电镜实验报告

实验三
扫描电镜样品常规制备技术
目的和要求 ：掌握扫描电镜样品的常规制备方法，了解离子溅 射仪的结构和用法。 实验用品 试材:植物的根、茎、叶或动物的脏器等。 试剂:乙醇，2%戊二醛，1%四氧化饿，0.lM或0.2MpH7.2的磷酸缓 冲液，醋酸(异)戊酯，液体二氧化碳，蒸馏水 器材：离子溅射仪，实体镜或放大镜，扫描电镜样品台，抛光膏， 牙签，竹签，镊子，刀片，剪刀，青霉素小瓶，培养皿， 载玻片，脱脂棉，导电胶或胶水。 实验步骤 1.准备样品台，用抛光膏擦净样品台(尤其是台面)后再用棉签蘸 丙酮擦净台上抛光膏，晾干备用。 2.取样与清洗：取样、清洗的步骤、要求、作法及所用洗液与透 射电镜样品的处理基本相同，但所取样品体积和面积可根据观 察要求和样品情况适当增大。
3.固定与漂洗:扫描电镜样品固定处理的完整步骤是由预固定、前 定固、漂洗、后固定、漂洗五步组成。对于只观察表面形貌的 样品，可不考虑固定剂的渗透深度，所以固定时间可适当缩短; 对于低倍下观察较老植物的样品，也可省略四氧化饿后固定。 4.脱水:脱水处理与实验二相同。 5.叔丁醇干燥 6.粘贴样品：取出样品，用牙签将少量导电银胶涂到样品台上， 胶面应稍小于样品底面。用镊子轻夹样品侧面，拟观察面向上， 将样品置于己涂胶的样品台上。 7.离子溅射镀膜
实验一 样品Formvar支持膜的制备 目的和要求:了解和掌握透射电镜所用样品支持膜的制备技术及其 质量标准。 实验用品： 试剂:0.3~0.5％Formvar氯仿溶液、0.02％中性皂液、蒸馏水 器材:铜网(200目)、5Oml小烧怀、新载玻片、平皿、玻璃水槽、普 通镊子、铜网镊子，单面面刀、滤纸，白绸布。 实验步骤 1.在水槽内盛满蒸馏水，将已配好的Formvar溶液倒入小烧杯中， 另将若干新载玻片浸入装有0.02%中性皂液的载玻缸中。 2.取一载玻片，用白绸布擦净，使之光洁，然后手持载玻片一端， 插入Formvar溶液中，再垂直匀速取出，在空气中稍晾片刻，使 其形成一层膜。用刀片在膜的四周各划一条刻痕，对膜哈气后， 将载玻片有膜一端成45０角或垂直慢慢压入水中，使膜缓缓地被 剥离并漂浮在水面上，取出载玻片。将清洁的铜网排列在膜上 (膜的厚度不均匀、有皱纹、尘埃或破损处不要摆网)。然后剪取 一块比膜的面积稍大的滤纸片与有铜网的膜贴附，随着滤纸的吸 湿逐步与膜、铜网贴附好后，边提边向上翻转离开水面，放置在 有滤纸的平皿中干燥后于干燥器中保存备用。
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2.前固定 (保持0~4０C):更换新鲜的3%戊二醛固定液，固定3小 时或过夜，用吸管吸出固定液，加入0.lM磷酸缓冲液漂洗1 小时，换液3～4次。 3.后固定：吸去漂洗液，在通风橱中加入1%四氧化饿固定液， 固定2小时后，吸出固定液，加入0.M磷酸缓冲液漂洗1小时， 换液3~4次。 4.脱水置换:吸去缓冲液，注入乙醇，逐级梯度脱水30％、50％、 70％、80％、90％、100％（两次）各1５分钟。 5.浸透：按照Epon812包埋剂配方配制包埋剂，注意需充分搅 拌，混匀后注入瓶中，环氧丙烷:包埋剂=3:1震荡过夜 6.包埋 ：把样品放入包埋模板底部正中，注入包埋剂，插入 标签。 7.聚合：将塑料模板放入恒温箱中加热聚合。在37０、45０C 、 6O０C分别聚合12小时、12小时、24小时，取出后去掉模板， 即为样品包埋块。
实验二
样品包埋块的制作
目的和要求：掌握常规的植物样品前处理技术及样品包埋 块的制备技术。 实验用品 试材：植物的幼嫩叶片 试剂：3%戊二醛固定液(PH7.0)，1%四氧化饿固定(PH7.0)， 0.1M磷 酸缓冲液 (PH7.0)，30％、50%、70%、80%、90%、100%系列 乙醇，环氧丙烷，双蒸馏水，Ep０n812环氧树脂，MNA，DDSA， DMP—300 器材：青霉素小瓶，载玻片，注射器，量筒，烧怀，试剂瓶，玻棒， 滴管，单面或双面刀片，普通镊子，牙签，酸度计或pH试纸， 塑料包埋模板，烘箱，冰箱，真空抽气泵。 实验步骤 1.取材与预固定：从植株上取下叶片立即放在用冰块预冷的载玻片 上，并滴上数滴冷3％戊二醛固定液，用锋利的刀片切取lmm宽， 3～4mm长的小条，然后用牙签将小条轻轻地逐一拨入盛有冷的3% 戊二 醛固定液的小瓶中(小瓶置冰盘中以保持0~4０C)，盖紧瓶塞 后用注射器多次抽气 (或将无塞小瓶置可排气的真空容器中)直至 样品沉落瓶底。