊断的方法可归为三大类：病理学（活检切片）；影像学（超声，X光，CT, PET 等）和血清学（血清肿瘤相关蛋白，如CA-125, CA-199, CEA 等），但所有这些方法都有不可避免的缺点，例如灵敏性及特异性差，过于依赖医生判断的主观性等。

因此目前临床急需一种能够为医生及病人提供准确，快速的肿瘤检测手段。

经过长时间的大量研究，美国FDA 认证的人外周血循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell, CTC）检测目前已被公认为最好及最可观的检测手段之一。

目前已有越来越多的国内外医生开始应用此技术作为肿瘤检查的重要辅助手段。

不仅于此，CTC 检测也被公认为是目前国外新近流行的肿瘤治疗方法-即阻断肿瘤细胞入血转移的唯一有效检测指标。

除了上述CTC可作为肿瘤检测手段外，CTC还可成功应用于以下一系列其它方面的用途：(1)个体化治疗的体外肿瘤药物筛选；(2)体内化疗药物药效的快速评估: 相对于每12周一查的CT 诊断，CTC在第1-2周即可显示药效结果，这一点对临床医生和病人尤为重要；(3) 根据CTC数目，判断病人愈后状况及存活时间；（4）肿瘤病人复发的监测与及时诊断；及（5）正常人群体检普查以利于尽可能的肿瘤早期诊断。

除了应用于临床外，CTC 亦可应用于众多药厂和科研机构的基础研究，包括寻找新的肿瘤标识物以及开发新的抗肿瘤药物等。

目前美国FDA已于2004年认证了美国上市公司Immunicon/Veridex的CTC检测技术及其临床应用。

cellserch循环肿瘤细胞CTC试剂盒说明书自译中文

790000 116人份试剂盒Cell Search循环肿瘤细胞检测试剂盒（上皮细胞）IVD使用须知本试剂盒仅用于体外诊断CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒用于外周血中循环肿瘤细胞（CTC）的计数，这些细胞来源于上皮细胞，即表现为CD45阴性（CD45-），EpCAM阳性（EpCAM+），细胞角蛋白8,18阳性（CK8,18+）和（或者）CK19阳性(CK19+)的细胞。

用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒检测的CTC，存在于外周血中，这类细胞与乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌*转移患者的无进展生存期和总生存期相关。

因此，CTC可以用来监控乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌患者的肿瘤细胞是否发生转移。

CTC应该进行持续检测，并与其他临床诊断方式联合起来监控上述肿瘤细胞的转移。

在肿瘤发生过程中的任何时间段，对CTC数量进行评估，可以预估肿瘤患者治疗后的无进展生存期和总生存期。

*在该研究中，转移性前列腺癌患者定义为血清标志物PSA在标准激素基准上，高于参考水平具有两次连续增加。

这些患者通常描述为具有非雄激素依赖性，激素抗性，或去势抗性的前列腺癌。

摘要说明肿瘤转移是指当肿瘤细胞从原发灶或转移灶剥落后，这些肿瘤细胞进入循环系统并在机体的远端定植生长的情况。

血液循环中的肿瘤细胞源自于上皮细胞，而这类细胞在血液循环系统中是极罕见的。

基于此，本公司推出的细胞自动化捕获仪(CELLTRACKS○R AUTOPREP○R System)通过预设程序并配合使用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒(CELLSEARCH○R Kit)可以对样本进行标准化和自动化检测。

用CELLTRACKS II分析仪或者CellSpotter分析仪，一种半自动荧光显微镜，可以对肿瘤细胞进行分析和计数。

这种方法只计具有上皮细胞特性（EpCAM+, CK8,18+，和/或者CK19+）的细胞数量。

检测原理CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒包括磁流体捕获试剂和荧光免疫试剂。

人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书

人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书（免疫磁捕获、免疫细胞化学鉴定）简介：本试剂盒利用免疫磁球捕获肿瘤病人全血中极少量的循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC），并通过免疫细胞化学鉴定所捕获的细胞，从而实现对CTC的灵敏检测。

