TGF-β1对大鼠肠黏膜缺血再灌注损伤的保护作用
吴茱萸次碱药理学研究进展
吴茱萸次碱药理学研究进展吴茱萸次碱是中药吴茱萸的主要活性成分之一，具有广泛的生理药理作用，包括对心脏有正性肌力和保护心脏作用，可舒张血管和降血压，对胃黏膜有保护作用，并可治疗溃疡性结肠炎。
此外还有抗抑郁、抗肥胖、抗肿瘤、镇痛消炎等作用。
随着近年来国内外学者对吴茱萸次碱的深入研究，本文就其药理作用的研究进展做一综述，为今后合理开发提供依据。
[Abstract] Rutaecarpine is one of the main active components of Chinese medicine Evodia rutaecarpa. It has extensive physiological and pharmacological effect，including positive inotropic and cardioprotective effect，and can vasorelaxant and reduce blood pressure. It can protect gastric mucosa and has therapeutic effect on ulcerative colitis. In addition，rutaecarpine also has antidepressant，anti-obesity，anti-tumor effect，analgesic and anti-inflammatory effects，etc. With further study of rutaecarpine by domestic and foreign scholars in recent years，this article reviews the research progress of its pharmacological effect，and aims at providing preference for reasonable exploitation in future.[Key words] Rutaecarpine; Pharmacological effect; Cardiovascular; Antidepressant activity吳茱萸属于芸香科植物，是我国一种传统中药，始载于《神农本草经》，在临床应用已有千年余。
细胞因子在心肌缺血再灌注损伤中的作用(综述)
细胞因子在心肌缺血再灌注损伤中的作用(综述)
闵小芬;明亮
【期刊名称】《安徽卫生职业技术学院学报》
【年(卷),期】2004(3)3
【摘要】目的:探讨细胞因子在心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法:查阅近十年国内外相关文献,并对文献进行分析、综述.结果:细胞因子在心肌缺血再灌注损伤的发生发展过程中起着重要作用,其中IL-1、IL-6、IL-8和TNF可引发和促进心肌缺血再灌注损伤,而TGFβ和IL-10对缺血再灌注损伤具有保护作用.结论:深入研究细胞因子在心肌缺血再灌注损伤中的作用有重要意义.
【总页数】4页(P58-61)
【作者】闵小芬;明亮
【作者单位】安徽医科大学药理教研室,合肥,230032;安徽医科大学药理教研室,合肥,230032
【正文语种】中文
【中图分类】R542.2
【相关文献】
1.大鼠缺血再灌注损伤肢体骨骼肌形态和组织中细胞因子变化及高压氧的干预 [J], 高博;任为;张彦;宋红;汪永强;雷燕;赵渝
2.肺缺血再灌注损伤中细胞因子的作用 [J], 王晓杨
3.酪蛋白激酶2相互作用蛋白1在心肌缺血再灌注损伤中的作用 [J], 周思远; 祖勉; 王禹
4.HMGB1在心肌缺血再灌注损伤中作用的研究进展 [J], 唐森胡
5.巨噬细胞在心肌缺血再灌注损伤中的作用 [J], 丁亚萌;袁博;杨华;耿琪琪;信栓力;常超
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TGF-β1对大鼠角膜移植后IL-6,IL-8的影响
重庆医科大学学 报 ２ ０ ０ ８年 第 ３ ３卷第 １期 （ｏ ｍａ ｏ ｈ ｎ ｑｎ ｄｃ ｌ ｉｅｓｙ２０ ． ｏ．３Ｎｏ１ Ｊ ｕ ｌ ｆ ｏ ｇ ｉｇＭｅ ｉａ Ｕｎｖ ｒｉ ０ ８ Ｖ １ ．） Ｃ ｔ ３
一
２ 一 ９
ｅ ｐｒ ｓｉ ｎ ｏ Ｌ一６ ｎ ｄ Ｌ一８ ｎ ｅ ｉ ｅ ａ ｂｌｏ ａｔｒ ｐｅ ｅｒ ｔｎ ｋ ｒ ｔｐｌ ｔ ｏ ｃ ｅ ｅ ｈ ｅ ｉ ｘ ｅ ｓｏ ｆ Ｉ ａ Ｉ ｉ ｐ ｒｐｈ ｒ ｌ ｏ ｄ ｆｅ ｎ ｔａ ｉｇ ｅ ａｏ ａ ｙ ｔ ａ ｈｉｖ ｔ ｍｍｕｎ ｉ ｉ ｔｏ ｓ ｅ ｎｈｂｉｉｎ
论 著 文章编 ０５—６６２ ８０－０９０ 号： ３３２（ ０）１ ２—４ ２ ０ ０
Ｔ Ｆ １ 对大 鼠角膜移 植 后 Ｉ一 ， 一 Ｇ一１ ３ Ｌ ６ Ｉ ８的影 响 Ｌ
杨 洋， 周善 璧
４０ １） ００６
（ 庆 医 科 大学 附属 第 一 医 院眼 科 ， 庆 重 重
【 摘
要】 的： 目 探讨转化生长因子 １１Ｔ Ｆ １１与大鼠穿透性角膜移植术后外周血中 Ｉ＿ 、 ＿ 含量的关 系。 ３ （Ｇ 一 ） ３ Ｌ６Ｉ ８ Ｌ 方法 ： 建立大 鼠
【 ｅ ｗｒｓ Ｐｎｔｔｇｋｒｏｌｔ； ｔ ｌ ｋ （ ） Ｇ —ｅ ｌ Ｋ ｙ ｏ 】 ｅｅａｎ ｅ ｔ ａ ｙＩ ｅｅ ｉ Ｉ ； Ｆ ｂｔ ｄ ｒｉ ａｐ ｓ ｎ ｒｕ ｎ Ｌ Ｔ ａ
角膜 病 是 致盲 的 主要 眼 病 之一 ， 角膜 移 植 是 治 疗 角膜盲 的唯一有 效方 法 。角膜 移 植术后 免 疫排斥 反 应 是 角 膜 移 植 失 败 的 主 要 原 因【 如 何 有 效 地 抑 ” ， 制 或 减弱 移 植排 斥 反 应是 提 高移 植 成功 率 、 长 植 延 片存 活 时 间 的根本 问 题 ， 也是 多 年来 国 内外 学 者 不
TGF-β1在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的作用