其中免疫磁球表面修饰有抗上皮细胞粘附分子（EpCAM）抗体。

免疫细胞化学鉴定是通过异硫氰酸荧光素标记的细胞角蛋白抗体（FITC-anti-CK19）、Alexa Fluor594标记的抗白细胞共同抗原抗体（AF594-anti-CD45）和DAPI对细胞进行免疫荧光染色，DAPI染色阳性，CK19表达阳性，CD45表达阴性（DAPI+/CK19+/CD45-）的细胞被鉴定为CTC。

本试剂盒对目标细胞的捕获效率高达90%，简便快速、特异性强、特别牢靠，可以在3小时内完成对全血中CTC的检测。

试剂盒所含试剂：（10人份/盒）试剂标号组分用途状态规格配制试剂A牛血清白蛋白封闭固体粉末试剂B免疫磁球磁捕获悬液200μL即用型试剂C4%多聚甲醛固定细胞液体5mL即用型试剂D1%Triton X-100通透细胞液体5mL即用型试剂E DAPI细胞染色液体50μL即用型试剂F FITC-anti-CK19细胞染色液体20μL即用型试剂G AF594-anti-CD45细胞染色液体50μL即用型试剂H1×PBS洗涤液体25mL即用型*保存条件：4-8℃用户自备试剂和材料：1.试剂L：通透封闭液于0.05g试剂A中加入0.5mL试剂D溶解待用，或根据此用量比配置所需用量的通透封闭液，标为“试剂L”。

2.试剂M：染色液于0.01g试剂A中加入190μL试剂H溶解后，向其中加5μL的试剂E，2μL 的试剂F，5μL试剂G，或根据此用量比配置所需用量的染色液，标为“试剂M”，4℃避光保存待用。

4.磁力架（推举Dynal公司123-20D）5.移液器（吉尔森）、涡旋仪、超声波清洗器、进口耗材（离心管、枪头等）、恒温水浴摇床、荧光倒置显微镜等。

循环肿瘤细胞(CTC)检测

循环肿瘤细胞（CTC）检测一、什么是循环肿瘤细胞（CTC）？循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，进入外周血循环的肿瘤细胞。

CTC非常稀少，每毫升血液中109血细胞只有几个CTC。

大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者的死亡风险。

二、肿瘤的发生及检测诊断全国肿瘤登记中心发布的2015年年报显示，2011年我国新增癌症病例约337万例，比2010年增加28万例——这相当于每分钟有6人被诊断为癌症。

然而，令人担忧的是这样的情势似乎仍未到达峰顶，未来可能还会不断增加。

美国约翰-霍普金斯大学Kinmel 癌症中心的Bert-Vogelstein 等专家在2013年3月份的一篇综述文章中写道：在今年将死于癌症的一百万人里，绝大部分是因为他们的癌症没有在发生、发展的前90%的时间内被发现。

因此，我们需要明确一点：癌症是一种慢性病，它只是被突然发现，并非是突然发生的。

我们需要尽可能早的发现它，从而提高治愈率。

伴随肿瘤的发生过程，肿瘤细胞的大小也随之增大。

传统方法诊断出癌症的时候，大部分已经是晚期。

晚期癌症的治愈率极低，其五年生存率也很低。

在肿瘤的发生过程中，早期到中期之间是最佳治疗期，因此，如果在早期就可以发现肿瘤的存在，必然可以提高治愈率。

临床癌症研究（Clinical Cancer Research）杂志上发表的荟萃分析（Meta-analysis）证实CTC在乳腺癌预测中的价值，结果表明早期和转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞CTC检测是一个稳定的预测和预后工具。

如果将肿瘤易感性基因检测和循环肿瘤细胞检测完美结合，那么能够将肿瘤的早期发现率提高数倍。

肿瘤易感性检测是对未来可能患有癌症的一种风险预测。

如果风险等级高，除了改变生活方式外，还可以定期做循环肿瘤细胞检测，即CTC检测，而且检查频率可以适当增加，每2-3个月检查一次，从而达到实时监控的目的。

外周血循环肿瘤DNA检测方法及应用

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cellsearch循环肿瘤细胞ctc)试剂盒说明书自译中文版