１ ４ 统计学方法 ．
计 量资 料 以均数 ±标 准差 （ ｘ±ｓ 表示 ， ）
组 间 比较采 用 ｔ 验 和 ｏ ｅｗ ｙＡ Ｏ Ａ 检 ｎ －ａ Ｖ Ｎ Ｌ检 验。应 用 Ｓ Ｓ ＰＳ １． １５统计 软件 分析 。以 Ｐ＜ ． ５为差异有统计学意义 。 ００
杉金桥 ） 照说 明 书操 作 ， Ａ 遵 Ｄ Ｂ显 色 。裱片 ， 水 ， 明 ， 脱 透 封 片 。以一抗稀释液 ２ ％血清代替一 抗作为阴性对照染色 。每
张切片在 ４ ０倍 光 镜下 选 １ ０ ０个不 同视 野计 数 免 疫 阳性 细
胞 数。
小胶 质细胞和星形细胞反应 的多种作用 ， 能将 缺血性 损伤 的 多个 环 节 联 系 起 来 。本 文 通 过 建 立 脊 髓 缺 血 模 型 ， 测 检 Ｔ Ｆ１ Ｇ 一 １的表 达变化并 通过 体 内抗 体封 闭 Ｔ Ｆ １ ３ Ｇ 一 １作用从 而 ３ 探讨 Ｔ Ｆ１ 在脊髓缺血损伤 中的作用 。 Ｇ 一１ ３
【 关键词 】 脊髓 缺血再 灌注 ；Ｇ 一 １Ｃ ６ ； Ｇ Ｔ Ｆ１ ； Ｄ ８ Ｎ Ｆ ３
Ｔ Ｆ１ Ｇ －１是一类多功能 的细胞 生长 因子 ， Ｇ 一 １的作用 ３ Ｔ Ｆ１ ３ 涉及细胞生长 、 分化 、 性反 应和 组织 修复 … 。在 缺 血性脑 炎
损伤 中 Ｔ Ｆ 有 抗氧化 、 止细胞 凋亡 、 节炎性 反应 、 节 ＧＩ ３ 阻 调 调
（ ００ ） Ｐ＜ ．５ 。抗体封 闭后 ， Ｇ ６ｈＮ Ｆ蛋 白的表达开始增加 ， 后
上 升缓慢 。
巨噬细胞主要位 于损 伤区 、 中央 灰质 区和坏死后 形成 的
甲醛的 ０ １ｍ ］Ｌ磷 酸缓冲液 。取 出脊髓置入 上述固定液后 ． ｏ ／ 固定 ， 梯度蔗糖浸泡至沉底 。用恒冷箱切 片机将 脊髓做 连续
IL-10抑制TGF-β1诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及表型转化
IL-10抑制TGF-β1诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及表型转化郝燕捷;陈莹;薛林;韩晓宁;丁文惠【摘要】目的：研究白细胞介素10（IL-10）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（CFBs）增殖、向肌样成纤维细胞（MyoFbs）转化的影响及其作用通路。
方法原代培养SD乳鼠CFBs，应用第2～4代，分为对照组、IL-10刺激组、TGF-β1刺激组、IL-10与TGF-β1共同刺激组（ IL-10预处理后加入TGF-β1）。
每个刺激组设3个复孔，所有实验重复3次。
四氮唑盐比色法检测细胞增殖，免疫细胞化学染色检测增殖细胞核抗原表达，免疫细胞化学染色及Western blot检测α-平滑肌细胞肌动蛋白（α-SMA）和ERK1／2、P38激酶磷酸化蛋白的表达。
结果与对照组比较，TGF-β1（10μg／L）能显著刺激 CFBs 增殖及表型转化（α-SMA 表达）（P ＜0.01），用 IL-10（10、50和100μg／L）预处理后，TGF-β1诱导的CFBs增殖及α-SMA表达呈剂量依赖性被显著抑制（ P＜0.01）。
TGF-β1能显著刺激CFBs内ERK1／2和P38磷酸化水平（P＜0.01），而IL-10（100μg／L）预处理后， TGF-β1诱导的ERK1／2和P38激酶磷酸化被明显抑制（ ERK1／2：P＜0.05；P38：P＜0.01）。
结论 IL-10可能通过抑制ERK1／2和P38激酶活化抑制了TGF-β1诱导的CFBs增殖及向MyoFbs转化。
%Objective To examine the effects of IL-10 on cardiac fibroblasts ( CFBs) proliferation and phenotype transformation to myofibroblasts (MyoFbs) induced by transforming growth factor-β1 (TGF-β1);and to investigate the regulating pathways .Methods Cardiac fibroblasts were isolated from cardiac ventricles of neonatal SD rats . The passage 2~4 were used and divided into the following groups fortreatment:1) control group, 2) IL-10 reac-tion group, 3) TGF-β1 reaction group, and 4) IL-10 plus TGF-β1 reaction group (TGF-β1 treatment followed with IL-10 pretreatment ) .Cells proliferation was assessed by MTT assay and immunocytochemistry staining for prolifera-ting cell nuclear antigen (PCNA);the phenotype transformation into MyoFbs was assessed by immunocytochemistry of α-smooth muscle actin (α-SMA);extracellular signal related kinase ( ERK1/2) and P38 kinase pathways were assessed by western-blot.Results TGF-β1 (10 μg/L) treatment boosted the proliferation and the expression ofα-SMA significantly (P<0.01), while