790000116人份试剂盒Cell Search循环肿瘤细胞检测试剂盒（上皮细胞）IVD使用须知本试剂盒仅用于体外诊断CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒用于外周血中循环肿瘤细胞（CTC）的计数，这些细胞来源于上皮细胞，即表现为CD45阴性（CD45-），EpCAM阳性（EpCAM+），细胞角蛋白8,18阳性（CK8,18+）和（或者）CK19阳性(CK19+)的细胞。

用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒检测的CTC，存在于外周血中，这类细胞与乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌*转移患者的无进展生存期和总生存期相关。

因此，CTC可以用来监控乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌患者的肿瘤细胞是否发生转移。

CTC应该进行持续检测，并与其他临床诊断方式联合起来监控上述肿瘤细胞的转移。

在肿瘤发生过程中的任何时间段，对CTC数量进行评估，可以预估肿瘤患者治疗后的无进展生存期和总生存期。

*在该研究中，转移性前列腺癌患者定义为血清标志物PSA在标准激素基准上，高于参考水平具有两次连续增加。

这些患者通常描述为具有非雄激素依赖性，激素抗性，或去势抗性的前列腺癌。

摘要说明肿瘤转移是指当肿瘤细胞从原发灶或转移灶剥落后，这些肿瘤细胞进入循环系统并在机体的远端定植生长的情况。

血液循环中的肿瘤细胞源自于上皮细胞，而这类细胞在血液循环系统中是极罕见的。

用CELLTRACKS II分析仪或者CellSpotter分析仪，一种半自动荧光显微镜，可以对肿瘤细胞进行分析和计数。

这种方法只计具有上皮细胞特性（EpCAM+, CK8,18+，和/或者CK19+）的细胞数量。

检测原理CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒包括磁流体捕获试剂和荧光免疫试剂。

cellsearch循环肿瘤细胞(CTC)试剂盒说明书自译中文版

790000116 人份试剂盒Cell Search循环肿瘤细胞检测试剂盒（上皮细胞）IVD使用须知本试剂盒仅用于体外诊断Cellsearch 循环肿瘤细胞检测试剂盒用于外周血中循环肿瘤细胞（ CTC ）的计数，这些细胞来源于上皮细胞，即表现为 CD45 阴性（ CD45- ）， EpCAM 阳性（ EpCAM+ ），细胞角蛋白 8,18 阳性（ CK8,18+ ）和（或者） CK19 阳性（CK19+）的细胞。

用CellSearch 循环肿瘤细胞检测试剂盒检测的CTC ，存在于外周血中，这类细胞与乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌 *转移患者的无进展生存期和总生存期相关。

因此，CTC 可以用来监控乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌患者的肿瘤细胞是否发生转移。

CTC 应该进行持续检测，并与其他临床诊断方式联合起来监控上述肿瘤细胞的转移。

在肿瘤发生过程中的任何时间段，对 CTC 数量进行评估，可以预估肿瘤患者治疗后的无进展生存期和总生存期。

*在该研究中，转移性前列腺癌患者定义为血清标志物 PSA 在标准激素基准上，高于参考水平具有两次连续增加。

这些患者通常描述为具有非雄激素依赖性，激素抗性，或去势抗性的前列腺癌。

摘要说明肿瘤转移是指当肿瘤细胞从原发灶或转移灶剥落后，这些肿瘤细胞进入循环系统并在机体的远端定植生长的情况。

血液循环中的肿瘤细胞源自于上皮细胞，而这类细胞在血液循环系统中是极罕见的。

用 CELLTRACKS II 分析仪或者 CellSpotter 分析仪，一种半自动荧光显微镜，可以对肿瘤细胞进行分析和计数。

这种方法只计具有上皮细胞特性（ EpCAM+, CK8,18+ ，和/或者 CK19+ ）的细胞数量。

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人外周血循环肿瘤细胞检测试剂盒使用说明书
（免疫磁捕获、免疫细胞化学鉴定）
简介：
本试剂盒利用免疫磁球捕获肿瘤病人全血中极少量的循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC），并通过免疫细胞化学鉴定所捕获的细胞，从而实现对CTC的灵敏检测。