IL-10 (10, 50 or 100 μg/L) plus TGF-β1 co-treatment induced lower cell proliferation and expression of α-SMA than treating with TGF-β1 alone ( P<0.05 ) , with the inhibitory effect of IL-10 being concentration dependent .TGF-β1 could significantly stimulate the ERK 1/2 and P38 kinase phospho-rylation( P<0.01 ) , however IL-10 (100 μg/L) plus TGF-β1 co-treatment failed to down-regulated the phospho-rylation of ERK1/2 and P38 kinase compared with TGF-β1 alone ( ERK1/2:P<0.05;P38:P<0.01 ) .Conclu-sions IL-10 can attenuate TGF-β1-induced CFBs proliferation and phenotype transformation to MyoFbs .The in-hibitory effects may explained by a mechanism of inhibiting the activation of ERK 1/2 and P38 kinase .【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】6页(P1182-1187)【关键词】白细胞介素-10;心脏成纤维细胞;转化生长因子-β1;细胞外信号调节激酶;P38激酶【作者】郝燕捷;陈莹;薛林;韩晓宁;丁文惠【作者单位】北京大学第一医院心内科，北京100034; 北京大学第一医院风湿免疫科，北京100034;北京大学第一医院心内科，北京100034;北京大学第一医院心内科，北京100034;北京大学第一医院心内科，北京100034;北京大学第一医院心内科，北京100034【正文语种】中文【中图分类】R541.1在急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）后的心室重构发展过程中，心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFBs）增殖、向肌样成纤维细胞（myofibroblasts，MyoFbs）转化、分泌大量细胞外基质是重要的病理机制之一。
转化生长因子β1抗体对大鼠肾缺血—再灌注时SMAD7表达的影响
转化生长因子β1抗体对大鼠肾缺血—再灌注时SMAD7表达的影响作者：徐俊南王荣荣李志涛王征龚裕强孙来芳陈大庆来源：《中华急诊医学杂志》2012年第11期转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1， TGF-β1）是一类多功能的细胞因子，由多种组织细胞合成，调控着细胞周期，影响细胞的增殖、分化、黏附、转移和凋亡，与人类多种疾病发生发展密切相关[1]。
研究表明在大鼠肾缺血-再灌注时TGF-β1表达呈增加趋势[2]。
与配体结合后，TGF-β家族受体激活了一个由Smad蛋白家族介导的独特的信号转导通路，Smad7是TGF-β/Smads蛋白信号通路中最重要的内源性抑制因子[3]。
笔者采用注射TGF-β1抗体的方法来中和体内表达增多的TGF-β1，观察肾功能损害变化以及此通路上重要抑制因子Smad7的表达变化。
1 材料与方法1.1 实验材料健康雄性SD大鼠80只，月龄6个月，体质量220～250 g，一级动物，由温州医学院实验动物中心提供。
Smad7抗体、SABC免疫组化试剂盒由武汉博士德生物试剂公司提供，TGF-β1抗体由北京博奥申生物试剂公司提供，DAB显色液北京中杉金桥试剂公司提供。
1.2 实验方法1.2.1 动物分组及方法雄性SD大鼠80只，随机（随机数字法）分为肾缺血-再灌注损伤模型组（A组）和TGF-β1抗体治疗组（B组），每组数量40只，组内按再灌注时间不同又分为再灌注0、4、12、24 h 4个小组，每组10只，分别在再灌注到0、4、12、24 h时取材。
A 组、B组均建立肾缺血-再灌注模型，再灌注达相应时间点时，从各小组大鼠腹主动脉取血2 ml备测血尿素氮（BUN）和血肌酐（Cr），然后迅速切除左肾，肾组织用10%甲醛固定，制备石蜡切片，作HE染色观察病理变化以及作免疫组化分析肾组织Smad7表达情况（方差分析）。
采用全自动生化分析仪、免疫组化、HE染色，分别测定或观察血肌酐、尿素氮、肾组织Smad7表达、肾组织病理改变。
基于TGF-β1
㊃心血管专栏㊃[收稿日期]2022-11-11[基金项目]河北省自然科学基金精准医学联合基金培育项目(H 2021206141);河北医科大学大学生创新性实验项目(U S I P 2022119)[作者简介]张诺琪(2001-),女,河北张家口人,河北医科大学基础医学院学生,从事临床医学学习㊂*通信作者㊂E -m a i l :w a n g y a l i n g81@163.c o m 基于T G F -β1/S m a d s 信号通路的m i R N A 在心肌纤维化的研究进展张诺琪1,于国慧1(综述),王亚玲2*(审校)(1.河北医科大学基础医学院2020级临床医学3大班,河北石家庄050017;2.河北医科大学第二医院心内科,河北石家庄050000) [摘要] 心肌纤维化(m y o c a r d i a l f i b r o s i s ,M F )是多种心血管疾病终末阶段的主要病理表现,转化生长因子β1(t r a n s f o r m i n gg r o w t h f a c t o r -β1,T G F -β1)/S m a d s (d r o s o p h i l am o t h e r s a g a i n s t d e c a p e n t a p l e g i c )信号通路的异常激活广泛参与纤维化疾病的发生,是导致心肌纤维化的关键通路;微小R N A (m i c r o R N A ,m i R N A )是一类内源性小分子非编码R N A ,具备调控功能,主要在转录后水平调控基因的表达㊂现有研究已表明,m i R N A 是影响T G F -β1/S m a d s 信号转导的重要调节因子,深入阐明T G F -β1/S m a d s 信号通路相关的m i R N A 在心肌纤维化中的调控机制,可以为预防㊁诊断及治疗心肌纤维化提供新的研究思路㊂[关键词] 心内膜心肌纤维化症;微R N A s ;T G F -β1/S m a d s 信号通路 d o i :10.3969/j .i s s n .1007-3205.2024.01.017 [中图分类号] R 542.23 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2024)01-0089-05心肌纤维化(m yo c a r d i a l f i b r o s i s ,M F )是多种心血管系统疾病发展到终末阶段的常见病理改变,其特征为心脏成纤维细胞异常激活分化为肌成纤维细胞㊁细胞外基质合成与降解间的平衡被打破㊁胶原纤维沉积过多且排列紊乱㊁各种胶原成分比例失调等,它不仅可以引起心脏舒缩功能显著减弱或不协调,还可能造成心脏发生结构重构和电重构,心脏功能减退加剧,最终诱导心律失常㊁心力衰竭等发生,是人类生命健康面临的巨大威胁之一,M F 的生物标志物及相关治疗靶点也是当下研究的热点之一[1]㊂M F 的出现可能与多种信号通路的异常激活密切相关,其中转化生长因子β1(t r a n s f o r m i n gg r o w t h f a c t o r -β1,T G F -β1)/S m a d s (d r o s o p h i l a m o t h e r s a g a i n s td e c a p e n t a p l e gi c )通路被认为是影响M F 的经典通路,其激活可以触发纤维化相关基因的过表达[2]㊂微小R N A (m i c r o R N A ,m i R N A )是一种主要在转录后水平调控基因表达的单链小分子非编码R N A ,普遍参与机体的病理及生理过程㊂近年来许多研究成果表明,m i R N A 广泛地参与了M F的发生与发展过程[3]㊂由于m i R N A 的功能及机制复杂,全面深入了解m i R N A 的作用非常必要,本文重点关注M F 发生发展过程中T G F -β1/S m a d s 信号通路相关m i R N A 的作用机制,并就研究现状及最新进展作简要综述㊂1 T G F -β1/S m a d s 信号通路T G F -β1是转化生长因子β(t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r -β,T G F -β)三种亚型之一,它在M F 发展中发挥着最重要的作用㊂S m a d s 蛋白位于T G F -β家族的下游,是T G F -β家族的直接作用底物,参与T G F -β1信号转导的S m a d s 蛋白有S m a d 2/3/4/7㊂T G F -β1/S m a d s 信号转导途径为:T G F -β1活化后首先识别并结合细胞表面的转化生长因子β受体(t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r -βr e c e p t o r ,T G F βR )Ⅱ,然后结合T G F βRⅠ的丝氨酸/苏氨酸激酶区并使其发生磷酸化,T G F -β1㊁T G F βRⅡ㊁T G F βRⅠ形成稳定的异源三聚体,异源三聚体募集并磷酸化下游的S m a d 2/3将信号传导至细胞质内,磷酸化的S m a d 2/3与S m a d 4在胞质结合形成稳定复合物,并转移到细胞核,在核内调控特定基因的转录㊂T G F βR Ⅲ㊁S m a d 7是T G F -β1介导S m a d s 通路的负向调控因子,能够减弱信号转导强度[4]㊂T G F -β1/S m a d s 通路对心脏的生理及病理过程具有调节作用,在M F 进程中的作用至关重要㊂㊃98㊃第45卷第1期2024年1月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .45 N o .1J a n . 2024T G F-β1/S m a d s信号转导途径激活,诱导心肌细胞凋亡,激活成纤维细胞并促使其转化为肌成纤维细胞,内皮细胞表型及功能改变转分化为间质细胞,同时刺激细胞上调纤维化相关基因表达,基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s,MM P s)表达降低,其抑制剂(t i s s u e i n h i b i t o r o f m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e s,T I M P)呈相反趋势表达,细胞外基质异常增加,胶原过度沉积且成分比例失调[5]㊂最新研究发现扩心方可能通过抑制T G F-β1/S m a d2信号通路改善扩张型心肌病大鼠M F[6],基于T G F-β1/S m a d s信号通路逆转M F可能成为未来研究的重要方向㊂2m i R N Am i R N A是一类单链小分子非编码R N A,由内源基因编码,长度约22个核苷酸㊂多重因素影响下,R N A聚合酶Ⅱ作用于细胞核内编码m i R N A的基因,使其转录形成原始m i R N A(p r i-m i R N A),接着经R N a s eⅢ酶D r o s h a剪切,形成前体m i R N A (p r e-m i R N A),在核孔转运蛋白E x p o r t