其中免疫磁球表面修饰有抗上皮细胞粘附分子（EpCAM）抗体。

本试剂盒对目标细胞的捕获效率高达90%，简便快速、特异性强、非常可靠，可以在3小时内完成对全血中CTC的检测。

试剂盒所含试剂：（10人份/盒）
试剂标号组分用途状态规格配制
试剂A牛血清白蛋白封闭固体粉末
试剂B免疫磁球磁捕获悬液200μL即用型试剂C4%多聚甲醛固定细胞液体5mL即用型试剂D1%Triton X-100通透细胞液体5mL即用型试剂E DAPI细胞染色液体50μL即用型试剂F FITC-anti-CK19细胞染色液体20μL即用型试剂G AF594-anti-CD45细胞染色液体50μL即用型试剂H1×PBS洗涤液体25mL即用型*保存条件：4-8℃
用户自备试剂和材料：
1.试剂L：通透封闭液
于0.05g试剂A中加入0.5mL试剂D溶解待用，或按照此用量比配置所需用量的通透封闭液，标为“试剂L”。

2.试剂M：染色液
于0.01g试剂A中加入190μL试剂H溶解后，向其中加5μL的试剂E，2μL 的试剂F，5μL试剂G，或按照此用量比配置所需用量的染色液，标为“试剂M”，4℃避光保存待用。

4.磁力架（推荐Dynal公司123-20D）
5.移液器（吉尔森）、涡旋仪、超声波清洗器、进口耗材（离心管、枪头等）、恒温水浴摇床、荧光倒置显微镜等。

6.96孔板或PDMS小槽
检测步骤：
1.捕获
抽取约1.5mL病人血液于EDTA抗凝真空采血管中，将全血样品转移到2 mL的离心管内，加入20μL试剂B（试剂B预先用超声仪超声分散均匀），手摇或涡旋分散均匀后，置于恒温摇床上，150rpm，37℃下孵育30min。

2.细胞固定
将步骤1中的样品置于磁力架上，吸引约5min，用移液器延外侧轻轻吸出清液，再用400μL的试剂C重悬样品，室温放置10min。

3.细胞通透封闭
将步骤2中的样品于磁力架上，吸引约3min，用移液器去掉清液，再取400μL的试剂L重悬样品，室温放置20min。

4.细胞染色
将步骤3中的样品置于磁力架上，吸引约3min，用移液器去掉清液，再取200μL的试剂M重悬样品，37℃避光孵育30min。

待孵育结束后，将样品置于磁力架上，吸引约3min，用移液器去掉清液；再用200μL的试剂H重悬，再磁吸引，去掉清液，用试剂H重复洗涤3次，最后用100μL的试剂H分散样品。

5．检测
将步骤4得到的样品转移到96孔板底部或者PDMS小槽内，磁富集到底部后用倒置荧光显微镜观察。

三通道同时观察并用CCD采集图片，其中DAPI+/CK19+/CD45-的细胞即为CTC。

通道激发波长（nm）发射波长（nm）1#（DAPI）：405447±30
2#（FITC-CK19）488525±25
3#（AF594-CD45）594615±20
操作流程图
结果判断与分析：
循环肿瘤细胞（CTC）：DAPI+/CK19+/CD45-
白细胞（WBC）：DAPI+/CK19-/CD45+
操作注意事项：
1.所有试剂4℃冷藏保存，切勿冷冻。

2.试剂盒供科研使用，任何物质均不能食用。

3.试剂B用之前充分混匀分散。

4.不同批号的试剂不要混用，保质期前使用。

5.保质期：6个月。