i n5的识别与转运作用下,p r e-m i R N A通过核孔复合体进入细胞质,经R N a s eⅢ酶D i s e r剪切形成长约22b p的双链m i R N A[7]㊂双链m i R N A的引导链参与了R N A 诱导沉默复合体(R N A-i n d u c e d s i l e n c i n g c o m p l e x, R I S C)的形成,与m R N A的3'U T R特定序列依照碱基互补配对原则相结合,在转录后水平抑制靶标m R N A翻译或者影响m R N A的稳定性,从而对基因表达进行负向调节,随从链则立即降解,这就是m i R N A在生物体内的经典作用机制,新的研究发现随从链也可能作为功能链发挥重要作用㊂此外, m i R N A还存在多种非经典作用机制,如结合其他功能蛋白㊁直接参与基因的转录过程㊁促进蛋白质表达㊁对线粒体相关基因m R N A进行靶向调控等[8]㊂近年来越来越多的研究表明,m i R N A在M F病理过程中发挥着不可忽视的调控作用,有望成为改善M F的新靶点[3]㊂3T G F-β1/S m a d s信号通路相关的m i R N A在心肌纤维化中的作用多种m i R N A通过直接或间接途径参与T G F-β1/S m a d s信号通路,对心肌纤维化的发生发展具有重要调控意义(图1)㊂图1m i R N A在T G F-β1/S m a d s信号通路介导的心肌纤维化中的作用正常箭头表示激活作用及核转位;T型箭头表示抑制作用3.1 m i R N A-21 在体外培养的心肌成纤维细胞中,过表达m i R N A-21能明显提高成纤维细胞的活力,且T G F-β1表达量大幅提升[9];用T G F-β1处理心肌成纤维细胞后,m i R N A-21表达明显增多[10]㊂m i R N A-21与T G F-β1之间存在相互促进的循环,这可能是加快M F进程的重要原因㊂将m i R N A-21模拟物转染至T G F-β1处理的心脏成纤维细胞,促进了T G F-β1对S m a d7的抑制作用,S m a d2和S m a d3的磷酸化水平进一步增加[11]㊂用血管紧张素Ⅱ(a n g i o t e n s i nⅡ,A n g-Ⅱ)处理m i R N A-21敲除小鼠的心脏成纤维细胞,T G F-β和p-S m a d2/3的表达减少,抑制m i R N A-21能够减弱A n g-Ⅱ诱导的T G F-β/S m a d s信号转导[12]㊂孟华等[13]通过数据库预测发现,m i R N A-21-5p可与S m a d7的3'U T R区结合,在调控S m a d7表达方面具有潜在的功能;进一步检测表明,m i R N A-21-5p过表达组S m a d7的m R N A及蛋白质含量均显著下调㊂朱参战等[9]利用双荧光素酶报告基因检测证实,m i R N A-21-5p对S m a d7具有靶向调控作用,m i R N A-21-5p通过靶向抑制心肌成纤维细胞S m a d7的表达而促进胶原沉积和心脏纤维化过程;此外,m i R N A-21-5p对心肌成纤维细胞的促纤维化作用可以因为S m a d7的过表达而发生逆转㊂通过下调T G F-β1/S m a d s信号通路负调节因子S m a d7蛋白的表达进而实现对该通路的激活,提高心脏成纤维细胞的活力,促进其增殖和迁移,最终导致M F,这可能是m i R N A-21-5p 发挥作用的重要方式之一㊂m i R N A-21还能通过下调T G F-β1信号的负调控因子WW结构域蛋白1使T G F-β1/S m a d2信号通路激活,从而显著提高了心脏成纤维细胞的增殖能力[14]㊂上述研究一致表明,m i R N A-21在提高心肌成纤维细胞的增殖和迁移等能力㊁推动M F发生发展过程中发挥重要作用,㊃09㊃河北医科大学学报第45卷第1期激活T G F-β1/S m a d s信号通路可能是m i R N A-21促使成纤维细胞发挥生物学作用的重要靶途径㊂m i R N A-21也可作用于心肌细胞参与M F,但目前仍存在争议㊂在缺氧处理不同时间的心肌细胞中,m i R N A-21㊁T G F-β1㊁S m a d3表达均增高,且m i R N A-21与T G F-β1/S m a d3存在显著正相关;在缺氧心肌细胞中过表达m i R N A-21后,T G F-β1和S m a d3表达明显升高,抑制m i R N A-21表达得到相反的结果[15]㊂由这一结果推测m i R N A-21可能通过激活T G F-β1/S m a d3通路诱导心肌细胞凋亡,刺激心脏进行瘢痕修复,生成大量胶原纤维,同时高表达的T G F-β1也可通过旁分泌激活心脏成纤维细胞,与前述m i R N A-21的促纤维化作用相一致㊂但史东东等[16]研究表明,m i R N A-21-5p通过靶向下调T G F-β1的表达水平,增加心肌细胞存活率并抑制其凋亡,具有保护心脏的作用,袁媛等[17]㊁范丽等[18]的研究也认为m i R N A-21能够改善心肌细胞的损伤㊂动物实验同样表明,m i R N A-21具有调控M F 的作用㊂m i R N A-21抑制剂能够有效减轻缺血/再灌注损伤后的心脏重塑[19]㊂使用柯萨奇病毒B3诱导小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化模型,较模型组而言,m i R N A-21抑制剂组T G F-β1蛋白的心脏表达量明显降低,S m a d7蛋白表达量显著升高,M F 程度降低,心脏功能得到有效改善[20]㊂结扎小鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,向小鼠心肌注射m i R N A-21抑制剂,S m a d2和S m a d3的磷酸化水平下降,改善了心肌梗死后的纤维化[11]㊂m i R N A-21与T G F-β1/S m a d s通路之间存在复杂的交互作用,上述研究有助于深入理解M F的发病机制,并为抗纤维化的临床治疗提供理论指导作用㊂但目前仍未完全阐明M F过程中m i R N A-21发挥作用的生物学机制,还需要进一步研究证明㊂3.2 m i R N A-195大鼠心肌梗死模型中,m i R N A-195㊁T G F-β1㊁S m a d3表达水平显著升高,S m a d7表达降低;m i R N A-195拮抗剂处理后,T G F-β1/ S m a d s信号通路被抑制,纤维化程度有所改善[21]㊂m i R N A-195过表达的原代心肌细胞的培养基中, T G F-β1浓度显著升高,用该培养基处理成纤维细胞后,其S m a d2/3蛋白磷酸化水平明显增加,同时纤维化相关基因表达上调[22]㊂由此推测m i R N A-195的作用机制之一可能为:m i R N A-195促进心肌细胞分泌T G F-β1,T G F-β1作用于成纤维细胞激活T G F-β1/S m a d s信号通路发挥一系列生物学效应,进而调控大鼠心肌梗死后M F的发生发展㊂D i n g 等[23]通过体内体外实验证实,抑制m i R N A-195-5p 可以抑制内皮间质转化,能够有效减轻糖尿病性心肌病大鼠的M F程度,其机制可能与m i R N A-195-5p对s m a d7的靶向作用有关;在高糖处理的内皮细胞中过表达m i R N A-195-5p的同时引入T G F-β1/ S m a d s通路的抑制剂,内皮间质转化被抑制,反向证明m i R N A-195-5p通过T G F-β1/S m a d s信号发挥对M F的调节作用㊂m i R N A-195可以通过多种途径调节M F的发生,T G F-β1/S m a d s信号通路的激活可能是它发挥作用的机制之一,更多机制还需更深入的研究㊂3.3 m i R N A-199为使T G F-β1/S m a d3信号通路处于激活状态,用A n g-Ⅱ刺激分离培养的小鼠心肌成纤维细胞,发现m i R N A-199a转录本㊁m i R N A-199a-3p㊁-5p的表达均上调;S m a d3抑制剂处理后, m i R N A-199a转录本㊁m i R N A-199a-3p㊁-5p表达均显著降低[24]㊂将m i R N A-199a-3p模拟物瞬时转染至体外培养的心肌成纤维细胞,细胞纤维化相关基因m R N A和蛋白质均呈现高表达状态,作用机制可能为m i R N A-199a-3p通过靶向抑制S m a d1表达,提高S m a d3磷酸化水平,发挥促纤维化作用[25]㊂过表达m i R N A-199a-5p也能发挥同样的作用,它可以靶向抑制沉默信息调节因子1表达,使其无法发挥去乙酰化功能,加剧S m a d3乙酰化程度,同时上调S m a d3磷酸化水平,增强T G F-β1/S m a d3信号,促进M F发展[24]㊂m i R N A-199a-3p,-5p可以加强T G F-β1/S m a d s信号转导,从而刺激胶原纤维形成,而T G F-β1/S m a d s信号通路的激活又可以提高m i R N A-199a-3p,-5p的表达,形成正反馈循环,进一步加重了M F程度㊂在高血压大鼠心脏重构过程中,m i R N A-199b-5p㊁T G F-β1㊁S m a d3表达量显著升高,用药物贝那普利干预后,表达量下降,心脏重构程度减轻,提示m i R N A-199b-5p与T G F-β1/S m a d s通路之间的潜在作用[26]㊂研究人员证实,m i R N A-199b-5p在心肌成纤维细胞的细胞核中高度表达,核m i R N A-199b-5p可以在体内外激活细胞周期依赖蛋白9表达,而细胞周期依赖蛋白9诱导S m a d3接头的磷酸化,这对于T G F-β1/S m a d s信号的完全激活是不可或缺的[27]㊂所以,在心脏重塑过程中T G F-β1/ S m a d3信号转导很可能介导了m i R N A-199b-5p诱导纤维化相关基因表达的作用㊂目前就m i R N A-199在M F发生发展㊁诊断治疗的关系的研究仍然不完善,还需要进一步的研究㊂3.4m i R N A-23 心房颤动患者右心耳组织中, m i R N A-23和T G F-β1表达水平均大幅提高,且二者表达呈正相关[28],对m i R N A-23进行基因干扰能㊃19㊃河北医科大学学报第45卷第1期够降低T G F-β的表达,显著改善风湿性心脏病大鼠M F的严重程度[29]㊂另一研究发现,小鼠脓毒症模型中,心肌组织m i R N A-23b表达水平上调,T G F-β1/S m a d2/3信号通路激活,加入m i R N A-23b抑制剂阻止了脓毒症诱导的T G F-β1和S m a d2/3的高表达,作用机制可能为m i R N A-23b靶向抑制T G F-β1/S m a d2/3信号通路的转录抑制因子来促进T G F-β1/S m a d2/3信号通路的激活,从而介导脓毒症晚期心脏纤维化重塑[30]㊂杨真祯等[31]发现,在分离培养的人心房肌成纤维细胞中,成纤维细胞的活力㊁增殖能力㊁迁移能力不因为m i R N A-23b-3p 的过表达而发生显著变化,但会导致纤维化相关基因的表达大幅上调;m i R N A-23b-3p可与T G F-βR Ⅲ特定位点靶向结合抑制其表达,无论是沉默T G FβRⅢ还是过表达m i R N A-23b-3p均能使纤维化相关蛋白表达水平明显升高以及S m a d3磷酸化水平大幅上调,提示m i R N A-23b-3p通过靶向抑制T G F-β1/S m a d s信号通路的负调控因子T G F-βRⅢ,从而激活该通路,促进胶原沉积和心脏纤维化过程㊂有关m i R N A-23与M F的研究尚不全面, m i R N A-23在M F的发生发展中具体发挥的作用及其重要性还有待进一步的探讨㊂3.5其他m i R N A m i R N A-125b在心肌成纤维细胞过表达后,与纤维化有关的基因表达水平显著升高,T G F-β1/S m a d s通路相关蛋白T G F-β1的表达水平及S m a d2/S m a d3蛋白磷酸化水平均有明显上调,这些结果提示,m i R N A-125b对心肌成纤维细胞的一系列调控作用可能是通过T G F-β1/S m a d s通路实现的[32]㊂m i R N A-10a过表达可促进心房组织T G F-β1表达㊁降低S m a d7表达从而激活T G F-β1/ S m a d s信号通路,提升了心脏成纤维细胞的增殖能力并加速心房颤动诱导的心脏纤维化[33]㊂制备急性心肌梗死大鼠模型并上调m i R N A-208a在模型大鼠体内的表达,发现T G F-β1㊁S m a d2㊁S m a d3表达异常升高,沉默m i R N A-208a得到相反结果,提示m i R N A-208a对T G F-β1/S m a d s通路的调节作用[34]㊂在小鼠心肌成纤维细胞转染m i R N A-140-5p 模拟物后,S m a d s依赖的T G F-β1信号通路相关蛋白T G FβRⅠ明显下调㊁S m a d2磷酸化程度降低㊁S m a d7的表达明显增加,m i R N A-140-5p能够靶向作用于T G FβRⅠ抑制T G F-β1/S m a d s信号降低纤维化程度[35]㊂在缺氧条件下培养的心肌成纤维细胞中,m i R N A-130a过表达能够下调T G FβRⅠ表达㊁减弱S m a d3磷酸化程度,且T G FβRⅠ是m i R N A-130a的靶基因,m i R N A-130a靶向作用于T G FβRⅠ抑制T G F-β1/S m a d s信号转导,阻碍了成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,从而发挥抗纤维化特性[36]㊂m i R N A-126能够使心肌梗死大鼠T G F-β1㊁S m a d2和S m a d3相对表达量显著降低,阻断T G F-β1/S m a d s信号的促纤维化作用[37]㊂大鼠心梗模型显示,m i R N A-1908过表达后T G F-β1和S m a d2/3的表达被抑制,从而显著改善了心脏功能㊁降低M F程度,可能机制为m i R N A-1908通过靶向T G F-β1抑制T G F-β1/S m a d s通路的激活改善M F[38]㊂4展望M F是多种心血管疾病发展到一定阶段的共同病理变化,发病机制纷繁复杂,目前对其了解尚不全面,缺乏有效的治疗手段与措施㊂关于m i R N A的研究已在M F发生机制等方面获得了重大突破,从表观遗传学角度丰富了M F的发病机制,有可能是疾病的生物学标志物和潜在治疗靶点㊂而T G F-β1/S m a d s通路被认为是影响M F的经典信号通路,广泛参与了M F发展过程㊂m i R N A是影响T G F-β1/S m a d s信号转导的重要调节因子,两者之间存在着精细复杂的调节,但作用机制尚未完全明确,部分存在争议,在今后的研究中需要更深入的探索㊂多项动物实验表明,调节T G F-β1/S m a d s信号通路相关m i R N A的表达能够在一定程度上改善心肌纤维化,m i R N A很可能成为治疗心肌纤维化的干预靶点,但目前缺乏临床证据的支持㊂尽管如此,这些发现仍为M F的早期诊断㊁精准治疗和良好预后指明新的道路,利用m i R N A预测疾病,通过调控m i R N A进而调控T G F-β1/S m a d s通路实现有效抑制M F的发生发展,从而改善患者预后㊁提高患者生命质量,这将是未来心血管药物研发的一个重要的发展方向㊂有理由相信随着研究的深入和技术的发展,M F的治疗有望实现开创性突破㊂[参考文献][1] T r a v e r s J G,T h a r p C A,R u b i n o M,e t a l.T h e r a p e u t i c t a r g e t sf o rc a r d i a cf i b r o s i s:f r o m o l ds c h o o l t on e x t-g e n[J].JC l i nI n v e s t,2022,132(5):e148554.[2]杨萍芬,牛艳芬.T G F-β1/S m a 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BMP-7和TGF—β1在大鼠肾缺血再灌注损伤后的表达及相关性研究
Ｔ ｅＥ ｐ ｅ ｓ０ ｎ ｅａ ｉｎ ｈｐ０ ＭＰ ７ａ ｄＴ Ｆ—３ ｌ ｘ ｒ ｓ ｉｎａ ｄＲ ｌ．０ ｓ ｉ ｆ ｈ ｔ Ｂ 一 ｎ Ｇ Ｉ１ｉ ｝ ｎ Ｉｉｎｔ 【ｄ ｅ ０ｌ 、 ｇＩｃ ｅ ａ Ｒｅ ｅ’ ｉｎＩ． ｙｉ Ｒａ ｌ ｊ ｕ ｎ
注损伤 模型 ，随机分 为实验组 和假手 术组 ，采 用免疫 组化 （Ａ ｃ法 ）检测各 组大 鼠左肾组织 中 Ｂ Ｐ ７与 ＳＢ Ｍ一 Ｔ Ｆ 蛋白的表达水平 ，分析两种 因子表达的变化趋势 ，进行 比较和相关性分析．结果 Ｇ —Ｂｌ
相 比，再灌 注 ２ ２ ４ｈ 的肾组织 中 Ｂ Ｐ一７蛋 白的表达 随着缺血再灌注损伤的加重而逐渐减弱 ，再灌注 、１ 、２ 后 Ｍ 损伤 ４ 、７ ８ ２ ｈ后表达逐渐恢复 ；再灌 注 ２ ２ ４ｈ后的肾组织 中 Ｔ Ｆ Ｂ１ 、ｌ 、２ Ｇ — 蛋白的表达随着损伤 的逐渐加重而 增强 ，再灌注损伤 ４ 、７ ８ ２ ｈ后表达逐渐下降 ；Ｂ ＭＰ一 ７与 Ｔ Ｆ ｐ１ Ｇ — 蛋白的表达在统计学上有明显 的负相关性． 结论 在 肾脏缺血再灌注损伤后 Ｂ 一７随着损伤 的加重表达逐渐减弱 ，而 Ｔ Ｆ 却随着损伤 的加重表达增 ＭＰ Ｇ —Ｂ１
河南 郑 州 ４ ０ ∞） ５０
［ 摘要 ］ Ｈ的 探讨 大 鼠肾脏缺 血再 灌 注损伤 后骨 形态 发生 蛋 白 一 （ ＭＰ ７ ７ Ｂ 一 ）和转 化 生长 因子 一 Ｂｌ 建立大 鼠。 肾脏缺血再灌 实验组 与假手术组
（Ｇ 一 ）表达 的发生机制和内在联系 ，为防治缺血再灌注损伤提供理论基础．方法 Ｔ Ｆ ８１
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我们 通过 建立 大 鼠小 肠 ＩＲ损 伤 模 型 ， ／ 经肠 系膜 上
动脉 （ ＭＡ） 予 外 源 性 Ｔ Ｆ １ ， 察 小 肠 黏 膜 形 Ｓ 给 Ｇ ．１观 ３
态学 改变 、 菌易 位 ， 析 研 究 Ｔ Ｆ１ 细 分 Ｇ ．１对肠 黏 膜 Ｉ ３ ／ Ｒ损 伤 的保 护作用 。
３郑 州大 学第二 附属 医院 ）
［ 摘要 ］ 选择 ３ ０只 Ｓ Ｄ大 鼠 ， 随机分 成三组 ， 假手术组 （ Ａ组 ） 对 照组 （ 、 Ｂ组 ） 和实验组 （ Ｃ组 ） ｌ 各 ０只。Ｂ组 夹闭肠系膜上动脉 （ ＭＡ）０ｍ ｎ 再灌注 １０ｍ ｎ 缺血前 １ ｉ Ｓ ６ ｉ ， ２ ｉ， ０ｍ ｎ经 Ｓ ＭＡ注入生理盐 水 ０ ５ｍ 。Ｃ组 以 Ｔ Ｆ１ 代 ． ｌ Ｇ 一１ ３ 替生 理盐水。Ａ组单纯分离肠 Ｓ ＭＡ， 不做阻断 。采用 Ｈ Ｅ染 色及 ｃｉ ｈｕ评分 法判 断小肠 黏膜形 态学 损伤 程度 ， 检测 门静脉血浆 中 Ｄ 乳酸水平及大肠杆 菌易位情况 。发现 Ｂ组与 Ａ组相 比 ， ． 肠黏膜组 织损伤严重 ，ｈｕ ｃｉ 评分显 著升高 ， 门静 脉血 Ｄ 乳酸水平 和大肠杆 菌易位率显著升高 ； 一 Ｃ组与 Ｂ组相 比 ， 黏膜组 织损 伤较 轻 ，ｈｕ评 分显 著降低 ， 肠 ｃｉ 门
１ 资料 与方 法
于南 京 建成 生物 公 司 ， 改 良的 酶学 分 光 光 度 法 检 用 测 血 浆 Ｄ一 酸水 平 。 乳 １５ 统 计 学 方 法 ． 应 用 ＳＳ １０统计 软 件 。计 Ｐ Ｓ１ ． 数资 料 用 阳性 率 表 示 ， Ｆｓｅ ’ 确 概 率 检 验 。 用 ｉ ｒ ｓ精 ｈ 计 量 资料 用 －ｓ ４ 表示 ， － 采用 方差 分 析 。相 关 分析 采 用 Ｓｅｒ ａ 关 分 析 。病 理 学 形 态 评 分 比较 采 用 ｐａｍ ｎ相
静 脉血 Ｄ 乳酸水平和大肠杆菌 易位率显著降低 ； 一 门静 脉血浆 Ｄ 乳 酸水平 与肠 黏膜损 伤病 理评分 有 明显 的正相关 一 性 。认 为肠 缺血再灌注可引起肠黏膜屏 障形 态和功能 的损伤 ， 细菌及其 代谢产 物易位增 加 ； Ｇ ．１可 以显著减 使 Ｔ ＦＢ 轻损 伤程 度 ； Ｄ 乳 酸水平可以 间接反 映肠黏 膜屏障的通透性 ， 血 － 进而评价肠 黏膜屏障 的损伤程 度。
山东 医药 ２ ０ ０ ９年 第 ４ ９卷第 ｌ ６期
Ｔ ＦＩ Ｇ — 大 鼠肠 黏膜 缺 血 再 灌 注损 伤 的 ３ １对 保 护作 用
孙培 春 ， 吴万 庆 吴 ， 刚 韩 ， 斌
（ １华 中科技大学同济医学院附属 同济医院， 湖北武汉 ４ ０３ ； ３００ ２郑州大学第五附属医院；
循 环 。 ｅ ｅ 引 物 ：５一 Ｇ Ａ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ａ Ｇ Ｇ ａＡ Ａ Ｇ Ｔ Ａ ｒ Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ ． Ｇ Ｃ３ ， Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ＇ｑ Ｃ Ｇ 一 ， 增 片 Ａ 一 ５一Ｃ Ｇ Ｃ Ａ Ｃ Ｉ ＴＣ Ａ Ａ ３ 扩 Ｃ 段 为 ４０ｂ 。 ５ ｐ １４ 门静脉 血 Ｄ哥Ｌ ． 酸检 测 Ｄ哥Ｌ 检 测试 剂 盒 购 酸
［ 关键词 ］ 转化 生长因子 Ｂ； 再灌 注损伤 ； 肠黏膜 ； 黏膜屏 障 ； 细菌易 位
［ 中图分类号 ］ Ｒ ０ ６２
［ 文献标 识码 ］ Ｂ
［ 文章 编号 ］ １０ －６ Ｘ（ ０ ９ １ － ３ －２ ０ ２２６ ２ ０ ）６０ ５ ０ ０
缺血再灌注 （／ 损伤是严重创 伤、 ＩＲ） 休克后 救 治过 程 中可 能发 生 的一个 共 同 的病理 生理 阶段 。肠
黏膜 屏 障 的破 坏 引起 细 菌 和 内毒 素 易 位 ， 导全 身 诱 炎症 反应 综 合 征 （ ＩＳ 及 多 器 官 功 能 障 碍 综 合 征 ＳＲ ）
（ Ｄ ） 发 生 … 。２ ０ ＭＯ Ｓ 的 ０ ７年 １ ０月 ～２ ０ ０ ８年 ３月 ，
１３ 门静 脉 血大 肠 杆 菌 检 测 门静 脉 血 浆 细 菌染 ． 色体 Ｄ Ａ提 取 参 照 试 剂 盒 说 明 书 （ｉ ｇｎ生 物 技 Ｎ ｔ ｎｅ ａ 术 有 限公 司 ） Ｐ Ｒ体 系按 照试 剂盒 说 明 书 （ ａ ａ ａ ，Ｃ ＴＫＲ ＨＳＰ Ｒｋｔ 。以 Ｅｃｌ０ ５ Ｃ ｉ ） ｏ １７染 色体 编 码 紧 密 黏 附 ｉ 损 伤 的 ｅｅ ａＡ基 因设 计 引 物 ， 火 温 度 ５ 退 ２℃ ，６个 ３
秩 和 检验 。以 仅＝ ．５为检 验水 准 。 ００
２ 结果
１１ 动物模型 选择 健康清洁 Ｓ ． Ｄ大 鼠 ３ Ｏ只， 体
重 ２０～ ２ ， ７ ３０ｇ 由河 南 省实验 动 物 中心 提供 。ｓ Ｄ大 鼠随机 分为 ３组 ， 手 术 组 （ 组 ） 对 照 组 （ 假 Ａ 、 Ｂ组 ） 和实验 组 （ ｃ组 ） １ 。Ｂ组 用无 创 动 脉血 管 夹 各 ０只
夹 闭肠 系 膜 上 动 脉 （ ＭＡ） 始 部 ， 成 肠 缺 血 ６ Ｓ 起 造 ０ ｍ ｎ 然后恢 复 血 流 １０ ｍ ｎ 缺 血 前 １ ｎ用 胰 岛 ｉ， ２ ｉ， ０ ｍｉ
素微 型注 射器 通过 Ｓ ＭＡ注人 生理 盐水 ０５ｍ ， ． ｌ持续
１ｍｉ； ｎ Ｃ组 以 ０ １ ｇ ｍ Ｇ 一 １ ｐｏ ｅ ． ／ ｌ Ｆ １ （ ｒｔ ｈ公 司 ） Ｔ ３ ｅ 溶
２ １ 肠 黏膜病理 改变 ．
大体 观 ： 大 鼠肠 管红 润 ， Ａ组
液 ０５ｍ 代替生理盐水 ， 同 Ｂ组 ； ． ｌ 余 Ａ组单纯分离 Ｓ Ａ后 不做 阻 断 ， 同 Ｂ组 。 Ｍ 余
１２ 病 理 学 观 察 ． 再 灌 注 １０ｍｎ后 观 察 肠 管 大 ２ ｉ
体 标本 情 况 ； 全 层 回肠 组 织 ， Ｅ染 色 ， 镜 下 按 取 Ｈ 光 ｃｉ ｈｕ分级 法评 价小 肠 组织 损伤 程度 ＿ 。 ２ ］